Biosíntesis de Los Alcaloides Indólicos

Rev. Soc. Quím. Méx.
2004, 48, 67-94
Revisión
Biosíntesis de los alcaloides indólicos. Una revisión crítica

Víctor M. Loyola-Vargas*, Patricia Sánchez-Iturbe, Blondy Canto-Canché, Luis C. Gutiérrez-Pacheco,
Rosa M. Galaz-Ávalos y Oscar Moreno-Valenzuela
Unidad de Bioquímica y Biología Molecular de Plantas, Centro de Investigación Científica de Yucatán, Calle 43 No. 130, Colonia
Chuburná de Hidalgo, CP 97200, Mérida, Yuc. Correo electrónico: [email protected]. Tel. (999)-9813961, fax (999)-9813900
Recibido el 4 de noviembre del 2004; aceptado el 8 de enero del 2004
Resumen. Los alcaloides son uno de los grupos de metabolitos Abstract. Alkaloids are one of most diverse groups of secondary
secundarios más diversos encontrados en los organismos vivos. Este metabolites found in living organisms. This group includes around
grupo incluye alrededor de 12,000 productos, entre los cuales se 12,000 products, among them we can find indole alkaloids, which are
encuentran los alcaloides indólicos, alcaloides derivados del triptofa- derived from tryptophan and comprise around 25% of all alkaloids.
no que conforman alrededor de la cuarta parte de todos ellos. Los These types of alkaloids are present in several family plants, mainly
alcaloides se han reportado en varias familias vegetales, pero princi- Apocinaceae, Loganiaceae and Rubiaceae, all of them from the
palmente en las Apocinacea, Loganiaceae y Rubiaceae, todas del Gentiales order. The most economically important alkaloids are the
orden Gentianales. Entre los alcaloides más importantes se tiene a los bisindolics vinblastine, used for treating Hodgkin’s disease, and vin-
de tipo bisindólico como la vinblastina, utilizada en el tratamiento del cristine, used for children’s leukemia. Furthermore, the monoterpene
mal de Hodgkin, y a la vincristina empleada en el tratamiento de la alkaloids ajmalicine and serpentine are utilized as antihypertensive
leucemia; además de los alcaloides monoterpén-indólicos ajmalicina agents against cardiac arrythmias and the improvement of the brain’s
y serpentina utilizados como agentes antihipertensivos contra las blood circulation. The complexity of the genetic, catalytic and trans-
arritmias cardiacas y el mejoramiento de la circulación cerebral. La port processes of the monoterpene indole alkaloid biosynthesis are
complejidad de los procesos genéticos, catalíticos y de transporte en actually one of the more stimulating intellectual challenges in plant
la biosíntesis de los alcaloides monoterpén indólicos, es actualmente secondary metabolism field. More than 50 metabolic steps are requi-
uno de los retos intelectuales más estimulantes en el área de los meta- red to synthetize the most important alkaloids in Catharanthus
bolitos secundarios. Si bien se requieren más de 50 pasos metabólicos roseus. Until now about only 20 of the 50 enzymes required for their
para sintetizar los alcaloides más importantes producidos por C. biosynthesis have been determined and characterized. Hence, there is
roseus, hasta ahora solamente se han determinado y caracterizado, en still an important number of enzymes that need to be characterized
algún grado, 20 de las enzimas requeridas. Faltan aún por elucidar un and genes to be isolated and cloned. It is also fundamental to elucida-
importante número de pasos metabólicos, para después purificar las te the regulatory aspects of their biosynthesis, both at the cellular and
correspondientes enzimas e intentar clonar sus genes. También es the molecular level, in order to address the question of their function
necesario elucidar los diversos aspectos de la regulación de la biosín- in the plants producing them. In this review, an analysis of the state
tesis de los alcaloides, tanto en el nivel celular como en el molecular, of the art related to the biosynthesis of the monoterpene indole alka-
pero sobre todo determinar cual es su función en las plantas que los loids is presented.
producen. En esta revisión se presenta un análisis del estado actual Keywords: Catharanthus roseus, alkaloid, biosynthesis,
que guarda el conocimiento en las rutas de biosíntesis de los alcaloi- secundary metabolism.
des monoterpén-indólicos en C. roseus.
Palabras clave: Catharanthus roseus, alcaloide, biosíntesis,
metabolitos secundarios.
Introducción Con base en esta clasificación se tienen cuatro grupos: 1) alca-

loides derivados de aminoácidos tales como ornitina/arginina,
Los alcaloides son uno de los grupos más diversos de metabo- lisina, histidina, fenilalanina/tirosina, triptofano, y del ácido
litos secundarios encontrados en los organismos vivos. Si bien antranílico y el ácido nicotínico; 2) alcaloides purínicos; 3)
los alcaloides han sido aislados tradicionalmente de las plan- terpenos aminados y 4) alcaloides policétidos.
tas, de las cuales alrededor del 20% los contienen [1], actual- Entre los alcaloides derivados del triptofano se encuentran
mente se ha reportado la presencia de un número creciente de los alcaloides indólicos, mismos que pueden ser reagrupados
este tipo de metabolitos en animales, insectos, invertebrados en monoterpernos o indol terpenos (iridoides). Dentro del
marinos y microorganismos [2]. Una gran cantidad de alcaloi- grupo de alcaloides indólicos existen numerosos subgrupos,
des han sido empleados en la medicina, y muchos de ellos aún los cuales dependen del modo de ciclización después de la
son prominentes fármacos hoy en día [3]. remoción del residuo de glucosa de la estrictosidina (Figura
En el grupo de sustancias químicas conocidas como alca- 1). En este caso se pueden reconocer 8 subgrupos: corinante,
loides, alrededor de unas 12,000 [1], se agrupan a una gran aspidosperma, iboga, estricnano, plumerano, eburnano, vale-
variedad de constituyentes químicos, por lo que estos metabo- siacontamano y aparicino [4].
litos se han estructurado de acuerdo con su origen biogenético.
68 Rev. Soc. Quím. Méx. 2004, 48 Víctor M. Loyola-Vargas, et al.
Fig. 1. Alcaloides indólicos sintetizados a partir de la estrictosidina [4, 5].
Alcaloides monoterpén indólicos mias cardiacas y el mejoramiento de la circulación cerebral [3;

14]. Actualmente el costo de la vinblastina en el mercado es
Los alcaloides monoterpén-indólicos (AMIs) conforman una de aproximadamente un millón de dólares por kilogramo;
familia de más de 3,000 miembros, de los cuales sólo en algu- teniéndose una producción anual de 12 Kg. Por otra parte, la
nos casos se conoce su efecto fisiológico en los mamíferos [6; vincristina alcanza un costo de 3.5 millones de dólares por
7]. Este tipo de alcaloides se han encontrado en varias familias kilogramo y su producción anual es de 1 kilogramo. El alto
vegetales, pero principalmente en las Apocinacea, costo de estos alcaloides se debe a que encuentran en concen-
Loganiaceae, Nissaceae y Rubiaceae, todas del orden traciones muy bajas en la planta (alrededor de 0.0005% PS) y
Gentianales. Entre las plantas más conocidas y estudiadas que su extracción se lleva a cabo en presencia de otros 200 alcaloi-
producen AMIs se tienen a Catharanthus roseus, des con propiedades químicas y físicas similares [15,16].
Tabernaemontana divaricata y Rauvolfia serpentina [8,9]. Esta problemática planteó la necesidad de encontrar fuen-
tes alternas para la obtención de alcaloides bisindólicos. Al
Catharanthus roseus principio de la década de los ochentas se pensaba que el culti-
vo de tejidos vegetales podría ser la alternativa; sin embargo,
Catharanthus roseus (L.) G. Don, es una planta perenne de la hasta ahora, y después de un gran esfuerzo de investigación,
familia de las Apocinaceas de distribución pantropical origi- los alcaloides de importancia farmacológica de C. roseus sólo
naria de Madagascar, que ha sido cultivada con fines orna- han sido obtenidos en concentraciones muy bajas [12,14,17,
mentales gracias a que durante la mayor parte del año presenta 18]. Entre las principales causas de la falta de éxito para la
flores de color rosa o blanco [10]. Esta planta ha sido usada en obtención de alcaloides y otros productos de importancia eco-
la medicina tradicional como agente hipoglucémico [11]; el nómica a partir de cultivo de tejidos vegetales, se encuentra la
interés por esta planta se debe a que sigue siendo una fuente falta de conocimiento de las vías de biosíntesis y degradación
importante de agentes quimioterapéuticos con actividad anti- de estos productos.
cancerígena [3,10] y a que produce una gran variedad de
AMIs [10,12], la mayoría de los cuales poseen actividad far-
macológica. Entre los alcaloides más importantes producidos Biosíntesis de AMIS
por C. roseus están los del tipo bisindólico que incluyen a la
vinblastina, utilizada en el tratamiento del mal de Hodgkin La biosíntesis de los AMIs producidos por C. roseus (Figura
[3], y a la vincristina empleada en el tratamiento de la leuce- 2) es extremadamente compleja y requiere de la conjunción
mia [3]; esta planta también produce los agentes antihiperten- de dos vías metabólicas: la vía indólica y la vía terpénica
sivos ajmalicina y serpentina [13] utilizados contra las arrit- [19,20].
Biosíntesis de los alcaloides indólicos. Una revisión crítica 69
Fig. 2. Estructura de los AMIs: ajmalicina (A), catarantina (B), vindolina (C) alcaloides monoterpén-indólicos y de los alcaloides bisindólicos
vincristina (D, VCR) y vinblastina (D, VLB).
La enzima L-aminoácido-aromático carboxi-liasa (EC para la biosíntesis de terpenoides en el citoplasma, y 2) la ruta

4.1.1.28)1 (nc = triptofano descarboxilasa) cataliza la conver- de la 1-deoxi-D-xilulosa-5-fosfato en los plástidos (Figura 3)
sión de L-triptofano a L-triptamina, el derivado indólico de [23,24].
los AMIs y de esta manera deriva triptofano hacia el metabo- La ruta metabólica del mevalonato está basada en las
lismo secundario. La triptamina y la secologanina, el precur- investigaciones realizadas sobre la biosíntesis de los esteroles,
sor monoterpén-glucoiridoide, son condensados para formar principalmente en mamíferos y levaduras [34]. En las plantas
estrictosidina, un glucoalcaloide precursor de todos los alca- estos mecanismos son similares, sin embargo, la cantidad de
loides aislados de C. roseus. La enzima que cataliza la con- productos finales que sintetizan los vegetales a partir de esta
densación de la triptamina y de la secologanina es la 3-α(S)- molécula, es mucho mayor.
estrictosidina triptamina-liasa (EC 4.3.3.2) (nc = estrictosidina La vía del mevalonato se inicia con la conjugación de dos
sintasa). moléculas de acetil-CoA por la acetil-CoA:acetil-CoA C-ace-
Los precursores inmediatos de los AMIs, triptamina y tiltransferasa (EC 2.3.1.9) (nc = acetil-CoA C-acetiltransfera-
secologanina, requieren a su de vez precursores provenientes sa) (Reacción 1, figura 3). En el siguiente paso la acetilo-
del metabolismo primario. En las plantas, al igual que en los CoA:acetoacetil-CoA C-acetiltransferasa (EC 2.3.3.10) (nc =
animales y los microorganismos, los precursores de los ami- hidroximetilglutaril-CoA sintasa) une al acetoacetil-CoA con
noácidos aromáticos fenilalanina, tirosina y triptofano provie- otra molécula de acetil-CoA para formar la 3-hidroxi-3-metil-
nen de la vía metabólica del ácido shikímico [21,22]. glutaril-CoA (Reacción 2, figura 3), la cual es reducida a (R)-
mevalonato por la enzima (R)-mevalonato:NADP oxidorre-
ductasa-CoA (CoA-acetilante) (EC 1.1.1.34) (nc = hidroxime-
Biosíntesis de secologanina tilglutaril-CoA reductasa, HMGR) (Reacción 3, figura 3). El
(R)-mevalonato es fosforilado dos veces, primero por la
La vía del mevalonato que da lugar a la biosíntesis de la seco- ATP:(R)-mevalonato-5-fosfotransferasa (EC 2.7.1.36) (nc =
loganina, es una ruta mucho más compleja y ramificada que la mevalonato cinasa) (Reacción 4, figura 3) y luego por la
vía del ácido shikímico. Las plantas poseen dos rutas indepen- ATP:(R)-5-fosfomevalonato fosfotransferasa (EC 2.7.4.2) (nc
dientes de biosíntesis del isopentenil pirofosfato para la for- = fosfomevalonato cinasa) (Reacción 5, figura 3) para obtener
mación de isoprenoides que funcionan en compartimientos (R)-5-difosfomevalonato. Por último, el (R)-5-difosfomevalo-
celulares diferentes: 1) la ruta clásica del acetato/mevalonato nato es descarboxilado por la ATP:(R)-5-difosfomevalonato
carboxiliasa (deshidratante) (EC 4.1.1.33) (nc = difosfomeva-
lonato descarboxilasa) a isopentenil pirofosfato (IPP)
1 La primera vez que se nombra una enzima se da el nombre sistemático y el (Reacción 6, figura 3).
número asignado por la Comisión de Enzimas (EC) de la IUBMB El IPP es convertido a su isómero reactivo el dimetilalil
(www.chem.qmul.ac.uk/iubmb/enzyme/) y entre paréntesis se da el nombre difosfato (DMAPP) por la isopentenil-difosfato ∆3-∆2 isome-
común; a partir de la segunda vez que se nombra la enzima, y en los pies de
las figuras se utiliza el nombre común.
rasa (EC 5.3.3.2) (nc = isopentenil-difosfato ∆-isomerasa)
Fig. 3. Ruta para la biosíntesis del isopentenil pirofosfato (IPP). Los números dentro del círculo indican las enzimas: acetil-CoA C-acetiltransfe-
rasa (1); 3-hidroxi-3-metilglutaril CoA sintasa (2); 3-hidroxi-3-metilglutaril CoA reductasa (3); mevalonato cinasa (4); 5-fosfomevalonato cina-
sa (5); difosfomevalonato descarboxilasa (6); 1-deoxi-D-xilulosa-5-fosfato sintasa (7); 1-deoxi-D-xilulosa-5-fosfato reductoisomerasa (8); 2-C-
metil-D-eritriol 4-fosfato citidiltransferasa (9); 4-(citidina 5’-difosfo)-2-C-metil-D-eritriol cinasa (10); 2-C-metil-D-eritriol 2,4-ciclodifosfato
sintasa (11); 4-hidroxi-3-metilbut-2-en-1-il difosfato sintasa (12); 4-hidroxi-3-metilbut-2-enil difosfato reductasa (13), isopentenil difosfato iso-
merasa (14) [23-33].
(Reacción 14, figura 3; reacción 1, figura 4). La condensación sintetizar carotenos a partir de [14C]-acetato, lo que sugiere
del DMAPP con una molécula de IPP es llevada a cabo por la que en ellos también se lleva a cabo la biosíntesis de IPP.
dimetilalil-difosfato:isopentenil-difosfato dimetilaliltrans- Como se creía que la HMGR tendría que estar involucrada (y
transferasa (EC 2.5.1.1) (nc = dimetilaliltrans transferasa) ésta se localiza en el retículo endoplásmico) se propuso la
(Reacción 2, figura 4) y genera el geranil-difosfato (GPP), ini- existencia de una HMGR plastídica. Sin embargo, este no fue
ciándose de esta forma la biosíntesis de los monoterpenos; el caso, lo que se obtuvo fue una nueva ruta metabólica para la
posteriormente la geranil-difosfato:isopentenil-difosfato gera- síntesis del IPP plastídico [44, 45].
niltranstransferasa (EC 2.5.1.10) (nc = geraniltranstransfera- La ruta de la 1-desoxi-D-xilulosa-5-fosfato sintasa, descu-
sa) cataliza la unión del GPP con una molécula de IPP y pro- bierta en Escherichia coli por Rohmer et al. [48], se inicia con
ducir trans, trans-farnesil difosfato (Reacción 3, figura 4) y la condensación entre el piruvato y el gliceraldehído-3-P para
dirigirse a la biosíntesis de los sesquiterpenos, triterpenos, dar la 1-deoxi-D-xilulosa-5-P, en una reacción dependiente de
diterpenos, etc. [35] (Figura 4). A diferencia de los animales, tiamina y catalizada por la 1-desoxi-D-xilulosa-5-fosfato sin-
en las plantas algunas de las enzimas descritas para esta parte tasa (EC 2.2.1.7) [49] (Reacción 7, figura 3). Esta enzima fue
de la ruta se encuentran formando complejos multienzimáti- aislada por primera vez en plantas de Mentha x piperita y
cos; en rábano (Raphanus sativus) [36] y en C. roseus [37] se tiene una masa molecular de 71 kDa [50]. En las plantas esta
ha detectado la existencia de una enzima membranal que pre- vía alterna de biosíntesis genera el IPP en los plástidos para la
senta la actividad de acetoacetil-CoA C-acetiltransferasa y de biosíntesis de isoprenoides, [25,27,49,50].
hidroximetilglutaril-CoA sintasa juntas. De acuerdo con Contin et al. [51], la secologanina provie-
Hasta principios de la década de los noventas se creía que ne principalmente de la vía alterna de biosíntesis del IPP, aun-
todos los isoprenoides eran biosintetizados a partir de mevalo- que los datos de la literatura sugieren que la vía del mevalona-
nato [38-41] y que la enzima HMGR podría representar un to también participa en la biosíntesis de este monoterpeno, si
paso limitante para la biosíntesis de los isoprenoides vegeta- bien en menor grado. En nuestro laboratorio hemos determina-
les, como ocurre para la biosíntesis del colesterol en los ani- do que raíces transformadas de C. roseus, llevando la HMGR
males [42]. También se pensaba que el IPP se biosintetizaba truncada de hámster sin el dominio por el cual se une a la
exclusivamente en el citosol y se metabolizaba allí mismo, o membrana, son capaces de modificar la biosíntesis de alcaloi-
se transportaba a los plástidos. Sin embargo, Heintze et al. des y de esteroles [52]. En el caso con menor actividad de la
[43], observaron que los plástidos de trigo son capaces de bio- enzima soluble se obtuvo un aumento en la biosíntesis de
Fig. 4. Biosíntesis de isoprenoides. Los números dentro del círculo indican las enzimas: isopentenil-difosfato D-isomerasa (1), dimetilaliltrans-
transferasa (2); geraniltranstransferasa (3); farnesiltranstransferasa (4) [30,46,47].
ajmalicina y de catarantina al mismo tiempo que disminuyó la ría de estas enzimas se han caracterizado de manera superfi-
biosíntesis de campesterol. Cuando la actividad de la HMGR cial por lo que se sabe poco sobre ellas.
soluble fue máxima, no se detectó catarantina y los niveles de Se ha propuesto que el primer paso de regulación en la
campesterol y serpentina aumentaron [52]. biosíntesis de la secologanina se encuentra al nivel de la oxi-
La coexistencia de ambas vías también se ha propuesto genación del geraniol. La reacción es catalizada por la enzima
para la biosíntesis de otros terpenos como el β-caroteno, el geraniol 10-hidroxilasa (Reacción 3, figura 5) y se ha sugerido
fitol y la luteína en C. roseus [26] y para los sesquiterpenos de que esta enzima es la que compromete los esqueletos carbona-
Matricaria recutita [25]. dos a la biosíntesis de la secologanina. Algunas observaciones
En C. roseus sólo se han determinado algunas de las enzi- que apoyan el hecho de que esta enzima pudiera representar
mas que se requieren para la biosíntesis de la secologanina un punto de control son: su actividad es inducida en condicio-
(Figura 5); las enzimas mejor conocidas son la HMGR nes en las que se produce un aumento en el contenido de alca-
(Reacción 3, figura 3), enzima que biosintetiza al mevalonato loides e, inversamente, la adición de fosfatos, que provoca una
[12]; la geraniol 10-hidroxilasa (Reacción 3, figura 5), deter- disminución en el contenido de alcaloides, inhibe su actividad
minada, aislada y purificada de suspensiones celulares [53- [63]. Otras condiciones que provocan un aumento o una dis-
55]; la enzima NADPH:citocromo P-450 reductasa, reconoci- minución en el contenido de alcaloides también correlacionan
da como un componente de la geraniol 10-hidroxilasa, fue con la actividad de la geraniol 10-hidroxilasa [53], por lo que
purificada hasta homogeneidad por cromatografía de inter- su papel parece fundamental para la biosíntesis de este tipo de
cambio iónico [56]; una monoterpeno-alcohol oxido-reductasa metabolitos. Además, esta enzima es inhibida por la cataranti-
no específica soluble que funciona en presencia de NAD(P)+ na (Ki=1 mM) [64], lo cual pudiera tener un significado fisio-
(Reacción 4, figura 5), capaz de catalizar la oxidación del 10- lógico al acumularse este alcaloide en el mismo organelo, e
hidroxigeraniol a los correspondientes aldehídos [57]. inhibirla por producto final [19].
Recientemente nuestro grupo ha sido capaz de determinar Como se mencionó con anterioridad sólo se conocen
en raíces transformadas de C. roseus y utilizando el verdadero algunas de las enzimas de la ruta de biosíntesis de la secologa-
sustrato de la monoterpén iridodial ciclasa, la enzima que nina, a continuación se hace un análisis de las enzimas que
cataliza la primera ciclización en la vía de biosíntesis de la mejor se conocen.
secologanina (Reacción 5, figura 5) [58]. También se ha deter-
minado a la (S)-adenosil-L-metionina-ácido logánico-metil- 3-hidroxi-3-metilglutaril-CoA sintasa. Mientras que en
transferasa, en semillas de C. roseus; esta enzima cataliza la células animales y en levaduras participan dos enzimas en la
formación de loganina a partir de ácido logánico o del ácido biosíntesis de la hidroximetilglutaril-CoA [la acetil-CoA C-
secologánico y de la (S)-adenosil-L-metionina (Reacción 6, acetiltrans transferasa (EC 2.3.1.9) (Reacción 1, figura 3) y la
figura 5) [59]. Recientemente se ha determinado la secologa- 3-hidroxi-3-metilglutaril-CoA sintasa (EC 2.3.3.109
nina sintasa (Reacción 7, figura 5), una proteína de la familia (Reacción 2, figura 3)], en las plantas parece ser que es una
de las P450 [60, 61]. No todas las enzimas han sido purifica- sola enzima la encargada de ambas reacciones. Aún cuando el
das y únicamente la geraniol 10-hidroxilasa se ha visto que es equilibrio de la reacción de la tiolasa está orientado hacia la
inhibida por uno de los alcaloides producidos por C. roseus, la formación de la acetil-CoA, más que hacia la biosíntesis de la
catarantina. acetoacetil-CoA, la razón de lo anterior reside en el mecanis-
En general se sabe muy poco sobre la biosíntesis de la mo de la reacción, pues incluye una condensación tipo
secologanina. La ruta se ha postulado a partir de experimentos Claisen, ya que una de las dos moléculas de acetil-CoA actúa
llevados a cabo con trazadores in vivo administrando glucosa, como un carbanión que luego se adiciona nucleofílicamente
mevalonato, geraniol u otros precursores intermedios marca- sobre la otra molécula de acetil-CoA; si bien la eliminación
dos con 3H o 14C. Para ello se han empleado suspensiones del protón en el α metilo del acetilo, para convertirlo en car-
celulares de C. roseus, Rawolfia serpentina, Gardenia jasmi- banión, es energéticamente desfavorable, la reacción general
noides, Teucrium marum y Nepetia cataria, así como plantas de biosíntesis de la hidroximetilglutaril-CoA logra llevarse a
de diversas especies del género Lonicera [51]. El primer pro- cabo, de manera termodinámicamente favorable, debido a que
ducto que compromete a los esqueletos hidrocarbonados hacia la reacción de condensación aldólica, que realiza la 3-hidroxi-
la biosíntesis del monoterpeno es el geraniol. Se ha propuesto 3-metilglutaril-CoA sintasa (Reacción 2, figura 3), se combina
que entre éste y la secologanina existen al menos 11 pasos con la que realiza la Acetil-CoA C-acetil transferasa
enzimáticos, de las cuales únicamente se conocen seis: la (Reacción 1, figura 3) [65, 66].
geraniol 10-hidroxilasa (Reacción 3, figura 5), la La hidroximetilglutaril-CoA puede seguir tres caminos
NADP+:monoterpén oxidorreductasa (Reacción 4, figura 5), la diferentes una vez que ha sido sintetizada: a) puede interactuar
monoterpén (iridodial) ciclasa (Reacción 5, figura 5), la 7- con la enzima hidroximetilglutaril-CoA liasa (EC 4.1.3.4),
deoxiloganina,NADPH:oxígeno oxidorreductasa (7α-hidrola- para contribuir a la formación de cuerpos cetónicos en las
sa) (EC 1.14.13.74) (Reacciones 6 y 8, figura 5), la (S)-adeno- mitocondrias de las células animales (aunque se ha detectado
sil-L- metionina:loganato 11-O-metiltransferasa (EC 2.1.1.50) su presencia en plantas [65,67], aún no se conoce con certeza
(Reacciones 7 y 10, figura 5), la loganina:oxígeno oxidorre- su papel dentro de la fisiología vegetal y permanece como un
ductasa (EC 1.3.3.9) (Reacciones 9 y 11, figura 5). La mayo- área no explorada), b) puede servir como sustrato de la 3-
Fig. 5. Biosíntesis del monoterpeno iridoide secologanina. Los números encerrados en los círculos corresponden a las enzimas: geraniol pirofos-
fato sintasa (1); fosfatasa (¿?) (2); geraniol 10-hidroxilasa (3); NADP+: monoterpén oxidorreductasa (4); monoterpén (iridodial) ciclasa (5); 7-
deoxiloganina, NADPH:oxígeno oxidorreductasa (7α-hidrolasa) (6 y 8); S-denosil-L-metionina:loganato 11-O-metiltransferasa (7 y 10); y loga-
nina:oxígeno oxidorreductasa (9 y 11). Al principio de la vía se señala la posición de la fosfatasa específica para el geranil pirofosfato, propuesta
por el grupo del Dr. R. Verpoorte [62], pero cuya existencia no ha podido ser demostrada hasta el momento. Las flechas punteadas indican pasos
no caracterizados o probables. Varias flechas en el mismo paso indican que probablemente se trata de varios pasos metabólicos. Paso
inhibido por la catarantina. Diagrama basado en De Luca [20], Gershenzon y Croteau [35] y Meijer [19].
metilglutaconil-CoA hidratasa (EC 4.2.1.18), para formar 3- A este respecto recientemente se encontró que el promotor del
hidroxi-3-metilglutaconato (reacción involucrada en el catabo- gen Hmgr2 de jitomate, posee un elemento regulador positivo
lismo de la leucina; la 3-metilglutaconil-CoA hidratasa ha sido en el interior de la región 5’UTR y uno más que consiste en un
purificada de hepatocitos de oveja y semipurificada de C. rizo localizado corriente arriba del codón de inicio [80]. El
roseus [68]) y c) la HMGR (EC 1.1.1.34) puede convertirla en incremento en la eficiencia traduccional del ARNm de la
mevalonato con la ayuda del poder reductor de dos moléculas HMGR resulta, en parte, del procesamiento del ARNm de
de NADPH. manera alternada, que se da en células sometidas a bajas con-
La localización de la enzima se complica por el hecho de centraciones de mevalonato. Daraselia, también sugiere que el
que el origen del IPP depende del tipo de tejido y del estadio extremo amino terminal, el cual se encuentra insertado en la
de desarrollo, e.g., un estudio con cloroplastos en desarrollo membrana, es el responsable de la regulación de la degrada-
de cebada, demostró que mientras que los cloroplastos de teji- ción de la enzima [80].
dos juveniles son capaces de biosintetizar isopentenil pirofos- La HMGR de mamíferos se inactiva por una fosforilación
fato, aquellos pertenecientes a tejidos de hoja madura, depen- reversible, que parece no estar relacionada con el mecanismo
den de la importación de IPP desde el citosol [69]; por otro de control por retroalimentación pero si con la actividad de
lado, en tricomas glandulares aislados de pimienta, la forma- una cinasa dependiente de AMP [71]. Con respecto a las
ción de isopentenil pirofosfato en el citosol es bloqueada a modificaciones post-traduccionales, en un estudio reciente se
nivel de la HMGR en el momento en que la acumulación de demostró que los metabolitos no esteroidales derivados del
aceite es más rápida, por lo que la biosíntesis de monoterpenos mevalonato y sintetizados entre el escualeno y el lanosterol,
y sesquiterpenos recae exclusivamente en el isopentenil piro- disminuyen la biosíntesis de la HMGR en células de hámster
fosfato derivado de plástidos [70]. tratadas con lovastatina (un inhibidor de la HMGR), con TMD
Se sabe que la biosíntesis de isoprenoides se reparte en (4,4,10-β-trimetil-trans-decal-3β-ol, inhibidor de la escualeno
tres compartimientos subcelulares semiautónomos: el ciclasa) y con mevalonato; y que la regulación se da en el
citosol/retículo endoplásmico para la biosíntesis de sesquiter- nivel transduccional y por lo tanto aumenta la degradación de
penos y triterpenos; los plástidos para la biosíntesis de mono- la enzima [81]. Se tienen evidencias de que los inhibidores de
terpenos, diterpenos y tetraterpenos (así como para las porcio- la HMGR provocan la aparición de mecanismos regulatorios
nes prenilo de la clorofila, las plastoquinonas y los tocofero- presentes de manera implícita [81]. Lopez et al. [82], han
les); y la mitocondria (y/o el aparato de Golgi) para la biosín- demostrado que los inhibidores son capaces de revelar meca-
tesis de ubiquinona [66]. Para explicar los eventos anteriores nismos de regulación transcripcional, controlados por el coles-
se han propuesto recientemente una serie de modelos; en uno terol de la dieta, y mecanismos de degradación de la enzima
de ellos Chappell, sugiere que existen canales metabólicos controlados por el farnesol.
regulados de manera independiente dedicados a la producción Hampton et al. [83], hacen una propuesta interesante esta-
de tipos específicos de isoprenoides [41]. bleciendo dos categorías para regular la actividad de la
Mientras que en las células de los mamíferos la HMGR es HMGR: a) inhibición por retroalimentación y b) regulación
una enzima codificada por un solo gen, en las plantas esta cruzada. La regulación por retroalimentación implica que la
misma enzima se presenta como múltiples isoenzimas y es actividad de la enzima es reducida en respuesta a los produc-
codificada por una pequeña familia de genes. Miembros espe- tos provenientes de la vía del mevalonato. En mamíferos, por
cíficos de esa familia de genes son expresados diferencialmen- ejemplo, este tipo de regulación se logra a través de una
te durante el desarrollo de la planta o en respuesta a factores modulación coordinada de la biosíntesis y degradación de la
ambientales y distintas isoformas de la enzima pueden ser crí- proteína; el dominio amino terminal que se ancla en la mem-
ticas en la dirección de los intermediarios de la vía hacia iso- brana es tanto necesario como suficiente para mediar la degra-
prenoides específicos [41,71,72]. dación regulada de la HMGR. Por otra parte, entre los meca-
La HMGR de las plantas es una enzima que está estrecha- nismos de regulación cruzada se tiene la fosforilación por una
mente regulada por fitocromo (de manera post-transduccional) cinasa dependiente de AMP. Un estudio reciente sobre la
[73], fitohormonas, mecanismos de retroalimentación y facto- regulación por fosforilación, en extractos de hoja de Spinacea
res proteícos endógenos [74]; además, existen evidencias de oleracea L., demostró la capacidad de las proteín-cinasas para
que la HMGR de plantas está regulada por fosforilación rever- activar y desactivar, mediante fosforilación, tanto a la nitrato
sible, al parecer mediante una cascada de dos ciclos. De hecho reductasa como a la HMGR1 de Arabidopsis thaliana. La pro-
ya se han encontrado algunas cinasas que actúan sobre la teín cinasa fosforiló más rápidamente a la HMGR1, haciéndo-
HMGR [75-79]. lo además en la serina 577, y apoyando la propuesta hecha por
Chappell divide los mecanismos de regulación de la bio- Dale et al. [77], en el sentido de que este residuo es el punto
síntesis de isoprenos en finos y gruesos, y propone que el de regulación de la fosforilación [79]. Este hallazgo traerá
aumento en la transcripción de la enzima está mediado por como consecuencia replanteamientos acerca de cómo se ven
una disminución de los oxiesteroles citosólicos que interactú- las interrelaciones entre la asimilación del nitrato y el metabo-
an con factores en trans, y que éstos a su vez, se unen a los lismo de la sacarosa y de los isoprenoides. Mienras que en los
elementos reguladores de la biosíntesis de los esteroles, los mamíferos las citocinas aumentan los niveles de ARNm de la
cuales se encuentran en el promotor del gen de la HMGR [39]. HMGR; en las plantas el daño causado por patógenos dispara,
la mayoría de las veces, la inducción de algunas isoenzimas de grandes cantidades de la enzima pura (cerca de 5 mg L-1 de
la HMGR y la represión de otras [84]. También se sabe que cultivo), con una actividad específica final de 17 U mg prot-1;
las isoenzimas de HMGR están reguladas por desarrollo como lo anterior, expresado en pkat mg prot-1, da un valor de 2.82 ×
sucede en jitomate, en el cual las isoenzimas son sintetizadas 108, siendo ésta la actividad específica más elevada reportada
en tejidos específicos [85]. El mismo evento se ha observado hasta la fecha para cualquier HMGR purificada a partir de teji-
en tubérculos de Solanum tuberosum L., en donde los miem- dos vegetales. Los valores de las Km para el NADPH y la
bros de la familia de la HMGR se expresan, de acuerdo al hidroximetilglutaril-CoA fueron de 71 ± 7 µM y 8.3 ± 1.5 µM,
estadio de desarrollo, mediante la producción de isoformas respectivamente. En este mismo modelo se comprobó que la
específicas para la biosíntesis de productos finales diferentes HMGR1 de A. thaliana es inactivada por fosforilación en la
en tejidos particulares [86]. En resumen, la regulación de la serina 577. Por otra parte, Galaz-Ávalos detectó dos picos de
HMGR se da a cuatro niveles: en la transcripción, en la tra- actividad al eluir extractos de raíces transformadas de C.
ducción de su ARNm, en la modificación covalente por fosfo- roseus a través de una columna de intercambio aniónico. Estos
rilación y en la degradación de la enzima. componentes presentan actividades específicas de 284.61 y
La HMGR ha demostrado ser una enzima difícil de purifi- 210.58 pkat mg prot-1 y poseen una masa molecular cercana a
car. Sólo ha sido purificada de Hevea brasiliensis [87], S. los 200 kDa [93].
tuberosum [88], R. sativus [89], Zea mays [90] y A. thaliana
[77]; y se ha semipurificado de Parthenium argentatum [91]; Geraniol 10-hidroxilasa. La geraniol 10-hidroxilasa es una
N. cataria [92], y C. roseus [93,94]. monooxigenasa de la familia de las proteínas P450 [101] y se
Bach et al. [89], establecieron una metodología para puri- encuentra localizada en las membranas de las vacuolas [102].
ficar HMGR basada en la extracción de la enzima por medio Esta enzima cataliza la hidroxilación del geraniol en la posi-
de detergentes, utilizando membranas aisladas a partir de plán- ción 10 y requiere O2 y NADPH (Reacción 3, figura 5) [101].
tulas etioladas de R. sativus. La enzima fue caracterizada Los electrones del NADPH son transferidos al grupo hemo de
molecular y cinéticamente y se determinó que tiene una masa la monooxigenasa a través de la NADPH: citocromo P450
molecular de 180 kDa, con 4 subunidades de 45 kDa cada una reductasa [103]. Esta flavoproteína es absolutamente necesaria
y que se trata de una proteína ligeramente ácida, con un pI de para que la monooxigenasa realice su catálisis y está formada
5.9. Por otro lado Kondo y Oba [88], desarrollaron una meto- por dos componentes: la citocromo P-450 reductasa NADPH
dología para purificar HMGR a partir de S. tuberosum, logran- dependiente y el citocromo P-450, con actividad propia de
do solubilizar la enzima utilizando la digestión con tripsina en geraniol 10-hidroxilasa [104]. El primer componente es una
lugar de detergentes y obteniendo un porcentaje de recupera- flavoproteina membranal que ha sido purificada a homogenei-
ción del 1.8%, con una actividad específica de 7,910 nmoles dad, su masa molecular es de aproximadamente 78 kDa y
de mevalonato formados min-1 mg de prot-1 e identificando tiene como cofactores al FMN y al FAD [56, 57, 102, 105]. El
que la enzima está constituida por dos subunidades de 55 kDa segundo componente es una proteina de masa molecular de 56
y una masa molecular total de 110 kDa. En tanto que las kDa que ha sido purificada aparentemente a homogeneidad;
HMGR de aves y mamíferos presentan estructuras monoméri- acepta únicamente como sustrato al geraniol y no al geraniol-
cas de entre 90 y 97 kDa [95], en Pseudomonas mevalonii P o al nerol-P, lo cual podría considerarse como evidencia de
[96] y levaduras la enzima es tetramérica con una masa mole- que existe una desfosforilación previa durante la ruta metabó-
cular de 260 a 280 kDa [97, 98]. lica [53]. Esta enzima tiene como inhibidor no competitivo
Se han determinado diferentes valores de K m para la reversible a la catarantina (Ki = 1 mM), es estimulada por
hidroximetilglutaril-CoA, tanto para la fracción membranal DTT y es inhibida por CO, aunque esta inhibición es revertida
como para la fracción citosólica en semillas de Pisum sativum; por la luz [57,101,105]. El ADNc de la citocromo P-450
para la primera se determinó un valor de 0.385 µM y de 80 reductasa que codifica para un péptido de 78.9 kDa, ha sido
µM para la segunda, lo que sugiere la existencia de isoenzi- clonado empleando como sonda regiones altamente conserva-
mas en la célula [99]. El valor de 27 µM de la Km para el das entre estas proteínas [104]; sin embargo, cuando este
NADPH y de 1.5 µM para la Km de la hidroximetilglutaril- ADNc se empleó para transformar Nicotiana tabacum y A.
CoA de la HMGR en R. sativus es ligeramente menor que el thaliana, la proteína se expresó pero no se detectó actividad de
determinado para la enzima de mamíferos y levaduras [100]. geraniol 10-hidroxilasa. Los anticuerpos generados contra la
Una afinidad elevada hacia el NADPH, como se ha visto en R. proteína que codifica el ADNc cruzaron con la proteína purifi-
sativus, podría permitir la regulación de la actividad de cada por la Meijer [106].
HMGR in vivo a través de un cambio rápido en la relación
NADP+/NADPH [89]. Monoterpén acíclica de alcoholes primarios: NADP+ oxi-
Recientemente Dale et al. [77], lograron expresar en E. dorreductasa. Se ha establecido que esta enzima juega un
coli, en una forma catalíticamente activa, el dominio catalítico importante papel en la biosíntesis de la secologanina [18], y
de la HMGR1 de A. thaliana y lo purificaron. La alta eficien- cataliza la oxidación reversible del 10-hidroxigeraniol en pre-
cia del sistema de expresión bacteriano, aunado a la simplici- sencia de NADP+, para producir 10-oxogeraniol ó 10-hidroxi-
dad del protocolo de purificación, resultó en la obtención de geranial (Reacción 4, figura 5); al parecer ésta es una enzima
inespecífica en cuanto al grupo OH que es capaz de oxidar Biosíntesis de los AMIS

[107]. Se ha purificado de células de R. serpentina, su masa
molecular es de 44 kDa y su pI es de 5.4. Es inactivada por La mayoría de las investigaciones realizadas para caracterizar
iodoacetamida y por N-etilmaleimida, lo que sugiere que a las enzimas de la ruta de biosíntesis de los AMIs se han lle-
requiere de grupos SH para su actividad [108]. El valor de la vado a cabo tomando en cuenta la enorme complejidad de la
Km para el NADP+ y el NADPH es de 25 y 5.5 µM respectiva- ruta. Para una revisión profunda sobre el tema se puede recu-
mente, teniendo nerol (oxidación) o neral (reducción) como rrir a las excelentes revisiones que sobre el tema han realizado
sustrato. Esta enzima no utiliza NAD+ ni NADH como cofac- De Luca [1,20] y Meijer et al. [19]. La lista de las enzimas que
tores y puede aceptar alcoholes alílicos primarios con cadenas han sido estudiadas en menor o mayor grado incluye a la trip-
mayores a seis carbonos como sustratos; sin embargo, no tofano decarboxilasa, la geraniol 10-hidroxilasa, la NADPH-
acepta alcoholes secundarios, ni etanol [18]. citocromo P450 reductasa, la oxidorreductasa de NADP+-
dependiente, la monoterpén (iridodial) ciclasa, la secologanina
Monoterpén (iridodial) ciclasa. Esta enzima cataliza la sintasa, la SAM-loganato O-metiltransferasa, la 7-deoxilogani-
reacción de formación de iridodial a partir de 10-oxogeranial na 7-hidroxilasa, la estrictosidina sintasa, la estrictosidina-β-D-
y utiliza NADPH como agente reductor (Reacción 5, figura glucosidasa, la catenamina reductasa, la tabersonina 16-hidro-
5). Esta enzima ha sido semipurificada 440 veces de R. ser- xilasa, la S-adenosil-L-metionina:16-hidroxitabersonina-16-O-
pentina [107, 109] y parece ser un homotetrámero con una metiltransferasa, la S-adenosil-L-metionina:16-metoxi 2, 3-
masa molecular de 118 kDa y un pH óptimo de 7.0. Nuestro dihidro-3-hidroxitabersonina-N-metiltransferasa, la desaceto-
grupo la ha semipurificado de raíces transformadas de C. xivindolina-4-hidroxilasa, la acetilCoA:4-O-desacetilvindoli-
roseus [58]. na-4-O-acetiltransferasa, la tabersonina 17-hidroxilasa y la
minovincinina 19-O-acetiltransferasa (Tabla 1).
7-deoxi:loganina, NADPH:oxígeno oxidorreductasa [7α α- El precursor indólico triptamina se sintetiza a partir del
hidroxilante] (EC 1.14.13.74). Esta enzima cataliza puede triptofano (Reacción 1, figura 6), en una reacción catalizada
utilizar como sustrato tanto al 7-deoxiloganato como a la 7- por la enzima L-aminoácido aromático carboxi-liasa (EC
deoxiloganina (Reacciones 6 y 8, figura 5). La reacción es 4.1.1.28) (Nombre común: triptofano decarboxilasa, TDC)
inhibida por mjonóxido de carbono, así como por diversos que emplea como cofactor al piridoxal fosfato; esta reacción
inhibidores de las proteínas citocromo P450, indicando que también puede emplear como sustrato al 5-hidroxitriptofano.
esta enzima pertenece a la familia de los citocromos P450. La Los dos precursores, la secologanina y la triptamina, son con-
Km para la 7-deoxiloganina y el NADPH es de 170 y 18 µM densadas para producir la estrictosidina-O-glucosa, en una
respectivamente [110]. reacción catalizada por la 3-α (S)-estrictosidina triptamina-
liasa (EC 4.3.3.2) (Nombre común: estrictosidina sintasa, SS)
Loganina:oxígeno oxidorreductasa (EC 1.3.3.9). Esta enzi- (Reacción 2, figura 6) [112]; el producto de esta reacción, la
ma cataliza el último paso de la biosíntesis de secologanina a 3α (S) estrictosidina, es desglucosilado por la estrictosidina β-
partir de loganina, que involucra una ruptura oxidativa del D-glucohidrolasa (EC 3.2.1.105) para formar finalmente la
anillo del metilciclopentano de la loganina (Reacción 11, molécula de estrictosidina aglicona (Reacción 3, figura 6),
figura 5). La enzima también reconoce como sustrato al ácido precursor de los aproximadamente 200 alcaloides indólicos de
logánico (Reacción 7, figura 5). Es un miembro de la familia C. roseus, incluyendo a la vindolina y la catarantina [113,
de proteínas citocromo P450 y se encuentra presente en la 114]. La estrictosidina aglicona se convierte en 4,21-didehi-
fracción microsomal de suspensiones celulares de C. roseus, drogeissoschizina, en forma expontánea, la cual puede ser
así como en la epidermis de sus hojas [60]. También ha sido transformada en catenamina, precursor directo de la ajmalici-
determinada en suspensiones celulares de Lonicera japonica na y la serpentina [115], o puede ser reducida enzimáticamen-
[61, 111]. te a geissoschizina (Reacción 4, figura 6).
Por catalizar pasos cruciales de la biosíntesis de los
S-adenosil-L-metionina:loganato 11-O-metiltransferasa AMIs, las enzimas TDC y SS han sido ampliamente estudia-
(EC 2.1.1.50). Esta enzima cataliza la O-metilación del grupo das [118,119]. La TDC se ha purificado tanto de células en
carbonilo del ácido logánico. Puede catalizar la transferencia suspensión [120] como de raíces transformadas de de C.
del grupo metilo de la (S)-adenosil-L-metionina indistinta- roseus [121]. La TDC es una enzima citoplásmica formada
mente al ácido logánico (Reacción 9, figura 5) o al ácido seco- por dos subunidades idénticas de 55 kDa, tiene una masa
logánico (Reacción 10, figura 5), pero no acepta al ácido 7- molecular aproximada de 110 kDa, un pI de 5.9, un pH ópti-
desoxilogánico como sustrato; lo anterior indica que en la vía mo de 8.5 y es modulada por diversos factores; se ha determi-
de biosíntesis de la secologanina, la hidroxilación antecede a nado que la actividad de la TDC aumenta en cultivos de C.
la metilación. Esta enzima ha sido purificada parcialmente a roseus como respuesta a la adición de homogenizados fúngi-
partir de plántulas etioladas de C. roseus; los valores de Km cos [122] o de enzimas hidrolíticas [123]. En el primer caso,
para la (S)-adenosil-L-metionina y para el ácido logánico son se sabe que el aumento de su actividad se debe al incremento
de 0.06 y 12.5 mM, respectivamente [19]. en la trascripción del gen y en la traducción del mensajero.
Fig. 6. Biosíntesis de la estrictosidina, precursor universal de los alcaloides monoterpén-indólicos. Los números indican la posición en la vía de
las enzimas: Triptofano decarboxilasa (1); estrictosidina sintasa (2); estrictosidina glucosidasa (3); geissoschizina deshidrogenasa (4). Las fle-
chas cortadass indican varios pasos metabólicos [19; 20; 116; 117].
Por otra parte, contrario al efecto del homogenizado fúngico, sobresíntesis de triptamina, ya sea por medios bioquímicos o
las auxinas provocan represión de la expresión de la TDC moleculares, no se ve reflejada en una mayor biosíntesis de
[124]. alcaloides [12,19,127]. Este resultado sugiere que la enzima
El valor de Km para triptofano de la TDC es de 75 µM y TDC no es el único punto de regulación en la biosíntesis de
de 13 µM para el 5-hidroxitriptofano; el D-triptofano resulta estos metabolitos, confirmándose lo anterior en múltiples tra-
ser un inhibidor no competitivo y la triptamina (producto de la bajos realizados con células en suspensión [128-130]. Por otra
reacción) es un inhibidor competitivo [121,125]. parte, y como era de esperarse, la actividad de la TDC puede
La TDC, además de estar regulada por factores externos disminuir sin afectar el contenido total de los AMIs. Moreno-
(ataques fúngicos, etc.) está también sujeta a regulación tejido Valenzuela et al. [131], desdiferenciaron un cultivo de raíces
específica y por desarrollo. En plántulas de C. roseus prove- transformadas a células en suspensión, y posteriormente las
nientes de semillas germinadas in vitro, bajo condiciones de rediferenciaron a raíces. Durante este proceso la actividad de
oscuridad, su actividad es transitoria; comienza a detectarse a la TDC se vio dramáticamente alterada. En el paso de raíces a
los 3 días, alcanza su máximo a los 5 días y luego declina células, la actividad de la TDC disminuyó en un orden de
[126]. En general en las plántulas, su actividad es mayor en las magnitud o más y los AMIs disminuyeron de 10 a 2 mg g-1 PS
partes aéreas (siendo mayor en hojas jóvenes que en las madu- durante este proceso. En las raíces rediferenciadas se encontró
ras); mientras que en la planta adulta su actividad es mayor en un nivel de actividad de TDC similar a la detectada en las
las raíces [122]. células en suspensión, en tanto que la producción de los alca-
A pesar de que la TDC deriva el triptofano al metabolis- loides se recuperó hasta en un 90% respecto a la producción
mo secundario, la sobre-expresión del gen de la TDC en C. inicial. Estos datos sugieren que no se requieren niveles eleva-
roseus no conlleva a una mayor producción de AMIs, a pesar dos de actividad de TDC para producir a los AMIs. Este resul-
de que ocurre un aumento en la cantidad de la proteína con tado ha sido recientemente comprobado empleando cultivos
actividad de TDC y en la producción de triptamina [14]. La transgénicos que sobreexpresan la actividad de TDC [132].
78
Tabla 1. Enzimas caracterizadas en la ruta de biosíntesis de los AMIs en Catharanthus roseus y Rauwolfia serpentina. Modificado de Meijer et al., [19]. AH = aparente homogeneidad;
P = parcial; Pur = purificación. Los espacios vacíos indican que dichos parámetros no han sido determinados. Las referencias se citan a lo largo del texto.
Enzima Abreviatura MM × 10-3 Sustratos y Km* Localización Pur Clonación Tejido
Triptofano decarboxilasa TDC 56 Trp 75 µM Citoplasma AH Sí Epidermis hojas> raíz

C. roseus
Geraniol 10-hidroxilasa G10OH 56; 63 Geraniol 5.5 µM Membrana vacuola AH Si Plántulas C. roseus
NADPH: citocromo P-450 reductasa 79 Citocromo P-450a Membrana vacuola AH Sí Plántulas C. roseus
Rev. Soc. Quím. Méx. 2004, 48
Monoterpén iridodial ciclasa MIC 10 oxogeranial; NADPH ¿Vacuola? P Raíces transformadas

C. roseus y R. serpentina
SAM: ácido logánico metil transferasa LAMT SAM 0.06 mM; ácido logánico P Plántulas C. roseus
12.5 mM
7-deoxiloganina 7-hidroxilasa DL7H O2, NADPH 18 µM, Microsomas Si Cultivo de tejidos L.

7-deoxiloganina 170 µM japonica y C. roseus
Secologanina sintasa SS O2, NADPH, loganina Retículo Sí Hoja C. roseus y cultivo

endoplásmico de tejidos L. japonica
Estrictosidina sintasa ES 39 Triptamina 0.9 – 2 mM; 5.8 Vacuola AH Sí Epidermis hojas, yemas
mM; secologanina 30 µMb; florales, cultivo de tejidos
2.6 mM C. roseus y R. serpentina
Estrictosidina β-D-glucosidasa SG 63; 230; 450 Estrictosidina 0.1 – 0.2 mM Retículo AH Si Hoja>raíz>tallo>flor
endoplásmico Cultivo de tejidos C. roseus
y R. serpentina
Geissoschizina deshidrogenasa GD Geissoschizina 83 µM, 35x Cultivo de tejidos C. roseus

NADP+ 77 nM
Polineuridina aldehído esterasa PNAE Aldehído de polineuridina AH Si Cultivo de tejidos R.

serpentina
Catenamina sintasa CS 4, 21-geissoschizina

Catenamina reductasa CR Catenamina
Tetrahidroalstonina sintasa 81 Catenamina imonium 62 µM P
Peroxidasa 15 Catenamina + vindolina Vacuola P

Víctor M. Loyola-Vargas, et al.
Peroxidasa 37 Ajmalicina Vacuola P
Tabersonina 16-hidroxilasa T16OH O2, NADPH 14 µM y Retículo Hojas jóvenes y cultivo de

tabersonina 11 µM endoplásmico tejidos C. roseus
SAM 16-hidroxitabersonina OMT 16-hidroxitabersonina Retículo P Plántulas C. roseus

O-metil-transferasa endoplásmico
SAM: 16-metoxi-2, 3-dihidro-3- NMT 16-metoxi-2, 3-dihidro-3- Membranas de P Plántulas C. roseus

hidroxitabersonina-N-metil-transferasa hidroxi-tabersonina los tilacoides
Deacetoxivindolina 4-hidroxilasa D4H 45 O2, 2-oxoglutarato Citoplasma P Si Idioblastos/latidíferas hoja,

Desacetilvindolina tallo y flores C. roseus
AcetilCoA: deacetilvindolina DAT 54 AcetilCoA 6.5 µM Citoplasma AH Si Idioblastos/latidíferas

4-O-acetil-transferasa (33+22) Deacetilvindolina 1.3 µM hoja, tallo y flores C. roseus
Biosíntesis de los alcaloides indólicos. Una revisión crítica
Minovincinina 19-O-acetiltransferasa MAT Minovincinina Si Células corticales raíz

C. roseus
Anhidrovinblastina sintasa (peroxidasa) 45 Vindolina y catarantina Vacuola AH Cultivo de tejidos C. roseus
Vinorina sintasa VS 31 16-epi-vellosimina 19.4 µM AH Cultivo de tejidos R.

Acetil-CoA 64 µM serpentina
Vomilenina reductasa VR 43 Vomilenina y NADPH 20.6 Cultivo de tejidos R.

serpentina
Vinorina hidroxilasa VH O2, NADPH 3 µM, vinorina

26 µM Microsomal Cultivo de tejidos R.
serpentina
* En el caso de que se presenten varios valores para la Km, se refiere al hecho de que éstos han sido determinados por diferentes autores.
m m
a En ensayos in vitro también puede reducir al sustrato artificial citocromo c (K 7.8 µM) con NADPH (K 5.7 µM) como el donador de electrones.
m
b El valor de K de 30 µM es para todas las isoenzimas [140]
79
Se ha aislado y caracterizado una clona genómica de la por lo que no es claro aún si esta enzima es regulada por el
TDC a partir del genoma de C. roseus. El gen para esta enzi- proceso de desarrollo [131].
ma se encuentra presente en una sola copia [133]. La cuanti- Existen evidencias que sugieren que la SS no constituye
ficación de los niveles de TDC en plántulas y en suspensio- un paso limitante en la biosíntesis de los alcaloides indólicos
nes celulares muestran que tanto la expresión del gen como en plántulas de C. roseus; se ha encontrado que al transferir un
la actividad enzimática son inducibles en forma transiente, cultivo de células en suspensión de C. roseus, de un medio de
sugiriendo que la actividad de la TDC está regulada en los mantenimiento a uno de inducción para producir alcaloides, el
nivel transcripcional, traduccional y postraduccional [122, aumento en la acumulación de alcaloides no correlaciona con
130,134,135]. un incremento en la actividad de la SS; sin embargo, en callos
La otra enzima, la SS, cataliza la condensación estereoes- de C. roseus transformados con el gen de la SS se observó una
pecífica de la secologanina con la triptamina para producir la correlación directa entre el aumento de la actividad enzimática
3-α(S)-estrictosidina. La enzima es altamente específica para y la acumulación de alcaloides [141,142]. Resultados simila-
sus dos sustratos, i. e. no acepta al ácido secologánico ni al res se han obtenido en Cinchona ledgeriana [143,144] y en
triptofano como sustratos, pero muestra una ligera actividad plántulas de C. roseus [144]. Lo anterior sugiere la posibilidad
con análogos sustituidos en las posiciones 5, 6 o 7 de la tripta- de que la SS es un punto de regulación de esta ruta metabóli-
mina. Hasta ahora no se tienen indicios de que esta enzima sea ca; sin embargo, la información es poco precisa y en ocasiones
inhibida por alguno de los alcaloides, productos finales de esta contradictoria, lo cual puntualiza la necesidad de profundizar
ruta metabólica [136-138]. en las investigaciones que permitan establecer su papel real en
La SS fue purificada a finales de los setentas y se caracte- la biosíntesis de los AMIs.
rizó como una enzima soluble de masa molecular entre 35 y La SS es codificada por un solo gen, sugiriendo que las
38 kDa [138]. Diez años más tarde se reportó la identificación isoformas son el resultado de modificaciones postransduccio-
de cuatro diferentes formas de SS en células en suspensión y nales de un precursor simple [145, 146]; esta enzima fue la
hojas de C. roseus [139]. Recientemente, De Waal et al. [140], primera del metabolismo de los AMIs en ser clonada, primero
determinaron que el número de SSs es mayor; estos investiga- de R. serpentina [147] y luego de C. roseus [145]. El mensaje-
dores purificaron seis diferentes SSs, distinguibles por electro- ro para la SS presenta una región que codifica para un péptido
foresis empleando geles de alta concentración (20% de acrila- señal de 31 aminoácidos que la dirige a la vacuola [122], lo
mida). En C. roseus se han detectado siete isoenzimas de la cual apoya diversos ensayos que sugieren que se trata de una
SS, cuatro de las cuales pueden ser separadas por sus activida- enzima vacuolar [119,148].
des catalíticas (diferente valor de Km) y por su pI (entre 4.3 y Doireau et al. [149], y Stevens et al. [150], han medido la
4.8). Pfizer y Zenk [139], sugieren que por tratarse de una actividad de la TDC y de la SS, así como las concentraciones
enzima glucosilada hay diferencias entre isoenzimas en la de triptamina en cultivos de células de C. roseus y de otras
cadena hidrocarbonada. Por otra parte, se tienen evidencias de especies. Estos autores observaron que existe una acumula-
que la ocurrencia de isoformas no está relacionada con el esta- ción de triptamina a pesar de haber una elevada actividad de
dio de desarrollo ni con alguna regulación tejido-específica, ya SS; estos resultados apoyan la hipótesis de que la limitante
que se encontró que las isoformas se expresan tanto en células para la biosíntesis de estrictosidina y sus múltiples derivados
en suspensión, como en hojas, tallos y raíces [140]. Estos es el contenido del precursor terpénico secologanina. Los
datos sugieren que las diferentes isoformas se deben a glucosi- resultados de nuestro grupo de trabajo [131], también sugieren
laciones de la proteína original, aunque no se han caracteriza- que los principales puntos de regulación para la producción de
do los tipos de carbohidratos presentes [140]. Hasta el la estrictosidina se ubican en alguna(s) enzima(s) que partici-
momento no se conocen las funciones, en la planta, de las pan en la biosíntesis de la secologanina.
diferentes isoformas de SS.
A diferencia de la TDC que muestra regulación tejido
específica, la SS presenta niveles de actividad similares en los Biosíntesis de los primeros AMIS
diferentes órganos de la planta [126], y su actividad no se alte-
ra cuando los cultivos in vitro de C. roseus son transferidos al Después de la síntesis de estrictosidina el siguiente paso en la
“medio de producción de alcaloides” (8% de sacarosa) [134]. biosíntesis de los AMIs es la desglucosilación de la estrictosi-
Esta enzima tampoco parece estar regulada por el proceso de dina por la estrictosidina β-D-glucohidrolasa (EC 3.2.1.105)
desarrollo [126], por lo que pareciera no estar sujeta a meca- para producir estrictosidina-aglicona (Reacción 3, figura 6),
nismos de regulación. Sin embargo, durante el proceso descri- un producto inestable que después de varios rearreglos, los
to por Moreno-Valenzuela et al. [131], sobre la desdiferencia- cuales no se conocen con precisión, se convierte en 4,21-
ción-rediferenciación de raíces transformadas de C. roseus, la didehidrogeissoschizina, la cual a su vez es reducida a geis-
actividad de la SS disminuyó en un 60% cuando las raíces se soschizina por la geissoschizina: NADP+ 4,21 oxidorreductasa
desdiferenciaron a células en suspensión. La actividad de la (EC 1.3.1.36) (Reacción 4, figura 6) [151].
SS sólo se recuperó a la mitad, en tanto que el patrón de iso- La estrictosidina β-D-glucohidrolasa es una glucoproteína
formas cambió, cuando las células se rediferenciaron a raíces, localizada en el retículo endoplásmico [7]; es altamente espe-
cífica para la estrictosidina o su derivado 10-metoxi y en su A partir de la 4, 21-didehidrogeissoschizina la ruta de bio-

forma nativa parece encontrarse en forma de agregados, en los síntesis que lleva a la biosíntesis de ajmalicina, catarantina y
cuales cada subunidad de 63 kDa se une a las otras por interac- tabersonina se encuentra poco documentada .
ciones hidrofóbicas [152]. La ruta biosintética hacia la producción de ajmalicina
Se ha demostrado que la estrictosidina β-D-glucohidrolasa comienza cuando la 4, 21-didehidrogeissoschizina es converti-
se encuentra codificada por un solo gen que ha sido clonado da en catenamina (Reacción 1, figura 7) por la catenamina sin-
recientemente y se expresa en diferentes niveles en flores, tasa [19]. La catenamina es reducida a ajmalicina por la cate-
tallos, hojas y raíces, lo que sugiere una regulación tejido namina reductasa (Reacción 2, figura 7). Las enzimas involu-
específica; además, la actividad enzimática cuantificada en cradas en esta parte de la vía se han estudiado muy poco y sólo
cada órgano es proporcional al nivel de ARNm detectado [7]. se sabe que la catenamina reductasa es dependiente de
Su expresión es inducida por metil jasmonato (MeJa) y en los NADPH [153]. Hasta ahora se han separado dos isoenzimas,
cultivos que acumulan AMIs la actividad de esta enzima es una de las cuales interviene en la biosíntesis de la ajmalicina y
elevada [150], de ahí que se le considere un paso clave en la la otra convierte la forma iminium de la catenamina en tetrahi-
biosíntesis de estos compuestos. droalstonina [19]. Se desconoce como se regulan estas dos
Por otra parte la información sobre la geissoschizina: enzimas.
NADP 4,21 oxidorreductasa es escasa, sólo se tiene el reporte La catenamina reductasa (Reacción 2, figura 7) que catali-
de una purificación parcial a partir de células en suspensión de za la reducción de la catenamina a ajmalicina, tiene un pH
C. roseus y en comparación con otras enzimas de esta vía su óptimo de 6.6 y una masa molecular de 81 kDa. La caracteri-
actividad específica es muy baja [151]. zación de la enzima tetrahidroalstonina sintasa (Reacción 4,
Fig. 7. Biosíntesis de la ajmalicina y serpentina. Los números encerrados en un círculo corresponden a las enzimas: catenamina sintasa (1), cate-
namina reductasa (2); peroxidasa inespecífica (3), y tetrahidroalstonina sintasa (4). Las flechas cortadas indican varios pasos metabólicos. Existe
la posibilidad de quela ruta no inicie con la 4,21-dehidrogeissoschizina, si no que inicie con la 20,21-aldehido de dehidrocorinanteina.
[5,116,117].
figura 7), la cual cataliza la formación de tetrahidrolstonina a 162]. Recientemente se ha reportado la selección de una línea
partir de la forma iminium de la catenamina, muestra que de callos de C. roseus capaz de acumular hasta 0.45 mg-1 g PS
ambas enzimas poseen el mismo pH óptimo y la misma masa de vindolina en cultivos de callos incubados con luz [163].
molecular. La forma parcialmente purificada de la tetrahidro- La biosíntesis y acumulación de vindolina está asociada a
alstonina sintasa muestra una Km de 62 µM para la catenamina la luz y al estadio de desarrollo de la planta y en tanto que la
y utiliza al NADPH pero no al NADH como cofactor [154]. expresión de las enzimas para su biosíntesis es órgano-especí-
La ajmalicina es oxidada a serpentina por peroxidasas fica [1, 20, 118, 126, 135, 164-169].
básicas que se encuentran dentro de las vacuolas [155] y se La 4, 21-didehidrogeissoschizina representa también el
sabe que su producción esta fuertemente influenciada por la precursor de inicio de biosíntesis de la ajmalina, esta es una
luz [156]. Hasta ahora no se han purificado estas peroxidasas molécula altamente compleja y que contiene nueve carbonos
básicas y tampoco se tienen datos sobre su especificidad, pues quirales [170]. La biosíntesis de la ajmalina involucra cerca de
la ajmalicina en presencia de peroxidasa de rábano es oxidada 10 pasos enzimáticos (Figura 8). El primer paso metabólica
a serpentina. Aparentemente esta conversión permite a las que deriva 4,21-didehidrogeissoschizina a la biosíntesis de
células vegetales mantener la ajmalicina almacenada dentro la ajmalina es la oxidación de este compuesto a geissoschizina,
vacuola. En células en suspensión de C. roseus la oxidación en una reacción catalizada por la geissoschizina deshidrogena-
de la ajmalicina parece estar regulada por luz, pues en su pre- sa (EC 1.3.1.36) (Reacción 1, figura 8), la cual adiciona, de
sencia los cultivos producen una gran cantidad de serpentina forma estereoespífica, un hidrógeno en el carbono 21 en la
mientras que los cultivados en oscuridad sólo acumulan ajma- posición α. La enzima ha sido purificada 35 veces de supen-
licina [155,156]. siones celulars de C. roseus; la enzima requiere de un pH ópti-
De Luca [20], ha sugerido que la reducción de la geissos- mo de 7.6 y el valor de su Km para geissoschizina y para
chizina por la geissoschizina NADP+ 4,21 oxidorreductasa es NADP+ es de 83 µM y 77 nM, respecitvamente [151].
reversible (Reacción 4, figura 6) y que la ramificación de la La polineuridina aldehído esterasa (EC 3.1.1.78) cataliza
vía puede ocurrir a partir de una modificación diferente a la la conversión del aldehído polinueridina a 16-epi-vellosimina
ciclización de la catenamina, este último producto se reduce (Reacción 3, figura 8) [170]. Produce un precursor inmediato
para formar ajmalicina, en tanto que la forma iminium tam- para la biosíntesis del esqueleto ajmalano que conduce a la
bién se reduce para formar tetrahidroalstonina (Reacción 4, biosíntesis de ajmalina; esta enzima ha sido purificada recien-
figura 7) [154]. temente 423 veces a homogeneidad a partir de suspensiones
Mientras que la catarantina se ha detectado en la mayoría celulares de R. serpentina, posee una masa molecular de 30
de los cultivos in vitro [157-160], la vindolina hasta hace poco kDa y un pI de 5.9; ha sido clonada mediante el escrutinio de
tiempo sólo se había determinado en el nivel de trazas [161, una biblioteca de ADNc. La enzima pura tiene una actividad
Fig. 8. Biosíntesis de la ajmalina. Los números encerrados en un círculo corresponden a las enzimas: geissoschizina dehidrogenasa (1), vomile-
lina reductasa (2), polineuridina aldehído esterasa (3), vinorina sintasa (4), vinorina hidroxilasa (5); 1,2-dihidrovomillenina:NADP+ oxidoreduc-
tasa (6). Las flechas punteadas indican que no se conocen las enzimas que catalizan dicha transformacion. Varias flechas indican varios pasos
metabólicos [170,171].
específica de 160.8 nkat mg prot.-1, es altamente específica ma que cataliza la reacción de reducción es dependiente de
para la polineuridina aldehido como sustrato para el cual tiene NADPH y ha sido aislada recientemente de suspensiones celu-
una Km de 0.83 mM y pertenece a la familia de las α/β-hidro- lares de R. serpentina; tiene una masa molecular de 43 kDa
lasas [170]. [171].
El siguiente paso en la ruta de biosíntesis de la ajmalina,
es la biosíntesis de vinorina y es catalizada por la acil-
CoA:16-epivellosimina O-acetiltransferasa (ciclizante) (nom- Biosíntesis de catarantina y tabersonina
bre común: vinorina sintasa) (EC 2.3.1.160) (Reacción 4, figu-
ra 8). Esta enzima ha sido purificada 160 veces de suspensio- La biosíntesis de la catarantina así como la de la tabersonina
nes celulares de R. serpentina. Entre sus propiedades más inte- inicia en el 20, 21-aldehido de dehidrocorinanteína y procede
resantes se encuentra su elevado pH (8.5) y temperatura ópti- posiblemente vía catenamina to estemmadenina y dehidrose-
ma 35°C, un pI de 4.4 y una masa molecular de 31 kDa. La codina, el precursor de los alcaloides con esqueletos iboga o
Km para sus sustratos 16-epi-vellosimina y acetil-CoA es de Aspidosperma (Figura 9) [116]. No se conoce nada acerca de
19.4 y 64 µM, respectivamente, y al igual que otras enzimas la naturaleza de las enzimas involucradas en la conversión de
de la ruta de biosíntesis de la ajmalina es altamente específica la catenamina a catarantina y tabersonina.
para sus sutratos [172].
La vinorina es hidroxilada a vomilenina por la vinorina,
NADPH:oxígeno oxidorreductasa (21α-hidrolizante)(EC Biosíntesis de vindolina
1.14.13.75) (Reacción 5, figura 8). La enzima es completa-
mente dependiente de NADPH y oxígeno molecular, se Las suspensiones celulares de C. roseus poseen la capacidad
encuentra localizada en la fracción microsomal y es inhibida de sintetizar catarantina y tabersonina [14,17] y de transformar
por los inhibidores típicos de las proteínas citocromo P450, por tabersonina en 16-metoxitabersonina [174] pero no poseen la
lo que seguramente se trata de una citocromo P450 monooxi- actividad enzimática necesaria para la biosíntesis de vindolina
genasa. La enzima tiene un pH óptimo de 8.3 y su Km para el [118;164;175]. Por esta razón una gran cantidad de trabajos se
NADPH y la vinorina es de 3 y 26 µM, respectivamente [173]. han canalizado al estudio de las enzimas y los mecanismos de
El último paso conocido de la biosíntesis de ajmalina es la regulación involucrados en la biosíntesis de vindolina.
saturación del doble enlace de la indolmina de la vomilenina Vázquez-Flota et al. [176], han determinado que cultivos
en forma estereoespecífica para producir la 2β(R)-1,2-dihidro- de raíces transformadas retados con MeJa aumentan la pro-
vomilenina por medio de la 1,2-dihidrovomilenina:NADP+ ducción de catarantina. Estos resultados sugieren que proba-
oxidorreductasa (EC 1.5.1.32) (Reacción 6, figura 8). La enzi- blemente algunas de las enzimas que están participando en la
Fig. 9. Biosíntesis de la catarantina y tabersonina. Las flechas punteadas indican pasos metabólicos y enzimas desconocidas. Las flechas conti-
nuas varios pasos metabólicos [116].
biosíntesis de este alcaloide estén sujetas a regulación y pue- lares de C. roseus se ha detectado actividad de tabersonina 16-
den ser utilizados para el estudio de la ruta de biosíntesis de la hidroxilasa y de 11-O-dimetil-17-O-deacetilvindolina O-
catarantina (Figura 9). metiltransferasa pero no de 16-metoxi-2,3-dihidro-3-hidroxi-
La biosíntesis de vindolina a partir de la tabersonina cons- tabersonina N-metiltransferasa, desacetoxivindolina-4-hidroxi-
ta de seis pasos enzimáticos (Figura 10) catalizados por la lasa y 17-O-deacetilvindolina O-acetiltransferasa [118,167,
tabersonina NADPH:oxígeno oxidorreductasa (16-hidroxilan- 174].
te) (EC 1.14.13.73) (nombre común: tabersonina 16-hidroxila- La regulación de esta vía ocurre por medio de un meca-
sa), la S-adenosil-L-metionina:11-O-dimetil-17-O-deacetilvin- nismo complejo y a diferentes niveles. Esta regulación com-
dolina 11-O-metiltransferasa (EC 2.1.1.94) (nombre común: prende desde factores que afectan la presencia de estas enzi-
11-O-dimetil-17-O-deacetilvindolina O-metiltransferasa), una mas en los niveles transcripcional, post-transcripcional y post-
hidroxilasa no caracterizada, la S-adenosil-L-metionina:16- traduccional, hasta su localización dentro de la célula, del tipo
metoxi-2,3-dihidro-3-hidroxi-tabersonina N-metiltransferasa de célula y, como se mencionó con anterioridad, la edad del
(EC 2.1.1.99) (nombre común: 16-metoxi-2,3-dihidro-3-hidro- tejido.
xi-tabersonina N-metiltransferasa), la desacetoxivindolina,2– En plántulas de C. roseus se ha reportado que las enzimas
oxoglutarato:oxígeno oxidorreductasa (4β-hidroxilante (EC tabersonina 16-hidroxilasa, (16-metoxi-2, 3-dihidro-3-hidroxi-
1.14.11.20) (nombre común: desacetoxivindolina-4-hidroxila- tabersonina N-metiltransferasa, desacetoxivindolina-4-hidroxi-
sa), y la acetilCoA:17-O-deacetilvindolina 17-O-acetiltransfera- lasa y 17-O-desacetilvindolina O-acetiltransferasa, alcanzan
sa (EC 2.3.1.107) (nombre común: 17-O-deacetilvindolina O- su máxima actividad seis días después de la imbibición [135].
acetiltransferasa) [118,135,164,168,169,174,175,177,178]. Cuando estas plántulas son tratadas con luz, las enzimas taber-
Los resultados reportados sugieren que la ruta de biosínte- sonina 16-hidroxilasa y desacetoxivindolina-4-hidroxilasa
sis de la vindolina está regulada por los procesos de desarrollo aumentan su actividad seis veces, en tanto que la 17-O-desa-
y restringida a las partes aéreas de la planta adulta, principal- cetilvindolina-17-O-acetiltransferasa lo hacen 10 veces [126,
mente en hojas jóvenes y en los cotiledones, pues es en estos 174,175]. Este efecto de la luz sobre la actividad de las enzi-
tejidos en los que se han detectado los mayores niveles de mas desacetoxivindolina-4-hidroxilasa y 17-O-desacetilvindo-
ARNm y la actividad más elevada de estas enzimas (Figura lina-17-O-acetiltransferasa, es mediado por fitocromo ya que
12) [164,174,179]. Esta presencia va disminuyendo con la son activadas por un pulso de luz roja (660 nm) y esta activa-
edad y con el tipo de órgano, siendo ya poco preponderante en ción es revertida por un pulso de luz roja lejana (710 nm)
hojas adultas, tallos, raíces y yemas florales. En cultivos celu- [183,184]. La 16-metoxi-2,3-dihidro-3-hidroxi-tabersonina-N-
Fig. 10. Biosíntesis de la vindolina. Los números encerrados en un círculo corresponden a las enzimas: tabersonina 16-hidroxilasa (1), 11-O-
dimetil-17-O-deacetilvindolina O-metiltransferasa (2), hidroxilasa no caracterizada (3), 16-metoxi-2,3-dihidro-3-hidroxi-tabersonina N-metil-
transferasa (4), deacetoxilvindolina 4-hidroxilasa (5), 17-O-deacetilvindolina O-acetiltransferasa (6). [5,18,118,135,164,168,169,174,175,177,
178,180-182].
metiltransferasa es la única enzima de esta vía cuya actividad mente específica, únicamente hidroliza el C-4 de la N(1)-
no es afectada por la luz [126]. metil-desacetoxivindolina para formar la N(1)-metil desacetil-
De todas las enzimas involucradas en la biosíntesis de la vindolina; la adición de ácido ascórbico y iones ferrosos
vindolina, la desacetoxivindolina-4-hidroxilasa es la más inte- aumentan su actividad. La enzima, purificada a homogeneidad
resante. En plántulas de C. roseus los transcritos del gen D4h aparente a partir de hojas jóvenes de C. roseus, es un monó-
y la proteína misma ya se encuentran presentes en la oscuri- mero con una masa molecular de aproximadamente 45 kDa y
dad. Al exponer las plántulas a la luz, la actividad enzimática posee tres isoformas con pI de 4.6, 4.7 y 4.8.
de la desacetoxivindolina-4-hidroxilasa y los niveles de los La cinética de interacción del sustrato con la enzima y los
transcritos del gen D4h se elevan significativamente. Los estudios de inhibición del producto, sugieren que la reacción
resultados reportados sugieren que este aumento en la activi- se lleva a cabo mediante un mecanismo Ter-Ter ordenado. En
dad se debe a una isoenzima de pI 4.7, inactiva en la oscuri- este mecanismo el primer sustrato es el α-cetoglutarato, segui-
dad, y la cual, en presencia de la luz, sufre una modificación do por el O2 y al final la desacetoxivindolina; los valores de
post-traduccional que la torna más ácida y activa [165; 184]. Km para el α-cetoglutarato, el O2 y la desacetoxivindolina son
De manera coordinada la luz también induce la trascripción de 45, 45 y 0.03 µM, respectivamente [175,178,188,189].
del gen Dat y su producto, la 17-O-desacetilvindolina-17-O- Si bien esta enzima se encuentra en el nivel de trazas en
acetiltransferasa, eleva su actividad enzimática [185]. plántulas etioladas de C. roseus, su actividad aumenta sustan-
La TDC y la SS en estas plántulas exhiben un pico de cialmente con la presencia de la luz y con ella, la biosíntesis
actividad a los 5 días después de imbibición en todos los teji- de vindolina [164,182]. Las plántulas etioladas comienzan a
dos y ninguna de las dos es estimulada por luz [126,135]. acumular cantidades importantes de transcritos de la hidroxila-
Mientras el MeJa induce la acumulación de vindolina y eleva sa y de la proteína, pero prácticamente no hay actividad duran-
las actividades enzimáticas de la TDC, la SS, la desacetoxivin- te los diferentes estadios del desarrollo. Por el contrario, el tra-
dolina-4-hidroxilasa y la 17-O-desacetoxivindolina-17-O-ace- tamiento con luz produce un aumento importante en la activi-
tiltransferasa [144]. dad de la enzima, pero el aumento en los niveles del transcrito
y de la proteína es muy pequeño. Estos datos sugieren que el
Tabersonina NADPH:oxígeno oxidorreductasa (16-hidro- punto de regulación por luz en la hidroxilasa se encuentra en
xilante) (EC 1.14.13.73). Esta enzima es una monoxigenasa el nivel post-traduccional [164,182].
P450 localizada en el retículo endoplásmico que requiere Usando oligonucléotidos degenerados para el escrutinio
NADPH, O 2 y tabersonina para llevar a cabo su función de una biblioteca de ADNc de plántulas de C. roseus se obtu-
(Reacción 1, figura 10). Esta enzima es inhibida por CO, clo- vieron 3 clonas, de las cuales dos representan alelos dimórfi-
trimazol, miconazol y por citocromo C [174]. cos cuyas secuencias difieren únicamente en el extremo 3’ no
traducido [165].
S-adenosil-L-metionina:11-O-dimetil-17-O-deacetilvindoli-
na 11-O-metiltransferasa (EC 2.1.1.94). Esta metiltransfera- AcetilCoA:17-O-deacetilvindolina 17-O-acetiltransferasa
sa ha sido determinada tanto en cultivos celulares de C. roseus (EC 2.3.1.107). El último paso en la biosíntesis de la vindoli-
[169], como en plantas de la misma especie [135]. La enzima na es catalizado por la 17-deacetilvindolina-O-acetiltransfera-
requiere (S)-adenosil-L-metionina como donador de grupos sa dependiente de acetil-CoA (Reacción 6, figura 10) [168;
metilos y es altamente específica para la 16-hidroxitabersoni- 179]. La aparición de la enzima se encuentra regulada por
na (Reacción 2, figura 10). desarrollo en plántulas de C. roseus y la actividad enzimática
aparece sólo después de un tratamiento con luz de las plántu-
S-adenosil-L-metionina:16-metoxi-2,3-dihidro-3-hidroxi- las etioladas [179].
tabersonina N-metiltransferasa (EC 2.1.1.99). Esta enzima se Esta acetiltransferasa es una enzima dimérica que ha sido
encuentra localizada en los tilacoides de los cloroplastos [118], purificada a homogeneidad y tiene una masa molecular de
requiere (S)-adenosil-L-metionina como donador de grupos 32/21 kDa [190] o 26/20 kDa [191]. La enzima pura está for-
metilo (Reacción 4, figura 10) y es altamente específica para su mada por cinco isoformas con pI en el rango de 4.3 y 5.4 [190,
sustrato, la 16-metoxi-2,3-dihidro-3-hidroxi-tabersonina [186]. 191]. Los valores de Km para la acetil-CoA y para la deacetil-
La enzima ha sido parcialmente purificada tiene una masa vindolina son de 5.4 y 6.5 µM y de 0.7 y 1.3 µM, para las
molecular aparente de 60 kDa y es absolutamente dependiente enzimas parcialmente purificadas [179] y purificadas a homo-
de la presencia de un doble enlace en la posición 2 [187]. geneidad, respectivamente [190,191]. Los estudios de inhibi-
ción muestran que la CoA es un poderoso inhibidor competiti-
Desacetoxivindolina,2–oxoglutarato:oxígeno oxidorreduc- vo de la deacetilvindolina (Ki = 8 µM) [179] similar a la taber-
tasa (4ββ-hidroxilante (EC 1.14.11.20). Esta enzima es una sonina (50% de inhibición a 45 µM) [191]; mientras que la
dioxigenasa α-cetoglutarato dependiente y cataliza, en el cito- enzima no es inhibida significativamente por la vindolina
plasma, la adición de O2 a la desacetoxivindolina y al α-ceto- hasta concentraciones de 2 mM [179,191].
glutarato produciendo deacetilvindolina, succinato y CO2; esta El uso de oligonucléotidos degenerados para los extremos
es la penúltima reacción de biosíntesis de la vindolina amino y carboxilo terminales y la amplificación posterior de
(Reacción 5, figura 10) [164,175,178]. Esta enzima es alta- su producto por PCR permitió obtener una sonda con la cual
se llevó a cabo el escrutinio de una biblioteca de ADN genó- te de la biosíntesis de este tipo de alcaloides resulta ser la dis-
mico de C. roseus. Con lo anterior se obtuvo una clona que ponibilidad de los precursores monoméricos [192-196]. Sin
codifica para una proteína de 439 aminoácidos con la masa embargo, recientemente se ha purificado una enzima que cata-
molecular predicha de 49,890 Da. La clona, conteniendo una liza específicamente dicho paso y ha sido denominada α-3’,
extensión de seis histidinas en el amino terminal, se expresó 4’-anhidrovinblastina sintasa (AVLBS) (Reacción 1, figura
en E. coli mostrando niveles elevados de actividad. La activi- 11). Esta enzima, dependiente de H2O2, que ha sido purifica-
dad de la enzima recombinante es completamente dependiente da a homogeneidad aparente (192 veces) a partir de hojas de
de la presencia de deacetilvindolina o de acetil-CoA. El análisis C. roseus, tiene una masa molecular de 45.4 kDa y un pH
por Western blot de la proteína recombinante de la de hojas de óptimo de 6.5, si bien también presenta una actividad sustan-
C. roseus, rinde una sola banda de 50 kDa de masa molecular, cial en el rango de pH de 4 – 5, el cual es el rango de pH
lo que sugiere que el heterodímero aislado durante la purifica- comúnmente determinado en las vacuolas. Además de su acti-
ción es probablemente un artefacto de la técnica empleada [18]. vidad de AVLBS la enzima pura tiene actividad de peroxida-
Si bien aún no se ha llevado a cabo la determinación ciné- sa. Su espectro visible de absorbancia muestra máximos de
tica de las enzimas de la biosíntesis de la vindolina, existe absorción a 404, 501 y 633 nm sugiriendo que se trata de una
suficiente evidencia para decir que los pasos limitantes de esta proteina con hierro en un grupo hemo y que pertenece a la
ruta son las dos reacciones de hidroxilación (Reacciones 1 y 5, familia de las peroxidasas [197].
figura 10) [18].
Compartamentalización
Biosíntesis de los alcaloides diméricos
La biosíntesis de los AMIs es un proceso altamente comparta-
La biosíntesis de los alcaloides bisindólicos se inicia con la mentalizado. La compartamentalización, y la localización en
condensación de la catarantina y la vindolina, para formar la diferentes células de las distintas enzimas involucradas en esta
3’,4’-anhidrovinblastina, el precursor de la vinblastina, la vin- vía metabólica, se pueden considerar como otro mecanismo de
cristina, la leurosina y la catarina (Figura 11). Esta reacción, al regulación, ya que esta ubicación requiere del transporte de
igual que la oxidación posterior, parece ser llevada a cabo por los diferentes metabolitos de un punto a otro para su conver-
peroxidasas inespecíficas, lo que parece indicar que la limitan- sión. Prácticamente todos los compartimentos de la célula y
Fig. 11. Biosíntesis de los alcaloides bisindólicos vincristina y vinblastina. Los números encerrados en un círculo corresponden a kas enzimas:
a-3’,4’-anhidrovinblastina sintasa (1). [117,192-197]. Las flechas punteadas indican que las enzimas correspondientes no han sido caracterizadas
y/o se desconocen los pasos metabólicos.
diferentes tipos celulares intervienen en el proceso, e. g. el y yemas florales [200]. Lo anterior sugiere mecanismos de
mensajero para la SS presenta una región que codifica para un translocación de los intermediarios de una célula a otra, para
péptido señal de 31 aminoácidos que lo dirige a la vacuola la biosíntesis de estos metabolitos [200]. Más importante aún
[122,148]; lo anterior apoya diversos ensayos que sugieren es el hecho de que los primeros pasos en la biosíntesis de la
que se trata de una enzima vacuolar [119,148]. Por otra parte vindolina se llevan a cabo en diferentes compartimientos celu-
las enzimas estrictosidina glucosidasa y tabersonina 16-hidro- lares a los de los últimos pasos [182].
xilasa se localizan en el retículo endoplásmico [7,174]. La tabersonina da origen a productos finales que se
Las reacciones catalizadas por las enzimas TDC, 11-O- encuentran en tejidos diferentes en la planta (Figura 12) [180].
dimetil-17-O-deacetilvindolina O-metiltransferasa, desaceto- En este caso el ARNm para la minovincinina 19-O-acetiltrans-
xivindolina-4-hidroxilasa y 17-O-desacetilvindolina O-acetil- ferasa (Reacción 8, figura 12) sólo se expresa en las células
transferasa se llevan a cabo en el citoplasma [118,165,174]; la corticales de los meristemos radiculares; puesto que la TDC y
reacción mediada por la enzima AVLBS se realiza en la la SS también se expresan en los mismos tipos de célula, se
vacuola [199]. La 11-O-dimetil-17-O-deacetilvindolina O- puede inferir que en ellas se llevan a cabo la biosíntesis de la
metiltransferasa se encuentra en los tilacoides de los cloro- tabersonina y de sus derivados.
plastos (Figura 13) [118].
Los ARNm para la TDC y la SS se localizan en las células
de la epidermis de los tallos, hojas y yemas florales, así como Regulación
en las células corticales y del protoderma alrededor del meris-
temo apical de la raíz [200]. En las raíces, la actividad enzimá- Investigaciones realizadas con la fracción indólica, empleando
tica de la TDC se encuentra localizada en el citoplasma y en la células en suspensión de C. roseus, sugieren que no existe
región apoplástica de las células meristemáticas, así como en relación directa entre los valores de máxima actividad de la
las células de la epidermis de la cápside de la raíz [201]. enzima TDC y la producción de alcaloides [131,202,203]; los
Los ARNm de la desacetoxivindolina-4-hidroxilasa y la datos de Eilert et al. [204], empleando inductores de origen
17-O-desacetilvindolina O-acetiltransferasa se localizan sólo fúngico, también apoyan esta última conclusión. Sin embargo,
en los idioblastos y en las células laticíferas de las hojas, tallos también se ha reportado que variando la concentración de
Fig. 12. Compartamentalización de la biosíntesis de la vindolina y otros AMIs. Los números encerrados en un círculo corresponden a las enzi-
mas: tabersonina 16-hidroxilasa (1), (S)-adenosil-L-metionina-16-hidroxitabersonina-O-metiltransferasa (2), hidroxilasa no caracterizada (3), S-
adenosil-L-metionina: 2, 3-dihidro-3- hidroxitabersonina-N-metiltransferasa (4), deacetoxylvindolina 4-hidroxilasa (5), acetil CoA: desacetilvin-
dolina 4-O-acetiltransferasa (6), Tabersonina 19-hidroxilasa (7) y (10), minovincinina 19-O-acetiltransferasa (8), hidroxilasas (9) y (11) [13,18,
180,180-182,198].
nutrimentos se observa una correlación positiva entre la activi- estacionaria produce un aumento en la biosíntesis de alcaloi-
dad de la enzima TDC y la acumulación de alcaloides [205]. des la adición de diversos precursores en la etapa tardía del
Es posible que la discrepancia entre resultados se deba a la ciclo de cultivo no produce ningún efecto [208].
clona en estudio [206]. Se ha utilizado líneas de C. roseus en suspensión celular
La adición de geraniol, 10-hidroxigeraniol y secologani- que sobreexpresan a la TDC y a la SS para realizar experimen-
na, precursores de la parte terpénica de la vía, aumenta los tos de adición de precursores [132,203,210]. En general, la
niveles de alcaloides, particularmente de tabersonina, en culti- adición de secologanina al momento de la inoculación produ-
vos de células en suspensión, lo que parece indicar que la pro- ce un aumento importante en la cantidad de los AMIs; en tanto
ducción de alcaloides puede resultar limitada por una o más que la adición, junto con la loganina, de triptofano o triptami-
etapas de la ruta terpénica [13,63,149,202,207,208]. Aunque na, produce un aumento aún mayor en la biosíntesis de los
esta conclusión no puede ser generalizada ya que existen evi- AMIs en ambas líneas transgénicas.
dencias contradictorias como el aumento en la producción de La adición de efectores externos como homogenados fún-
alcaloides mediante la adición de triptamina al medio de culti- gicos, cambo del pH del medio de cultivo, etc., también modi-
vo [209]. Por otra parte, la adición de mevalonato no tiene fican, en algunos casos sustancialmente, la biosíntesis de
efecto en la biosíntesis de los AMIs [13]; sin embargo, es AMIs [176,211-218].
importante tomar en cuenta que recientemente se ha demostra- Mientras que la adición de pectinasa aumenta los niveles
do que los resultados dependen fundamentalmente de dos fac- de tabersonina 2.5 veces, la adición de quitina eleva los nive-
tores: la concentración de los productos adicionados y la etapa les de ajmalicina en 50% y la adición de ácido jasmónico
en la que se encuentra el cultivo receptor. Mientras que bajas aumenta los niveles de lochnericina y horthammericina, pero
concentraciones de triptofano en la etapa temprana de la fase no los de tabersonina [13]. La adición tanto de homogenizados
Fig. 13. Compartamentalización de la biosíntesis de los alcaloides indólicos en C. roseus. Redibujado de Meijer et al. [19] y Verpoorte et al. [221].
En la figura se muestra que todos los pasos se llevan a cabo en una sola célula, lo cual no es el caso. Los rayos indican enzimas que se sabe son
reguladas por luz. Las flechas punteadas se refieren a reacciones que no están del todo caracterizadas. Trp = triptofano; G = geraniol; MV =
mevalonato; DAV = dacetilvindolina; MOH = 16-metoxi-2,3-dihidro-3-hidroxitabersonina; 16 MT = 16-metoxitabersonina; 16-OHT = 16-
hidroxitabersonina; TAB = tabersonina; EG = Estrictosidina glicona; DG = Estrictosidina aglicona; 10-OHG = 10-hidroxigeraniol; VLB = vin-
blastina; VCR = vincristina; G10OH = geraniol 10-hidroxilasa; MIC = monoterpén (iridodial) ciclasa; LMT = (S)-adenosil-L-metionina:ácido
logánico metil transferasa; ES = estrictosidina sintasa; PDX = peroxidasa básica; SG = estrictosidina glucosidasa; CR = catenamina reductasa;
THA = tetrahidroalstonina sintasa; GDH = geizssoschizina deshidrogenasa; T16OH = tabersonina 16-hidroxilasa; OMT = 11-O-dimetil-17-O-
deacetilvindolina O-metiltransferasa; NMT = 16-metoxi-2,3-dihidro-3-hidroxi-tabersonina N-metiltransferasa; D4H = deacetoxilvindolina-4-
hidroxilasa; DAT = 17-O-deacetilvindolina O-acetiltransferasa. Los signos de interrogación denotan enzimas que aún se desconocen o que exis-
ten reportes contradictorios por el momento. Para una visión global de las diferentes células que intervienen en la biosíntesis de los alcaloides
indólicos en C. roseus ver la figura 14.
de micelios fúngicos, como de filtrados provenientes de culti-

vos de hongos aumentan de forma importante la acumulación
de diferentes AMIs [176,211,218].
Existen otros factores medioambientales que también
modifican de manera importante la biosíntesis de los AMIs;
entre éstos los extremos osmótico y salino se encuentran entre
los más importantes [211,213,219]. La adición de KCl, NaCl,
manitol y sorbitol incrementan la acumulación de AMIs.
Cuando conjuntamente se utiliza alguno de estos efectores y
se adicionan precursores de la biosíntesis de AMIs como trip-
tamina y triptofano, la producción de los AMIs mejora sustan-
cialmente [219].
La biosíntesis de la catarantina y de la vindolina se
encuentra diferencialmente regulada. La biosíntesis de la vin-
dolina es regulada en cuatro diferentes niveles: tisular, celular,
por desarrollo y el medio ambiente, en tanto que la de la cata-
rantina no lo es.
La localización tejido-específica de las enzimas para la Fig. 14. Compartamentalización de la biosíntesis de alcaloides en C.
biosíntesis de los AMIs, la regulación ontogénica de la biosín- roseus. (A) Corte transveral de una hoja de C. roseus y (B) corte lon-
tesis de vindolina como resultado de la expresión coordinada gitudinal de una raíz. E = epidermis. Las flechas llenas señalan idio-
de las enzimas involucradas en el proceso, así como la presen- blastos y las flechas vacías señalan células laticíferas.
cia de alcaloides específicos en los tejidos de la raíz y en la
parte aérea de las plantas confirman que las rutas de biosínte-
sis son expresadas de una forma tejido-específica. Durante el vindolina y ésta acoplarse con catarantina para formar los
desarrollo de la plántula, las actividades de la TDC y la SS son alcaloides bisindólicos.
expresadas 36 – 48 horas antes que las de la desacetoxivindo-
lina-4-hidroxilasa y 17-O-desacetilvindolina O-acetiltransfera-
sa [126]. La activación de estas dos últimas enzimas coincide Diferenciación celular
con la transformación cuantitativa de la tabersonina en vindo-
lina y requiere de la participación de la luz [126,164,182,183, El proceso de desarrollo produce, además de la morfogénesis, la
220]. También se ha determinado que existe un gradiente basi- especialización bioquímica de la células dando como resultado
petal de expresión de las enzimas TDC, SS, desacetoxivindoli- la biosíntesis y/o acumulación de metabolitos secundarios tales
na-4-hidroxilasa y 17-O-desacetilvindolina O-acetiltransfera- como alcaloides de diferente origen biosintético [131, 222-227].
sa, lo que sugiere que la expresión de biosíntesis de la vindoli- Se ha determinado que el contenido de hiosciamina, alcaloide
na ocurre transientemente durante el desarrollo temprano de la derivado del tropano, en raíces transformadas de Hyosciamus
hoja, el tallo y la raíz [1, 200] . muticus es similar al determinado en las raíces de plantas com-
La luz juega un papel central en la regulación de la bio- pletas. Sin embargo, cuando las raíces son desdiferenciadas a
síntesis de algunos alcaloides. En particular la luz activa algu- callo, el contenido del alcaloide disminuye al nivel de trazas;
nos de los últimos pasos de la ruta de biosíntesis de la vindoli- cuando los callos son rediferenciados a raíces, el contenido de
na. La luz no participa en la formación de los idioblastos ni de alcaloides vuelve a los niveles originales; este protocolo se
las células laticíferas, por lo que aún está por determinarse puede repetir infinidad de veces con el mismo resultado [222].
como ocurre la activación por la luz de las enzimas que llevan En otros procesos también se ha determinado que existe
a cabo la inducción de la biosíntesis de los AMIs [182]. una correlación directa entre la diferenciación celular y la bio-
En suma, la catarantina es biosintetizada a lo largo de síntesis de metabolitos secundarios, e. g. la de monoterpenos
todos los tejidos de la planta, en tanto que la vindolina es bio- en las glándulas epidérmicas de Mentha piperita [228]. En C.
sintetizada sólo en las partes aéreas. Las reacciones cataliza- roseus se ha propuesto que la presencia de células laticíferas
das por la TDC y la SS se encuentran localizadas en la epider- son esenciales para la producción de alcaloides monoterpén-
mis superior e inferior de las hojas y en el protoderma de la indólicos [135]; así, la vindolina, una de las dos unidades
raíz y en las células corticales alrededor del meristemo apical. monoméricas de los alcaloides bisindólicos, se biosintetiza en
La desacetoxivindolina-4-hidroxilasa y la 17-O-desacetilvin- brotes pero no en los callos [229]. Se han obtenido resultados
dolina O-acetiltransferasa se encuentran en los idioblastos y similares para el caso de la vinblastina, ya que este producto
en las células laticíferas (Figura 14). Es posible que la raíz se acumula en brotes regenerados a partir de callos de C.
biosintetice catarantina y tabersonina y que éstas sean trans- roseus pero no en callos o en suspensiones celulares [230,
portadas vía xilema a las células laticíferas asociadas a las tra- 231]. La catarantina, por otra parte, se produce prácticamente
queidas. Estas últimas células pueden convertir tabersonina en en toda la planta [232-234].
Conclusiones mis obedece a diferentes papeles biológicos y funciones eco-

lógicas de los productos finales; que clase de tejidos produce
Un problema importante a considerar en el estudio del meta- intermediarios específicos para la biosíntesis de la vindolina;
bolismo secundario en general, y en particular en el de C. como son movilizados los intermediarios en las células laticí-
roseus, es el hecho de que no se ha utilizado un solo modelo. feras y en los idioblastos; para que se requiere un sistema tan
En el caso de las enzimas involucradas en la biosíntesis de los sofisticado de biosíntesis; que alcaloides se acumulan en las
alcaloides monoterpén-indólicos, las enzimas estudiadas han células laticíferas, los idioblastos, la epidermis y las raíces [1].
sido aisladas de diferentes fuentes, y si bien es importante ana- Otra pregunta central para entender la biosíntesis de los
lizar la diversidad existente para estructurar un modelo para AMIs es porqué los efectores externos aumentan selectiva-
confrontarlo con la realidad, también lo es el poder tener una mente la biosíntesis de sólo uno de los alcaloides y no la de
ruta biosintética completa en un solo modelo. todos, aunque ya se ha propuesto la existencia de canales
Se ha determinado que los niveles de alcaloides totales en metabólicos para explicar estos resultados, y los de diferencia-
las raíces en cultivo son de aproximadamente un orden de ción celular [131]. También es importante determinar si exis-
magnitud mayor que en las células en suspensión, confirmán- ten transportadores específicos para el movimiento de los dife-
dose con esto que la diferenciación celular juega un papel rentes alcaloides entre los diferentes compartimientos celula-
importante en la biosíntesis de los alcaloides [235]. Las raíces res y los diferentes tejidos. Por otra parte, se debe evaluar el
transformadas de C. roseus poseen la capacidad de biosinteti- hecho de que varias de las enzimas involucradas en la biosín-
zar y acumular alcaloides indólicos en cantidades similares a tesis de los productos naturales tienen homología con proteí-
los de las raíces de las plantas [235-239], además de biosinte- nas relacionadas con patogenicidad.
tizar alcaloides que no habían sido reportados con anterioridad La complejidad de los procesos genéticos, catalíticos y de
como la O-acetilvalesamina [239] y la 19(S)-epimisilina transporte de la biosíntesis de los AMIs es uno de los retos
[240]. intelectuales más estimulantes en el área de los metabolitos
La elucidación de la ruta de biosíntesis que lleva a los secundarios actualmente. Si bien se requieren más de 50 pasos
productos naturales, sólo puede alcanzarse mediante la purifi- metabólicos para sintetizar los alcaloides más importantes de
cación de cada una de las enzimas. El conocimiento que se C. roseus, solamente se han determinado y caracterizada en
tiene hoy en día de la biosíntesis de los AMIs es aún fragmen- algún grado alrededor de 20 de las enzimas requeridas (Tabla
tado; mientras que ya se conoce con bastante profundidad la 1). Por lo que aún faltan por elucidar un número importante de
ruta de biosíntesis de vindolina a partir de tabersonina, inclu- pasos metabólicos, purificar las enzimas correspondientes y
yendo la clonación de algunos de los genes que codifican para clonar sus genes. También es necesario elucidar los diversos
las enzimas requeridas [18], aún se está lejos de entender la aspectos de su regulación, tanto en el nivel celular como en el
biosíntesis de la secologanina, la ajmalicina, la tabersonina, la molecular, pero sobre todo determinar cual es la función de
catarantina y de varios de los intermediarios de la ruta de los los AMIs en las plantas que los producen.
AMIs, aunque sabemos que la luz y el estadio de desarrollo
regulan la actividad y expresión de algunas de las enzimas.
Se sabe que la biosíntesis de la vindolina y de la cataranti- Agradecimientos
na son reguladas diferencialmente; la biosíntesis de la primera
se encuentra bajo un control celular (participan el cloroplasto, Los autores agradecen la revisión realizada por dos anónimos
el citoplasma, el retículo endoplásmico y la vacuola), de desa- evaluadores, y cuyos comentarios y observaciones mejoraron
rrollo (los alcaloides se biosintetizan preferentemente en los sustancialmente el presente trabajo. Para la nomenclatura de
tejidos jóvenes), de tejido (participan por lo menos tres tipos las enzimas se utilizaron las reglas de la Internacional Union
de células) y medio ambiental (luz) más estricto que la de la of Biochemistry and Molecular Biology (http://www.chem.
catarantina. También sabemos que el uso de efectores que pro- qmw.ac.uk/iubmb/enzyme/).
ducen un aumento en el contenido de alcaloides en las células,
provoca un incremento en la actividad de algunas de las enzi-
mas o en los niveles de expresión de algunos de los genes que Bibliografía
las codifican.
Sin embargo, lo más importante es el hecho de que se 1. De Luca, V.; St Pierre, B. Trends Plant Sci. 2000, 5, 168-173.
cuenta hoy en día con modelos experimentales tales como 2. Roberts, M. F.; Wink, M. En: Alkaloids. Biochemistry, ecology,
plántulas, cultivos celulares y raíces transformadas de C. and medicinal applications; Roberts, M. F., Wink, M., Eds.;
Plenum Press: New York and London, 1998; pp 1-7.
roseus, así como con herramientas tales como anticuerpos, 3. Schmeller, T.; Wink, M. En: Alkaloids. Biochemistry, ecology,
sondas moleculares y particularmente con las nuevas metodo- and medicinal applications; Roberts, M. F., Wink, M., Eds.;
logías provenientes de la proteómica. Plenum Press: New York, 1998; pp 435-459.
Recientemente se han planteado algunas de las preguntas 4. Kutchan, T. M.; Dittrich, H.; Bracher, D.; Zenk, M. H.
que faltan por resolver: cual es el número de pasos de la vía Tetrahedron 1991, 47, 5945-5954.
5. Roberts, M. F. En: Alkaloids. Biochemistry, ecology, and medi-
que se llevan a cabo en la epidermis o en los ápices radicales; cinal applications; Roberts, M. F., Wink, M., Eds.; Plenum
si la biosíntesis de los alcaloides en las raíces y en la epider- Press: New York, 1998; pp 109-146.
6. Kutchan, T. M. The Plant Cell 1995, 7, 1059-1070. 39. Chappell, J. Ann. Rev. Plant Physiol. Plant Mol. Biol. 1995, 46,
7. Geerlings, A.; Ibañez, M. M. L.; Memelink, J.; Van der 521-547.
Heijden, R.; Verpoorte, R. J. Biol. Chem. 2000, 275, 3051- 40. Chappell, J.; Wolf, F.; Proulx, J.; Cuellar, R.; Saunders, C.
3056. Plant Physiol. 1995, 109, 1337-1343.
8. Waterman, P. G. En: Alkaloids. Biochemistry, ecology, and 41. Chappell, J. Plant Physiol. 1995, 107, 1-6.
medicinal applications; Roberts, M. F., Wink, M., Eds.; Plenum 42. Goldstein, J. L.; Brown, M. S. Nature 1990, 343, 425-430.
Press: New York, 1998; pp 87-107. 43. Heintze, A.; Riedel, A.; Aydogdu, S.; Schultz, G. Plant Physiol.
9. Cordell, G. A. En: The Alkaloids; Cordell, G. A., Ed.; Biochem. 1994, 32, 791-797.
Academic Press: San Diego, 1999; pp 261-376. 44. Lichtenthaler, H. K.; Rohmer, M.; Schwender, J.; Disch, A.;
10. Svoboda, G. H.; Blake, D. A. En: The Catharanthus Alkaloids; Seemann, M. En: Physiology, biochemistry and molecular bio-
Taylor, W. I., Farnsworth, N. R., Eds.; Marcel Dekker, Inc.: logy of plant lipids; Williams, J. P., Khan, M. U., Lem, N. W.,
New York, 1975; pp 45-83. Eds.; Kluwer Academy Publishers: Dordrecht, 1997; pp 177-179.
11. Singh, S. N.; Vats, P.; Suri, S.; Shyam, R.; Kumria, M. M. L.; 45. Schwender, J.; Seemann, M.; Lichtenthaler, H. K.; Rohmer, M.
Ranganathan, S.; Sridharan, K. J. Ethnopharmacol. 2001, 76, Biochem. J. 1996, 316, 73-80.
269-277. 46. Banthorpe, D. V.; Bucknall, G. A.; Doonan, H. J.; Doonan, S.;
12. Van der Heijden, R.; Verpoorte, R.; Ten Hoopen, H. J. G. Plant Rowan, M. G. Phytochemistry 1976, 15, 91-100.
Cell Tiss. Org. Cult. 1989, 18, 231-280. 47. Reed, B. C.; Rilling, H. C. Biochemistry 1975, 14, 50-54.
13. Shanks, J. V.; Bhadra, R.; Morgan, J.; Rijhwani, S.; Vani, S. 48. Rohmer, M.; Knani, M.; Simonin, P.; Sutter, B.; Sahm, H.
Biotechnol. Bioeng. 1998, 58, 333-338. Biochem. J. 1993, 295, 517-524.
14. Moreno, P. R. H.; Van der Heijden, R.; Verpoorte, R. Plant 49. Lichtenthaler, H. K. Ann. Rev. Plant Physiol. Plant Mol. Biol.
Cell Tiss. Org. Cult. 1995, 42, 1-25. 1999, 50, 47-65.
15. Scott, I. A. Acc. Chem. Res. 1979, 3, 151. 50. Lange, B. M.; Wildung, M. R.; McCaskill, D.; Croteau, R.
16. De Luca, V.; Laflamme, P. Curr. Opi. Plant Biol. 2001, 4, 225- Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 1998, 95, 2100-2104.
233. 51. Contin, A.; Van der Heijden, R.; Lefeber, A. W.; Verpoorte, R.
17. Verpoorte, R.; Van der Heijden, R.; Schripsema, J.; Hoge, J. H. FEBS Lett. 1998, 434, 413-416.
C.; Ten Hoopen, H. J. G. J. Nat. Prod. 1993, 56, 186-207. 52. Ayora-Talavera, T.; Chappell, J.; Lozoya-Gloria, E.; Loyola-
18. De Luca, V.; St-Pierre, B.; Vázquez-Flota, F.; Laflamme, D. Vargas, V. M. Appl. Biochem. Biotechnol. 2002, 97, 135-145.
En: Cellular Integration of Signalling Pathways in Plant 53. Meijer, A. H.; De Waal, A.; Verpoorte, R. J. Chromatogr.
Development; Lo Chiavo, F., Last, R. L., Morelli, G., Raikhel, 1993, 635, 237-249.
N. V., Eds.; Springer-Verlag: Berlin, Heidelberg, 1998; pp 171- 54. Canto-Canché, B.; Loyola-Vargas, V. M. Phyton 2000, 66, 183-
187. 190.
19. Meijer, A. H.; Verpoorte, R.; Hoge, J. H. C. J. Plant Res. 1993, 55. Canto-Canché, B.; Loyola-Vargas, V. M. In Vitro Cell. Dev.
3, 145-164. Biol. -Plant 2001, 37, 622-628.
20. De Luca, V. En: Methods in Plant Biochemistry Vol. 9; Lea, P. 56. Madyastha, K. M.; Coscia, C. J. J. Biol. Chem. 1979, 254,
J., Ed.; Academic Press Limited: London, 1993; pp 345-368. 2419-2427.
21. Berg, J. M.; Tymoczko, J. L.; Stryer, L. Biochemistry; W.H. 57. Madyastha, K. M.; Coscia, C. J. Rec. Advan. Phytochem. 1979,
Freeman and Company: New York, 1995; pp 1-974. 13, 85-129.
22. Mathews, C. K.; Van Holde, K. E.; Ahern, K. G. Biochemistry; 58. Sánchez-Iturbe, P.; Galaz-Avalos, R. M.; Loyola-Vargas, V. M.
Addison Wesley Longman: San Francisco, 2000; pp 1-1186. Semipurification of a monoterpen cyclase from hairy roots of
23. Lichtenthaler, H. K. En: Discoveries in Plant Biology; Kung, Catharanthus roseus. Journal of Plant Physiology 2003.
S.-D., Yang, S.-F., Eds.; London, 2001; pp 141-161. (GENERIC)
24. Lange, B. M.; Rujan, T.; Martin, W.; Croteau, R. Proc. Natl. 59. Madyastha, K. M.; Guarnaccia, R.; Baxter, C.; Coscia, C. J. J.
Acad. Sci. (USA) 2000, 97, 13172-13177. Biol. Chem. 1973, 248, 2497-2501.
25. Adam, K. P.; Zapp, J. Phytochemistry 1998, 48, 953-959. 60. Irmler, S.; Schröder, G.; St-Pierre, B.; Crouch, N. P.; Hotze,
26. Arigoni, D.; Sagner, S.; Latzel, C.; Eisenreich, W.; Bacher, A.; M.; Schmidt, J.; Strack, D.; Matern, U.; Schröder, J. Plant J.
Zenk, M. H. Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 1997, 94, 10600- 2000, 24, 797-804.
10605. 61. Yamamoto, H.; Katano, N.; Ooi, A.; Inoue, K. Phytochemistry
27. McCaskill, D.; Croteau, R. Trends Biotechnol. 1998, 16, 349- 2000, 53, 7-12.
355. 62. Meijer, A. H. Cytochrome P-450 and secondary metabolism in
28. Bloch, K.; Chaykin, S.; Phillips, A. H.; de Waard, A. J. Biol. Catharanthus roseus; Faculteit der godgeleerdheid:
Chem. 1959, 234, 2595-2604. Gravenhage, 1993; pp 1-151.
29. Tchen, T. T. J. Biol. Chem. 1958, 233, 1100-1103. 63. Schiel, O.; Witte, L.; Berlin, J. Z. Naturforsch. [C] 1987, 42c,
30. Agranoff, B. W.; Eggerer, H.; Henning, U.; Lynen, F. J. Biol. 1075-1081.
Chem. 1960, 235, 326-332. 64. McFarlane, J.; Madyastha, K. M.; Coscia, C. J. Biochem.
31. Stern, J. R.; Drummond, G. I.; Coon, M. J.; del Campillo, A. J. Biophys. Res. Commun. 1975, 66, 1363-1369.
Biol. Chem. 1960, 235, 313-317. 65. Bach, J.; Weber, T. En: Biological Role of Plant Lipids; Biacs,
32. Rudney, H. J. Biol. Chem. 1957, 227, 363-377. P. A., Orliz, K., Kremmer, T., Eds.; Plenum Pub. Corp.: New
33. Durr, I. F.; Rudney, H. J. Biol. Chem. 1960, 235, 2572-2578. York & London, 1989; pp 279-282.
34. Gray, J. C. En: Advances in Botanical Research Vol. 14; 66. McGarvey, D. J.; Croteau, R. The Plant Cell 1995, 7, 1015-
Callow, J. A., Ed.; Academic Press: New York, 1987; pp 25-91. 1026.
35. Gershenzon, J.; Croteau, R. Rec. Advan. Phytochem. 1990, 24, 67. Van der Heijden, R.; Verpoorte, R. Plant Cell Tiss. Org. Cult.
99-160. 1995, 43, 85-88.
36. Bach, T. J.; Raudot, V.; Vollack, K.-U.; Weber, T.; Zeiler, S. 68. Van der Heijden, R.; Verpoorte, R.; Duine, J. A. Plant Physiol.
Plant Physiol. Biochem. 1994, 32, 775-783. Biochem. 1994, 32, 807-812.
37. Van der Heijden, R.; De Boer-Hlupá, V.; Verpoorte, R.; Duine, 69. Heintze, A.; Gorlach, J.; Leuchner, C.; Hope, P.; Hagelstein, P.;
J. A. Plant Cell Tiss. Org. Cult. 1994, 38, 345-349. Schulze-Siebert, D.; Schultz, G. Plant Physiol. 2003, 93, 1121-
38. Bach, T. J. Lipids 1995, 30, 191-202. 1127.
70. McCaskill, D.; Croteau, R. Planta 1995, 197, 49-56. 102. Madyastha, K. M.; Ridgway, J. E.; Dwyer, J. G.; Coscia, C. J.
71. Weissenborn, D. L.; Denbow, C. J.; Laine, M.; Lång, S. S.; J. Cell Biol. 1977, 72, 302-313.
Yang, Z.; Yu, X.; Cramer, C. L. Physiol. Plant. 1995, 93, 393- 103. Donaldson, R. P.; Luster, D. G. Plant Physiol. 1991, 96, 669-
400. 674.
72. Enjuto, M.; Balcells, L.; Campos, N.; Caelles, C.; Arró, M.; 104. Meijer, A. H.; Lopes-Cardoso, M. I.; Verpoorte, R.; Hoge, J. H.
Boronat, A. Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 1994, 91, 927-931. C. Plant J. 1993, 4, 47-60.
73. Budde, R. J. A.; Chollet, R. Physiol. Plant. 1988, 72, 435-439. 105. Madyastha, K. M.; Meehan, T. D.; Coscia, C. J. Biochemistry
74. Bach, T. J. Plant Physiol. Biochem. 1987, 25, 163-178. 1976, 15, 1097-1102.
75. Huber, S. C.; Huber, J. L.; McMichael, R. W., Jr. Int. Rev. 106. Vetter, H.-P.; Mangold, U.; Schröder, G.; Marner, F.-J.; Werck-
Cytol. 1994, 149, 47-98. Reichhart, D.; Schröder, J. Plant Physiol. 1992, 100, 998-1007.
76. Ball, K. L.; Dale, S.; Weekes, J.; Hardie, D. G. Eur. J. Biochem. 107. Uesato, S.; Ogawa, Y.; Inouya, H.; Saiki, K.; Zenk, M. H.
1994, 219, 743-750. Tetrahedron Lett. 1986, 13, 2893-2896.
77. Dale, S.; Arró, M.; Becerra, B.; Morrice, N. G.; Boronat, A.; 108. Ikeda, H.; Esaki, N.; Nakai, S.; Hashimoto, K.; Uesato, S.;
Hardie, D. G.; Ferrer, A. Eur. J. Biochem. 1995, 233, 506-513. Soda, K.; Fujita, T. J. Biochem. (Tokyo) 1991, 109, 341-347.
78. Barker, J. H. A.; Slocombe, S. P.; Ball, K. L.; Hardie, D. G.; 109. Uesato, S.; Ikeda, H.; Fujita, T.; Inouye, H.; Zenk, M. H.
Shewry, P. R.; Halford, N. G. Plant Physiol. 1996, 112, 1141- Tetrahedron Lett. 1987, 28, 4431-4434.
1149. 110. Katano, N.; Yamamoto, H.; Iio, R.; Inoue, K. Phytochemistry
79. Douglas, P.; Pigaglio, E.; Ferrer, A.; Halfords, N. G.; 2001, 58, 53-58.
MacKintosh, C. Biochem. J. 1997, 325, 101-109. 111. Yamamoto, H.; Katano, N.; Ooi, Y.; Inoue, K. Phytochemistry
80. Daraselia, N. D.; Tarchevskaya, S.; Narita, J. O. Plant Physiol. 1999, 50, 417-422.
1996, 112, 727-733. 112. Stöckigt, J.; Zenk, M. H. FEBS Lett. 1977, 79, 233-237.
81. Peffley, D. M.; Gayen, A. K. Arch. Biochem. Biophys. 1997, 113. Stöckigt, J.; Treimer, J. F.; Zenk, M. H. FEBS Lett. 1976, 70,
337, 251-260. 267-270.
82. Lopez, D.; Chambers, C. M.; Ness, G. C. Arch. Biochem. 114. Stöckigt, J.; Zenk, M. H. J. Chem. Soc. Chem. Commun. 1977,
Biophys. 1997, 343, 118-122. 646-648.
83. Hampton, R.; Dimster-Denk, D.; Rine, J. Trends Biochem. Sci. 115. Stöckigt, J.; Husson, H.-P.; Kan-fan, Ch.; Zenk, M. H. J. Chem.
1996, 21, 140-145. Soc. Chem. Commun. 1977, 164-166.
84. Choi, D.; Ward, B. L.; Bostock, R. M. The Plant Cell 1992, 4, 116. Sundberg, R. J.; Smith, S. Q. En: The Alkaloids; Cordell, G. A.,
1333-1344. Ed.; Academic Press: San Diego, 2002; pp 281-376.
85. Narita, J. O.; Gruissem, W. The Plant Cell 1989, 1, 181-190. 117. Verpoorte, R.; Van der Heijden, R.; Moreno, P. R. H. En: The
86. Korth, K. L.; Jaggard, D. A. W.; Dixon, R. A. Plant J. 2000, 23, Alkaliods; Cordell, G. A., Ed.; Academic Press: San Diego,
507-516. 1997; pp 221-299.
87. Wititsuwannakul, R.; Wititsuwannakul, D.; Suwanmanee, P. 118. De Luca, V.; Cutler, A. J. Plant Physiol. 1987, 85, 1099-1102.
Phytochemistry 1990, 29, 1401-1403. 119. Stevens, L. H.; Blom, T. J. M.; Verpoorte, R. Plant Cell Rep.
88. Kondo, K.; Oba, K. J. Biochem. 1986, 100, 967-974. 1993, 12, 573-576.
89. Bach, T. J.; Rogers, D. H.; Rudney, H. Eur. J. Biochem. 1986, 120. Fernandez, J. A.; Kurz, W. G. W.; De Luca, V. Biochem. Cell
154, 103-111. Biol. 1989, 67, 730-734.
90. Bach, T. J.; Weber, T.; Motel, A. Rec. Advan. Phytochem. 121. Islas-Flores, I. R.; Loyola-Vargas, V. M.; Miranda-Ham, M. L.
1990, 24, 1-82. In Vitro Cell. Dev. Biol. -Plant 1994, 30P, 81-83.
91. Reddy, A. R.; Das, V. S. R. Phytochemistry 1986, 25, 2471- 122. Pasquali, G.; Goddijn, O. J. M.; De Waal, A.; Verpoorte, R.;
2474. Schilperoort, R. A.; Hoge, J. H. C.; Memelink, J. Plant Mol.
92. Arebalo, R. E.; Mitchell, E. D. Phytochemistry 1984, 23, 13-18. Biol. 1992, 18, 1121-1131.
93. Galaz-Avalos, R. M. Estudio sobre la enzima 3-hidroxi-3metil 123. Moreno-Valenzuela, O. A. Regulación de la vía de síntesis de
glutaril CoA reductasa en raíces transformadas de los alcaloides indólicos en raíces transformadas de
Catharanthus roseus; ITM/CICY: Mérida, 1996; pp 1-53. Catharanthus roseus; Centro de Investigación Científica de
94. Gutiérrez-Pacheco, L. C. Establecimiento de protocolos de Yucatán: Mérida, Yucatán, 1999; pp 1-94.
solubilización con detergente y purificación por cromatografía 124. Goddijn, O. J. M.; De Kam, R. J.; Zanetti, A.; Schilperoort, R.
de afinidad de la enzima 3-hidroxi-3-metilglutaril-CoA reducta- A.; Hoge, J. H. C. Plant Mol. Biol. 1992, 18, 1113-1120.
sa de raíces transformadas de Catharanthus roseus (L.) G. 125. Noé, W.; Mollenschott, C.; Berlin, J. Plant Mol. Biol. 1984, 3,
Don; CICY: Mérida, 2000; pp 1-106. 281-288.
95. Chin, D. J.; Gil, G.; Russell, D. W.; Liscum, L.; Luskey, K. L.; 126. De Luca, V.; Fernández, A. J.; Campbell, D.; Kurz, W. G. W.
Basu, S. K.; Okayama, H.; Berg, P.; Goldstein, J. L.; Brown, M. Plant Physiol. 1988, 86, 447-450.
S. Nature 1984, 308, 613-617. 127. Morris, P.; Scragg, A. H.; Smart, N. J.; Stafford, A. En: Plant
96. Brown, W. E.; Rodwell, V. W. En: Dehydrogenases Requiring Cell Culture. A Practical Approach; Dixon, R. A., Ed.; IRL
Nicotinamide Coenzymes; Jeffery, J., Ed.; Birkhauser Verlag: Press: Oxford, 1985; pp 127-167.
Basel, 1980; pp 232-272. 128. Knobloch, K.-H.; Berlin, J. Plant Cell Tiss. Org. Cult. 1983, 2,
97. Learned, R. M.; Fink, G. R. Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 1989, 333-340.
86, 2779-2783. 129. Mérillon, J. M.; Ouelhazi, L.; Doireau, P.; Chenieux, J. C.;
98. Qureshi, N.; Dugan, R. E.; Cleland, W. W.; Porter, J. W. Rideau, M. J. Plant Physiol. 1989, 134, 54-60.
Biochemistry 1976, 15, 4191-4197. 130. Eilert, U.; De Luca, V.; Constabel, F.; Kurz, W. G. W. Arch.
99. Wong, R. J.; McCormack, D. K.; Russell, D. W. Arch. Biochem. Biophys. 1987, 254, 491-497.
Biochem. Biophys. 1982, 216, 631-638. 131. Moreno-Valenzuela, O. A.; Galaz-Avalos, R. M.; Minero-García,
100. Rogers, D. H.; Panini, S. R.; Rudney, H. En: 3-hydroxy-3- Y.; Loyola-Vargas, V. M. Plant Cell Rep. 1998, 18, 99-104.
methylglutaryl Coenzyme A reductase; Sabine, J. R., Ed.; CRC 132. Whitmer, S.; Van der Heijden, R.; Verpoorte, R. J. Biotechnol.
Press: Boca Raton, Fl, 1983; pp 57-75. 2002, 96, 193-203.
101. Meehan, T. D.; Coscia, C. J. Biochem. Biophys. Res. Commun. 133. Goddijn, O. J. M.; Van der Duyn Schouten, P. M.; Schilperoort,
1973, 53, 1043-1048. R. A.; Hoge, J. H. C. Plant Mol. Biol. 1993, 22, 907-912.
134. Knobloch, K.-H.; Hansen, B.; Berlin, J. Z. Naturforsch. [C] 168. Fahn, W.; Gundlach, H.; Deus-Neumann, B.; Stöckigt, J. Plant
1981, 36c, 40-43. Cell Rep. 1985, 4, 333-336.
135. De Luca, V.; Balsevich, J.; Tyler, R. T.; Eilert, U.; Panchuk, B. 169. Fahn, W.; LauBermair, E.; Deus-Neumann, B.; Stöckigt, J.
D.; Kurz, W. G. W. J. Plant Physiol. 1986, 125, 147-156. Plant Cell Rep. 1985, 4, 337-340.
136. Treimer, J. F.; Zenk, M. H. FEBS Lett. 1979, 97, 159-162. 170. Dogru, E.; Warzecha, H.; Seibel, F.; Haebel, S.; Lottspeich, F.;
137. Treimer, J. F.; Zenk, M. H. Eur. J. Biochem. 1979, 101, 225- Stöckigt, J. Eur. J. Biochem. 2000, 267, 1397-1406.
233. 171. von Schumann, G.; Gao, S.; Stöckigt, J. Bioorg. Med. Chem
138. Mizukami, H.; Nordlov, H.; Lee, S.-L.; Scott, A. I. 2002, 10, 1913-1918.
Biochemistry 1979, 18, 3760-3763. 172. Pfitzner, A.; Polz, L.; Stöckigt, J. Z. Naturforsch. [C] 1986, 41,
139. Pfitzner, U.; Zenk, M. H. Planta Med. 1989, 55, 525-530. 103-114.
140. De Waal, A.; Meijer, A. H.; Verpoorte, R. Biochem. J. 1995, 173. Falkenhagen, H.; Stöckigt, J. Z. Naturforsch. [C] 1995, 50, 45-53.
306, 571-580. 174. St-Pierre, B.; De Luca, V. Plant Physiol. 1995, 109, 131-139.
141. Kutchan, T. M. Phytochemistry 1993, 32, 493-506. 175. De Carolis, E.; Chan, F.; Balsevich, J.; De Luca, V. Plant
142. Canel, C.; Lopes-Cardoso, M. I.; Whitmer, S.; Van der Fits, L.; Physiol. 1990, 94, 1323-1329.
Pasquali, G.; Van der Heijden, R.; Hoge, J. H. C.; Verpoorte, R. 176. Vázquez-Flota, F.; Moreno-Valenzuela, O. A.; Miranda-Ham,
Planta 1998, 205, 414-419. M. L.; Coello-Coello, J.; Loyola-Vargas, V. M. Plant Cell Tiss.
143. Aerts, R. J.; Van der Leer, T.; Van der Heijden, R.; Verpoorte, Org. Cult. 1994, 38, 273-279.
R. J. Plant Physiol. 1990, 136, 86-91. 177. De Luca, V.; Aerts, R. J.; Chavadej, S.; De Carolis, E.; Alarco,
144. Aerts, R. J.; Gisi, D.; De Carolis, E.; De Luca, V.; Baumann, T. A.-M. En: Biosynthesis and Molecular Regulation of Amino
W. Plant J. 1994, 5, 635-643. Acids in Plants; Singh, B. K., Flores, H. E., Shannon, J. C.,
145. McKnight, T. D.; Roessner, C. A.; Devagupta, R.; Scott, A. I.; Eds.; American Society of Plant Physiology: Rockville, 1992;
Nessler, C. L. Nucleic Acids Res. 1990, 18, 4939. pp 275-284.
146. Pasquali, G.; Erven, A. S.; Ouwerkerk, P. B.; Menke, F. L.; 178. De Carolis, E.; De Luca, V. J. Biol. Chem. 1993, 268, 5504-
Memelink, J. Plant Mol. Biol. 1999, 39, 1299-1310. 5511.
147. Kutchan, T. M.; Hampp, N.; Lottspeich, F.; Beyreuther, K.; 179. De Luca, V.; Balsevich, J.; Kurz, W. G. W. J. Plant Physiol.
Zenk, M. H. FEBS Lett. 1988, 237, 40-44. 1985, 121, 417-428.
148. McKnight, T. D.; Bergey, D. R.; Burnett, R. J.; Nessler, C. L. 180. Laflamme, P.; St Pierre, B.; De Luca, V. Plant Physiol. 2001,
Planta 1991, 185, 148-152. 125, 189-198.
149. Doireau, P.; Mérillon, J. M.; Guillot, A.; Rideau, M.; Chénieux, 181. Schröder, G.; Unterbusch, E.; Kaltenbach, M.; Schmidt, J.; Strack,
J. C.; Brillard, M. Planta Med. 1987, 53, 364-367. D.; De Luca, V.; Schröder, J. FEBS Lett. 1999, 458, 97-102.
150. Stevens, L. H.; Schripsema, J.; Pennings, E. J. M.; Verpoorte, 182. Vázquez-Flota, F. A.; St Pierre, B.; De Luca, V. Phytochemistry
R. Plant Physiol. Biochem. 1992, 30, 675-681. 2000, 55, 531-536.
151. Pfitzner, A.; Stöckigt, J. Phytochemistry 1982, 21, 1585-1588. 183. Aerts, R. J.; De Luca, V. Plant Physiol. 1992, 100, 1029-1032.
152. Luijendijk, T. J. C.; Stevens, L. H.; Verpoorte, R. Plant Physiol. 184. Vázquez-Flota, F. A.; De Luca, V. Phytochemistry 1998, 49,
Biochem. 1998, 36, 419-425. 395-402.
153. Felix, H.; Brodelius, P.; Mosbach, K. Anal. Biochem. 1981, 185. St-Pierre, B.; Laflamme, P.; Alarco, A. M.; De Luca, V. Plant
116, 462-470. J. 1998, 14, 703-713.
154. Hemscheidt, T.; Zenk, M. H. Plant Cell Rep. 1985, 4, 216-219. 186. De Luca, V.; Balsevich, J.; Tyler, R. T.; Kurz, W. G. W. Plant
155. Blom, T. J. M.; Sierra, M.; Van Vliet, T. B.; Franke-van Dijk, Cell Rep. 1987, 6, 458-461.
M. E. I.; De Koning, P.; Van Iren, F.; Verpoorte, R.; Libbenga, 187. Dethier, M.; De Luca, V. Phytochemistry 1993, 32, 673-678.
K. R. Planta 1991, 183, 170-177. 188. De Carolis, E.; De Luca, V. Phytochemistry 1994, 36, 1093-
156. Loyola-Vargas, V. M.; Méndez-Zeel, M.; Monforte-González, 1107.
M.; Miranda-Ham, M. L. J. Plant Physiol. 1992, 140, 213-217. 189. De Carolis, E.; De Luca, V. Plant Cell Tiss. Org. Cult. 1994,
157. Drapeau, D.; Blanch, H. W.; Wilke, C. R. Planta Med. 1987, 38, 281-287.
53, 373-376. 190. Power, R.; Kurz, W. G. W.; De Luca, V. Arch. Biochem.
158. Hong, J.; Lee, J.; Lee, H.; Kim, D.; Hwang, B. Biotechnol. Lett. Biophys. 1990, 279, 370-376.
1997, 19, 967-969. 191. Fahn, W.; Stöckigt, J. Plant Cell Rep. 1990, 8, 613-616.
159. Lee, C. W. T.; Shuler, M. L. Biotechnol. Bioeng. 2000, 67, 61-71. 192. Endo, T.; Goodbody, A. E.; Vukovic, J.; Misawa, M.
160. Zhao, J.; Zhu, W. H.; Hu, Q. Enzyme Microb. Technol. 2001, Phytochemistry 1988, 27, 2147-2149.
28, 673-681. 193. Kutney, J. P.; Aweryn, B.; Choi, L. S. L.; Kolodziejczyk, P.;
161. O’Keefe, B. R.; Mahady, G. B.; Gills, J. J.; Beecher, C. W. W.; Kurz, W. G. W.; Chatson, K. B.; Constabel, F. Heterocycles
Schilling, A. B. J. Nat. Prod. 1997, 60, 261-264. 1981, 16, 1169-1171.
162. Misawa, M.; Goodbody, A. E. En: Plant Cell Culture 194. Kutney, J. P.; Boulet, C. A.; Choi, L. S. L. Heterocycles 1988,
Secondary Metabolism Toward Industrial Application; 27, 621-628.
DiCosmo, F., Misawa, M., Eds.; CRC Press: Boca Raton, 195. Misawa, M.; Endo, T.; Goodbody, A. E.; Vukovic, J.; Chapple,
Florida, 1996; pp 123-138. C. S.; Choi, L. S. L.; Kutney, J. P. Phytochemistry 1988, 27,
163. Zhao, J.; Zhu, W. H.; Hu, Q. Plant Growth Regul. 2001, 33, 43- 1355-1359.
49. 196. Smith, J. I.; Amouzou, E.; Yamaguchi, A.; McLean, S.;
164. Vázquez-Flota, F.; De Luca, V. Plant Physiol. 1998, 117, 1351- DiCosmo, F. Biotechnol. Appl. Biochem. 2003, 10, 568-575.
1361. 197. Sottomayor, M.; López-Serrano, M.; DiCosmo, F.; Barceló, A.
165. Vázquez-Flota, F.; De Carolis, E.; Alarco, A. M.; De Luca, V. R. FEBS Lett. 1998, 428, 299-303.
Plant Mol. Biol. 1997, 34, 935-948. 198. Kutney, J. P.; Choi, L. S. L.; Kolodziejczyk, P.; Sleigh, S. K.;
166. De Luca, V.; Brisson, N.; Kurz, W. G. W. En: Primary and Stuart, K. L.; Worth, B. R.; Kurz, W. G. W.; Chatson, K. B.;
Secondary Metabolism of Plants Cell Cultures II; Kurz, W. G. Constabel, F. Phytochemistry 1980, 19, 2589-2595.
W., Ed.; Springer Verlag: Berlin, 1989; pp 154-161. 199. Sottomayor, M.; De Pinto, M. C.; Salema, R.; DiCosmo, F.;
167. Vázquez-Flota, F.; De Luca, V.; Carrillo-Pech, M. R.; Canto- Pedreño, M. A.; Barcelo, A. R. Plant Cell Environ. 1996, 19,
Flick, A.; Miranda-Ham, M. L. Mol. Biotechnol. 2002, 22, 1-8. 761-767.
200. St-Pierre, B.; Vázquez-Flota, F. A.; De Luca, V. The Plant Cell 219. Zhao, J.; Hu, Q.; Guo, Y. Q.; Zhu, W. H. Appl. Microbiol.
1999, 11, 887-900. Biotechnol. 2001, 55, 693-698.
201. Moreno-Valenzuela, O. A.; Minero-García, Y.; Brito-Argáez, 220. Balsevich, J.; De Luca, V.; Kurz, W. G. W. Heterocycles 1986,
L.; Carbajal-Mora, E.; Echeverría, O.; Vázquez-Nin, G.; 24, 2415-2421.
Loyola-Vargas, V. M. Mol. Biotechnol. 2003, 23, 11-18. 221. Verpoorte, R.; Van der Heijden, R.; Memelink, J. Transg. Res.
202. Merillon, J. M.; Ramawat, K. G.; Chenieux, J. C.; Rideau, M. 2000, 9, 323-343.
En: VI International Congress Plant Tissue and Cell Culture; 222. Flores, H. E.; Filner, P. En: Primary and Secondary Metabolism
Somers, D. A., Ed.; International Association for Plant Tissue in Plant Cell Cultures; Neumann, K. H., Barz, W., Reinhard,
Culture: Minneapolis, 1986; pp 370 E., Eds.; Springer-Verlag: Heidelberg, 1985; pp 174-186.
203. Whitmer, S.; Van der Heijden, R.; Verpoorte, R. Plant Cell 223. Robinson, T. Science 1974, 184, 430-435.
Tiss. Org. Cult. 2002, 69, 85-93. 224. Robinson, T. The Biochemistry of Alkaloids; Springer-Verlag:
204. Eilert, U.; Kurz, W. G. W.; Constabel, F. En: Plant Biology. 1981; pp 1-11.
Vol. 3. Plant Tissue and Cell Culture; Green, C. E., Somers, D. 225. Hashimoto, T.; Yamada, Y. Ann. Rev. Plant Physiol. Plant Mol.
A., Hackett, W. P., Biesboer, D. D., Eds.; Alan R. Liss, Co.: Biol. 1994, 45, 257-285.
New York, 1987; pp 213-219. 226. Facchini, P. J.; De Luca, V. The Plant Cell 1995, 7, 1811-1821.
205. Knobloch, K.-H.; Berlin, J. Adv. Biotechnol. 1981, 1, 129-133. 227. Facchini, P. J. Ann. Rev. Plant Physiol. Plant Mol. Biol. 2001,
206. Toivonen, L. Utilization of Catharanthus roseus hairy root and 52, 29-66.
cell suspension cultures in plant biotechnology; Helsinki 228. Dörnenburg, H.; Knorr, D. Enzyme Microb. Technol. 1995, 17,
University of Technology: Helsinki, 1992; pp 1-93. 674-684.
207. Facchini, P. J.; DiCosmo, F. Appl. Microbiol. Biotechnol. 1991, 229. Constabel, F.; Gaudet-LaPrairie, P.; Kurz, W. G. W.; Kutney, J.
35, 382-392. P. Plant Cell Rep. 1982, 1, 139-142.
208. Morgan, J. A.; Shanks, J. V. J. Biotechnol. 2000, 79, 137-145. 230. Datta, A.; Srivastava, P. S. Phytochemistry 1997, 46, 135-137.
209. Zenk, M. H.; Deus, B. En: Proceedings 5 th International 231. Endo, T.; Goodbody, A. E.; Misawa, M. Planta Med. 1987, 53,
Congress of Plant Tissue and Cell Culture; Fujiwara, A., Ed.; 479-482.
The Japanese Association for Plant Tissue Culture: Japan, 232. Westekemper, P.; Wieczorek, U.; Gueritte, F.; Langlois, N.;
1982; pp 391-394. Potier, P.; Zenk, M. H. Planta Med. 1980, 39, 24-37.
210. Whitmer, S.; Canel, C.; Hallard, D.; Gonçalves, C.; Verpoorte, 233. Deus-Neumann, B.; Stöckigt, J.; Zenk, M. H. Planta Med.
R. Plant Physiol. 1998, 116, 853-857. 1987, 53, 184-188.
211. Godoy-Hernández, G.; Loyola-Vargas, V. M. Plant Cell Rep. 234. Balsevich, J.; Bishop, G. En: Primary and Secondary
1991, 10, 537-540. Metabolism of Plant Cell Cultures II; Kurz, W. G. W., Ed.;
212. Sáenz-Carbonell, L.; Santamaría, J. M.; Villanueva, M. A.; Springer-Verlag: Berlin Heidelberg, 1989; pp 149-153.
Loyola-Vargas, V. M.; Oropeza, C. J. Plant Physiol. 1993, 142, 235. Ciau-Uitz, R.; Miranda-Ham, M. L.; Coello-Coello, J.; Chí, B.;
244-247. Pacheco, L. M.; Loyola-Vargas, V. M. In Vitro Cell. Dev. Biol.
213. Vázquez-Flota, F.; Loyola-Vargas, V. M. J. Plant Physiol. -Plant 1994, 30P, 84-88.
1994, 144, 613-616. 236. Bhadra, R.; Ho,C.; Rosi,S.; Shanks,J.V. In Vitro Cell.Dev.Biol.-
214. Godoy-Hernández, G.; Loyola-Vargas, V. M. Plant Cell Rep. Plant 1990, 26, Pt.2 69A Abstract.
1997, 16, 287-290. 237. Bhadra, R.; Vani, S.; Shanks, J. V. Biotechnol. Bioeng. 1993,
215. Moreno-Valenzuela, O. A.; Monforte-González, M.; Muñoz- 41, 581-592.
Sánchez, J. A.; Méndez-Zeel, M.; Loyola-Vargas, V. M.; 238. Parr, A. J.; Peerless, A. C. J.; Hamill, J. D.; Walton, N. J.;
Hernández-Sotomayor, S. M. T. J. Plant Physiol. 1999, 155, Robins, R. J.; Rhodes, M. J. C. Plant Cell Rep. 1988, 7, 309-
447-452. 312.
216. Godoy-Hernández, G. C.; Vázquez-Flota, F. A.; Loyola- 239. Toivonen, L.; Balsevich, J.; Kurz, W. G. W. Phytochem. Soc.
Vargas, V. M. Biotechnol. Lett. 2000, 22, 921-925. Newsletter 1989, 29, 22.
217. Vázquez-Flota, F.; Monforte-González, M.; Méndez-Zeel, M.; 240. Peraza-Sánchez, S. R.; Gamboa-Angulo, M. M.; Erosa-López,
Minero-García, Y.; Loyola-Vargas, V. M. Phyton 2000, 66, C.; Ramírez-Erosa, I.; Escalante-Erosa, F.; Peña-Rodríguez, L.
155-164. M.; Loyola-Vargas, V. M. Nat. Prod. Lett. 1998, 11, 217-224.
218. Zhao, J.; Zhu, W. H.; Hu, Q. Enzyme Microb. Technol. 2001,
28, 666-672.

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Rev. Soc. Quím. Méx.

2004, 48, 67-94

Biosíntesis de los alcaloides indólicos. Una revisión crítica

Recibido el 4 de noviembre del 2004; aceptado el 8 de enero del 2004

Introducción Con base en esta clasificación se tienen cuatro grupos: 1) alca-

Fig. 1. Alcaloides indólicos sintetizados a partir de la estrictosidina [4, 5].

Alcaloides monoterpén indólicos mias cardiacas y el mejoramiento de la circulación cerebral [3;

La enzima L-aminoácido-aromático carboxi-liasa (EC para la biosíntesis de terpenoides en el citoplasma, y 2) la ruta

inespecífica en cuanto al grupo OH que es capaz de oxidar Biosíntesis de los AMIS

Enzima Abreviatura MM × 10-3 Sustratos y Km* Localización Pur Clonación Tejido

Triptofano decarboxilasa TDC 56 Trp 75 µM Citoplasma AH Sí Epidermis hojas> raíz

Monoterpén iridodial ciclasa MIC 10 oxogeranial; NADPH ¿Vacuola? P Raíces transformadas

7-deoxiloganina 7-hidroxilasa DL7H O2, NADPH 18 µM, Microsomas Si Cultivo de tejidos L.

Secologanina sintasa SS O2, NADPH, loganina Retículo Sí Hoja C. roseus y cultivo

Geissoschizina deshidrogenasa GD Geissoschizina 83 µM, 35x Cultivo de tejidos C. roseus

Polineuridina aldehído esterasa PNAE Aldehído de polineuridina AH Si Cultivo de tejidos R.

Catenamina sintasa CS 4, 21-geissoschizina

Tetrahidroalstonina sintasa 81 Catenamina imonium 62 µM P

Peroxidasa 15 Catenamina + vindolina Vacuola P

Tabersonina 16-hidroxilasa T16OH O2, NADPH 14 µM y Retículo Hojas jóvenes y cultivo de

SAM 16-hidroxitabersonina OMT 16-hidroxitabersonina Retículo P Plántulas C. roseus

SAM: 16-metoxi-2, 3-dihidro-3- NMT 16-metoxi-2, 3-dihidro-3- Membranas de P Plántulas C. roseus

Deacetoxivindolina 4-hidroxilasa D4H 45 O2, 2-oxoglutarato Citoplasma P Si Idioblastos/latidíferas hoja,

AcetilCoA: deacetilvindolina DAT 54 AcetilCoA 6.5 µM Citoplasma AH Si Idioblastos/latidíferas

Minovincinina 19-O-acetiltransferasa MAT Minovincinina Si Células corticales raíz

Anhidrovinblastina sintasa (peroxidasa) 45 Vindolina y catarantina Vacuola AH Cultivo de tejidos C. roseus

Vinorina sintasa VS 31 16-epi-vellosimina 19.4 µM AH Cultivo de tejidos R.

Vomilenina reductasa VR 43 Vomilenina y NADPH 20.6 Cultivo de tejidos R.

Vinorina hidroxilasa VH O2, NADPH 3 µM, vinorina

cífica para la estrictosidina o su derivado 10-metoxi y en su A partir de la 4, 21-didehidrogeissoschizina la ruta de bio-

de micelios fúngicos, como de filtrados provenientes de culti-

Conclusiones mis obedece a diferentes papeles biológicos y funciones eco-

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