ANTICUERPOS MONOCLONALES

¿QUÉ SON ANTICUERPOS MONOCLONALES?

Los anticuerpos monoclonales son glucoproteínas (son moléculas compuestas por
una proteína unida a uno o varios glúcidos, simples o compuestos) especializadas que hacen
parte del sistema inmune, producidas por las células B, con la capacidad de reconocer
moléculas específicas (antígenos). Los anticuerpos monoclonales son herramientas
esenciales en el ámbito clínico y biotecnológico, y han probado ser útiles en el diagnóstico
y tratamiento de enfermedades infecciosas, inmunológicas y neoplá-sicas, así como
también en el estudio de las interacciones patógeno-hospedero y la marcación, detección y
cuantificación de diversas moléculas. Actualmente, la incorporación de las técnicas de
biología molecular e ingeniería genética y proteica han permitido ampliar el horizonte de la
generación de anticuerpos monoclonales y sus usos, y se han encontrado técnicas como la
hibridación, la quimerización, la humanización y la producción de anticuerpos
monoclonales totalmente humanos. Es una de las áreas de mayor crecimiento en la industria
biotecnológica y farmacéutica; en el mercado se encuentran cerca de 29 anticuerpos
monoclonales aprobados por la Food and Drug Administration (FDA) de los Estados
Unidos para uso en humanos.
PRODUCCIÓN DE LOS ANTICUERPOS MONOCLONALES
Si una sustancia extraña (antígeno) se inyecta en el cuerpo de un humano, alguna de las
células B de su sistema inmune se transformarán en células plasmáticas y empezarán a
producir anticuerpos que se unirán a ese antígeno. Cada célula B produce un solo tipo de
anticuerpo, así diferentes linfocitos B producirán anticuerpos estructuralmente diferentes
que se unirán a distintas partes del antígeno. Esta mezcla fisiológica natural de anticuerpos
es conocida como antisuero policlonal.
Para producir anticuerpos monoclonales, primero se extraen células B del bazo de un
animal que ha sido expuesto al antígeno. Estas células B son fusionadas en presencia de
PEG (polietilenglicol) con células tumorales de mieloma múltiple (un tipo de cáncer) que
pueden crecer indefinidamente en cultivo celular. Esta fusión hace a las membranas
celulares más permeables. Estas células fusionadas híbridas, llamadas hibridomas pueden
multiplicarse rápida e indefinidamente (ya que son células tumorales después de todo) y
pueden producir gran cantidad de anticuerpos. Los hibridomas son suficientemente diluidos
y cultivados para obtener un número diferente de determinadas colonias, las cuales
producen sólo un tipo de anticuerpo. Los anticuerpos de diferentes colonias son analizados
para conocer su capacidad de unirse a un antígeno determinado, por ejemplo, con un tipo de
test llamado ELISA, y para seleccionarse y aislarse de la manera más efectiva.
El proceso de producción de anticuerpos monoclonales es complejo. Primero se disgrega el
bazo del ratón inmunizado, donde se acumulan los linfocitos B que tienen una escasa
viabilidad en cultivo, y se fusionan con células de mieloma deficientes en enzimas
implicados en la síntesis del nuevo ADN como la timidina quinasa (TK) o la hipoxantina
guanina fosforibosil transferasa (HGPRT). Los productos de la fusión celular (hibridomas)
son cultivados en medio HAT (de hipoxantina, aminopterina y timidina) donde las células
mielómicas son eliminadas. Solamente pueden crecer en el medio de cultivo HAT las
células que son producto de la fusión entre un linfocito y una célula de mieloma. Las
células híbridas obtenidas tras el proceso de fusión contienen un número elevado de
cromosomas (72 del mieloma y 40 del linfocito B) que en las sucesivas divisiones celulares
se irán perdiendo hasta oscilar entre los 70 y los 80 cromosomas. Como consecuencia de
dicho proceso, algunas células pierden la capacidad de secreción de anticuerpos o bien
funciones básicas para la viabilidad celular. Por ello tan pronto como se identifica como
positivo un pocillo se somete a un proceso de clonación para evitar el crecimiento de
células no productoras que al ser metabólicamente más eficientes acabarían por dominar el
cultivo.
Los anticuerpos monoclonales pueden producirse en cultivos celulares o en animales.
Cuando las células de un hibridoma se inyectan en cultivos de tejidos como el peritoneo
(cavidad peritoneal), produce tumores que sintetizan un fluido rico en anticuerpos, llamado
líquido ascítico.
Se conoce la tecnología necesaria para la producción de anticuerpos en ausencia de
inmunización del animal. Es la denominada tecnología de los anticuerpos recombinantes.
Los avances en la tecnología génica han facilitado en gran medida la manipulación
genética, producción, identificación y conjugación de fragmentos de anticuerpos
recombinantes, obteniéndose nuevos anticuerpos multivalentes y multiespecíficos.
Estas tecnologías han permitido desarrollar estrategias de screening de anticuerpos
monoclonales fuera del cuerpo humano. Para ello es necesario disponer, en primer lugar de
enormes librerías de genes de anticuerpos, habitualmente mediante amplificación PCR de
cADN de linfocitos, o, alternativamente, mediante síntesis in vitro de genes usando
cebadores aleatorizados (randomized wobble). El método de 'screening' de estas librerías
debe tener una eficiencia comparable a la del sistema inmune, lo que se puede conseguir
exponiendo en la superficie de microorganismos los anticuerpos producidos. Ejemplos de
los microorganismos empleados son los fagos filamentosos como M13 o bacterias. Esta
presentación en superficie permite establecer un enlace físico entre la función de unión al
antígeno y el gen del anticuerpo, de forma que la afinidad al antígeno permite aislar el
microorganismo portador del gen del anticuerpo de interés entre millones de otros. Una vez
aislado el clon específico se amplifica para la producción del anticuerpo de interés por
ejemplo en E. coli.
HISTORIA DE LOS ANTICUERPOS MONOCLONALES
Los investigadores Niels K. Jerne, Georges Köhler y Cesar Milstein, describieron la técnica
que permitía el cultivo de hibridomas o células híbridas de linfocitos B con células
plasmáticas tumorales de mieloma múltiple. Con esta fusión de dos células, una
programada para producir un anticuerpo específico pero que no se multiplica
indefinidamente (linfocito) y otra inmortal con gran capacidad de crecimiento pero que no
produce inmunoglobulina (célula de mieloma), se combina la información genética
necesaria para la síntesis del anticuerpo deseado y una capacidad de síntesis proteica,
permitiendo su multiplicación indefinida tanto in vitro como in vivo. Por esta aportación a
la ciencia Jerne, Kölher y Milstein recibieron el premio Nobel de Medicina en 1984.
En el año 2010, los anticuerpos monoclonales cumplieron 30 años desde su invención
dejando de ser una curiosidad biológica para ser una forma de tratamiento y diagnóstico
muy importante en diversas enfermedades. Existen más de 17 anticuerpos monoclonales
aprobados por la FDA, pero el número de anticuerpos monoclonales en fase de ensayo
clínico es elevado y representan un 30 por ciento de todos los compuestos en investigación
en el 2005. Muy importante para tratamientos de distintas enfermedades como artritis
reumatoide, distintos cánceres, enfermedad de Crohn, entre otras.
TIPOS DE ANTICUERPOS MONOCLONALES
Según su origen, podemos distinguir entre 4 tipos de Anticuerpos Monoclonales, los cuales
se diferenciar principalmente en su composición y diferente antigenicidad que presentan en
el organismo.

 Murinos:
 Anticuerpos procedentes del ratón.
 Eficacia terapéutica disminuida (sistema inmune los identifica como
extraños y reacciona para destruirlo.
 Pueden presentar posibles efectos secundarios como nefrotoxicidad y
reacciones alérgicas.
 Quiméricos:
 Obtenidos mediante la humanización de los AcMo obtenidos del ratón por
Ingeniería Genética (regiones variables proceden de ratón que reconocen el
antígeno específico y las regiones contantes de los anticuerpos son
humanas).
 Evitan el rechazo del Sistema Inmune al ser introducidos en el organismo.
 Producen anticuerpos anti-quiméricos.
 Humanizados:
 El 90% del anticuerpo es de origen humano, por lo que reduce aún más la
inmunogenicidad de los anticuerpos.
 El 10% restante corresponde a las regiones CDR o hipervariables que son las
únicas en este caso que proceden del ratón.
 Humanos:
 La totalidad del anticuerpo es de origen humano.
 El rechazo del Sistema Inmune es prácticamente inexistente.
MECANISMO DE ACCIÓN DE LOS ANTICUERPOS MONOCLONALES
Los anticuerpos monoclonales (AcMo) ejercen sus actividades de manera muy diversa
dependiendo de las dianas que se encuentren afectadas. En su acción también van a tener
vital importancia los diferentes tipos de anticuerpos existentes, anteriormente explicados.
En función de su actuación o mecanismo de acción estos pueden ser clasificados en tres
diferentes tipos:
 Inmunomoduladores: la célula diana está inhibida de forma natural.
 Inmunodepresores: como el Rituximab, que produce la eliminación de los linfocitos
B.
 Bloqueantes: actúan sobre linfocitos Treg.
Todos estos además pueden realizar numerosas acciones como son:

 Bloqueo de la interacción entre el receptor y el ligando.

 Activación del complemento por lisis celular.
 Lisis celular mediada por Anticuerpos.
 Activación de células T y de mecanismos efectores.
 Inducción de Apoptosis.
 Inhibición de traducción de señal o de la activación de los receptores.

GENERACIÓN DE ANTICUERPOS MONOCLONALES

La técnica utilizada para la generación de los Anticuerpos Monoclonales fue ideada por C.
Milstein y G. Kohler en 1975 y por la cual consiguieron el Premio Nobel de Medicina y
Fisiología.

 Tecnologías de producción
La producción de los anticuerpos monoclonales se centra en la síntesis de una línea
celular estable que secreta un determinado tipo de isotipo de inmunoglobulina que
actúa contra un antígeno específico.
 Síntesis del hibridoma
Para poder obtener anticuerpos monoclonales contra un antígeno se deben sintetizar
los hibridomas, una línea celular resultante de la fusión de células B productoras de
anticuerpos procedente de un animal, el cual ha sido inmunizado con el antígeno de
interés, y una célula tumoral mielomatosa no secretora de anticuerpos, que carece de
la enzima hipoxantina-guanina-fosforribosil transferasa lo que aumenta la
permeabilidad de la membrana y consecuentemente, reproducirse más rápido.
Las células B, en un cultivo in vitro, mueren a los pocos días. Por ello, se utilizan
las células mielomatosas, con el objetivo de inmortalizar a estas células.
 Propiedades del hibridoma
 Sobreviven de manera indefinida en medios de cultivo.
 Producen los anticuerpos monoclonales contra el antígeno concreto.
 Es específico para un solo antígeno.
 Puede utilizarse para identificar antígenos desconocidos en una muestra.
Los pasos del proceso de formación del hibridoma en animales murinos se explica
detalladamente en el siguiente esquema:
1. Inmunizar al ratón: inyectar, en el peritoneo del animal, el antígeno de interés del
animal, el antígeno de interés ante el cual deben actuar los anticuerpos
monoclonales.
2. Obtención de Células B inmunizadas del bazo: extraer del brazo las células B que
producen el determinado anticuerpo.
3. Empleo de Células de Mieloma, que dota de la capacidad de división ilimitada: con
déficit de la enzima HGPR, quedando inhibida la síntesis de nucleótidos.
4. Hibridación de las células B con el mieloma: fusión de las células B con el
mieloma en glicol polietileno.
5. Selección y maduración de hibridomas: solo las células que hibridan y producen
anticuerpos nos interesan. Para ello, distribuimos las células resultantes con
pocillos en medio HAT para desechar las que no hayan hibridado y seleccionar las
que sí.
6. Propagación Clonal: las células seleccionadas se aíslan en unos caldos de cultivo
(donde suponemos que haya una única célula) para que generen clones, que
generen anticuerpos específicos para el antígeno de interés, los cuales podrán
inyectarse en el propio ratón, produciendo gran cantidad de líquido ascítico con los
Ac deseados.
7. Obtención de Anticuerpos Monoclonales: para obtener los anticuerpos
monoclonales para el antígeno, poniéndolos en contacto y observando si existe
reacción positiva. Si existe, entonces hay AcMo.
 ANTICUERPOS MONOCONALES QUIMÉRICOS Y HUMANIZADOS
(PRODUCCIÓN)

Desde la introducción de los primeros anticuerpos monoclonales obtenidos por la técnica

del hibridoma, se observó que se producían fuertes respuestas de rechazo por ser de origen
animal (ratón), especialmente en terapias que requieran tratamientos prolongados, ya que el
sistema inmune los identifica como cuerpos extraños y reacciona para destruirlos, por lo
que su eficacia terapéutica se ve claramente disminuida. Para subsanar este problema, se
inició el uso de técnicas de recombinación de DNA y biología molecular.

Además, pueden presentar posibles efectos secundarios como nefrotoxicidad, reacciones

anafilácticas, etc. Por ello, el objetivo final es obtener unos anticuerpos que tengan la
máxima proporción de origen humano, reduciendo al mínimo cualquier tipo de reacción
que se pueda generar. En conclusión, obtener anticuerpos monoclonales humanos.

Se han desarrollado diferentes técnicas para ofrecer soluciones a la inicial imposibilidad de

obtener anticuerpos monoclonales enteramente humanos, entre las que destacan la
transformación de linfocitos B humanos en cultivo mediante el virus de Epstein-Barr, la
utilización de ratones con inmunodeficiencia severa combinada, el uso de ratones
transgénicos, o técnicas de ADN recombinante. Todas estas técnicas han presentado
distintos inconvenientes que han imposibilitado el desarrollo final de los anticuerpos
monoclonales humanos.

Por ello, en la generación de MoAbs para su uso clínico en humanos, un proceso

fundamental es el de humanizar los anticuerpos, que se centrará en mantener la
especificidad de unión de estos anticuerpos, pero reduciendo su antigenicidad. Este proceso
de humanización va a constar de dos fases: obtención de Anticuerpos Quiméricos y
Humanizados.

 Obtención de anticuerpos quiméricos: mediante tecnologías de DNA Recombinante,

que se centran en combinar genes que codifican para la región constante de Igs
humanos mediante vectores con genes que codifican para la región variable de los
ratones. Se logra conseguir anticuerpos con una porción humana que se corresponde
con la Porción Constante (Fc) y la porción variable es animal.
 Obtención de anticuerpos humanizados: mediante ingeniería de proteínas. La
técnica se basa en transferir las CDR (región determinante de la
complementariedad) de las Inmunoglobulinas del ratón a las regiones variables que
sean tanto de la cadena pesada, como de la cadena ligera de las Inmunoglobulinas
humanas. Finalmente se acaban obteniendo anticuerpos humanos que tienen
solamente las regiones hipervariables (CDR) procedentes del ratón.

TECNOLOGÍAS DE MEJORA DE LOS ANTICUERPOS MONOCLONALES

Los anticuerpos monoclonales, cuando son combinados con otras moléculas, aumentan
considerablemente su efectividad en su uso para terapia. Estas moléculas (péptidos y
proteínas terapéuticas) presentan problemas al ser introducidas en el organismo, debido a su
toxicidad y su degradación. Su unión a los Ac Monoclonales optimiza su efecto.

Esta mejora de los anticuerpos se produce principalmente a dos niveles:

 Mejora de las funciones efectoras: mediante inmunotoxinas, conjugado con

enzimas, anticuerpos biespecíficos e inmunocitoquinas principalmente.
 Mejora de la afinidad: utilizando la glicoingeniería y bibliotecas sintéticas.
 Mejora de la eficacia terapéutica

APLICACIONES DE LOS ANTICUERPOS MONOCLONALES

Una vez que se han producido anticuerpos monoclonales que se unen a determinadas
sustancias, estos pueden ser usados para detectar la presencia y cantidad de esta sustancia,
gracias a la prueba de Western blot, que detecta una sustancia en una solución o con una
prueba de inmunofluorescencia, que detecta una sustancia en una célula entera. Los
anticuerpos monoclonales también son usados para purificar una sustancia con técnicas
llamadas inmunoprecipitación y cromatografía.

Los anticuerpos monoclonales muestran una serie de ventajas sobre los anticuerpos
policlonales como:

 Mayor homogeneidad.
 Reproductibilidad de sus efectos, como consecuencia de su homogeneidad.
 Mayor capacidad potencial de seleccionar los mejores anticuerpos en afinidad, tipo
de reconocimiento.

Los anticuerpos monoclonales se utilizan en muchos campos como:

 La investigación biomédica, como la identificación y clonación de genes, la

identificación y aislamiento de proteínas, la activación de enzimas, conocimiento de
la estructura molecular y morfogénesis.
 Diagnóstico: En medicina, gracias a la gran especificidad y capacidad prácticamente
ilimitada de los anticuerpos monoclonales para reconocer cualquier estructura
química, permite la detección de hormonas, vitaminas, citocinas; la monitorización
de drogas, detección de enfermedades infecciosas en microbiología; la detección de
alérgenos en alergia, hematología, marcadores tumorales e infartos de miocardio,
aplicaciones forenses, inmunoescintografía. En las ténicas diagnósticas se emplean
diversas herramientas de biología molecular como ELISA, EIA, citometría,
inmunohistoquímica, inmunofluorescencia. Los anticuerpos monoclonales son unas
de las sustancias más utilizadas en los laboratorios de diagnóstico.
 Catálisis: Los anticuerpos monoclonales se han utilizado como catalizadores de
múltiples reacciones químicas.
 Biosensores: Los anticuerpos monoclonales acoplados a transductores electrónicos
pueden detectar tanto moléculas orgánicas como inorgánicas como la
contaminación de metales pesados en alimentos y agua, detección de gases tóxicos,
 etc. Un biosensor es un instrumento analítico formado por un material biológico
inmovilizado como una enzima, anticuerpo, célula entera, orgánulo o
combinaciones de los mismos, en íntimo contacto con un sistema transductor
adecuado que convierta la señal bioquímica en una señal eléctrica cuantificable.
 Tratamiento: Las aplicaciones terapéuticas constituyen el campo más importante de
los anticuerpos monoclonales, ya que son capaces de destruir células, incluidas las
tumorales, mediante distintos mecanismos. Se emplean en el tratamiento de diversas
enfermedades autoinmunes como la artritis reumatoide, el cáncer o para evitar el
rechazo tras un trasplante. Existen varios anticuerpos monoclonales aprobados para
su uso en determinadas enfermedades.3
 Terapia dirigida contra el cáncer: Las terapias dirigidas contra el cáncer son
fármacos u otras sustancias que bloquean el crecimiento y la diseminación del
cáncer al interferir en moléculas específicas ("blancos moleculares") que participan
en el crecimiento, el avance y la diseminación del cáncer. Las terapias dirigidas
contra el cáncer se llaman algunas veces "fármacos dirigidos molecularmente",
"terapias dirigidas molecularmente", "medicinas de precisión", o términos
semejantes.

Ejemplos:

 Rituximab (Rituxan)- ANTIGENO CD20: La proteína CD20 presente en los

linfocitos B tiene una gran importancia en el desarrollo de la enfermedad siendo un
marcador tumoral, en este caso es atacada por el anticuerpo disminuyendo
claramente su actividad.
 Alemtuzumab (Campath)- ANTIGENO CD52: La proteína CD52, conocida
también como “cluster of differentation”, se encuentra en linfocitos B y T,
monocitos y plaquetas, pero no en células hematopoyéticas de ahí su gran
importancia e interés.

ANTICUERPOS MONOCLONALES APROBADOS PARA USO

TERAPÉUTICO

Anticuerpo
Antígeno Mecanismo de acción Indicaciones
monoclonal
Antitrombótico en
Glicoproteína Inhibe la
Abciximab intervenciones coronarias y
Gpllb/llla agregación plaquetaria
angioplásticas
Enfermedad de
Inhibe el efecto
Crohn, Artritis
Adalimumab TNF-alfa proinflamatorio de TNF-
reumatoide, Espondilitis
alfa
anquilopoyética, Psoriasis
 ADCC (Antibody-
Alemtuzumab CD52 dependent cell-mediated Leucemia linfoide crónica B
cytotoxicity), CDC
Inhibe la activación de
Prevención del rechazo
Basiliximab CD25 linfocitos T mediada por
agudo en trasplante de riñón
CD25
Inhibe el efecto
Bevacizumab VEGF-A proangiogénico del Cáncer colorrectal
VEGF-A
Bloquea la unión
de EGF a su receptor en
Cetuximab EGFR las células tumorales y su Cáncer colorrectal
proliferación ADCC,
CDC
Inbibe la activación
Prevención del rechazo
Daclizumab CD25 de linfocitos T mediada
agudo en trasplante de riñón
por CD25
Osteoporosis en mujeres
Inhibición de
Denosumab RANKL posmenopausicas con alto
los osteoclastos
riesgo de fracturas
Hemoglobinuria paroxística
Bloquea el sistema del
nocturna, Síndrome
Eculizumab complemento, uniendose
hemolítico
a C5
urémico Miastenia gravis.
Inhibe receptores
EpCAM,
Edrecolomab de factores de Cáncer colorrectal
ADCC, CDC
crecimiento
Inhibe la adhesión de
Psoriasis, Retirado del
Efalizumab CD11a linfocitos T al endotelio y
mercado
su activación
Inhibe los niveles del
5
Pirferidone CTGB factor de crecimiento de Fibrosis pulmonar
tejido conectivo
Efecto citotóxico por
Gemtuzumab CD33 Leucemia mieloide aguda
daño al ADN y apoptosis
Radioterapia, ADCC,
Ibritumomab CD20 Linfoma no Hodgkin
CDC, apoptosis
Revierte en minutos la
Idarucizumab Dabigatrán anticoagulación Detiene hemorragías
producida por dabigatrán
 Enfermedad de
Inhibe el efecto
Crohn, Artritis
Infliximab TNF-alfa proinflamatorio de TNF-
reumatoide, Espondilitis
alfa
anquilopoyética, Psoriasis
Inhibe control de
Ipilimumab CTLA4 Melanoma metastásico
actividad de linfocito T
Inmunosupresor; anergia
Tratamiento del rechazo
Muromonab CD3 y apoptosis de linfocitos
agudo en trasplante
T tras su activación
Leucemia linfática
crónica, Linfoma no
Ofatumumab CD20 Produce apoptosis Hodgkin folicular, , artritis
reumatoide y esclerosis
múltiple
Disminuye los niveles de
IgE en circulación,
Omalizumab IgE Asma de origen alérgico
bloquea la unión a sus
receptores
Profilaxis enfermedad virus
VSR proteína
Palivizumab Inmunoterapia pasiva sincitial respiratorio en
F
niños
Inhibe el efecto Degeneración macular
Ranibizumab VEGF proangiogénico del asociada a la edad de tipo
VEGF exudativo
Linfoma no
CD20,
Rituximab Produce apoptosis Hodgkin, Leucemia linfática
ADCC, CDC
crónica
Radioterapia, ADCC,
CDC, muerte dependiente
Tositumomab CD20 de lisosomas y adhesión Linfoma no Hodgkin
homotípica, no apoptótica
ni autofágica
Inhibe la proliferación de
células tumorales Cáncer de
Trastuzumab ErbB2/neu
mediada por ErbB2 y mama metastásico
ADCC
Linfoma no
Ublituximab CD20 Produce apoptosis Hodgkin, Leucemia linfática
crónica
 BIBLIOGRAFIA

http://www.enciclopediasalud.com/definiciones/anticuerpo-monoclonal

https://www.sanitas.es/sanitas/seguros/es/particulares/biblioteca-de-
salud/cancer/anticuerpos-monoclonales.html

https://www.news-medical.net/life-sciences/Monoclonal-Antibodies-(Spanish).aspx
TRABAJO DE BIOLOGIA MOLECULAR

ANTICUERPOS MONOCLONALES

BIOLOGIA MOLECULAR

DOCENTE: LOURDES VARELA FRIETO

CODIGO: 45801

SEGUNDO SEMESTRE

2018-1

INTEGRANTES:

YEIMY SANTIAGO

SERGIO CASTELLAR

MARIA VILLAREAL

LINDA CABALLERO

FACULTAD: QUÍMICA Y FARMACIA

PROGRAMA: FARMACIA

BARRANQUILLA