Cytogénétique Humaine

Cytogénétique Humaine
• Développée Depuis la découverte du nombre
exact de chromosomes humains par Tjio et
Levan en 1956.
• Elle a pour objet l’étude cytologique des
chromosomes.
• Leur analyse est effectuée au cours d'un stade
du cycle cellulaire ou les chromosomes sont
bien individualisés et peuvent être observés
au microscope (métaphase mitotique).
 Objectifs Cytogénétique Humaine
1) étude des anomalies chromosomiques constitutionnelles
chez des enfants affectés de malformations et/ou de
dysmorphies.

2) dépistage anténatal d'aberrations chromosomiques .

3) analyse des anomalies chromosomiques acquises,

présentes dans les cancers et les leucémies, ou
consécutives à l'exposition aux radiations ionisantes, à des
substances toxiques ou à des agents mutagènes.

4) localisation de gènes ou de segments d’ADN sur les

chromosomes, dans 1'objectif d'établir une carte
cytologique du génome humain.
Mitose
 Chromosome
• Une structure subcellulaire
colorable, portant les gènes.
Un chromosome est
caractérisé par un
centromère, point d'attache
au fuseau mitotique, relié à
un bras court (p) et à un bras
long (q) qui comportent une
ou deux chromatides selon
le stade de la mitose, et
dont les extrémités
constituent les télomères.
Chromosome métaphasique
Types de chromosomes
 type de chromosomes
Chromosome métacentrique:
Les 2 bras p et q sont de même
longueur.
 Types de chromosomes
Chromosome submétacentrique
Le centromère est déplacé vers le
haut.
 Types de chromosomes
Chromosome acrocentrique
un bras p très court (séquence
satellite )
 Les chromosomes humains
• La cellule somatique humaine possède 46
chromosomes ou 23 paires de chromosomes
• Dans les 22 premières paires, les chromosomes
d’une paire sont dits homologues.
• Deux chromosomes homologues contiennent la
même information génétique.
• la formule chromosomique s’écrit :
 46, XX, pour une femme normale
 46, XY, pour un homme normal
 Classification des chromosomes
humains
Groupe des Numéros des Description des chromosomes
chromosomes chromosomes
A 1-3 Long, métacentrique

B 4-5 Long submétacentrique

C 6-12 + chr. X Longueur moyenne, submétacentrique

D 13-15 Longueur moyenne, acrocentrique.

E 16-18 Court, submétacentriques

F 19-20 Court, métacentrique

G 21-22 + chr. Y Très court, acrocentrique.

 Bandes chromosomiques
• Au début des années 1970 les techniques de
banding ou zébrage ont été mis au point.
• La bande chromosomique désigne la région
d'un chromosome que l'on distingue des
autres par des colorations spécifiques.
• Ils correspondent aux différents types de
chromatine. Dans une espèce donnée, ces
variants de chromatine ont une taille et une
disposition constantes.
 Bandes chromosomiques
• Les principaux types en sont :
Les bandes G
Les bandes R
Les bandes Q
Les bandes C
Les bandes T
 Bandes G
• Obtenus par dénaturation enzymatique.
• Coloration par Giemsa après traitement à la
trypsine.
• Les bandes G marquent des régions de l’ADN
riches en liaison A-T et correspondent aux
zones pauvres en gènes actifs (hétéro-
chromatine).
Bandes G
Bandes G
 bandes R (reverse band)
• Obtenues par traitement au Giemsa +
desoxyuridine + incubation à 87°C.
• Les bandes R sont riches en C-G, en gènes
actifs à la réplication (euchromatine).
• Les 2 marquages (G et R) sont
complémentaires
bandes R
Bandes G et R
 Bandes Q
• Coloration à la quinacrine + observation en
lumière UV.
• Apparition des bandes fluorescentes sur les
chromosomes: bandes Q.
• Les bandes Q et G marquent l’hétéro-
chromatine (régions pauvres en gènes actifs).
Bandes Q
 Marquage des centromères (bandes C)
• Marque les régions péricentromériques.
• Ces régions ont de l’ADN répétitif ou ADN
satellite.
• Traitement avec acide ou base + baryum +
Giemsa.
Marquage des centromères (bandes C)
Bandes G, R et C
 Marquage des télomères (bandes T)
• Modification de la technique des bandes R.
• Une dénaturation thermique poussée ne
laisse persister le marquage qu’au niveau des
télomères
Marquage des télomères (bandes T)
 Marquage des microsatellites
• Marquage du bras court de tous les
chromosomes acrocentriques par Nitrate
d’argent
Le caryotype humain
 Définition du caryotype humain
• Est une technique qui permet l’étude des chromosomes d’un
individu.
• Cette technique permet d’obtenir une image en microscopie
optique des chromosomes d’une cellule au cours de la
métaphase de la mitose.
• La résolution d’un caryotype est celle d’une bande
chromosomique, soit environ de 5 à 10 millions de bases
(méga bases)
• Il décrit la constitution chromosomique, le nombre total des
chromosomes et la constitution des chromosomes sexuels.
Exp: femme, 46, XX
homme, 46, XY
• Il décrit également le type d’anomalie des chromosomes et les
bandes atteintes.
Le caryotype humain
établissement du caryotype
 Etablissement du caryotype
1. Prélèvement du sang et culture cellulaire.
2. Séparation par centrifugation des globules
blancs.
3. Stimulation de croissance des lymphocytes
pendant 3 jours à 37°C dans un milieu nutritif en
présence de lectine (permet la stimulation de la
croissance des lymphocytes)
4. Blocage de la multiplication des cellules au stade
métaphase par l’ajout de la colchicine(empêche
la formation du fuseau mitotique).
 Etablissement du caryotype
5. Provoquer un choc hypotonique (par solution
hypotonique (H2O).
6. Faire tomber le contenu cellulaire sur une lame avec
une certaine force: il s’éclate, s’étale, et peut alors
être analysé au microscope.
7. Fixation (acide acétique+ méthanol).
8. Coloration.
9. Observation microscopique, prise photographique
et agrandissement
10.Classification des chromosomes.
nomenclature
 Anomalies chromosomiques
• Si l’effet de la mutation est suffisamment
important pour être visible au microscope
optique, cette mutation sera qualifiée
d’anomalie chromosomique ou d’abération
chromosomique.
 Anomalies chromosomiques
• Anomalies constitutionnelles :
résulte d’une transmission d’un gamète
(spermatozoïde ou ovule) anormal ou d’une
fécondation anormale
• Anomalies somatiques (acquises):
Pendant le développement embryonnaire
donnent des mosaïques génétiques.
Anomalies chromosomiques

Anomalies de nombre

Anomalies de structure
 Anomalies du nombre

polyploïdie aneuploïdie Mixoploïdie

 Polyploïdie
L’existance des copies
supplémentaires de tous les
chromosomes
 Triploïdie
Conséquente de la fécondation d’une ovule par 2
spermatozoïdes(dispermie) ou d’une fécondation impliquant une
gamète diploïde anormale
 Tétraploïdie
Résulte de l’absence de première division
zygotique complète
 Aneuploïdie
 L’existance des copies supplémentaires d’un
chromosome ou plus .
 Perte d’un chromosome ou plus.
 Causes d’aneuploïdie
Elle résulte de:
■ La non disjonction chromosomique : l’incapacité
des chromosomes appariés de se séparer lors de
la 1ere division méiotique ou l’incapacité des
chromatides sœurs de se disjoindre lors de la
seconde division méiotique ou lors de la mitose
■ un décalage de l’anaphase: l’echec de
l’incorporation d’un chromosome dans le noyau
de l’une des cellules filles , elle résulte du
déplacement retardé du chromosome au cours
de l’anaphase et de la perte chromosomique qui
l’en résulte.
 Aneuploïdie
• Trisomie 21
• 47, XYY
• Monosomie 14
Mixoploïdie(Mosaïsme)
 un mosaïque génétique: possède 2 ou
plusieurs lignés cellulaires génétiquement
différentes.
 Anomalies de structure
Une cassure Deux cassures d’un Cassures concernant
plus d’un
chromosomique même chromosome chromosome
 Une cassure
chromosomique
Anomalies structurales
une seule cassure
délétion terminale
Deux cassures d’un
même chromosome
 Anomalies structurales
deux cassures d’un même
chromosome
 Anomalies structurales
deux cassures d’un même
chromosome
Anomalies structurales
deux cassures
délétion interstitielle
 Anomalies structurales
deux cassures
chromosome en anneau
 Les cassures
concernant plus d’un
chromosome
 les cassures concernant plus d’un
chromosome
• Translocation réciproque
Fusion centrique (Robertsonienne)
Translocation insertionnelle
Translocation insertionnelle
 Anomalies chromosomiques

Anomalies Anomalies
équilibrés déséquilibrés