Microbiologia 4

Unidade 3 | Seção 4
Roteiro
Aula Prática
Microbiologia
ROTEIRO DE AULA PRÁTICA
NOME DA DISCIPLINA: Microbiologia
Unidade 3
Seção 3.4
OBJETIVOS
Definição dos objetivos da aula prática:
Criar condições didático-pedagógicas para que os alunos desenvolvam seus
conhecimentos com relação aos procedimentos envolvidos na realização de um
antibiograma pelo método de difusão em disco (Método de Kirby-Bauer) e a
importância da solicitação de um antibiograma na prática médica.
INFRAESTRUTURA
Instalações
O procedimento será realizado no Laboratório Multidisciplinar.
Materiais de consumo
Quant. de materiais
DESCRIÇÃO
por procedimento
Procedimento 1
Bico de Bunsen 1 para cada 5 alunos
Placa de Petri contendo meio Mueller-Hinton 1 para cada 2 alunos
Alça de níquel-cromo ou platina 1 para cada 5 alunos
Culturas de Staphylococcus aureus e Escherichia coli 1 para cada 5 alunos
Discos de antibióticos (Cefalotina, Bacitracina, Penicilina, 1 para cada 5 alunos
Norfloxacino, Sulfazotrim (Sulfametoxazol+Trimetropin)
Tubo de ensaio contendo Salina estéril (NaCl 0,85 %) 1 para cada 2 alunos
Swab estéril 1 para cada 2 alunos
Pinça 1 para cada 2 alunos
Escala 0,5 Mac Farland 1 para cada 5 alunos
2
Álcool 70% 2 por laboratório
Estufa 37ºC 1 por laboratório
Autoclave 1 por laboratório
Estante para tubo de ensaio 1 para cada 2 alunos
Procedimento 2
Discos de papel filtro estéril 4 para cada 2 alunos
Soluções desinfetantes: hipoclorito de sódio a 0,5%; 1 para cada 5 alunos
clorexidina alcoolica 2%; detergente, álcool 70%)
Placa de Petri contendo meio Mueller-Hinton 1 para cada 2 alunos
Alça de níquel-cromo ou platina 1 para cada 5 alunos
Culturas de Staphylococcus aureus e Escherichia coli 1 para cada 5 alunos
Tubos de ensaio contendo Salina estéril (NaCl 0,85 %) 1 para cada 2 alunos
Bico de Bunsen 1 para cada 5 alunos
Swab estéril 1 para cada 2 alunos
Pinça 1 para cada 2 alunos
Escala 0,5 Mac Farland 1 para cada 5 alunos
Álcool 70% 2 por laboratório
Estufa 37ºC 1 por laboratório
Estante para tubo de ensaio 1 para cada 2 alunos
Autoclave 1 por laboratório
Software:
Sim ( ) Não ( X )
Em caso afirmativo, qual?
Pago ( ) Não Pago (X )
Tipo de Licença: NSA.
Equipamento de Proteção Individual (EPI)

Para a utilização do laboratório multidisciplinar, os alunos devem obrigatoriamente
utilizar jaleco de mangas longas, óculos de proteção, calças compridas, calçado fechado
onde nenhuma parte do pé fique exposta e cabelo preso.
3
PROCEDIMENTOS PRÁTICOS
Neste momento, é fundamental o resgate de conceitos importantes relacionados aos

antibióticos e a relevância de uma escolha terapêutica efetiva no tratamento adequado
de infecções. Sugiro que inicie a aula através de um questionamento sobre a
importância da realização do teste de sensibilidade de antimicrobianos, seguindo
recomendações e orientações adequadas para direcionar a escolha médica da terapia
antimicrobiana mais adequada, além de monitorar e controlar a evolução da resistência
bacteriana.
Pontue também sobre a importância da assepsia durante a realização das técnicas
antes e após a utilização dos materiais.
É necessário especial atenção e orientação para o risco de queimaduras e acidentes
com o uso do bico de Bunsen. Também cabe destacar a importância da manutenção de
um ambiente asséptico no laboratório, especialmente em Microbiologia, para que não
haja contaminação de amostras. Nesse sentido, é interessante retomar a relevância das
normas de biossegurança e do uso de EPI.
PROCEDIMENTO 1
Atividade proposta
Realizar o antibiograma utilizando método de Kirby-Bauer (Disco Difusão).
Procedimentos para a realização da atividade

Nesta aula será aplicada a técnica de disco difusão em ágar utilizando o método de
Kirby-Bauer.
É importante salientar que o ideal é a realização dessas técnicas em capela de fluxo
laminar, para diminuir os riscos de contaminação. Entretanto em virtude das
proporções da aula deverão utilizar o raio da chama do bico de Bunsen como ambiente
estéril, tomando todos os cuidados de esterilização dos materiais.
É necessário que antes de iniciar os procedimentos e após a realização destes seja
realizada a higienização e antissepsia das mãos.
ANTIBIOGRAMA
4
 Fazer uma suspensão utilizando a cepa de Staphylococcus aureus ou Escherichia
coli isolada com a salina estéril (NaCl 0,85%) pela escala 0,5 de Mac Farland.
 Semear a suspensão microbiana na superfície da placa de Petri contendo o meio
Mueller-Hinton utilizando o “swab” estéril em movimentos de zig-zag
promovendo assim um crescimento confluente.
 Com a pinça previamente esterilizada, depositar os discos de antibióticos de
forma equidistante pressionando-os levemente para maior aderência ao meio.
 As placas devem ser incubadas na estufa a 37o C, por 18 a 24 horas.
 Após este período, verificar a presença de halos de inibição ao redor dos discos,
medir e anotar o diâmetro de cada disco e comparar estes dados com a tabela
padrão, classificando-os em sensíveis, intermediários ou resistentes.
Antimicrobiano Sigla Diâmetro do Halo de Inibição (mm)
Resistentes Intermediário Sensível
Cefalotina Cfl <14 15-17 >18
Bacitracina Bac <8 09-12 >13
Norfloxacino Nor <12 13-16 >17
Penicilina Pen <28 - >29
Sulfazotrim Sut <10 11-15 >16
PROCEDIMENTO 2
Atividade proposta
Conhecer a ação dos desinfetantes.
Procedimentos para a realização da atividade

Neste procedimento serão utilizados discos de papel filtro branco que serão
impregnados previamente através da imersão em soluções de desinfetantes diferentes
conforme está descrito na tabela de materiais de consumo.
TESTANDO PRODUTOS DESINFETANTES
5
 Fazer uma suspensão utilizando a cepa de S. aureus ou E. coli isolada com a
salina estéril (NaCl 0,85%) pela escala 0,5 de Mc Farland.
 Semear a suspensão microbiana na superfície da placa de Petri contendo o meio
Mueller-Hinton utilizando o “swab” estéril em movimentos de zig-zag
promovendo assim um crescimento confluente.
 Com a pinça previamente esterilizada, mergulhe o papel filtro nos produtos
(hipoclorito de sódio a 0,5%; clorexidina alcoólica 2%; detergente e álcool 70%).
 Coloque cada círculo de papel equidistante na placa previamente semeada com
a cepa bacteriana de sua preferência pressionando-os levemente para maior
aderência ao meio.
 As placas devem então ser incubadas na estufa a 37o C, por 18 a 24 horas.
 Após este período, verificar a presença de halos de inibição ao redor dos discos,
medir e anotar o diâmetro de cada disco.
CHECKLIST
Semeadura prévia de placas de Petri contendo Ágar Mueller-Hinton com cepas
de S. aureus e E. coli;
Placas de Petri com meio Mueller-Hinton esterilizadas;
Salina (Nacl 0,85%) estéril;
Discos de papel filtro cortados em círculos esterilizados;
Frascos contendo as soluções desinfetantes;
Suspensão bacteriana utilizando como padrão a escala 0,5 de Mac Farland;
Realização da semeadura;
Incubação das placas em estufa à 37ºC;
Certificar se todos os alunos conseguiram realizar os procedimentos;
Possibilitar visita posterior ao laboratório para verificar se as placas se
desenvolveram e quais foram as colônias que cresceram;
Esclarecer possíveis dúvidas quanto aos procedimentos realizados e as
características observadas.
RESULTADOS
Como resultados dessa prática, espera-se a compreensão da técnica de disco difusão e
a importância sobre as práticas de laboratório no reconhecimento da sensibilidade de
um antimicrobiano que possa ser uma estratégia terapêutica efetiva no tratamento de
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infecções. Além disso, debata a dificuldade destes exames laboratoriais serem
adequados à identificação de novos mecanismos de resistência bacteriana, um
fenômeno biológico cada vez mais frequente.

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Equipamento de Proteção Individual (EPI)

Neste momento, é fundamental o resgate de conceitos importantes relacionados aos

Procedimentos para a realização da atividade

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TESTANDO PRODUTOS DESINFETANTES

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