Universidade Federal de Minas Gerais

Instituto de Ciências Biológicas

Programa de Pós-Graduação em Ecologia, Conservação
e Manejo da Vida Silvestre

Biologia Reprodutiva de Petunia mantiqueirensis (Solanaceae) e comportamento de

coleta de pólen de abelhas polinizadoras

Fernanda Figueiredo de Araujo

Belo Horizonte

2016
 Fernanda Figueiredo de Araujo

Biologia Reprodutiva de Petunia mantiqueirensis (Solanaceae) e comportamento de

coleta de pólen de abelhas polinizadoras

Dissertação apresentada ao Programa de

Pós-Graduação em Ecologia, Conservação
e manejo da Vida Silvestre do Instituto de
Ciências Biológicas da Universidade
Federal de Minas Gerais, como requisito
parcial à obtenção do título de Mestre.

Orientador: Profº. Dr. Clemens Schlindwein

Coorientadora: Prof.ª Dra. Reisla Oliveira

Belo Horizonte

2016
 AGRADECIMENTOS

Agradeço a todas as pessoas que de alguma maneira me ajudaram na realização desse

trabalho.

Primeiramente, agradeço ao meu orientador Clemens Schlindwein pela confiança,

atenção, paciência e principalmente pelos ensinamentos compartilhados.

À minha coorientadora Reisla Oliveira pela atenção, ensinamentos e por todas as suas
contribuições.

Agradeço imensamente ao pessoal da Mantiqueira, em especial à Bete por me acolher

tão bem em sua casa durante as atividades de campo; à Suely, Zé Maria, Márcio, Pedro,
Rosa e Eurides pela receptividade e auxílio durante os trabalhos de campo.

Aos amigos do Grupo Plebeia pela ótima convivência, em especial ao Matheus, Ana
Luisa, Nathália e Samuel pela ajuda no campo. Ao José, pela amizade, pelas conversas,
troca de conhecimento e ajuda nas analises estatística. À Paula Calaça pelas dicas de
analises polínica e estatística. À Bruna pela amizade.

Aos membros da banca, Alberto López Teixido e João Renato Stehmann, pelas ótimas
contribuições.

Ao Theo Motta pelas analises de refletância e conversas sobre o tema.

À Paula Zama pela ajuda na identificação das abelhas.

Ao Professor Cleber Figueredo e seus alunos pela agradável convivência no laboratório.

À turma de mestrado (2014-2016) pelos momentos de alegria e ótimas lembranças. Em

especial à friend Flávia, friend Samantha e Raquel pela amizade e carinho. À Isabelle
pela amizade e ajuda no campo. Vocês tornaram essa caminhada muito mais agradável!

Ao Programa de Pós Graduação em Ecologia Conservação e Manejo da Vida silvestre;

aos professores pelo aprendizado; aos secretários Fred Teixeira e a Cris pela gentileza e
disponibilidade sempre que precisei. E aos colegas do programa.

À Universidade Federal de Minas Gerais, à FAPEMIG pela bolsa de estudos, ao CNPq

pelo auxilio financeiro para o trabalho de campo, importante para execução deste
trabalho.
Agradeço também a todos os amigos, principalmente à Poliana, Bruna e Camila, por
estarem sempre presentes ao longo desses dois anos. Aos queridos amigos de Montes
Claros, Ellen e Fábio que mesmo longe sempre me mandaram muita energia positiva!

Aos familiares, em especial Tia Ester por me acolher em sua casa e Natália pela
amizade.

E finalmente meu agradecimento para aquelas pessoas que são as mais importantes em
minha vida e sem os quais chegar até aqui não seria possível! Aos meus pais, Carla e
Benício, por todos os ensinamentos, apoio e amor incondicional. Às minhas irmãs,
Paula e Júlia, por todo o amor e por trazer tanta felicidade à minha vida. Obrigada por
compreenderem minha essência!
 SUMÁRIO

INTRODUÇÃO GERAL ..................................................................................................7

REFERÊNCIAS ................................................................................................................8
CAPÍTULO I .................................................................................................................10
RESUMO ........................................................................................................................11
INTRODUÇÃO ...............................................................................................................12
MATERIAIS E MÉTODOS............................................................................................13
Local de estudo ....................................................................................................................... 13

Espécie estudada..................................................................................................................... 14

Biologia e morfologia floral ..................................................................................................... 14

Análises de refletância espectral das estruturas florais.......................................................... 15

Sistema reprodutivo ................................................................................................................ 16

Visitantes Florais ..................................................................................................................... 16

Remoção de pólen na primeira visita floral ............................................................................ 17

Análise de carga polínica dos visitantes florais ....................................................................... 18

RESULTADOS ...............................................................................................................18
Morfologia e biologia floral ..................................................................................................... 18

Sistema reprodutivo ................................................................................................................ 21

Visitantes florais ...................................................................................................................... 21

Remoção de pólen na primeira visita floral ............................................................................ 25

Análise Carga polínica dos Visitantes florais ........................................................................... 25

DISCUSSÃO ...................................................................................................................27
REFERÊNCIAS ..............................................................................................................31
CAPÍTULO II ................................................................................................................36
RESUMO ........................................................................................................................37
INTRODUÇÃO ...............................................................................................................38
MATERIAIS E MÉTODOS............................................................................................39
Local de estudo ....................................................................................................................... 39

Local de estudo ....................................................................................................................... 39

Espécies estudadas.................................................................................................................. 40
 Comportamento de forrageio de pólen .................................................................................. 41

RESULTADOS ...............................................................................................................42
Caracterização da mancha de flores ....................................................................................... 42

Comportamento de forrageio de Pseudagapostemon fluminensis ........................................ 42

Fidelidade à área de forrageio ............................................................................................ 42

Revisitas florais .................................................................................................................... 43
Eficiência no forrageio de pólen.......................................................................................... 43
DISCUSSÃO .............................................................................................................................. 45

REFERÊNCIAS ..............................................................................................................47

6
INTRODUÇÃO GERAL

A relação planta-polinizador é resultado de um longo processo de coevolução.

Embora a história evolutiva mostre que os insetos polinizadores tenham surgido
anteriormente às plantas com flores, o aumento na diversidade de ambos coincide
(Baker & Hurd, 1968), bem como o surgimento de inúmeras adaptações recíprocas, que
facilitam a interação entre plantas e polinizadores.
As plantas desenvolveram diversas características, como formas, tamanhos e
cores das flores, que atraem uma grande variedade de animais polinizadores, dentre eles
insetos, morcegos e aves (Ricklefs & Renner, 1994; Ashman et al., 2004). Como
recursos, além de pólen, as flores podem produzir néctar, resinas e óleos para transporte
de pólen pelos visitantes (Simpson & Neff, 1981; Roubik, 1989). Por outro lado, os
polinizadores desenvolveram características morfológicas e comportamentais que
aperfeiçoam a coleta dos recursos florais (Schilindwein, 2000).
As abelhas são o principal grupo de polinizadores (Baker & Hurd, 1968; Faegri
& van der Pijl, 1979). Isso pode ser explicado pelo fato de que praticamente toda a dieta
dos adultos e larvas é proveniente das flores (Baker & Hurd, 1968). Em relação à coleta
de pólen, é possível distinguir as abelhas em poliléticas, que obtêm o pólen de várias
espécies de plantas e as oligoléticas que restringem a coleta de pólen a poucas espécies
vegetais, geralmente do mesmo gênero ou mesmo de uma única espécie (Linsley, 1958;
Michener, 1979; Cane & Sipes, 2006). A distribuição das abelhas oligoléticas é muitas
vezes ajustada com a das plantas das quais obtêm recursos florais. No entanto, a
distribuição das espécies de plantas nem sempre é ligada à presença das espécies
oligoléticas. Na ausência das espécies oligoléticas, essas plantas podem vir a ser
polinizadas pelas espécies poliléticas (Michener, 1979). No entanto, na maioria das
vezes as abelhas oligoléticas são os polinizadores mais efetivos das plantas das quais
dependem (Schlindwein & Wittmann, 1995, 1997; Schlindwein, 2004; Pick &
Schlindwein, 2011).
Neste estudo, apresentamos a interação entre Petunia mantiqueirensis
(Solanaceae) e seus polinizadores, além da descrição da biologia floral e reprodutiva da
espécie e comportamento de forrageio da sua principal espécie polinizadora.

7
REFERÊNCIAS

ASHMAN, T.L.; KINIGHT, T.M.; STEETS, J.A.; AMARASEKARE, P.; BURD, M.;
CAMPBELL, D.R.; JONHSTON, M.O.; MAZER, S.J.; MITCHELL, R.J.; MORGAN,
M.T. & WILSON, W.G. 2004. Pollen limitation of plant reproduction: ecological and
evolutionary causes and consequences. Ecology. 85: 2408-2421.

BAKER, H.G. & P.D. HURD, JR. 1968. Intrafloral ecology. Annu. Rev. Entomol. 13:
385-414.

CANE, J.H. & SIPES, S. 2006. Characterizing floral specialization by bees: analytical
methods and a revised lexicon for oligolecty. In: Waser, N. M.: Ollerton J. (Ed.). Plant-
pollinator interactions: from specialization to generalization. Chicago: The University
of Chicago, p. 99-122.

FAEGRI, K. & L. VAN DER PIJL. 1979. The Principles of Pollination Ecology.
Oxford, Pergamon Press. 244 pp.

LINSLEY, E.G. 1958. The ecology of solitary bees. Hilgardian 27: 543-599.

MICHENER, C.D. 1979. Biogeography of the bees. Annals of the Missouri Botanical
Garden. 66:277-347

PICK, R. A. & SCHLINDWEIN, C. 2011. Pollen partitioning of three species of

Convolvulaceae among oligolectic bees in the Caatinga of Brazil. Plant Systematics and
Evolution 293:147-159.

RICKLEFS, R.E. & RENNER, S.S. 1994. Species richness within families of flowering
plants. Evolution, 48: 1619–1636.

ROUBIK, D. W. 1989. Ecology and natural history of tropical bees. Cambridge

Uniersity Press. 514p.

SCHILINDWEIN, C. 2000. A importância de abelhas especializadas na polinização de

plantas nativas e conservação do meio ambiente. Anais do Encontro sobre Abelhas 4:
131-141.

8
SCHLINDWEIN, C. 2004. Are oligoletic bees always the most effective pollinators? In
Freitas BM, Pereira JOP (eds) Solitary bees. Conservation, rearing and management for
pollinators. Fortaleza, Imprensa Universitária, 285p.

SCHLINDWEIN, C. & WITTMANN, D. 1995. Specialized solitary bees as effective

pollinators of South Brazilian species of Notocactus and Gymnocalycium (Cactaceae).
Bradleya, v. 13, p. 25-34.

SCHLINDWEIN, C. & WITTMANN, D. 1997. Micro-foraging routes of Bicolletes

pampeana (Colletidae) and bee-induced pollen presentation in Cajophora
arechavaletae. Bot Acta; 110:177-83.

SIMPSON, B. & NEFF, J. 1981. Floral rewards: alternatives to pollen and nectar.
Annals of the Missouri botanical Garden 68: 301-322.

9
 CAPÍTULO I

Relação especializada entre a espécie ameaçada Petunia mantiqueirensis

(Solanaceae) e a abelha polilética
Pseudagapostemon fluminensis (Halictidae)

10
RESUMO

O gênero Petunia (Solanaceae) ocorre no sul da América do Sul e compreende

espécies com síndromes de polinização distintas. Petunia mantiqueirensis, espécie
ameaçada de extinção, apresenta distribuição mais setentrionais do gênero e é endêmica
de regiões elevadas da Serra da Mantiqueira em Minas Gerais, Brasil. Exibe flores roxas
não convencionais, característica de petúnias melitófilas. Foi estudada a biologia floral,
determinado o sistema reprodutivo, visitantes florais e uma possível associação
especializada entre P. mantiqueirensis e suas abelhas polinizadoras efetivas, que são
relatados para outras espécies de Petunia. O estudo foi realizado entre 2014 e 2016.
Petunia mantiqueirensis é autoincompatível. A frutificação após polinização cruzada e
polinização pelas abelhas não diferiram, revelando a ausência de limitação de
polinizadores desta espécie. As flores fornecem especialmente pólen para as abelhas
(cerca de 127.000 grãos/flor), uma vez que a quantidade de néctar produzida foi ínfima.
Novas flores abrem ao longo do dia, fazendo que a apresentação de pólen seja
imprevisível. O espectro de abelhas visitantes foi de 11 espécies, mas apenas fêmeas de
Pseudagapostemon fluminensis (Halictidae) foram os visitantes relevantes (90% das
visitas de flores) e polinizadores efetivos durante os anos de estudo. Independentemente
do tempo de abertura das flores, fêmeas de P. fluminensis fez todas as primeiras três
visitas à flores monitoradas de P. mantiqueirensis (N = 115). Estas abelhas, portanto,
mostram um comportamento de forrageamento de pólen especializado programado para
o momento imprevisível da antese. Apesar do forrageamento de pólen altamente
especializado, P. fluminensis não é oligolética em flores de Petunia. A analise da carga
polínica das escopas de fêmeas coletadas em flores de P. mantiqueirensis continha
grãos de pólen de outras famílias de plantas, muitas vezes em altas porcentagens.

Palavras-chave: Petunia, monitoramento de flor, especialização alimentar, espécies

ameaçadas de extinção.

11
INTRODUÇÃO

Petunia Jussieu (Solanaceae) é um gênero que exibe flores vistosas e apresenta

espécies importantes economicamente, como Petunia hybrida (“petúnia-de-jardim”),
híbrido cultivado para fins ornamentais e uma das mais importantes plantas
comercializadas no mundo (Griesbach, 2007). As flores apresentam grande diversidade
de tamanhos e cores e o mercado de suas sementes é um importante recurso econômico
para vários países (Stehmann et al., 2009).
Além do uso ornamental, algumas espécies de Petunia apresentam
características que favorecem sua utilização como sistema modelo, especialmente na
área da genética molecular, como facilidade de crescimento, ciclo de vida relativamente
curto, facilidade de propagação assexuada e alta eficiência de transformação genética
(Gerats & Vandenbussche, 2005).
Petunia foi estabelecido por Jussieu em 1803 e após a descrição do gênero,
várias propostas de mudanças na delimitação do gênero ocorreram ao longo dos anos.
No entanto, somente no final do século XX, Wijsman & Jong (1985) evidenciaram por
meio de analises genéticas e morfológicas que o gênero Petunia era composto por dois
grupos distintos de espécies: um grupo com 2n = 14 e outro com 2n = 18. Dessa
maneira, a designação Petunia foi mantida para as espécies do primeiro grupo e 15
espécies 2n=18 foram designadas como Calibrachoa La Llave & Lex. (Wijsman, 1990).
O gênero Petunia ocorre em áreas subtropicais e temperadas da América do Sul.
A classificação mais recente reconhece 14 espécies pertencentes ao gênero (Stehmann
et al., 2009), e a maior riqueza de espécies é encontrada no Brasil, seguido por
Argentina, Uruguai, Paraguai e Bolívia. Todas as espécies ocorrem no Brasil, exceto P.
occidentalis, que apresenta uma distribuição restrita às montanhas subandinas no
noroeste da Argentina e sul da Bolívia (Stehmann et al., 2009). No Brasil, os centros de
diversidade do gênero são as terras altas do Rio Grande do Sul e Santa Catarina.
Algumas espécies são endêmicas de localidades restritas e assim consideradas raras.
Diferentes síndromes de polinização podem ser observadas em Petunia
(Stuurman et al., 2004; Fregonezi et al., 2013). A maioria das espécies são melitófilas,
embora esfingofilia e ornitofilia estejam presentes. De modo geral, as características
das flores estão em conformidade com o animal que a poliniza. Em ambos os gêneros,
as espécies melitófilas apresentam flores com corola magenta ou púrpura e raramente

12
branca ou vermelha. Já as espécies esfingófilas, têm flores com corola branca,
produzem forte odor noturno e quantidade considerável de néctar. A esfingofilia ocorre
em apenas uma espécie, P. axillaris. As flores das espécies polinizadas por beija-flores
(ornitofilia) apresentam corola vermelha, com estigma e anteras geralmente excertas.
Em Petunia, apenas P. exserta é uma espécie ornitófila. (Stehmann et al., 2009; Klahre
et al.2011; Fregonezi et al. 2013).
Interações altamente especializadas são reportadas para o gênero Petunia. Além
disso, abelhas oligoléticas foram destacadas como os principais polinizadores de
algumas espécies. Essas abelhas restringem a coleta de pólen a poucas espécies
vegetais, da mesma família, gênero ou até de uma única espécie (Linsley, 1958; Cane &
Sipes, 2006), como Callonychium petuniae (Andrenidae), especializada em espécies de
Petunia com flores púrpuras (Wittmann et al., 1990).
Petunia mantiqueirensis T. Ando & Hashim. é endêmica da Serra da
Mantiqueira, no sul do estado de Minas Gerais, onde ocorre isoladamente das demais
espécies cogenéricas, no limite norte da distribuição do gênero. A espécie está presente
em área onde grande parte da cobertura vegetal original foi removida, o que resultada
em forte declínio populacional da espécie (Kamino et al. 2012). Os locais de ocorrência
vêm sendo modificados devido à atividades agrícolas. Em consequência, P.
mantiqueirensis é classificada como espécie “criticamente ameaçada” (Fundação
Biodiversitas, 2010) e ”em Perigo” (CNCFlora, 2014).
Neste trabalho, estudamos a polinização de Petunia mantiqueirensis na Serra da
Mantiqueira em Minas Gerias. Para tal, verificamos: (i) a biologia reprodutiva da
espécie; (ii) a dinâmica de oferta de recursos florais; (iii) o espectro de visitantes florais
e os polinizadores efetivos e perguntamos: a relação entre P. mantiqueirensis e seus
polinizadores efetivos é especializada, como relatadas para outras espécies de Petunia?

MATERIAIS E MÉTODOS

Local de estudo

O estudo foi realizado em uma área rural, nos municípios de Camanducaia e

Gonçalves, situados na Serra da Mantiqueira no sul do estado de Minas Gerais (S22º
42.494' W45º 56.536'). O trabalho de campo foi realizado ao longo de duas estações de
florescimento, de outubro de 2014 a janeiro de 2016. O local de estudo está situado na
13
Área de Proteção Ambiental (APA) Fernão Dias, a 1750 metros de altitude, onde
predomina Floresta Ombrófila Mista (Floresta com Araucária). As temperaturas médias
mensais no período do estudo variaram de 10ºC a 23ºC (Agritempo, 2016). O
clima é úmido ao longo do ano e a média mensal de precipitação foi de 98 mm nos
período do estudo (Agritempo, 2016). Na região capões de mata nativa intercalam-se
com áreas cultivadas e pastagens.

Espécie estudada

Petunia mantiqueirensis é uma erva com hábito procumbente, podendo

apresentar ramos ascendentes que, frequentemente, se apoiam à vegetação arbustiva que
cresce ao seu redor. As plantas ocorrem em locais com solo úmido e parcialmente
sombreados, em regiões com Floresta com Araucária. Assim como a maioria das outras
espécies de Petunia, apresenta corola chamativa com coloração magenta. O tubo floral é
branco com nervuras púrpuras e o pólen é azul. É a espécie que apresenta as plantas
mais altas do gênero, e seus ramos podem atingir até quatro metros de altura (Ando &
Hashimoto, 1994). É uma espécie rara, segundo a definição de Kruckeberg &
Rabinowitz (1985), visto que apresenta distribuição e número populacional restrito. A
espécie ocupa uma área de 92 km2, sendo assim, endêmica da Serra da Mantiqueira
(Kamino et al. 2012).

Biologia e morfologia floral

Medimos o diâmetro da corola aberta, o comprimento do tubo floral e da câmara

nectarífera em 20 flores no local de estudo.

Ao longo da antese, uma gota de peróxido de oxigênio (H2O2) foi depositada no

estigma e a formação de bolhas no líquido indicou a receptividade estigmática (Dafni,
Kevan & Husband, 2005). A presença de néctar foi verificada com o auxilio de
microcapilares de 0,5 ml de volume (Hirschmann® Laborgeräte, Eberstadt, Alemanha).
Para determinar o número de grãos de pólen por flor, as cinco anteras de botões
florais foram maceradas em tubos tipo Eppendorf contendo 0,5 ml de ácido lático
glicerinado (3:1). A solução foi homogeneizada em agitador vórtex e uma alíquota
14
transferida para a câmara de Neubauer onde os grãos de pólen foram contados em
microscópio óptico (Maêda, 1985). A partir da contagem de duas subamostras de cada
botão floral, foi calculado o número de grãos por flor utilizando 15 botões florais de
plantas diferentes. Os mesmos botões empregados para contagem de pólen foram
dissecados, sob estereomicroscópio para contar os óvulos e calcular a razão pólen/óvulo
(P/O).
Para determinar a longevidade floral, 14 flores, acessíveis aos visitantes, foram
marcadas individualmente e monitoradas até a senescência. Além disso, 14 flores foram
ensacadas com sacos de organza para verificar se a longevidade floral varia em flores
não visitadas. O início da antese foi determinado logo que as pétalas começaram a se
separar e o estigma e anteras se tonaram visíveis. Para verificar se existiu diferença
significativa entre a longevidade floral nos diferentes tratamentos, foi realizado o teste
não-paramétrico Mann-Whitney (Teste U). O software utilizado para a realização das
analises foi o SigmaStat 3.5.

Análises de refletância espectral das estruturas florais

Para medir a qualidade espectral da luz refletida por estruturas florais foi
utilizado um espectrofotômetro (USB2000+UV-VIS-ES, Ocean Optics Inc) calibrado
radiometricamente entre 250 e 750 nm com uma fonte de luz mista deutério/tungstênio
(DH-2000-BAL, Ocean Optics Inc). A calibração nesta faixa de comprimentos de onda
permite avaliar com precisão os parâmetros espectrais de refletância na faixa do
ultravioleta, luz visível e infravermelho. Dessa forma, a análise espectral realizada
extrapola a faixa de percepção cromática humana e inclui componentes que estimulam o
sistema visual de himenópteros (Peitsch et al., 1992). O software SpectraSuite (Ocean
Optics Inc) foi utilizado na aquisição e análise das curvas espectrais.
Para medidas de refletância floral foi utilizada uma fibra ótica especializada com
tripla saída (R400-7-UV-VIS, Ocean Optics Inc) conectada ao espectrofotômetro e a
uma fonte de luz de xenônio pulsado (PX-2, 220Hz, 220-750nm, Ocean Optics Inc). O
sensor de luz da fibra ótica foi montado em suporte preto opaco (RPH-1, Ocean Optics
Inc), que permitiu padronizar o ângulo (90O) e a distância (0,5 cm) da luz emitida em
relação à amostra cuja refletância foi medida. Este sensor circular possui diâmetro de
1mm, permitindo medir o padrão específico de refletância em estruturas florais cuja
15
superfície seja igual ou maior a 0.8 mm2. Como padrão de branco para medidas de
refletância foi usado material difusor de Spectralon ® (WS-1-SL, Ocean Optics Inc).
Ramos de Petunia mantiqueirensis com flores, coletados na Serra da
Mantiqueira, foram levados ao laboratório na Universidade Federal de Minas Gerais em
Belo Horizonte e medida a refletância do limbo e tubo floral das pétalas, dissecadas
com o auxílio de micro-estilete e lupa. A refletância foi medida em três flores recém-
abertas e três flores velhas (do segundo e terceiro dia da antese). Dessa forma, foi
avaliada a constância/variabilidade dos espectros e construída a curva de padrão de
refletância espectral para flores novas e velhas. As curvas espectrais médias foram
utilizadas para caracterização do padrão de refletância segundo modelos clássicos
propostos na literatura, construídos tendo como base a fisiologia dos fotorreceptores
presentes na retina de himenópteros (Peitsch et al., 1992, Chittka & Menzel, 1992;
Chittka et al., 1994; Arnold et al., 2010).

Sistema reprodutivo

Para verificar o sistema reprodutivo de Petunia manqueirensis foi conduzido um

experimento de polinização com quatro tratamentos: 1) autopolinização espontânea,
flores sem manipulação; 2) autopolinização manual, flores polinizadas com seu próprio
pólen; 3) polinização cruzada manual, no qual o pólen foi transferido para flores de
outros indivíduos, distantes no mínimo 20 metros; e 4) polinização natural (controle),
realizada por visitantes em condições naturais. Todas as flores foram previamente
ensacadas e para cada tratamento foram utilizadas 15 flores. Após as manipulações,
todas as flores foram reensacadas para impedir o acesso aos visitantes, com exceção
daquelas do tratamento de polinização natural. Foi determinada a formação de frutos
nos diferentes tratamentos.

Visitantes Florais

Os visitantes florais foram coletados ao longo da floração de Petunia

mantiqueirensis, com o auxilio de rede entomológica e câmaras mortíferas contendo
acetato de etila. Os espécimes coletados foram montados em alfinetes entomológicos,
16
identificados e incluídos no banco de dados do grupo de pesquisa “Plebeia - Ecologia de
Abelhas e da Polinização”. Os insetos foram depositados na Coleção Entomológica do
Centro de Coleções Taxonômicas da Universidade Federal de Minas Gerais.
A frequência dos visitantes florais foi determinada durante 14 dias (112 horas de
trabalho) não consecutivos, das 08:00h às 16:00h em 115 flores marcadas. Assim, a taxa
de visitação às flores ao longo do dia, foi determinada em quatro intervalos de tempo
(8:00 as 10:00 h; 10:00 as 12:00 h; 12:00 as 14:00 h; 14:00 as 16:00 h). Anotamos
horário e duração da visita por flor, se os visitantes florais coletaram pólen e/ou néctar
durante as visitas e se contataram o estigma. Além disso, em cada flor nova, anotamos o
nome e o sexo da espécie de abelha que realizou a primeira, segunda e terceira visita à
flor e medimos a duração destas visitas. Foi medida também a duração das visitas a
flores depois do primeiro dia de antese.
Baseado no número de visitas por flor em cada um dos intervalos foi
estabelecida uma taxa de visitação por hora. Esta taxa foi comparada entre os intervalos
utilizando o método das Equações de Estimações Generalizadas (Generalized
Estimating Equations - GEE), adequado para tratar dados com medidas repetidas ao
longo do tempo (intervalos). O software utilizado para a realização das analises foi o R
3.3.0.

Remoção de pólen na primeira visita floral

Determinamos a quantidade de pólen removido durante a primeira visita às

flores de Petunia mantiqueirensis. Botões florais foram ensacados (N=15) e logo após o
inicio da antese, o saco foi removido e permitido uma visita de uma abelha. O nome da
espécie foi anotado e a flor foi removida e transferida para um tubo Eppendorf contendo
álcool 70%. Em seguida, as anteras foram removidas e maceradas e o pólen aderido à
corola foi lavado com álcool. As amostras foram homogeneizadas em agitador vórtex e
centrifugadas durante cinco minutos a uma velocidade de 6,0 rpm. Em seguida, o álcool
foi removido e 0,5 ml de solução de ácido lático glicerinado foi acrescentado. A
solução foi homogeneizada em agitador vórtex e transferida para Câmara de Neubauer,
com auxilio de micropipeta e os grãos de pólen foram contados em microscópio óptico.
Estimamos o número de grãos de pólen de acordo com o volume total, considerando a
alíquota utilizada (Maêda, 1985). A quantidade de pólen removida por flor foi

17
determinada subtraindo o número de grãos de pólen que sobrou na flor do número
médio de pólen quantificado em 15 flores não visitadas (ver acima).

Análise de carga polínica dos visitantes florais

Na espécie mais frequente, foi removida a carga polínica da escopa de fêmeas

coletadas (N=23) durante visitas a flores de P. mantiqueirensis e analisado sua
composição polínica para conhecer sua fidelidade floral e obter informações sobre uma
possível oligoletia dessa espécie. Uma amostra representativa do pólen foi transferida
com pequenas porções de gelatina glicerinada para lâminas de microscópio. Estas foram
aquecidas em chama de álcool, cobertas com lamínulas e seladas com parafina
(Schlindwein & Wittmann, 1997). O conteúdo de cada lâmina foi analisado em
microscópio óptico, com aumento de 400 vezes e os tipos polínicos identificados. A
frequência dos tipos polínicos presentes na escopa das fêmeas foi determinada contando
300 grãos de pólen por lâmina. Os tipos polínicos com frequência menor que 1% foram
considerados contaminação e desconsiderados no espectro polínico.

RESULTADOS

Morfologia e biologia floral

Petunia mantiqueirensis floresceu e frutificou de outubro a março. A corola

infundibuliforme, contém cinco lobos púrpuros com diâmetro entre 26 e 34 mm
(30,3±2,1; N=20) (Fig. 1A). O tubo floral é subcilíndrico, formado pela fusão das
pétalas e mede entre 24 e 30 mm de comprimento (28,8±1,5; N=20) e apresenta
nervuras púrpuras (Fig. 1B). O androceu é composto por cinco estames, dois longos,
dois médios e um curto, de modo que os longos alcançam a abertura do tubo. Os filetes
são fusionados ao tubo da corola, formando uma câmara nectarífera, que possui
comprimento entre 5 e 7 mm (6,5±0,5; N=20). O estigma bilobado é ligeiramente mais
longo que os estames longos.

18
Figura 1. Flores de Petunia mantiqueirensis. A) Detalhe da corola; B) Flor no início da
antese em vista lateral mostrando o tubo floral branco com nervuras roxas.

Aos olhos humanos, as flores de Petunia mantiqueirensis apresenta coloração

magenta/púrpura. As medidas espectrofotométricas de suas flores revelaram diferenças
entre o padrão de reflexão das pétalas e do tubo floral. A superfície das pétalas novas e
velhas apresentam valores significativos de refletância nas faixas do azul (400-500nm) e
vermelho (600-700nm) e baixa refletância relativa nas faixas no ultravioleta (300-
400nm) e verde (500-600nm). Além disso, foi identificada uma leve discrepância na
intensidade de refletância na faixa azul (~0.45) e vermelho (~0.85) medidos para as
pétalas de flores novas quando comparadas à pétalas de flores velhas (azul ~ 0.30 e
vermelho ~0.70). Os níveis de refletância relativa medidos nas faixas do azul e
vermelho, explicam a uniformidade de coloração magenta observada nestas estruturas
por olhos humanos. Em contraste, medidas espectrofotométricas da superfície do tubo
floral, revelaram refletância também nas faixas do ultravioleta (300-400nm) e verde
(500-600nm). Foi identificada uma leve discrepância na intensidade de refletância
medidas entre tubos de flores novas e flores velhas. Os níveis de refletância relativa
medidos nas faixas do azul, verde e vermelho, foram bastante similares, o que explica a
uniformidade de coloração branca observada nesta estrutura (Fig. 2).

19
Figura 2. Espectro de refletância de pétalas e tubo floral de Petunia mantiqueirensis.

As anteras abriram logo após a abertura da flor, primeiro nas anteras dos estames
maiores, seguido pelas intermediárias e posteriormente na antera do estame menor.
O teste de receptividade estigmática mostrou que o estigma já estava receptivo
quando iniciou a abertura, permanecendo receptível até a senescência da flor. O néctar
foi produzido em quantidades ínfimas, o que inviabilizou a quantificação do volume e
sua concentração.
As flores produziram em média 127033±16815 grãos de pólen e em média
111,5±10,7 óvulos. A razão Pólen/Óvulo foi de 1136,6±60.
A antese não foi sincronizada, ocorrendo a qualquer horário do dia. A
longevidade floral durou 7,1±0,7 dias (N=14) e flores visitadas por abelhas senesceram
mais cedo e tiveram longevidade de 4,6±1,1 dias (N=14). Houve diferença significativa
da longevidade floral entre os tratamentos (U=11,5; p<0,001; N=14) (Fig.3).

20
 10

8
Duração das flores (dias)

0
Flores ensacadas Flores acessíveis

Figura 3. Longevidade de flores de Petunia mantiqueirensis acessíveis aos visitantes e

ensacadas. Médias e desvio padrão (N=14).

Sistema reprodutivo

Os tratamentos de polinização controlada mostraram que Petunia

mantiqueirensis é autoincompatível, uma vez que não houve formação de frutos em
ambos os tratamentos de autopolinização (Tabela 1). Houve uma alta taxa de
frutificação nos tratamentos de polinização cruzada manual (80%) e na polinização
natural (73,3%). Os frutos contiveram, em média, 59,9 ± 17,5 (N=15) sementes

Tabela 1. Experimento de polinização controlada em Petunia mantiqueirensis.

Tratamentos N Frutos Sucesso

desenvolvidos (%)
Autopolinização manual 15 0 0
Autopolinização espontânea 15 0 0
Polinização cruzada manual 15 12 80
Polinização natural 15 11 73,3

Visitantes florais

Flores de Petunia mantiqueirensis foram visitadas por abelhas de 11 espécies

(Tabela 2).

21
Tabela 2: Visitantes florais de Petunia mantiqueirensis em Camanducaia e Gonçalves-
MG.

Família Tribo Espécie

Andrenidae Protandrenini Anthrenoides sp.

Apidae Meliponini Apis mellifera Linnaeus, 1758
Plebeia sp.
Trigona spinipes (Fabicius, 1793)
Xylocopini Xylocopa brasilianorum (Linnaeus, 1767)
Halictidae Augochlorini Augochlora sp.
Augochloropsis sp.
Neocorynura sp.
Halictini Pseudagapostemon cyanomelas Cure, 1989
Pseudagapostemon fluminensis (Schrottky, 1911)
Megachilidae Megachilini Megachile sp.

Fêmeas de Pseudagapostemon fluminensis foram os visitantes mais frequentes

ao longo da floração, seguido por Anthrenoides sp. e Pseudagapostemon cyanomelas..
Abelhas das demais espécies visitaram as flores esporadicamente (Fig. 4).

100

80
Visitas (%)

60

40

20

0
Pseudagapostemon Pseudagapostemon Anthrenoides sp. outras
fluminensis cyanomelas

Figura 4. Frequência relativa de visitas por espécie em flores de Petunia

mantiqueirensis durante 14 dias de observações.

22
 As maiores taxas de visitação foram observados nos primeiros intervalos do dia
(8:00 as 10:00 e 10:00 as 12:00 h), sendo que não houve diferença significativa entre
esses dois intervalos (p=0,99) (Fig. 5).

Figura 5. Número de visitas por intervalo de tempo em flores de Petunia

mantiqueirensis. Média e desvio padrão (N= 115 flores). Letras diferentes indicam
intervalos significativamente diferentes.

Fêmeas de Pseudagapostemon fluminensis foram responsáveis por 86% das

visitas às flores de P. mantiqueirensis na população estudada. Em 96% das visitas, as
fêmeas dessa espécie contataram o estigma. Fêmeas de P. fluminsensis visitaram
preferencialmente flores de primeiro dia de antese e raramente flores mais velhas. A
determinação do primeiro, segundo e terceiro visitante floral de P. mantiqueirensis
revelou que exclusivamente fêmeas de P. fluminensis fizeram as três primeiras visitas
florais em qualquer horário do dia. Em relação à primeira visita floral, 75 (65%) dessas
foram realizadas até as 10:00 horas, 35 (31%) entre 10:00 e 12:00 horas e apenas 5 (4%)
após 12:00 horas (Fig. 6). Para coletar pólen, as fêmeas agarraram-se às anteras e
removeram o pólen com as pernas anteriores e médias. As fêmeas permaneceram no
tubo floral para transferir o pólen para a escopa nas pernas posteriores e no metassoma.

23
 60

1ª, 2ª e 3ª visita em flores de

Petunia mantiqueirensis
40

20

1ª Visita 2ª Visita 3ª Visita

Figura 6. Três primeiras visitas de fêmeas de Pseudagapostemon fluminensis à flores de

Petunia mantiqueirensis ao longo do dia (N=115).

O tempo desprendido pelas fêmeas durante a primeira visita floral foi maior
(94,5±77,9 seg.; N=115) quando comprada à segunda e terceira visita de uma flor de P.
mantiqueirensis. Visitas a flores mais velhas foram curtas (9,6 ±5,2 seg) (Fig. 7). Nessas
visitas, as fêmeas não coletaram pólen e entraram no tubo floral até a câmara nectarífera
para tomar néctar.

200

150
Duraçãodas visitas
(segundos)

100

50

0
1ª visita 2ª visita 3ª visita visitas após dia 1

Figura 7. Duração das visitas de fêmeas de P. fluminensis à flores de P.

mantiqueirensis. Média e desvio padrão (N=115).

24
Remoção de pólen na primeira visita floral

Após a primeira visita restaram em média 18300 (dp=8937,88; N=15 visitas)

grãos de pólen nas flores de P. mantiqueirensis (Fig. 8). Durante a primeira visita floral,
as fêmeas de P. fluminensis removeram em média 86% dos grãos contidos em uma flor.

160000

140000

120000
Grãos de pólen

100000

80000

60000

40000

20000

0
Grãos de visitada
Flor não pólen/flor Grãos
Após de pólenvisita
primeira após
única visita

Figura 8. Grãos de pólen em flores não visitadas e após a primeira visita de fêmeas de
Pseudagapostemon fluminensis às flores de Petunia mantiqueirensis. Média e desvio
padrão; N=15.

Análise Carga polínica dos Visitantes florais

A análise da carga polínica de fêmeas de Pseudagapostemon fluminensis,

mostrou a presença de sete tipos polínicos de famílias diferentes. O pólen de P.
mantiqueirensis foi o mais frequente (51%), seguido pelo pólen de uma espécie de
Sisyrinchium (Iridaceae) (M1) e o pólen tricolporado reticulado não identificado (T2)
(Fig. 9A). Em 74% das fêmeas foram encontrados grãos de pólen de P. mantiqueirensis
e em 30% foram encontrados grãos de pólen de Cuphea sp., que é comum nos arredores
do local do estudo e é fonte de néctar para P. fluminensis (Fig. 9B). Além disso, apenas
17% (N=4) das fêmeas apresentaram carga polínica uniforme, sendo que a grande
maioria apresentou de dois ou quatro tipos polínicos aderidos à escopa (Fig. 9C).

25
Figura 9. Análise da carga polínica de fêmeas de Pseudagapostemon fluminensis
coletadas em Petunia mantiqueirensis. A- Proporção de grãos de pólen de cada tipo
polínico; B- Número de fêmeas com os diferentes tipos polínicos na escopa; C-
Quantidade de tipos polínicos nas escopas. Onde Pm= Petunia mantiqueirensis, A=
Asteraceae, C= Cuphea sp., M1= Monocotiledônea 1 (Sisyrichium sp.), M2=
Monocotiledônea 2, T1= Trizonocolpado reticulado, T2= Tricolpado reticulado (N=23).
26
DISCUSSÃO

Nosso estudo mostra que durante duas estações de florescimento, Petunia

mantiqueirensis foi polinizada, quase que exclusivamente, por fêmeas de
Pseudagapostemon fluminensis. Coletas anteriores de visitantes florais nessa planta
(2001, 2012-2013) também amostraram fêmeas de P. fluminensis como principal
visitante floral que revela que a interação entre os dois parceiros é consistente ao longo
de vários anos (Castro e Stehmann; Schlindwein, comunicação pessoal).
A análise da carga polínica das fêmeas mostrou que P. fluminensis é uma abelha
polilética e coleta pólen em pelo menos sete espécies de diferentes famílias. Pólen de P.
mantiqueirensis foi o tipo mais frequente na carga polínica das fêmeas desta espécie e
parece ser importante na dieta de P. fluminensis. No entanto, para conhecer a
contribuição do pólen de P. mantiqueirensis para a cria de P. fluminensis, seria
importante analisar o aprovisionamento larval no ninho. Os ninhos de P. fluminensis
infelizmente não são conhecidos e não encontramos ninhos para analise de
aprovisionamento larval no local de estudo. Enquanto que espécies de Asteraceae e
monocotiledôneas devem ter sido recursos polínicos, Cuphea sp., que é
extraordinariamente comum nos arredores do local de trabalho, é fonte de néctar de P.
fluminensis e de numerosas outras espécies de abelhas na área (observação pessoal).
Nas escopas de 82% das fêmeas de P. fluminensis foi encontrado pólen de
apenas uma ou duas espécies de plantas, que revela que as fêmeas apresentam alta
fidelidade floral durante seus voos de forrageio. No entanto, foi uma surpresa que cerca
de um quarto (26%) das fêmeas não carregaram pólen de P. mantiqueirensis mesmo
quando coletadas nas suas flores. Estas fêmeas, provavelmente, visitaram flores de P.
mantiqueirensis velhas e sem pólen.
Mesmo sendo uma abelha polilética, consideramos que Pseudagapostemon
fluminensis apresenta interação íntima com P. mantiqueirensis por (1) ser o visitante
floral e polinizador dessa espécie de planta mais frequente durante toda floração em
vários anos e (2) ajustar sua estratégia de coleta de pólen ao início da antese. Desta
maneira, a maior quantidade de pólen produzido pelas flores da Petunia mantiqueirensis
é destinada as fêmeas dessa espécie.
Diferentemente de P. mantiqueirensis, outras espécies de Petunia são
polinizadas por abelhas oligoléticas: a abelha oligolética Hexantheda missionica

27
(Colletidae) foi citada como polinizador de várias espécies de Petunia e Calibrachoa
(Schlindewein, 2004). Ela foi o principal polinizador de Petunia integrifolia (citada
como Petunia littoralis) em Santa Catarina (Castellani & Lopes, 2002) e Calibrachoa
elegans em Minas Gerais (Stehmann & Semir, 2001). A abelha cogenêrica H.
enneomera também é polinizador oligolético de espécies de Petunia e Calibrachoa no
Rio Grande do Sul (Schlindwein 2004). Outra relação altamente especializada ocorre
entre a oligolética Callonychium petuniae (Andrenidae) e espécies de Petunia com
flores púrpuras. A visão tetracromática - as abelhas possuem um receptor de vermelho,
além dos usuais receptores de UV, azul e verde (Peitsch et al. 1992) – foi interpretada
como adaptação para localização das flores de Petunia de cor púrpura (Wittmann et al.,
1990).
Petunia mantiqueirensis apresenta padrão de floração do tipo steady-stade
(sensu Gentry, 1974). As plantas produzem poucas flores por dia durante um longo
período de tempo. Suas flores permanecem abertas por cerca de cinco dias, no entanto,
após as primeiras visitas as anteras não contém mais pólen. Assim, a manutenção
prolongada das flores deve ter a função de aumentar a atração visual, como proposto
para outras espécies que mantém corolas em flores vazias após a polinização
(Schlindwein et al., 2014) e auxiliar as abelhas na localização das manchas dessa planta,
uma vez que somente poucas flores de Petunia são produzidas por dia. Além disso, a
produção continua de poucas flores torna as flores P. mantiqueirensis uma fonte
confiável de pólen para seus polinizadores durante um longo período, mesmo sendo
pouco abundante. Do ponto de vista da planta, o padrão steady-stade favorece a
polinização cruzada e o fluxo polínico entre indivíduos coespecíficos (Pinto et al.
2008). Para a autoincompatível P. mantiqueirensis, polinização cruzada é obrigatória
para garantir o sucesso reprodutivo como na maioria das espécies melitófilas do gênero
Petunia e Calibrachoa (Ando et al. 2001, Kokubun et al. 2006).
A liberação do pólen nas flores de P. mantiqueirensis não é contínua ao longo da
antese e isso dificulta o ajuste das visitas florais para coleta de pólen a um horário
específico (Roubik, 1979). Fêmeas de P. fluminensis mostraram uma estratégia de
forrageio voltada para realização de visitas florais no início da antese,
independentemente do horário de abertura. Essa estratégia mostrou ser altamente
eficiente e todas as três primeiras visitas às flores observadas de P. mantiqueirensis
foram realizadas por fêmeas da espécie. Seria interessante verificar se outras espécies de
28
Petunia e Calibrachoa também mostram abertura das flores pouco sincronizadas e se as
abelhas oligoléticas citadas como polinizadores efetivos (Callonychium petuniae,
Hexantheda missionica, H. enneamera) também ajustam suas visitas ao início da antese,
como descrito nesse trabalho para P. fluminensis.
Não há informações sobre a interação de P. fluminensis com outras espécies de
plantas. No entanto, é importante ressaltar interações entre outras espécies de
Pseudagapostemon com Petunia e Calibrachoa. No Brasil, a maioria das espécies de
Pseudagapostemon ocorre nas regiões Sudeste e Sul (Cure, 1989) e algumas possuem
distribuição geográfica bastante similar com as espécies de Petunia. Há relatos de coleta
ativa de pólen de fêmeas de Pseudagapostemon cyanomelas em Petunia reitzi em Santa
Catarina e P. scheideana no Paraná. Além disso, as fêmeas dessa espécie foram
registradas como visitantes florais de Calibrachoa linoides, em Campos do Jordão, São
Paulo, município localizado na Serra da Mantiqueira (Stehmann, 1999), em ambiente
parecido com o de ocorrência de P. mantiqueirensis. Fêmeas de P. cyanomelas também
foram registradas como visitantes florais de P. mantiqueirensis, porém são muito mais
raras que às de P. fluminensis. Além disso, na região dos pampas no Rio Grande do Sul,
uma espécie não identificada de Pseudagapostemon foi registrada coletando pólen em
P. secreta e P. scheideana (Stehmann, 1999).
Assim como Pseudagapostemon fluminensis, abelhas de P. cyanomelas e
Anthrenoides sp. foram registradas continuamente em manchas de P. mantiqueirensis
ao longo da floração. Em nosso estudo, contudo, essas espécies mais raras nunca
fizeram as primeiras visitas às flores de P. mantiqueirensis e parecem ser competidores
fracos pelo pólen quando comparados com P. fluminensis.
Chama a atenção neste estudo, que abelhas altamente eusociais, como Apis
mellifera e abelhas sem ferrão (Meliponini) foram extraordinariamente raras nas flores
de P. mantiqueirensis. Essas abelhas amplamente poliléticas (Cane & Sipes, 2006),
intensamente visitam plantas com floração maciça que fornecem pólen e néctar
simultaneamente em grandes quantidades (Roubik, 1993; Willms et al., 1996). A
produção de néctar em quantidades ínfimas ao longo da antese, a apresentação de pólen
por somente poucas flores por dia e em horários pouco previsíveis, torna as flores de P.
mantiqueirensis pouco atrativas para essas espécies, especialmente na presença de P.
fluminensis que são competidoras que apresentam comportamento de coleta
especializado à exploração de pólen no início da antese. Informações disponíveis de
29
visitantes florais de outras espécies de Petunia e Calibrachoa também carecem de
abelhas sociais ou citam essas somente como visitantes esporádicas (Stehmann e Semir,
2001; Castelani e Lopes, 2002).
A baixíssima taxa de visitação em flores de P. mantiqueirensis por outras
espécies de abelhas pode estar relacionada à presença de P. fluminensis em sincronia
com a abertura das flores, que ocasiona alto número de primeiras visitas e com isso,
remoção da maior parte do pólen, tornando as flores pouco atrativas para outras abelhas.
Embora rara e ameaçada de extinção, P. mantiqueirensis não sofre déficit de
polinização. No local do estudo, P. fluminensis garante a reprodução de P.
mantiqueirensis, uma vez que P. fluminensis foi altamente eficiente na coleta e
transferência de pólen, o que explica as altas taxas de formação de frutos em geral.
Assim, a manutenção dessa abelha, além dos locais de nidificação e de outras
plantas importantes em sua dieta é fundamental para a manutenção de P.
mantiqueirensis. Além disso, P. mantiqueirensis, possui populações pequenas e isoladas
e ocorre em áreas fragmentadas devido à intensa atividade agrícola, sendo assim,
ameaçada pela perda de habitat. Assim, informações sobre a biologia e comportamento
dos seus polinizadores se tornam importantes para o planejamento e desenvolvimento
de estratégias para a conservação de P. mantiqueirensis.

30
REFERÊNCIAS

AGRITEMPO - Sistema de monitoramento agrometereológico. 2016. Disponível em:<

https://www.agritempo.gov.br/agritempo/index.jsp>. Acesso em: 15 de Fev. 2016.

ANDO, T. & HASHIMOTO, G. 1994. A new Brazilian species of Petunia (Solanaceae)

from the Serra da Mantiqueira. Brittonia, 46(4): 340-343.

ANDO, T., NOMURA, M., TSUKAHARA, J., WATANABE, H., KOKUBUN, H.,
TSUKAMOTO, T. & KITCHING, I. J. 2001. Reproductive isolation in a native
population of Petunia sensu Jussieu (Solanaceae). Annals of Botany, 88(3), 403-413.

ARNOLD, S.E.; FARUQ, S.; SAVOLAINEN, V.; MCOWAN, P.W. & CHITTKA, L.
2010. FReD: the floral reflectance database—a web portal for analyses of flower colour.
PloS one: 5(12) e14287.

CANE, J.H. & SIPES, S. 2006. Characterizing floral specialization by bees: analytical
methods and a revised lexicon for oligolecty. In: Waser, N. M.: Ollerton J. (Ed.). Plant-
pollinator interactions: from specialization to generalization. Chicago: The University
of Chicago, p. 99-122.

CASTELLANI, T. T. & LOPES, B. C. 2002. Abundância e biologia reprodutiva de

Petunia littoralis Smith & Downs nas dunas da Praia da Joaquina, Ilha de Santa
Catarina, SC. Biotemas, v. 15, n. 2, p. 7-22.

CENTRO NACIONAL DE CONSERVAÇÃO DA FLORA, 2014. Lista Nacional

Oficial de Espécies da Flora Ameaçadas de Extinção. Disponível em:
http://cncflora.jbrj.gov.br/portal/. Acesso em: 10 de Fev. 2016.

CHITTKA L. & MENZEL R. 1992. The evolutionary adaptation of flower colours and
the insect pollinators' colour vision. Journal of Comparative Physiology A 171: 171-
181.

CHITTKA L.; SHMIDA A.; TROJE N. & MENZEL R. 1994. Ultraviolet as a

component of flower reflections, and the colour perception of Hymenoptera. Vision
research 34: 1489-1508.

CURE, J. R. 1989. Revisão de Pseudagapostemon Schrottky e descrição de

Oragapostemon, gen. n. (Hymenoptera, Halictidae). Revista Brasileira de Entomologia,
v. 33, n. 2, p. 229-335.
31
DAFNI, A., KEVAN, P.G. & HUSBAND, B.C. 2005. Practical pollination ecology.
Cambridge: Enviroquest Ltda.

FREGONEZI, J.N. 2009. História Evolutiva do gênero Calibrachoa La Llave & Lex.
(Solanaceae). Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Porto Alegre. Tese de
Doutorado.

FREGONEZI, J. N., TURCHETTO, C., BONATTO, S.L. & FREITAS, L.B. 2013.
Biogeographical history and diversification of Petunia and Calibrachoa (Solanaceae) in
the Neotropical Pampas grassland. Botanical Journal of the Linnean Society. 171:140–
153.

FUNDAÇÃO BIODIVERSITAS. 2010. Lista da flora brasileira ameaçada

de extinção. Disponível em: http://www.biodiversitas.org.br/listas-
mg/lista_floramg.asp. Acesso em: 03 de Nov. 2015.

GERATS, T. & VANDENBUSSCHE, M. 2005. A model system for comparative

research: Petunia. Trends Plant Sci, 10:251-256.

GRIESBACH, R.J. 2007. Petunia Petunia x hybrida. In: Anderson, N.O. (ed) Flower
Breeding and Genetics - Issues, Challenges and Opportunities for the 21st Century.
Springer, New York, pp 301-336.

GENTRY, A.H. 1974. Flowering phenology and diversity in tropical Bignoniaceae.

Biotropica, 6, 64–68.

KAMINO, L. H. Y., SIQUEIRA, M. F., SÁNCHEZ-TAPIA, A., & STEHMANN, J. R.

2012. Reassessment of the extinction risk of endemic species in the Neotropics: how
can modelling tools help us. Natureza & Conservação, 10(2), 191-198.

KLAHRE, U., GURBA, A., HERMANN, K., SAXENHOFER, M., BOSSOLINI, E.,
GUERIN, P. M., & KUHLEMEIER, C. 2011. Pollinator choice in Petunia depends on
two major genetic loci for floral scent production. Current Biology, 21(9): 730-739.

KOKUBUN, H., NAKANO, M., TSUKAMOTO, T., WATANABE, H., ASHIMOTO,

G., MARCHESI, E. & ANDO, T. 2006. Distribution of self-compatible and self-

32
incompatible populations of Petunia axillaris (Solanaceae) outside Uruguay. Journal of
plant research, 119(5): 419-430.

KRUCKEBERG, A. R.; RABINOWITZ, D. 1985. Biological aspects of endemism in

higher plants. Annual Review of Ecology and Systematics 16: 447-479.

LINSLEY, E.G. 1958. The ecology of solitary bees. Hilgardian 27: 543-599.

MAÊDA, J.M. 1985.Manual para uso da câmara de Neubauer para contagem de pólen
em espécies florestais. Rio de Janeiro: Universidade Federal do Rio de Janeiro.

MICHENER, C. D. 1979. Biogeography of the bees. Annals of the Missouri botanical

Garden, 277-347.

PEITSCH, D., FIETZ, A., HERTEL, H., SOUZA, J., VENTURA, D.F. & MENZEL, R.
1992. The spectral input systems of hymenopteran insects and their receptor-based
colour vision. Journal of Comparative Physiology A 170(1): 23-40.

PINTO, C. E., OLIVEIRA, R. & SCHLINDWEIN, C. 2008. Do consecutive flower

visits within a crown diminish fruit set in mass-flowering Hancornia speciosa
(Apocynaceae)? Plant Biology 10:408–412.

ROUBIK, D.W. 1989. Ecology and natural history of tropical bees. Cambridge,
University Press.

ROUBIK, D. W. 1993. Tropical pollinators in the canopy and understory: field data and
theory for stratum “preferences”. Journal of Insect Behavior, v. 6, n. 6, p. 659-673.

SCHLINDWEIN, C. & WITTMANN, D. 1997. Stamen movements in flowers of

Opuntia (Cactaceae) favour oligolectic pollinators. Plant Systematics and Evolution
204: 179-193.

SCHLINDWEIN, C. 2004. Are oligoletic bees always the most effective pollinators? In
Freitas BM, Pereira JOP (eds) Solitary bees. Conservation, rearing and management for
pollinators. Fortaleza, Imprensa Universitária, 285p.

SCHLINDWEIN, C., WESTERKAMP, C., CARVALHO, A.T. & MILET-PINHEIRO,

P. 2014. Visual signalling of nectar-offering flowers and specific morphological traits
33
favour robust bee pollinators in the mass-flowering tree Handroanthus impetiginosus
(Bignoniaceae). Botanical Journal of the Linnean Society, 2014, 176, 396–407.

STEHMANN, J.R. 1999. Estudos taxonômicos na tribo Nicotianeae (Solanaceae):

revisão de Petunia Jussieu, das espécies brasileiras de Calibrachoa La Llave & Lexarza
e o estabelecimento do novo gênero Petuniopsis Stehmann & Semir. Tese de doutorado,
Universidade Estadual de Campinas, Campinas.

STEHMANN, J.R. & SEMIR, J. 2001. Biologia reprodutiva de Calibrachoa elegans

(Miers) Stehmann & Semir (Solanaceae). Revta brasil. Bot., São Paulo, V.24, n.1, p.43-
49.

STEHMANN, J.R., LORENZ-LEMKE, A.P., FREITAS, L.B. & SEMIR, J. 2009. The
genus Petunia. In: Gerats T & Strommer J (eds) Petunia Evolutionary, Developmental
and Physilogical Genetics, 2ed, Springer, New York, pp 1-28.

STUURMAN, J., HOBALLAH, M. E., BROGER, L., MOORE, J., BASTEN, C &
KUHLEMEIER, C. 2004. Dissection of Floral Pollination Syndromes in Petunia.
Genetics 168: 1585–1599.

WIJSMAN, H.J.W. & JONG, J.H. 1985. On the interrelationships of certain species of
Petunia. IV. Hybridization between P. linearis and P. calycina and nomenclatorial
consequences in the Petunia group. Acta Bot Neerl 34:337-349.

WIJSMAN, H.J.W. 1990. On the inter-relationships of certain species of Petunia VI.

New names for the species of Calibrachoa formely included into Petunia (Solanaceae).
Acta Bot Neerl 39:101-102.

WILMS, W., IMPERATRIZ-FONSECA, V. L. & ENGELS, W. 1996. Resource

partitioning between highly eusocial bees and possible impact of the introduced
Africanized honey bee on native stingless bees in the Brazilian Atlantic Rainforest.
Studies on Neotropical Fauna & Environment 31: 137–151.

WITTMANN, D., RADTKE, R., CURE, J. R. & SCHIFINO-WITTMANN, M. T.

1990. Coevolved reproductive strategies in the oligolectic bee Callonychium petuniae

34
(Apoidea, Andrenidae) and three purple flowered Petunia species (Solanaceae) in
southern Brazil. Z. zool. Syst. Evolut.-forsch. 28:157-165.

35
 CAPÍTULO II

Comportamento de forrageamento de Pseudagapostemon fluminensis

(Schrottky, 1911) em flores de Petunia mantiqueirensis (Solanaceae)

na Serra da Mantiqueira, Minas Gerais

36
RESUMO

Pseudagapostemon fluminensis (Schrottky, 1911) (Halictidae) é o principal

polinizador de Petunia mantiqueirensis (Solanaceae) uma espécie endêmica da Serra da
Mantiqueira, Brasil e ameaçada de extinção. Apesar de ser uma abelha polilética,
apresenta uma interação especializada com P. mantiqueirensis. Para caracterizar o
comportamento de forrageio de pólen por fêmeas de P. fluminensis examinamos sua
fidelidade à manchas de flores, frequência de primeiras visitas florais, revisitas florais e
inspeção florais. O estudo foi realizado em outubro e novembro de 2015. Em uma
mancha de Petunia mantiqueirensis, acompanhamos as atividades de fêmeas de P.
fluminensis nas flores, a fim de determinar a estratégia de forrageio adotada por elas.
Para isso, fêmeas foram marcadas individualmente. O monitoramento da mancha de
observação revelou que 28 % das fêmeas marcadas retornaram a mancha durante vários
dias. As fêmeas diferiram quanto à sua fidelidade, frequência de primeiras visitas
florais, revisitas e inspeções florais. Ao buscar por pólen, fêmeas de Pseudagapostemon
fluminensis podem empregar diferentes comportamentos de forrageio que influenciam
na sua eficiência de coleta. A fidelidade à mesma mancha de flores de P.
mantiqueirensis foi determinante em se alcançar maiores quantidades de pólen.

Palavras-chave: Comportamento animal, forrageamento ótimo, coleta de pólen.

37
INTRODUÇÃO

A Teoria do forrageamento ótimo, proposta na década de 1960, prediz que os

animais forrageiam de modo a maximizar sua aptidão (MacArthur & Pianka, 1966;
Emlen, 1966). Com base nessa teoria, muitos estudos vêm tentando explicar e prever
como os animais devem se comportar na busca de maior ganho energético possível por
unidade de tempo (Charnov, 1976; Pyke et al.,1977; Wells & Wells, 1986; Lihoreau et
al., 2010). Tais estudos assumem que as variações nos comportamentos de forrageio são
hereditárias e susceptíveis a ação da seleção natural (MacArthur & Pianka, 1966).
A eficiência de um forrageador pode ser influenciada por diversos fatores como,
tamanho (Spaethe et al., 2000) e experiência do indivíduo (Chittka & Thomson,1997),
distribuição e disponibilidade dos recursos alimentares (Pyke et al.,1977) e competição
por recursos (Belovsky, 1997). Uma das maneiras de maximizar o forrageamento é o
desenvolvimento de fidelidade a um local de forrageio, através de retornos e
reutilização das mesmas áreas de forrageio (MacArthur & Pianka, 1966; Arthur et al.,
2015).
Por sua vez, polinizadores escolhem seu local de forrageamento e sua fonte de
recursos de acordo com a disponibilidade e atratividade dos recursos florais (Heinrich,
1975; Roubik 1989), visto que há uma grande variedade de fontes de recursos
disponíveis. Abelhas podem aprender os locais mais atrativos e retornar para essas
plantas na expectativa de recompensas (Thomson et al., 1997; Makino & Sakai, 2007).
Estudos relatam que operárias de Bombus (Apidae) visitam mais frequentemente plantas
gratificantes (Thomson, 1988; Cartar, 2004) e evitam plantas intensivamente visitadas
por outras abelhas (Thomson et al.,1987; Makino & Sakai, 2005). Ao aprender os locais
de plantas rentáveis, abelhas podem evitar perdas de tempo e energia ao visitar plantas
menos rentáveis e, assim, forragear eficientemente. Neste contexto, a fidelidade ao local
de forrageio pode beneficiar indivíduos familiares com os recursos além de reduzir a
predação.
De maneira geral, comportamentos de forrageamento de recursos florais,
principalmente néctar, são bem descritos em abelhas sociais, como Apis mellifera
(Ribbands, 1949; Kacelnick et al. 1986; Wells & Wells, 1986; Camazine, 1993) e
algumas espécies de Bombus (Manning, 1956; Thomson et al., 1982, 1987; Comba,

38
1999; Ohashi & Thomson, 2009). No entanto, estudos de forrageamento em abelhas
solitárias são muito raros (Janzen, 1971; Ackerman et al., 1982).
Pseudagapostemon fluminensis (Schrottky, 1911) (Halictidae) é o principal
polinizador de Petunia mantiqueirensis (Solanaceae) uma espécie endêmica da Serra da
Mantiqueira, Brasil, ameaçada de extinção (Capítulo I). Apesar de ser uma abelha
polilética, apresenta uma interação especializada com P. mantiqueirensis: as fêmeas
adotam um comportamento de coleta de pólen eficiente em P. mantiqueirensis com qual
elas garantem a primeira visita floral em flores cheias de pólen em qualquer horário do
dia. As flores dessa planta abrem, sobretudo pela manhã, mas não mostram um horário
sincronizado de abertura das flores o que torna o momento de apresentação de pólen
bastante imprevisível. Em todas as flores monitoradas dessa espécie, as fêmeas de P.
fluminensis fizeram as três primeiras visitas florais o que lhes garante quase a totalidade
do pólen, já que estas fêmeas removem mais que 85% do pólen já na primeira visita
floral em P. mantiqueirensis (Capítulo I). Além disso, são polinizadores efetivos, e os
visitantes florais mais frequentes ao longo da floração em vários anos. No entanto, o
comportamento adotado pelas fêmeas para garantir uma alta eficiência de coleta de
pólen não é conhecido.
Neste estudo, avaliamos o comportamento de forrageio de P. fluminensis em
flores de Petunia mantiqueirensis e focamos nas seguintes questões: (1) Quais as
características de comportamento de forrageio de P. fluminensis em flores de Petunia
mantiqueirensis? (2) Fêmeas diferem quanto à sua eficiência de coleta de pólen?

MATERIAIS E MÉTODOS

Local de estudo

Local de estudo

O estudo foi realizado em uma área rural, nos municípios de Camanducaia e

Gonçalves, situados na Serra da Mantiqueira no sul do estado de Minas Gerais (S22º
42.494' W45º 56.536'). O trabalho de campo foi realizado em outubro e novembro de
2015. O local de estudo está situado na Área de Proteção Ambiental (APA) Fernão
Dias, a 1750 metros de altitude, onde predomina Floresta Ombrófila Mista (Floresta
39
com Araucária). As temperaturas médias mensais no período do estudo variaram de
10ºC a 23ºC (Agritempo, 2016). O clima é úmido ao longo do ano e a média mensal de
precipitação foi de 95 mm nos período do estudo (Agritempo, 2016). Na região capões
de mata nativa intercalam-se com áreas cultivadas e pastagens.

Espécies estudadas

Petunia mantiqueirensis é uma erva procumbente, podendo apresentar ramos

ascendentes que se apoiam à vegetação arbustiva crescendo ao seu redor. As plantas
ocorrem em locais com solo úmido e parcialmente sombreados, em áreas com Floresta
com Araucária (Araucaria angustifolia, Araucariaceae) em Minas Gerais, Brasil. Assim
como a maioria das outras espécies melitófilas de Petunia, apresenta corola chamativa
com coloração magenta O tubo floral é branco com nervuras púrpuras (Ando &
Hashimoto, 1994) e o pólen é azul. É a espécie que apresenta as plantas mais altas do
gênero, e seus ramos podem atingir até quatro metros de altura (Ando & Hashimoto,
1994). A espécie é rara (Kruckeberg & Rabinowitz 1985), e apresenta distribuição
restrita com populações pequenas. Desta maneira foi classificada como espécie
ameaçada de extinção (Kamino et al. 2012; Fundação Biodiversitas, 2010; CNCFlora,
2014).
Pseudagapostemon Schrottky é um gênero da família Halictidae que possui 25
espécies descritas (Michener, 2007). Suas espécies apresentam distribuição Neotropical,
ocorrendo exclusivamente na América do Sul, do norte do Brasil ao Chile e Argentina
(Michener, 2007; Cure, 1989). O gênero é composto por três subgêneros bem definidos,
P. (Brasilagapostemon) Moure e Sakagami, P. (Neagapostemon) Cure e P.
(Pseudagapostemon) Schrottky. No subgênero P. (Brasilagapostemon), destaca-se
como espécie tipo P. fluminensis (Schrottky, 1911), que ocorre em Minas Gerais, São
Paulo e Paraná e no local do estudo constitui o principal polinizador de P.
mantiqueirensis (Fig. 1).

40
Figura 1. Flores de Petunia mantiqueirensis e visitas florais de Pseudagapostemon
fluminensis.

Comportamento de forrageio de pólen

O comportamento de forrageio de pólen por fêmeas de Pseudagapostemon

fluminensis foi caracterizado quanto (1) sua fidelidade à manchas de flores, que indica
durante quantos dias uma abelha marcada retorna à mesma mancha de flores; (2)
frequência de primeiras visitas florais; (3) revisitas florais, que indica quantas vezes ao
dia uma abelha marcada visita uma mesma flor, e (4) inspeção floral. Inspeção floral foi
quando a abelha paira em frente à flor, podendo tocar a corola por um instante (menos
que 3 seg.), mas não pousando no limbo das pétalas ou no centro da flor. Nas inspeções,
as abelhas nunca contataram anteras e estigma.

Em uma mancha de Petunia mantiqueirensis, acompanhamos as atividades de

fêmeas de P. fluminensis nas flores, a fim de determinar a estratégia de forrageio
adotadas por elas. O monitoramento das fêmeas foi realizado durante 14 dias não
consecutivos, em dias ensolarados, entre 08:00 e 15:00 horas. Para isso, 24 fêmeas
foram marcadas individualmente no mesossoma com código de cores, utilizando-se
tintas coloridas Revell (© 2012 Revell Gmbh & Co. KG, Bünde, Nordrhein-Westfalen,
Germany). As abelhas foram acondicionadas por cerca de 5 minutos à baixa
temperatura em uma caixa de isopor até alcançarem um estado de torpor. As fêmeas
foram marcadas ao longo das observações. Quando apareceram fêmeas não marcadas,
estas foram removidas temporariamente e marcadas. Na mancha, todas as flores abertas
por dia foram marcadas.
A eficiência de uma fêmea foi definida como a frequência com qual ela coleta o
pólen de flores novas, considerando a primeira-visita equivalente ao pólen ganho desta

41
flor, já que a fêmea de P. fluminensis remove 86% do pólen, durante a primeira vista a
uma flor (Capítulo I).
Para avaliar a relação dos comportamentos adotados pelas fêmeas, como
inspeções e revisitas, e certos parâmetros do forrageio, como intervalos de revisitas com
a frequência de primeiras visitas, foi utilizada o Coeficiente de Correlação de Spearman
(rs). Consideramos apenas as fêmeas que retornaram à mancha pelo menos um dia. As
análises foram feitas no software Statistica 7.0.

RESULTADOS

Caracterização da mancha de flores

Na mancha de Petunia mantiqueirensis estudada estiveram abertas, em média,

29,2±10,1 flores por dia durante os 14 dias de observação, dentre essas, em média
8,1±2,8 eram novas (amplitude: 5 a 12 flores).

Comportamento de forrageio de Pseudagapostemon fluminensis

Fidelidade à área de forrageio

Foram marcadas 24 fêmeas de P. fluminensis com códigos individuais. O

monitoramento da mancha de observação revelou que 11 indivíduos (28 %) retornaram
a esta mancha entre cinco e 13 dias. Sete fêmeas marcadas não foram revistas na
mancha (Fig. 2).

42
 35

30
Frequência de fêmeas (%) 25

20

15

10

0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13

Dias

Figura 2. Fidelidade de fêmeas de Pseudagapostemon fluminensis individualmente

marcadas à uma macha de flores de Petunia mantiqueirensis para forrageio de pólen.

Revisitas florais

As fêmeas diferiram quanto à sua frequência de visitas florais diárias na mesma

mancha. Os visitantes revisitaram a mancha de uma a 11 vezes por dia (3,3±2,3) ao
longo dos 14 dias de observações. O intervalo médio de revisitas à mancha variou de 10
a 222 minutos (40,9±41,8 minutos). Em 30% dos casos, as revisitas à mancha
ocorreram nos 10 minutos após a visita anterior e em 23% as revisitas ocorreram após
60 minutos.

Eficiência no forrageio de pólen

Entre as fêmeas marcadas, a variação na frequência média de primeiras visitas

por dia foi entre 0 e 28% (Fig. 3).

43
 30
Frequência de primeiras visitas
25

20

15
(%)

10

0
F1 F2 F3 F4 F5 F6 F7 F8 F19 F10 F11
Fêmea

Figura 3- Frequência da primeira visita após início de antese em flores de Petunia

mantiqueirensis realizadas por fêmeas individualmente marcadas de
Pseudagapostemon fluminensis.

Em relação ao comportamento de busca por recursos, o número médio de

inspeções florais por fêmea variou entre 0,5 e 8,5 por dia (Fig. 4).

9
8
Número de inspeções

7
6
5
4
3
2
1
0
F1 F2 F3 F4 F5 F6 F7 F8 F19 F10 F11

Fêmea

Figura 4- Número médio de inspeções realizadas por fêmeas individuais de

Pseudagapostemon fluminensis a flores de Petunia mantiqueirensis.

Houve uma forte correlação entre a eficiência das fêmeas e a fidelidade (rs=0,93;
p<0,001) (Fig. 5), indicando que aquelas fêmeas mais fiéis à mesma mancha foram as
mais eficientes na coleta de pólen em P. mantiqueirensis. Elas fizeram o maior número
de primeiras visitas às flores. No entanto, embora não significativas, observou-se clara
44
tendência positiva na relação entre eficiência e número médio de revisitas a flores (rs=
0,59; p>0,05; N=11) e eficiência e número médio de inspeções (rS=0,42; p>0,05;
N=11).

30

25
Frequência de primeira visita

20

15

10

0
0 2 4 6 8 10 12 14

Fidelidade

Figura 5. Relação entre a fidelidade das fêmeas de Pseudagapostemon fluminensis e a

frequência de primeiras visitas realizadas (rs=0,93; p<0,001; N=11).

DISCUSSÃO

Neste estudo demonstramos que, ao buscar por pólen, fêmeas de

Pseudagapostemon fluminensis podem empregar diferentes comportamentos de
forrageio que influenciam na sua eficiência de coleta. A fidelidade à mesma mancha de
flores de P. mantiqueirensis foi determinante em se alcançar maiores quantidades de
pólen. O fenômeno da fidelidade ao sítio de coleta pode ser considerado adaptativo à
medida que ao retornarem à mesma mancha, as fêmeas aprendem a reconhecer as mais
rentáveis em termos de oferta de recurso (Wells & Wells, 1986; Williams & Thomson,
1998; Ohashi et al., 2008). Ao acumular experiência de forrageio, fêmeas mais fiéis
adquirem a capacidade de ajustar seu comportamento de forrageio à dinâmica de oferta
do seu principal recurso polínico. Abelhas inexperientes de Bombus, por exemplo,
empregam o tamanho da planta e informações sobre idade ou estágio de
desenvolvimento das flores ao escolher que plantas visitar e quando partir para outra
mancha de flores (Makino & Sakai, 2007). Abelhas experientes dispõem da mesma
informação disponível para as ingênuas, mas adicionalmente dispõe das baseadas na sua
45
experiência anterior. Fêmeas de P. fluminensis podem inspecionar um número elevado
de flores, antes de iniciar as visitas. Através desse comportamento, a fêmea pode
adquirir experiência e distinguir as flores rentáveis, desprendendo menos energia e
tempo nas próximas visitas às manchas.
Polinizadores podem variar individualmente quanto a várias características do
seu forrageio, incluindo preferências por manchas de flores, velocidade de
deslocamento entre as manchas e eficiência de manuseio das flores. As marcações
individuais de fêmeas de P. fluminensis mostraram a existência de variação
intrapopulacional na eficiência de forrageamento entre as fêmeas em relação à
fidelidade, revisitas e inspeções às flores.
Para nosso conhecimento, este é o primeiro estudo que quantifica e relaciona o
emprego de diferentes comportamentos de forrageio com a eficiência de coleta de pólen
em abelhas solitárias. Como pólen é um recurso crítico para produção da prole, em
estudos futuros seria interessante verificar o efeito dessas variações comportamentais
individuais no número médio de células de cria provisionadas por uma fêmea. Apenas
desta forma saberemos os efeitos desse comportamento no sucesso reprodutivo das
fêmeas.

46
REFERÊNCIAS

ACKERMAN, J. D., MESLER, M. R., LU, K. L., & MONTALVO, A. M. 1982. Food-
foraging behavior of male Euglossini (Hymenoptera: Apidae): vagabonds or
trapliners?. Biotropica, 241-248.

AGRITEMPO - Sistema de monitoramento agrometereológico. 2016. Disponível em:<

https://www.agritempo.gov.br/agritempo/index.jsp>. Acesso em: 15 de Fev. 2016.

ANDO, T. & HASHIMOTO, G. 1994. A new Brazilian species of Petunia (Solanaceae)

from the Serra da Mantiqueira. Brittonia, 46(4): 340-343.

ARTHUR, B., HINDELL, M., BESTER, M., TRATHAN, P., JONSEN, I.,
STANILAND, I. & LEA, M. A. 2015. Return customers: foraging site fidelity and the
effect of environmental variability in wide-ranging Antarctic fur seals. PloS one, 10(3),
e0120888.

BELOVSKY, G. E. 1997. Optimal foraging and community structure: the allometry of

herbivore food selection and competition. Evolutionary Ecology,11(6), 641-672.

CAMAZINE, S. 1993. The regulation of pollen foraging by honey bees: how foragers
assess the colony's need for pollen. Behavioral Ecology and Sociobiology, 32(4), 265-
272.

CARTAR, R.V. 2004. Resource-tracking by bumble bees: responses to plant-level

differences in quality. Ecology. 85:2764–2771.

CENTRO NACIONAL DE CONSERVAÇÃO DA FLORA, 2014. Lista Nacional

Oficial de Espécies da Flora Ameaçadas de Extinção. Disponível em:
http://cncflora.jbrj.gov.br/portal/. Acesso em: 10 de Fev. 2016.

CHARNOV, E. L. 1976. Optimal foraging, the marginal value theorem.Theoretical

population biology, 9(2), 129-136.

CHITTKA, L., & THOMSON, J. D. 1997. Sensori-motor learning and its relevance for
task specialization in bumble bees. Behavioral Ecology and Sociobiology, 41(6), 385-
398.

47
COMBA, L. 1999. Patch use by bumblebees (Hymenoptera Apidae): temperature, wind,
flower density and traplining. Ethology Ecology & Evolution, 11(3), 243-264.

CURE, J. R. 1989. Revisão de Pseudagapostemon Schrottky e descrição de

Oragapostemon, gen. n. (Hymenoptera, Halictidae). Revista Brasileira de Entomologia,
v. 33, n. 2, p. 229-335.

EMLEN, J. M. 1966. The role of time and energy in food preference. Am. Nat., 100: 61
1-617.

FUNDAÇÃO BIODIVERSITAS. 2010. Lista da flora brasileira ameaçada

de extinção. Disponível em: http://www.biodiversitas.org.br/listas-
mg/lista_floramg.asp. Acesso em: 03 de Nov. 2015.

JANZEN, D. H. 1971. Euglossine bees as long-distance pollinators of tropical

plants. Science, 171(3967), 203-205.

HEINRICH, B. 1975. Energetics of pollination. Annual Review of Ecology and

Systematics 6: 139–170.

KACELNIK, A., HOUSTON, A. I., & SCHMID-HEMPEL, P. 1986. Central-place

foraging in honey bees: the effect of travel time and nectar flow on crop
filling. Behavioral Ecology and Sociobiology, 19(1), 19-24.

KAMINO, L. H. Y., SIQUEIRA, M. F., SÁNCHEZ-TAPIA, A., & STEHMANN, J. R.

2012. Reassessment of the extinction risk of endemic species in the Neotropics: how
can modelling tools help us. Natureza & Conservação, 10(2), 191-198.

KRUCKEBERG, A. R.; RABINOWITZ, D. 1985. Biological aspects of endemism in

higher plants. Annual Review of Ecology and Systematics 16: 447-479.

LIHOREAU, M., CHITTKA, L., & RAINE, N. E. (2010). Travel optimization by

foraging bumblebees through readjustments of traplines after discovery of new feeding
locations. The American Naturalist, 176(6), 744-757.

MACARTHUR, R. H., & PIANKA, E. R. 1966. On optimal use of a patchy

environment. American Naturalist, 603-609.

48
MAKINO, T. T., & SAKAI, S. 2005. Does interaction between bumblebees (Bombus
ignitus) reduce their foraging area?: bee-removal experiments in a net cage. Behavioral
Ecology and Sociobiology, 57(6), 617-622.

MAKINO, T. T., OHASHI, K., & SAKAI, S. 2007. How do floral display size and the
density of surrounding flowers influence the likelihood of bumble bee revisitation to a
plant?. Functional Ecology, 21(1), 87-95.

MANNING, A. 1956. Some aspects of the foraging behaviour of bumble-bees.

Behaviour, 9(1), 164-200.

MICHENER, C.D. 2007. The bees of the world. Baltimore, MD: Johns Hopkins
University
Press.

OHASHI, K., LESLIE, A., & THOMSON, J. D. 2008. Trapline foraging by bumble
bees: V. Effects of experience and priority on competitive performance.Behavioral
Ecology, 19(5), 936-948.

OHASHI, K., & THOMSON, J. D. 2009. Trapline foraging by pollinators: its ontogeny,
economics and possible consequences for plants. Annals of Botany, mcp088.

PYKE, G. H.,. PULLIAM, H. R & CHARNOV, E. L. 1977. Optimal Foraging: A

Selective Review of Theory and Tests. The Quarterly Review of Biology, 52(2): 137-
154.

RIBBANDS, C. R. 1949. The foraging method of individual honey-bees. The Journal of

Animal Ecology, 47-66.

ROUBIK, D. W. 1989. Ecology and natural history of tropical bees. Cambridge

Uniersity Press. 514p.

SPAETHE, J. TAUTZ,J. & CHITTKA,L. 2000. Foraging economics in bumble bees:

do larger bees do a better job? In International Behavioral Ecology Congress, Zürich,
Abstract Volume, p.185.

THOMSON, J.D. 1988. Effects of variation in inflorescence size and floral rewards on
the visitation rates of traplining pollinators of Aralia hispida. Evol Ecol. 2:65–76.
49
THOMSON, J. D., MADDISON, W. P., & PLOWRIGHT, R. C. 1982. Behavior of
bumble bee pollinators of Aralia hispida Vent.(Araliaceae). Oecologia, 54(3), 326-336.

THOMSON, J. D., PETERSON, S. C., & HARDER, L. D. 1987. Response of traplining

bumble bees to competition experiments: shifts in feeding location and
efficiency. Oecologia, 71(2), 295-300.

THOMSON, J.D., SLATKIN, M. & THOMSON, B.A. 1997. Trapline foraging by

bumble bees: II. Definition and detection from sequence data. Behav Ecol. 8:199–210.

WELLS, H., & WELLS, P. H. 1986. Optimal diet, minimal uncertainty and individual
constancy in the foraging of honey bees, Apis mellifera. The Journal of Animal
Ecology, 881-891.

WILLIAMS, N. M., & THOMSON, J. D. (1998). Trapline foraging by bumble bees:

III. Temporal patterns of visitation and foraging success at single plants. Behavioral
Ecology, 9(6), 612-621.

50