Cours de Génétique II (S5)

Chapitre 1: Génétique des populations

Chapitre 2: Génétique Humaine

Chapitre 3: Recombinaison génétique

1
Chapitre 2: Génétique
Humaine

2
Génétique Humaine

Le génome est l’ensemble du matériel génétique d’un

organisme. Il consiste à l’ADN ou l’ARN de certains virus.
Le génome inclus à la fois les régions codantes ( gènes) et
l’ADN non codant.

Le génome humain est un ensemble complet de

séquences d'acide nucléique, codées en ADN (23 paires
de chromosomes) dans les noyaux cellulaires humaines et
de petite molécule d'ADN mitochondrial .

3
Génétique Humaine

Le génome humain comme les autres organismes, est le

support moléculaire de l’hérédité, dont la capacité de
duplication assure la transmission des caractères , d’une
génération à l’autre.

il est essentiel de comprendre que le génome humain

peut être envisagé de deux points de vue :

• individuel (le génome d’ individu-ci, résultant de celui de

chacun de ses deux parents biologiques)

• collectif (le génome de telle famille, de telle population,

voire de l’espèce entière).
4
Génétique Humaine

Étudier de la transmission chez l'espèce humaine

* des caractères héréditaires
* des maladies et des anomalies héréditaires

Est basée sur l'analyse

√ des caryotypes
√ des arbres généalogiques (pedigree)
√ des nouvelles techniques de biologie moléculaire: analyse
d'ADN, activité enzymatique, cartographie génétique, ......

5
Génétique Humaine
Chromosome et
caryotype
Structure du chromosome

▪ état décondensé pendant

l'interphase
Expression des gènes
▪ état condensé au moment de la
division, où chaque molécule d'ADN
est compactée sous la forme d'un
chromosome

Le chromosome au sens microscopique

n'est donc pas un élément stable de la
cellule mais une structure dynamique et
6
transitoire.
Génétique Humaine
Chromosome et
caryotype

Détail d’un
chromosome au stade
métaphase

7
Chromosome est composé de bras court P et de bras
long Q
Génétique Humaine
Chromosome et
caryotype
Classification des
chromosomes
1-Indice centromérique (IC):
Longueur bras court/longueur totale de
chromosome
*Métacentrique
*Sub-métacentrique
*Acrocentrique
*Sub-tellocentrique

2- Taille (du plus grand au plus petit)

3- coloration des bandes chromosomiques

*Bande "G" sombre, riche en AT
*Bande "R" claire, riche en CG (gènes)
Classification selon « ISCN » International System 8
for human cytogenetic nomenclature
les différentes formes des chromosomes

9
 coloration des bandes chromosomiques

Bande chromosomique est une région d’un chromosome

distinguée des autres par coloration spécifique.
Cette coloration permet de distinguer et identifier des
délétions, des duplications , des translocations et des
inversions chromosomiques.

Exemples de coloration:

*Le G-Banding (technique de marquage des bandes G) qui

utilise le Giemsa. Se fixe sur T Et A et montre les régions
riche en AT.
*Bandes C: oxyde de Baryum
*Bandes R: acridine orange
*Bandes A: chromomycine A3

Années 80 remplacement par FISH : région plus spécifiques

10
Génétique Humaine
Chromosome et
caryotype
le caryotype
*ensemble des chromosomes d'une cellule réunis par paires de
chromosomes identiques et classés selon certains critères
après une analyse cytogénétique.

*issu d'un caryogramme

*ensemble des caractéristiques cytologiques morphologiques,

reconnaissables d'un individu ou d'un groupe d'individus
génétiquement liés.

Les caryotypes humains normaux :

22 paires autosomiques de chromosomes + une paire de
chromosomes sexuels.
Les caryotypes normaux:
^femme: 2chromosomes X et sont notés 46,XX. 11
^homme: à la fois un X et un chromosome Y notée 46,XY.
Génétique Humaine
Chromosome et
caryotype
Exemple de caryotype
normal

12
Génétique Humaine
Anomalies
chromosomiques
Les variations du caryotype standard peuvent
conduire à des anomalies chromosomiques

Anomalies chromosomiques: de nombre, de

structure

Acquises : apparait au cours de la

vie. Certaines cellules ou tissu
Anomalies somatique
chromosomiques
Constitutionnelles : apparait
dans le zygote ou le gamète

13
Génétique Humaine
Anomalies
chromosomiques
Anomalies chromosomiques de
nombre :
nombre anormal de chromosomes
1-Polyploïdies:
Nombre anormal de lots haploïdes entiers (n=23).

Les anomalies les + fréquentes: TRIPLOÏDIES :3xn

(69,XXX ou 69,XXY)

*Mécanismes des polyploïdies

1- Anomalies de la fécondation
*fécondation d’un œuf par 2 spz (cas ovocyte immature)
*fusion d’un œuf + un globule polaire puis fécondation
par un spz
2- Anomalies de la méiose 14
Production d’un ovocyte ou d’un spz diploïde : zygote
triploïde
Génétique Humaine
Anomalies
chromosomiques
Anomalies chromosomiques de
nombre :
nombre anormal de chromosomes

2-Aneuploïdies:
variations en plus ou en moins d’un ou plusieurs
chromosomes
46 +/- x chromosomes (2n +/- x)
a - Les monosomies (2n-1): Affectent les
GONOSOMES
b -Trisomies (2n+1) : (AUTOSOMES , GONOSOMES)
c - Anomalies plus rares : Doubles trisomies

15
Génétique Humaine
Anomalies
chromosomiques
Anomalies chromosomiques de
nombre :
nombre anormal de chromosomes

16

Caryotype: trisomie 21 Syndrome de Klinefelter: 47,

Génétique Humaine
Anomalies
chromosomiques
Anomalies chromosomiques de structure
Structure anormale de chromosomes

Modification de la structure d’un chromosome

par :

*Translocation: (Réciproque, Simple, Robertsonienne)

*Insertion : intercalation d’un segment
chromosomique d’un chromosome dans un autre.
*Inversion: cassure d’un segment chromosomique
suivie d’une rotation de 180 et recollement.
*Chromosome en anneau
*Isochromosome : Formation d’un chromosome avec
deux bras identiques. (ségrégation anormale des
chromatides).
*Délétion : Perte d’un segment chromosomique 17
( terminale, interstitielle)
18
Génétique Humaine
Anomalies
chromosomiques
Anomalies chromosomiques de structure
Structure anormale de chromosomes

19
Translocation Translocation
réciproque Robertsonienne
Génétique Humaine
Anomalies
chromosomiques
Anomalies chromosomiques de structure
Structure anormale de chromosomes

20
Inversion Inversion Délétion
paracentriq Chromosome en interstitielle
anneau
Génétique Humaine
Maladies
Héréditaires

Une maladie génétique est causée par des anomalies

ou par certains défauts au niveau des chromosomes
ou tout simplement au niveau des gènes d’une
personne.
(défaut de mutation, facteurs environnementaux)
deux types de maladies génétiques :
*les maladies génétiques chromosomiques (Trisomie
21)
*les maladies génétiques héréditaires

Une maladie héréditaire est une maladie transmise

par les gènes des parents à leurs enfants. Une
anomalie au niveau des cellules ou au niveau de
l’ADN, qui se transmet lors de la formation de
21
l’enfant.
Génétique Humaine
Maladies
Héréditaires
Maladies Héréditaires
dominantes

Une maladie héréditaire dominante est causée par un gène

défectueux dominant. une seule copie du gène défectueux
est nécessaire pour que la personne soit atteinte et
développe les symptômes de la maladie. Lorsqu’un des deux
parents est atteint de la maladie, il a une probabilité de 50 %
de transmettre la maladie à ses enfants à chaque grossesse.
L’âge d’apparition des premiers symptômes ainsi que la
gravité de ceux-ci varient beaucoup d’une personne à
l’autre.
Ce type de maladies atteint autant les garçons que les filles.

22
Génétique Humaine
Maladies
Héréditaires
Maladies Héréditaires
dominantes

23
▪ 50 % de probabilité d’avoir un enfant atteint.
▪ 50 % de probabilité d’avoir un enfant qui n’est pas
atteint de la maladie.
Génétique Humaine
Maladies
Héréditaires
Maladies Héréditaires
dominantes

Exemple : Hypercholestérolémie familiale

Le cholestérol est transporté dans le sang au moyen de
différentes particules, dont le LDL ( Low density lipoprotein). Le
cholestérol dans les LDL (mauvais cholestérol) normalement
capté par les récepteurs des LDL situés à la surface des
cellules.

L’hypercholestérolémie familiale est un défaut héréditaire dans

le système de livraison du cholestérol contenu dans les LDL aux
cellules. Le gène du récepteur des LDL étant modifié, incapable
de capter correctement le cholestérol, ce qui entraîne son
accumulation dans le sang.

24
Génétique Humaine
Maladies
Héréditaires

*Le cholestérol susceptible de se déposer sur les parois des

artères, dont artères coronaires, (risque d’apparition 25 de
maladies cardiovasculaires et d’accidents vasculaires cérébraux
(AVC).
Génétique Humaine
Maladies
Héréditaires
Maladies Héréditaires
récessives
Une maladie héréditaire récessive est causée par un gène
défectueux récessif.
Deux copies du gène défectueux sont nécessaires pour
que la maladie se développe.
Un individu ayant une seule copie du gène défectueux
responsable d’une maladie héréditaire récessive est dit
porteur.
(pas atteint et ne développera jamais les symptômes).

Cependant, il peut transmettre ce gène défectueux à ses

enfants. Les maladies récessives sont présentes dès la
naissance.
Ce type de maladies atteint autant les garçons que les
filles.
26
Génétique Humaine
Maladies
Héréditaires
Maladies Héréditaires
récessives

▪ 25 % de probabilité d’avoir un enfant atteint

▪ 50 % de probabilité d’avoir un enfant qui est porteur, non
atteint 27
de la maladie
▪ 25 % de probabilité d’avoir un enfant qui n’est ni atteint,
Génétique Humaine
Maladies
Héréditaires
Maladies Héréditaires
récessives
Exemple : L’acidose lactique
Est causée par l’insuffisance d’une enzyme, la cytochrome
oxydase.
Enzyme est diminuée ou absente dans plusieurs organes
(reins, muscles, cerveau) surtout au foie où cette absence
d’enzyme est importante.
Cette enzyme a pour rôle de fournir l’énergie aux cellules
du corps humain, l’enfant atteint produit donc moins
d’énergie.
*gène LRPPRC responsable situé sur le chromosome 2

28
Génétique Humaine
Maladies
Héréditaires
Maladies Héréditaires
récessives

29
Génétique Humaine
Maladies
Héréditaires
Maladies Héréditaires
récessives

Diagnostic:
*Prise de sang pour dosage lactate;
*Biopsie du foie et de la peau pour dosage cytochrome 30
oxydase ;
*Prise de sang pour test génétique (recherche du gène
Génétique Humaine
Thérapie
Génique
Thérapie génique : les traitements du
futur ?
La thérapie génique part du gène.
Cette nouvelle voie thérapeutique consiste à corriger un gène
malade, le plus souvent en transférant à l'intérieur des
cellules un autre gène, normal, qui le remplacera. On peut
aussi renforcer un gène pour permettre à l'organisme de
fabriquer ses propres médicaments permettant de lutter
contre la maladie.
C’est un domaine en plein essor, qui enregistre de véritables
succès. Plusieurs médicaments de thérapie génique sont
aujourd’hui sur le marché.
* La thérapie génique apporte du matériel génétique aux
cellules permettant de produire une protéine bénéfique pour
l’organisme (protéine fonctionnelle dans le cas d’une maladie
génétique, protéine modifiée dans le cas de
l’immunothérapie, …………).
31
*Elle constitue l’une des voies privilégiées pour traiter les
maladies génétiques mais également certains cancers,
( aujourd’hui, majorité des essais cliniques).
CRISPR/Cas9 ?

32
Génétique Humaine
Thérapie
Génique

33

Schéma résumant l'une des méthodes de thérapie

génique
Génétique Humaine
Thérapie
Génique
Deux approches existent :
*injecter directement le matériel génétique fonctionnel,
(méthode in vivo)
*le multiplier d'abord en laboratoire dans des cellules mutées de
l'organisme, (méthode ex-vivo).

34
Génétique Humaine
Thérapie
Génique

en pratique, parmi les 400 études qui ont été aujourd'hui

menées dans le monde sur 4000 malades environ, le
traitement du cancer arrive largement en tête avec plus de
60 % des travaux de thérapie génique menés chez l'homme.
Viennent ensuite les maladies infectieuses, notamment le
Sida, et les affections génétiques, en particulier la
mucoviscidose, l'hémophilie, la maladie de Gaucher, les
affections mitochondriales, l'hypercholestérolémie familiale,
le déficit immunitaire en adénosine déaminase (ADA).

35
Génétique Humaine
Diagnostic moléculaires des maladies
humaines
Méthodes de diagnostic moléculaires ?

Techniques de biologie moléculaire utilisées dans le

diagnostic des maladies.

Inclus des techniques telles que l'hybridation in situ de

chromosomes pour les analyses cytogéniques, le
séquençage par oligonucléotides en batterie de modèles
d'expression géniques aux différentes étapes de la maladie,
l'identification d'organismes pathogène par l'analyse de
séquences spécifiques d'ADN, et la détection de mutations
avec PCR (polymerase chain reaction)

36
Génétique Humaine
Diagnostic moléculaires des maladies
humaines
TECHNIQUES D’ANALYSE DE L’ADN:

*PCR et RT-PCR(réverse transcription suivie de PCR)

*SSMP: séquençage massif parallèle, une méthode de

séquençage d’ADN à haut débit, aussi appelé séquençage
de nouvelle génération (SNG). implique la construction de
bibliothèques d’ADN par PCR in vitro. L’ADN est ensuite
séquencé par synthèse et ajout de nucléotides au brin
complémentaire

*HGCL: hybridation génomique comparative sur réseau

technique utilisant le principe que les brins d’ADN
complémentaires fusionnent ensemble. L’échantillon
expérimental, ou échantillon d’intérêt, est combiné avec un
échantillon de contrôle, HGC peut détecter les anomalies
chromosomiques déséquilibrées, souvent utilisée pour aider
à caractériser la constitution génétique de tumeurs. 37
Génétique Humaine
Empreinte
génétique
Qu'est-ce qu'une empreinte génétique ?

C’est une combinaison de séquences d'ADN qui permet

d'identifier une personne. Tous les êtres humains
possèdent plus de 99% d'ADN strictement identique. Ce
qui distingue deux individus est concentré sur le moins de
1% restant. un certain ensemble de séquences dans
leur ADN reste spécifique à chaque individu (en raison
du polymorphisme). Plus précisément, ces différences
sont localisées dans des régions particulières, qui varient
d'un sujet à l'autre, et que l'on appelle «marqueurs
génétiques».
Empreinte Génétique est donc des portions
non codantes spécifiques à chaque individu et
constituent une signature génétique
différente d’un individu à l’autre.

38
Génétique Humaine
Empreinte
génétique
METHODES D’ETUDE ET ANALYSES

Les séquences d’ADN qui ne codent pour aucune protéine

sont répétées, nous en distinguons 2 sortes :
*Séquences microsatellites ( STR : Short Tandem
Repeats) : pour la plupart séquences de 4 nucléotides
(entre 2 et 5 sinon) répétées plusieurs fois
*Séquences mini satellites ( VNTR : Variable Number
Tandem Repeats) : séquences répétées entre 10 et 100
nucléotides.

Manipulations :
Extraction de l’ADN de l’échantillon cellulaire
Détection des loci (séquences répétées)
Choix de 13 loci pour rendre le résultat fiable.
Il existe plusieurs techniques d’analyse de l’ADN, mais 3 39
sont les plus utilisées.
Génétique Humaine
Empreinte
génétique
METHODES D’ETUDE ET ANALYSES

Méthode 1- PCR (Polymerase Chain Reaction) :

Technique d’amplification génique in vitro, basée sur les
propriétés d’hybridation et de déshybridation des brins
complémentaires d’ADN en fonction de la température.

Différentes étapes de la PCR:

1*Phase de dénaturation
2*Phase d’hybridation, appariement des amorces
3*Phase d’élongation

Rapide, nécessite peu d’ADN

l’analyse du produit se fait grâce à une électrophorèse sur

gel d’agarose, afin de calculer la taille du fragment d’ADN
amplifié, un marqueur de taille migre en parallèle à 40
l’échantillon
Génétique Humaine
Empreinte
génétique

Différentes étapes de la réaction de polymérisation en 41

chaine
Génétique Humaine
Empreinte
génétique
METHODES D’ETUDE ET ANALYSES

Méthode 2- RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism)

Nécessite beaucoup d’ADN et de bonne qualité

Différentes étapes de la RFLP:

*Hydrolyse de l'ADN par une enzyme de restriction
* Séparation des fragments de restriction par électrophorèse sur
gel d’agarose
* Dénaturation de l'ADN par la soude pour obtenir de l'ADN
monocaténaire
*Transfert sur membrane nylon, renforcement de la fixation.
*Séparation en bandes par technique Southern Blot et révélation
avec une ou plusieurs sondes.

42
Génétique Humaine
Empreinte
génétique

43
Génétique Humaine
Empreinte
génétique
METHODES D’ETUDE ET ANALYSES

Méthode 3- AmpFLP (Amplified Fragment Length

Polymorphism) *Technique plus rapide que RFLP
*Utilise la PCR pour répliquer les échantillons d’ADN
*Méthode hautement sensible pour la détection de
polymorphismes dans l’ADN.
*Avantages : Coût modeste Facilité de mise en place et
d’exploitation

Méthode 4- RAPD (Ramdom Amplification of Polymorphic

DNA) ou Analyse par Amplification aléatoire d'ADN
polymorphe (PCR avec segments choisis au hasard)
Analyse de l’ADN mitochondrial (ADN mt) (peu fiable)

44
Génétique Humaine
Empreinte
génétique

Grâce à toutes ces méthodes d’analyse, telle que

la PCR, le scientifique a pu exploiter les
empreintes génétiques, faisant ainsi un bon en
avant, aidant, la Justice, la médecine, les enfants
recherchant leurs vrais parents, allant même
jusqu’à dresser un profil de santé de l’individu,
dans quelques années, il ne s’agira plus de
diagnostic médical mais de pronostic.

45
Génétique Humaine
Génétique du
Cancer
Les cancers humains, maladies génomiques de la
cellule, sont dus à des mutations génétiques, incluant
les anomalies chromosomiques, généralement
acquises, car observées uniquement dans les cellules
tumorales et non dans les tissus normaux.

Une cellule Clone tumoral

Caryotype tumoral
Le caryotype classique se fait sur des cellules en
division, ce qui oblige à obtenir des prélèvements
vivants et stériles, sans certitude de succès de la mise
en culture. Cette difficulté a réduit l’intérêt du
caryotype en clinique au profit d’autres techniques
non dépendantes de la survie des cellules. 46
Génétique Humaine
Génétique du
Cancer
La Fluorescence In Situ par Hybridation (FISH)
est utilisée en routine clinique avec des sondes
commerciales. Elle détecte seulement les remaniements
chromosomiques correspondant aux sondes utilisées.
fonctionne aussi bien sur des noyaux cellulaires (en
interphase). Les empreintes cellulaires comme l’analyse
des tissus fixés au formol et inclus en paraffine permettent
désormais l'analyse par FISH de matériel tumoral, comme,
par exemple, les détections d'amplification géniques.
Micromatrices d’ADN (array CGH)
L’array CGH (aCGH) et autres techniques similaires (SNP,
Single Nucleotid Polymorphism), regroupées sous le terme
d’Analyse Chromosomique sur Puces à ADN (ACPA),
quantifient l’ADN tumoral le long du génome humain de
référence, sous réserve que les cellules malignes soient
majoritaires
47
Génétique Humaine
Génétique du
Cancer
rôle des gènes suppresseurs de tumeurs

Les gènes suppresseurs de tumeurs sont des garde-fous qui

empêchent la dérive d'une cellule vers la malignité. C'est la
raison pour laquelle de nombreux gènes suppresseurs de
tumeurs sont inactivés dans les cancers.

Les gènes suppresseurs de tumeurs agissent soit en inhibant

des mécanismes qui favorisent l'oncogenèse, soit en activant
des mécanismes qui l’empêchent. Les gènes suppresseurs de
tumeurs sont inactivés au cours de l'oncogenèse.

48
L'espèce humaine possède 23 paires de chromosomes (tous les gènes sont donc présent à l'état de deux
copies par cellules à l'exception des cellules germinales et on fait abstraction des chromosomes sexuels X et
Y). L'altération d'une copie d'un proto-oncogène produit une protéine dont l'activité diffère fortement de
celle du produit normale (par exemple expression très augmentée ou encore présence du produit dans des
cellules inappropriés). Cette protéine mutée stimule de façon constante la division cellulaire qui ne sera plus
49
régulée normalement. Cette altération est dite dominante car la production de protéine altérée par une seule
des deux copies du proto-oncogène est nécessaire et suffisante pour altérer sa fonction.
Génétique Humaine
Génétique du
Cancer

Mode d’action schématique du gène suppresseur de tumeurs

PTEN. 50
En l’absence de contrôle par PTEN, Akt active intensément la
prolifération cellulaire lorsqu’elle est stimulée par l’EGF. Si PTEN
exerce son contrôle sur Akt, la prolifération cellulaire est
Génétique Humaine
Génétique du
Cancer

Signalisation et réparation des dommages de l’ADN. Lors de

dommages sur l’ADN, les détecteurs de dommages de l’ADN
activent les systèmes de réparation de l’ADN ainsi que p53 qui
arrête le cycle cellulaire. Après la réparation de l’ADN, la 51
signalisation des dommages de l’ADN n’est plus active et le
cycle cellulaire reprend
Génétique Humaine
Génétique du
Cancer

Dans les cancers, on relève un dysfonctionnement de la

signalisation des dommages à l'ADN puisque la conservation
de mutations de l'ADN favorise la progression de
l'oncogenèse.
D'autre part, ce dysfonctionnement diminue
la fréquence d'activation des points de contrôle du cycle
cellulaire. Le cycle cellulaire est donc moins stoppé ce qui
permet aux cellules cancéreuses de proliférer plus
rapidement.
Enfin, l'instabilité génétique est forte dans les cellules
cancéreuses ce qui se traduit par d'importants dommages sur
l'ADN. Normalement ces dommages provoqueraient la mort de
la cellule. C'est pourquoi un défaut de signalisation des
dommages de l'ADN permet aussi à la cellule cancéreuse de
survivre à des dommages plus importants.

52