Investigação Bioquímica na

Prática Clínica

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 Bioquímica Clínica

Bioquímica Clínica
(Química Clínica ou Patologia Química)

• ramo da Medicina Laboratorial no qual são aplicados

métodos químicos ou bioquímicos para estudar a doença

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 Bioquímica Clínica

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 Bioquímica Clínica

• O conhecimento das bases fisiopatológicas das doenças metabólicas

é essencial para o uso efetivo dos testes bioquímicos na prática
clínica.

• Outros fatores importantes relacionados com a investigação

bioquímica incluem os:
• objetivos;
• processos envolvidos na realização dos testes;
• fatores gerais que influenciam a interpretação dos testes.

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Como são usados os testes bioquímicos?

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Objetivos da investigação bioquímica: diagnóstico

• Complementar o diagnóstico clínico (história, exame

clínico, outros exames complementares)

De facto, na prática clínica:

• Os testes bioquímicos confirmam, na maior parte das
vezes, o diagnóstico
o Ex.: um síndrome metabólico particular como um estado de
hipoglicémia
• Os testes bioquímicos específicos podem
confirmar/reforçar o diagnóstico de doenças
particulares
o Ex.: o teste de tolerância oral à glicose na diabetes mellitus

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Objetivos da investigação bioquímica: tratamento

• Acompanhar a resposta ao tratamento em disfunções agudas

o Ex.: na cetoacidose diabética, é importante monitorizar os níveis
de glicose sanguínea após administração de insulina

• Monitorizar o tratamento em situações crónicas

o Ex.: a concentração da hemoglobina glicosilada é um importante
indicador dos níveis de glicose ao longo de várias semanas e é
usada na diabetes para avaliar se o tratamento é o adequado

o Avaliar o tratamento com fármacos

- avaliar a sua eficácia (concordância, gama terapêutica,
sobredosagens, testes urgentes)
o Ex.: controlo da anticoagulação

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 Objetivos da investigação bioquímica: triagem

• Detetar precocemente uma doença que não é aparente

o Ex.: doenças metabólicas hereditárias (fenilcetonúria,
hipotiroidismo neonatal...)

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Objetivos da investigação bioquímica: prognóstico

• Prognóstico da doença, após o seu diagnóstico

o Ex.: a hipercolesterolémia é um fator de risco de
doença coronária
- Presentemente, justifica-se o tratamento da
hipercolesterolémia em pacientes com doença coronária
- Assim, a determinação de colesterol em pacientes com
doença coronária permite avaliar a eficácia de um
determinado tratamento redutor deste risco

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 Objetivos da investigação bioquímica: estudos clínicos

• Muitas vezes, os laboratórios de Bioquímica também

estão envolvidos na pesquisa das bases bioquímicas da
doença e na avaliação clínica de novos fármacos

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 Testes Bioquímicos
Testes bioquímicos gerais (“core analysis”)

•Sódio, potássio, cloreto e bicarbonato

•Ureia e creatinina

•Cálcio e fosfato

•Proteína total e albumina

•Bilirrubina e fosfatase alcalina

•Alanina aminotransferase (ALT) e aspartato aminotransferase (AST)

•Tiroxina (T4) e Hormona estimulante da tiroide (TSH)

•g-Glutamil transpeptidase (g-GT)

•Creatina cinase (CK)

•H+, PCO2 e PO2 (gases do sangue)

•Glicose

•Amilase

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 Testes Bioquímicos

Testes especializados Testes de emergência

•Hormonas •Ureia e eletrólitos

•Proteínas específicas •Gases do sangue

•Elementos vestigiais •Amilase

•Vitaminas •Glicose

•Drogas •Salicilatos

•Lípidos e lipoproteínas •Paracetamol

•Análise de DNA •Cálcio

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 Mecanismos de investigação bioquímica

• Podem ser realizados mais de 400 testes diferentes nos laboratórios de

bioquímica clínica.
• A maioria dos laboratórios está atualmente computorizada e usa códigos
de barras para identificação das amostras e métodos de análise
automáticos.

Autoanalisador ou
analisador automático

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Mecanismos de investigação bioquímica

Kits de análise
Utilizados em testes realizados Métodos manuais
menos frequentemente

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 Colheita de amostras

Testes especializados
•Sangue venoso, soro ou plasma

•Sangue arterial

•Sangue capilar

•Urina

•Fezes
•Fluido cerebroespinal

•Saliva

•Tecidos e células
•Aspirados, p.e.
• Fluido pleural
• Ascites
• Fluido sinovial
• Intestinal (duodenal)

•Cálculos (“pedras”)

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 Colheita de amostras: sangue

Pode ser:

lArterial
utilizado apenas em estudos muito específicos
Ex.: doseamento de gases sanguíneos

lCapilar
geralmente como alternativa à punção venosa, quando esta é difícil
Ex: crianças (ex.: picada no pezinho – DP) e obesos

lVenoso
mais utilizado

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 Colheita de amostras: sangue

Após a colheita, o sangue deve ser rapidamente processado, em

função do que se quiser obter:

Soro
SANGUE Sangue total (raramente)
Plasma

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 Soro vs. Plasma

Sangue total

Tubo seco Tubo com anticoagulante

20-30 min/37ºC Homogeneização por inversão

Fibrinogénio ® fibrina Separação das células por centrifugação

Coágulo

Separação das células por centrifugação

SORO PLASMA

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 Soro vs. Plasma

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 Anticoagulantes

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 Anticoagulantes

Heparina
• funciona como anticoagulante promovendo a inibição

da trombina

• é amplamente usado, não causando interferência na

maior parte dos testes

• não é apropriado para a contagem de células do

sangue

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 Anticoagulantes

EDTA
• quelante de Ca2+

• usado na Hematologia porque preserva os elementos

celulares do sangue

• não é apropriado para a análise de iões divalentes

• inibe enzimas que requerem iões divalentes

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 Anticoagulantes

Citrato de Sódio
l atua por remoção de Ca2+

l usado nos estudos da coagulação

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 Anticoagulantes

Fluoreto de sódio / oxalato

l o fluoreto de sódio inibe as enzimas glicolíticas

l usado na análise da glicose

l o fluoreto de sódio não é particularmente efetivo

como anticoagulante e, por isso, é usado em

combinação com o oxalato

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 Colheita de amostras: urina

• As análises bioquímicas na urina são

realizadas em amostras colhidas ao acaso

ou em colheitas periódicas (normalmente

de 24h).

• Os contentores para colheitas de 24h

• Volume normal – 1 a 2 L/dia devem incluir um conservante para

• Poliúria > 2 L/dia inibir o crescimento bacteriano, ou ácido

• Oligúria < 500 mL/dia para estabilizar determinados

• Anúria – 0 a 100 mL metabolitos.

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 Erros na obtenção de amostras

•Técnica de colheita de sangue

• Dificuldades na colheita podem levar à hemólise - falsos

resultados de potássio e outros constituintes dos eritrócitos

• Uso (prolongado) de garrote durante a colheita de sangue

• A água do plasma difunde para o espaço intersticial e as

amostras de soro ou plasma obtidas serão mais concentradas

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 Erros na obtenção de amostras

• Amostra insuficiente

• Erros no tempo

(p.e., na colheita de urina de 24h)

• Contentor de amostra incorreto

(p.e., anticoagulante incorreto)

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 Erros na obtenção de amostras

• Local de colheita incorreto

• P.e., o sangue não deve ser colhido do braço no qual está

a ser dada uma infusão intravenosa.

• Armazenamento da amostra incorreto

• P.e., uma amostra de sangue mantida durante uma noite
antes de ser enviada ao laboratório apresentará falsos
resultados de potássio, fosfato e enzimas dos eritrócitos,
tais como a lactato desidrogenase, devido à libertação
destas substâncias no fluido extracelular.

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 Amostras perigosas

•Todas as amostras de doentes com infeções perigosas devem

ser marcadas com autocolantes (amarelos) com a sinalização

de “amostra perigosa”.

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Diagrama do circuito em Bioquímica Clínica

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 Interpretação dos resultados

Resultado incorreto Diagnóstico e

tratamentos errados

Sérias consequências para

o doente!

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 Expressão dos resultados

• A maioria das análises bioquímicas é quantitativa, embora algumas

possam ser qualitativas ou semi-qualitativas (p.e., a determinação da

glicose na urina).

• Os resultados são, muitas vezes, expressos em unidades molar (M).

• Outras substâncias são expressas em gramas (g) ou miligramas (mg).

• As enzimas são expressas em unidades de atividade (U).

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 Expressão dos resultados

Mole* Abreviatura Definição

Milimole mmol x 10-3 da mole
Micromole µmol x 10-6
Nanomole nmol x 10-9
Picomole pmol x 10-12
Fentomole fmol x 10-15

*1 mole (mol) = 6,02 x 1023 partículas

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 Expressão de resultados

Concentração

•A concentração de uma substância é a

razão entre a quantidade de substância e
o volume em que ela se encontra
dissolvida. Variações na concentração
podem ocorrer porque:

•A quantidade de substância
aumentou ou diminuiu;

• O volume de fluido no qual a

substância está dissolvida pode ter
uma variação semelhante.

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 Expressão de resultados

Os resultados podem apresentar variações analíticas e biológicas

VARIAÇÕES ANALÍTICAS

• São as diferenças no resultado do teste que são devidas ao processo técnico

da determinação

– Erros fortuitos: ocorrem devido a circunstâncias imprevistas

– Erros sistemáticos: erros inerentes a um determinado procedimento

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 Expressão de resultados
Termos que descrevem os resultados bioquímicos:

• Precisão e exatidão
• Sensibilidade e especificidade

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 Expressão de resultados

• Precisão: define a proximidade dos valores ao valor médio

• Repetibilidade: precisão intra-teste
• Reprodutibilidade: precisão inter-teste

• Exatidão: medida da aproximação do resultado do

verdadeiro valor

• Sensibilidade: quantidade mínima de substância que o

método pode detetar

• Especificidade: capacidade do método em discriminar

entre a substância pretendida e possíveis substâncias
interferentes

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 Expressão de resultados

Limite aceitável do erro:

Depende de:
• Significado clínico da prova analítica
• Tecnologia utilizada
• Método

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 Expressão de resultados

Controlo de qualidade

• Os laboratórios participam em estudos de controlo de qualidade e

destes obtêm dados sobre a imprecisão e inexatidão.

• Assim, os laboratórios obtêm dados da variabilidade analítica de

um teste particular.

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 Expressão de resultados

Controlo de qualidade

• Controlos de qualidade internos

– Realizados diariamente ou em todos os ensaios. Os valores

esperados são conhecidos e os resultados obtidos são comparados
com valores prévios para monitorizar a performance.

• Controlos de qualidade externos

– Amostras idênticas são distribuídas pelos laboratórios e os

resultados são comparados.

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 Expressão de resultados

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 Expressão de resultados

Os resultados dos testes bioquímicos são, normalmente,

comparados com intervalos de referência que se
considera representarem o estado normal de saúde.

• Os intervalos de referência são obtidos determinando a concentração da

substância num grupo representativo da população que, aparentemente,
não apresenta doença.

• Os indivíduos de referência são selecionados com base em critérios bem

definidos.

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 Expressão de resultados

Os valores para muitos testes têm uma distribuição Gaussiana e,

nestes casos, convencionou-se que correspondem a:
Média ± 2SD

Esta definição inclui 95% da população testada.

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 Expressão de resultados

Algumas vezes, a distribuição dos resultados não é Gaussiana e, nestes

casos, devem usar-se outros métodos estatísticos para determinar o
intervalo de referência.

Por vezes, ocorre uma sobreposição

entre o estado de doença e o estado
normal.

• Doentes com um resultado anormal

podem não ter doença - falsos
positivos.

• Doentes com um resultado normal

podem ter doença - falsos negativos.

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 Expressão de resultados

VARIAÇÕES BIOLÓGICAS
A discriminação entre o normal e o anormal pode ser afetada por vários
fatores fisiológicos

• Postura do doente
• Sexo do doente
• Efeito do exercício
• Idade do doente
• História médica
• Efeito da dieta
• Gravidez
• Hora da colheita
• Ciclo menstrual
• Stress e ansiedade
• Fármacos/drogas

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 Alguns valores de referência...

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