Introd Prats Lab Imuno V FF Ago 06 17

Introdução às Práticas
Laboratoriais em Imunologia
Prof. Helio José Montassier

Principais preparações antigênicas usadas em atividades
experimentais em imunologia:
•Antígenos particulados: apresentam dimensão de uma célula e,

ao se adicionar um diluente apropriado, forma-se uma
suspensão. Ex: bactérias e células eucariontes, como hemácias
(carneiro, galinha).
•Antígenos solúveis: apresentam dimensão de macro-molécula

e, ao se adicionar um diluente apropriado, forma-se uma
solução. Ex: proteínas (ovoalbumina, gamaglobulina) e
polissacarídeos.
Tipos de diluentes:-
•Solução Salina (NaCl 0,15 M)
•PBS ou Tampão Fosfato com Salina (NaCl a 0,15M e

Fosfatos Ácido e Básico de Sódio a 0,04 M)
Sangue colhido
c/ anticoagulante
Sangue colhido e centrifugado p/
c/ anticoagulante separar a fração
e s/ centrifugar líquida do
sobrenadante
Sangue colhido
s/ anticoagulante
e depois de
coagulado é
centrifugado
Esquema de Componentes Ppais. e Ativação da Via de
Coagulação do Sangue
•PLASMA é o sobrenadante obtido após a centrifugação do sangue total, colhido em tubo
com anticoagulante.
•Os anticoagulantes mais utilizados no laboratório clínico são : heparina, EDTA e Citrato
de sódio.
•A heparina previne a coagulação pois liga-se à trombina, já o EDTA e o Citrato ligam-se

ao Ca²+ e Mg²+ , cuja interferência se dá nas enzimas cálcio e magnésio-dependentes
envolvidas na cascata de coagulação.
•O citrato é utilizado em coletas de sangue para transfusão.
•SORO é o sobrenadante obtido após coleta de sangue total e deixado para coagulação
espontânea (que leva de 30 a 45 minutos) . Durante o processo de coagulação , o
fibrinogênio é convertido em fibrina, é a clivagem proteolítica da trombina, e a sua maior
diferença entre plasma e soro é a ausência de fibrinogênio no soro.
SOROLOGIA
Imunologia e Sorologia:-
Imunologia é o ramo da biologia que estuda o sistema imune.
• Funcionamento do sistema imune de um indivíduo (vertebrado) no

estado sadio ou não.
• Características físicas, químicas e fisiológicas dos

componentes do sistema imune.
SOROLOGIA
Doenças diagnosticadas por técnicas imunológicos a
partir do soro (+ frequente), do plasma (- frequente) ou do
sangue total (- frequente):-
•Doenças Infecciosas
•Doenças autoimunes
•Reações de Hipersensibilidade (Alergias)
•Seleção de doadores de sangue (Imuno-hematologia)
•Seleção de doadores de órgãos ou tecidos para transplantes
SOROLOGIA
Exames e técnicas laboratoriais para a detecção de anticorpos
(+frequente) ou de antígenos (-frequente).
• ELISA (Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay) – cinomose, peste

suína clássica, toxoplasmose, etc.
•Reação de Imunofluorescência (RIF) – leishmaniose, toxoplasmose,

leptospirose, etc.
•Látex – Aglutinação – Detecção de Fator Reumatóide, Proteína C

Reativa, rotavirus, coronavirus, etc.
•Rádio-Imuno-Ensaio – Dosagem de hormônios.

Técnica de Diluições Seriadas
Importância – permitir a determinação das quantidades relativas

de anticorpos em testes sorológicos
Técnica de diluições seriadas:
-Séries com razão constante e diluições sucessivas.
-Nesta técnica, transferem-se volumes sucessivamente de um tubo para outro seguinte,
ao qual se adicionou quantidade adequada de diluente.
Exemplo 1. Diluições sucessivas com razão constante igual a 2:-
1) Distribuir numa série de tubos com 1 ml de diluente.

2) Ao tubo 1 adicionar 1 ml do material.
3) Transferir 1 ml do tubo 1 para o tubo 2.
4) Transferir 1 ml do tubo 2 para o tubo 3.
5) Prosseguir da mesma maneira até o último tubo da série.
Ao final as diluições obtidas serão: 1:2; 1:4; 1:8; 1:l6; 1:32; 1:64
Exemplo 2. Diluições sucessivas com razão constante igual a 10:-
1) Distribuir 0,9ml de diluente numa série de tubos.

2) Ao tubo 1 adicionar 0,1 ml do material não diluído.
3) Transferir 0,1 ml do tubo 1 para o tubo 2.
4) Transferir 0,1 ml do tubo 2 para o tubo 3.
5) Prosseguir da mesma maneira até o último tubo da série.
As diluições obtidas serão: 1:10; 1:100; 1:1000; 1:10.000; e 1:100.000.
Problemas: -
1. Como você faz para diluir um soro a 1/50;1/100;1/200;1/400 e 1/800?
2. Como você procede para diluir um vírus de 10-3 a 10-8?

Perguntas:-
1. Qual o procedimento geral para se preparar uma suspensão antigênica de hemácias a

5%, sem fazer a aferição por espectrofotometria?
2. Como se faz para preparar uma solução antigênica de gamaglobulina bovina a 0,1%,
num volume final de 5ml?
3. Qual das preparações antigênicas acima (exercícios 1 e 2) será usada para a obtenção
de soros:
a) Precipitantes b) Aglutinantes
4. Qual(is) a(s) principal(is) finalidade(s) de se fazer uma escala de diluições seriadas?
5. O que são:
a) Solução anti-coagulante de Alsever
b) Solução salina d) Soro
c) Plasma e) Solução salina tamponada

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Introdução às Práticas

Prof. Helio José Montassier

•Antígenos particulados: apresentam dimensão de uma célula e,

•Antígenos solúveis: apresentam dimensão de macro-molécula

•Solução Salina (NaCl 0,15 M)

•PBS ou Tampão Fosfato com Salina (NaCl a 0,15M e

•A heparina previne a coagulação pois liga-se à trombina, já o EDTA e o Citrato ligam-se

•O citrato é utilizado em coletas de sangue para transfusão.

Imunologia é o ramo da biologia que estuda o sistema imune.

• Funcionamento do sistema imune de um indivíduo (vertebrado) no

• Características físicas, químicas e fisiológicas dos

• ELISA (Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay) – cinomose, peste

•Reação de Imunofluorescência (RIF) – leishmaniose, toxoplasmose,

•Látex – Aglutinação – Detecção de Fator Reumatóide, Proteína C

•Rádio-Imuno-Ensaio – Dosagem de hormônios.

Importância – permitir a determinação das quantidades relativas

1) Distribuir numa série de tubos com 1 ml de diluente.

1) Distribuir 0,9ml de diluente numa série de tubos.

1. Como você faz para diluir um soro a 1/50;1/100;1/200;1/400 e 1/800?

2. Como você procede para diluir um vírus de 10-3 a 10-8?

1. Qual o procedimento geral para se preparar uma suspensão antigênica de hemácias a

4. Qual(is) a(s) principal(is) finalidade(s) de se fazer uma escala de diluições seriadas?

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