Dissertação - Aleane Francisca COrdeiro Barbosa - 2015

UNIVERSIDADE FEDERAL DE GOIÁS
ESCOLA DE VETERINÁRIA E ZOOTECNIA

PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM ZOOTECNIA
ÓLEO-RESINA DE COPAÍBA E EXTRATO DE BARBATIMÃO NA

DIETA DE POEDEIRAS COMERCIAIS INFECTADAS POR Escherichia
coli
Aleane Francisca Cordeiro Barbosa

Orientadora: Profª. Drª. Nadja Susana Mogyca Leandro
GOIÂNIA
2015
ii
ALEANE FRANCISCA CORDEIRO BARBOSA
ÓLEO-RESINA DE COPAÍBA E EXTRATO DE BARBATIMÃO NA

DIETA DE POEDEIRAS COMERCIAIS INFECTADAS POR Escherichia
coli
Dissertação apresentada para

obtenção do título de Mestre em
Zootecnia junto à Escola de
Veterinária e Zootecnia da
Universidade Federal de Goiás
Área de Concentração:
Produção Animal
Orientadora:
Profª. Drª. Nadja Susana Mogyca Leandro – EVZ/UFG
Comitê de Orientação:
Prof. Dr. Marcos Barcellos Café – EVZ/UFG
Profª. Drª. Maria Auxiliadora Andrade – EVZ/UFG
GOIÂNIA
2015
iii
iv
A minha família, em especial a minha mãe Enide

Cordeiro, por sempre me apoiar e acreditar nos meus
sonhos.
iv
AGRADECIMENTOS
Agradeço primeiramente a Deus, por ter me dado as forças que precisava para dar
continuidade a essa jornada.
A minha família, meus irmãos Alexandro e Arthur, em especial ao meu tio
Raimundo Cordeiro e minha tia Socorro, obrigada pelo apoio, incentivo e carinho. Jamais
esquecerei o que vocês fizeram por mim.
Aos meus queridos amigos Mariana Parente e Iberê Parente, sem vocês com
certeza eu não estaria aqui. Obrigada meus amores, por sempre acreditarem em mim.
Ao meu namorado Jorge pela compreensão e paciência.
A minha orientadora Profª. Drª. Nadja Susana Mogyca Leandro, pela
disponibilidade, lições profissionais e pessoais, paciência, incentivo e por se fazer presente em
todos os momentos da realização deste trabalho. Muito obrigada por me tornar uma
profissional melhor.
Aos meus co-orientadores Profª. Drª. Maria Auxiliadora Andrade e Prof. Dr.
Marcos Barcellos Café pela disponibilidade, apoio, dedicação e paciência.
Ao Prof. Dr. José Henrique Stringhini pelo incentivo, ensinamentos, carinho,
disponibilidade e por contribuído na minha formação profissional.
Aos amigos da Pós-Graduação, Januária, Maria Juliana, Bruno Moreira, Janaina,
Eduardo, Robson, Marta, Fabíola, Rayanne, Ana Flávia, Mariana, Leonardo, Maryelle, Bruno
Borges pela ajuda no experimento e pelos momentos bons e ruins que vivemos juntos, mas
que nos serviram de aprendizado. Em especial, a Raiana Noleto e Cristielle Nunes pelo apoio,
dedicação e amizade.
A equipe do Laboratório de bacteriologia da Escola de Veterinária e Zootecnia,
Samantha, Ana Maria, Dunya, Gisele, Edileuza pela ajuda, momentos de descontração e
amizade.
Aos Alunos da Graduação Mayra, Leandro, Thaiane e Nicaele pela ajuda com os
experimentos e pelas boas gargalhadas que demos juntos.
Aos funcionários da UFG que sempre se dispuseram a me ajudar, em especial ao
Sr. Expedito, Reginaldo, Helio, Gerson, Sr. Germano, Felipe, Rose e Cícera.
Ao prof°. Dr. Edemilson Cardoso da Conceição e a Mythai Lima do Laboratório
de Pesquisa em Produtos Naturais da Faculdade de Farmácia da Universidade Federal de
Goiás pela ajuda na obtenção dos produtos utilizados neste estudo.
A CAPES pelo apoio financeiro para realização da pesquisa e pela bolsa.
v
“Eu sou o que posso, na medida que me permitem.

Quando posso, ultrapasso as fronteiras. Quando não
posso, do meu limite, faço arte.
Sou semelhante ao rio. Se me barram, eu aprofundo.”
Padre Fábio de Melo

vi
SUMÁRIO
CAPÍTULO 1. CONSIDERAÇÕES INICIAIS ....................................................................... 12

1.1 Uso de aditivos fitogênicos na avicultura ........................................................................... 13
1.2 Copaíba ............................................................................................................................... 16
1.3 Barbatimão ......................................................................................................................... 19
1.4 Escherichia coli................................................................................................................... 21
REFERÊNCIAS 23
CAPITULO 2. DESEMPENHO E QUALIDADE DE OVOS DE POEDEIRAS
ALIMENTADAS COM RAÇÕES CONTENDO EXTRATO DE BARBATIMÃO OU ÓLEO
DE COPAÍBA E DESAFIADAS COM Escherichia coli ........................................................ 31
RESUMO..................................................................................................................................31
ABSTRACT.............................................................................................. ............................... 32
2.1 Introdução ........................................................................................................................... 33
2.2 Material e métodos ............................................................................................................. 34
2.2.1 Local de realização do experimento ................................................................................ 34
2.2.2 Alojamento das aves ........................................................................................................ 35
2.2.3 Delineamento experimental ............................................................................................. 35
2.2.4 Manejo experimental ....................................................................................................... 36
2.2.5 Preparação do inóculo de Escherichia coli e infecção experimental .............................. 37
2.2.6 Variáveis estudadas ......................................................................................................... 37
2.2.7 Análise estatística ............................................................................................................ 38
2.3. Resultados e discussão....................................................................................................... 39

2.3.1. Desempenho ................................................................................................................... 39
2.3.2. Qualidade dos ovos......................................................................................................... 43
2.4 Conclusões .......................................................................................................................... 48

REFERÊNCIAS................ ....................................................................................................... 49
CAPITULO 3. OCORRÊNCIA DE Escherchia coli EM OVOS, FOLÍCULOS OVARIANOS
E OVIDUTO DE POEDEIRAS VERMELHAS DESAFIADAS COM Escherichia coli E
ALIMENTADAS COM RAÇÕES CONTENDO EXTRATO DE BARBATIMÃO E ÓLEO
DE COPAÍBA.................. ........................................................................................................ 52
vii
RESUMO............................... .................................................................................................. 52
ABSTRACT.................... ......................................................................................................... 53
3.1 Introdução ........................................................................................................................... 54
3.2 Material e métodos ............................................................................................................. 55
3.2.1 Local de realização do experimento ................................................................................ 55
3.2.2 Alojamento das aves ........................................................................................................ 55
3.2.3 Delineamento experimental ............................................................................................. 55
3.2.4 Preparação do inóculo de Escherichia coli e infecção experimental .............................. 56
3.2.5 Variáveis estudadas ......................................................................................................... 57
3.2.6 Análise estatística ............................................................................................................ 59
3.3. Resultados e discussão....................................................................................................... 59

3.3.1. Pesquisa de Escherichia coli .......................................................................................... 59
3.4 Conclusões .......................................................................................................................... 65

REFERÊNCIAS.............. ......................................................................................................... 66
CAPÍTULO 4. CONSIDERAÇÕES FINAIS .......................................................................... 68
viii
LISTA DE TABELAS
CAPITULO 2
TABELA 1. Composição centesimal e valor nutricional calculado da ração

basal..................................................................................................... 36
TABELA 2. Desempenho de poedeiras comerciais alimentadas com ração
contendo extrato de barbatimão ou óleo de copaíba, no período de 64 a
68 semanas de idade.............................................................................. 39
72 semanas......................................................................................... 40
76 semanas......................................................................................... 41
TABELA 5 Desempenho de poedeiras comerciais alimentadas com ração
contendo extrato de barbatimão ou óleo de copaíba no período total
(64 a 76 semanas de idade).................................................................. 42
TABELA 6. Qualidade de ovos de poedeiras comerciais alimentadas com ração
contendo extrato de barbatimão ou óleo de copaíba, no período de 64
a 68 semanas........................................................................................ 43
contendo extrato de barbatimão ou óleo de copaíba, no período de
68 a 72 semanas................................................................................. 44
contendo extrato de barbatimão ou óleo de copaíba, no período de
72 a 76 semanas................................................................................... 45
contendo extrato de barbatimão ou copaíba no período total (de 64 a
76 semanas)......................................................................................... 46
xi
CAPITULO 3
TABELA 1. Composição centesimal e valor nutricional calculado da ração

basal......................................................................................... 57
TABELA 2. Frequência de isolamento de Escherichia coli em suabes
intravaginal de poedeiras comerciais alimentadas com dietas
contendo óleo de copaíba ou extrato de barbatimão antes e após o
período experimental........................................................................... 60
TABELA 3. Frequência de isolamento de Escherichia coli em folículos
ovarianos e oviduto de poedeiras comerciais alimentadas com dietas
contendo óleo de copaíba ou extrato de barbatimão, no final do
período experimental.......................................................................... 61
TABELA 4. Frequência de isolamento de Escherichia coli em ovos de poedeiras
comerciais alimentadas com dietas contendo óleo de copaíba ou
extrato de barbatimão no período de 64 a 76 semanas........................ 62
x
RESUMO
Óleo-resina de copaíba e extrato de barbatimão na dieta de poedeiras

comerciais infectadas por Escherichia coli
A realização do presente estudo teve como objetivo avaliar o efeito da suplementação de óleo-
resina de copaíba ou extrato de Barbatimão na ração de poedeiras comerciais desafiadas com
Escherichia coli. Foram utilizadas 200 poedeiras comerciais da linhagem Isa Brow (64 a 76
semanas de idade) sendo todas as aves inoculadas via intravaginal (0,5 mL de solução salina
esterilizada a 0,85% contendo 8,8 x 109UFC/mL de Escherichia coli), alojadas em gaiolas e
distribuídas em delineamento em blocos ao acaso (sendo o peso das aves blocado), com
quatro tratamentos e cinco repetições de 10 aves. Os tratamentos foram: aves desafiadas
recebendo: A – ração basal sem aditivos; B – ração basal + 30 mg/kg de antibiótico
(halquinol); C – ração basal + 30 mg/kg de óleo-resina de copaíba; D – ração basal + 40
mg/kg de barbatimão. O experimento teve duração de três períodos de 28 dias. Ao final de
cada período foi avaliado desempenho, qualidade externa e interna de ovos e pesquisa de
Escherichia coli em ovos, e ao final do último período foi realizado pesquisa de Escherichia
coli em folículos ovarianos e oviduto, e biometria de ovário e oviduto. Os dados de
desempenho, qualidade externa e interna de ovos e biometria, foram submetidos a análise de
variância e as médias, quando necessário, comparadas pelo teste de Tukey (5%). Para a
pesquisa de Escherichia coli em ovos, folículos e oviduto foi aplicada análise descritiva
(frequência absoluta e relativa). A inclusão de 40 mg/kg de ração, do extrato de barbatimão
proporcionou pior conversão alimentar em relação ao tratamento controle e prejudicou a
produção de ovos em relação ao tratamento com antibiótico. A adição de 30 mg/kg de ração,
do óleo-resina de copaíba não influenciou no desempenho produtivo. A utilização do extrato
de barbatimão proporcionou ovos mais pesados e pior espessura de casca e qualidade interna
(UH) em relação ao tratamento com antibiótico. O peso do ovo, a porcentagem de albúmen e
o índice de gema do tratamento com óleo-resina de copaíba se apresentaram melhores que o
tratamento com antibiótico. No entanto a inclusão do óleo-resina de copaíba resultou em
porcentagem de gema inferior em relação ao tratamento com antibiótico. Houve menor
frequência de isolamento de Escherichia coli em amostras de suabes intravaginal do
tratamento com copaíba. A inclusão do barbatimão ou da copaíba proporcionou menor
frequência de isolamento de E. coli nos folículos ovarianos em relação ao tratamento com
antibiótico. Houve menor frequência de isolamento de E. coli no oviduto com a adição do
extrato de barbatimão em relação ao tratamento com antibiótico. Já o tratamento com óleo-
resina de copaíba apresentou maior frequência de isolamento de E. coli no oviduto que os
demais tratamentos. A utilização do óleo-resina de copaíba ou extrato de barbatimão resultou
em menor frequência de isolamento de Escherichia coli nas amostras de casca, albúmen e
gema que o tratamento com antibiótico. Rações contendo óleo-resina de copaíba ou
barbatimão promoveram peso de ovário semelhante ao tratamento com antibiótico. O peso do
oviduto do tratamento com copaíba foi superior ao tratamento com antibiótico. A inclusão de
óleo-resina de copaíba ou extrato de -barbatimão pode ser alternativa ao uso de antibióticos
melhoradores de desempenho em dietas de poedeiras comercias.
Palavras-chave: Aditivos, Copaífera, fitogênicos, galinhas, Stryphnodendron adstringens.

11
xi
ABSTRACT
Oil resin of copaíba and extract barbatimão in the diet of laying hens infected with
Escherichia coli
The present study was performed to evaluate the supplementation of copaiba oleo resin or
barbatimão extract in the diet of laying hens challenged with Escherichia coli. A total of 200
Isa Brown laying hens (64-76 weeks old) were used, and all the birds were intravaginally
inoculated with 0.5 mL of 0.85% sterile saline solution containing 8.8 x 109 CFU / mL of
Escherichia coli. It was adopted the randomized complete block design (birds weight used as
block criteria), with four treatments and five replicates of 10 birds. The treatments consisted
of: basal diet without additives (control); basal diet + 30 mg / kg of antibiotic (halquinol);
basal diet + 30 mg / kg of copaiba oleo resin and basal diet + 40 mg / kg barbatimão extract.
The experiment lasted three periods of 28 days. At the end of each period, the performance
and the external and internal egg quality were evaluated as the search for the presence of
Escherichia coli in eggs; and at the end of the total period, the search for Escherichia coli in
ovarian follicles and oviduct. Data were subjected to analysis of variance and means, when
necessary, were compared by Tukey test (5%). For the Escherichia coli searching in eggs,
follicles and oviduct, it was applied descriptive analysis (absolute and relative frequency).
The inclusion of 40 mg / kg diet of barbatimão extract lead to worse feed conversion than the
control treatment and decreased egg production compared to antibiotic treatment. The
addition of 30 mg / kg diet of copaiba oleo resin did not influence the hens performance. The
use of barbatimão extract lead to production of heavier eggs, and worse shell thickness and
internal quality (UH) when compared to antibiotic treatment. Egg weight, the albumen
percentage and the yolk index in the treatment with copaiba oleo resin were better than those
of antibiotic treatment. However, the inclusion of copaiba oleo resin resulted in a lower yolk
percentage when compared to antibiotic treatment. There was a lower frequency of isolation
of Escherichia coli in intra-vaginal swabs samples from treatment with copaiba. The inclusion
of barbatimão or copaiba provided lower frequency of isolation of E. coli in ovarian follicles
in relation to antibiotic treatment. There was a lower frequency of isolation of E. coli in the
oviduct with the addition of barbatimão extract when compared to antibiotic treatment. The
treatment with copaiba oleo resin showed higher frequency of isolation of E. coli in the
oviduct than the other treatments. The use of copaiba oleo resin or barbatimão extract resulted
in lower frequency of isolation of Escherichia coli in the shell, albumen and yolk samples, in
relation to antibiotic treatment. The inclusion of copaiba oleo resin may be an alternative to
antibiotics in laying hens commercial diets.
Keywords: Additives, Copaífera, phytogenics, hens, Stryphnodendron adstringens.

12
CAPÍTULO 1. CONSIDERAÇÕES INICIAIS
Os aditivos melhoradores de desempenho são utilizados na produção animal desde

a década de 50. Na avicultura, são adicionados à ração, com o intuito de alcançar melhores
índices zootécnicos, como menor conversão alimentar, e evitar a ocorrência de doenças1,
reduzindo agentes patogênicos nos processos digestivo das aves, principalmente em
ambientes com maior desafio microbiano. Os melhoradores de desempenho mais difundidos
na produção animal são os antibióticos e os quimioterápicos.
Apesar de todos os benefícios conferidos com o uso dos antibióticos, melhoria do
desempenho zootécnico, alguns mercados consumidores, como é o caso da União Européia,
baniram sua utilização na alimentação animal, sendo admitido apenas com finalidade
curativa2. As autoridades de saúde pública européia acreditam que o emprego contínuo de
antibióticos na ração dos animais contribui para agravar a epidemia da resistência de cepas
bacterianas3, 4, e ainda, que a utilização dos antibióticos possa deixar resíduos nos produtos de
origem animal destinados ao consumo humano.
Assim, seguindo uma tendência mundial, os órgãos ligados a saúde pública no
Brasil estão atentos ao uso de aditivos melhoradores de desempenho na alimentação animal,
sendo observada uma crescente preocupação com o uso dos antibióticos5. No Brasil, a
proibição do uso aos antibióticos conta com duas Instruções Normativas do Ministério da
Agricultura e da Pecuária (MAPA), a IN 65 e IN 04.
Diante de tais pressões, existe a necessidade de que possam substituir os
antibióticos utilizados como melhoradores de desempenho na avicultura industrial. Segundo
Huyghebaert et al.6, os produtos alternativos devem proporcionar o mesmo efeito benéfico
verificados nos AMDs (Antimicrobianos Melhoradores do Desempenho).
Em geral, os substitutos aos antibióticos adotados atualmente são os ácidos
orgânicos, próbióticos, prebióticos, simbióticos, entre outros. Produtos extraídos de plantas
como os extratos e óleos essenciais, vêm sendo bastante pesquisados e tem demonstrado ser
um promissor substituto aos antimicrobianos sintéticos7, 8.
Os extratos vegetais possuem certa vantagem em relação aos antimicrobianos
tradicionais, pois estes possuem apenas um princípio ativo, enquanto os extratos vegetais
possuem uma série de princípios ativos que podem apresentar efeitos sinérgicos benéficos na
melhoria do desempenho animal.
A grande diversidade do Bioma Cerrado apresenta grande quantidade de plantas
que merecem destaque, por possuírem elementos químicos que agem como antimicrobianos;
13
outras espécies possuem elementos químicos como taninos, glucanos e outros compostos cuja
utilidade em saúde publica é bastante apreciada quando em sistemas de produção orgânica e
sustentável, e, como tal, deve ser sempre incentivada9-13. Carneiro14 faz referência a plantas
encontradas na região dos Cerrados e que apresentam efeito terapêutico comprovado, como o
Barbatimão (Stryphnodendron adstringens), a Pacari (Lafoensia pacari), o Alecrim
(Rosmarinus officinalis), a Alfavacão (Ocimum gratissimum), a Sucupira Branca
(Pterodonemarginatus), e a Copaíba (Copaifera spp.). Dentre esses, podemos destacar o
Barbatimão e a Copaíba.
O Barbatimão, popularmente chamado de casca da virgindade, é uma árvore típica
do Cerrado. O uso da casca tem efeito considerado antimicrobiano15, anti-inflamatório, anti-
hemorrágico, ajuda no combate a diarréias, cicatrizante, antisséptico, e pode ser utilizado
ainda no tratamento de problemas circulatórios, dor de garganta e gastrointestinais.
A copaíba também apresenta propriedade anti-inflamatória16,17 comprovada, além
de possuir atividade antimicrobiana18, 19, e ser um excelente cicatrizante20.
Na produção de ovos, assim como na produção de frangos de corte, os
antimicrobianos sintéticos são utilizados com finalidade terapêutica e também como aditivo
zootécnico. Porém, o uso indiscriminado desses antibióticos, tem contribuído para o
aparecimento de linhagens resistentes de bactérias, ocasionando sérios problemas para a
avicultura industrial e para a saúde pública21.
Diante do exposto, e a partir das pesquisas in vitro22,18, as quais comprovam a
atividade antimicrobiana de produtos extraídos de plantas, como a copaíba e o barbatimão,
com esta pesquisa, objetivou-se estudar o potencial desses bioprodutos como substitutos aos
antibióticos.
1.1 Uso de aditivos fitogênicos na avicultura

Desde a antiguidade as plantas são conhecidas por suas propriedades medicinais.
Ao longo dos anos, modernas tecnologias foram criadas, proporcionando novos
conhecimentos, como por exemplo, o isolamento sistemático e caracterização dos princípios
ativos das plantas medicinais23.
As funções farmacológicas e terapêuticas das plantas estão associadas aos seus
princípios ativos, que são substâncias produzidas e armazenadas durante o crescimento da
planta e estão presentes em toda a planta ou em partes específicas24. Em geral, os princípios
ativos são produzidos como mecanismo de defesa da planta a agressões externas, como
variações climáticas, falta de água, falta de nutrientes, predadores e patógenos25.
14
As plantas desenvolvem uma série de metabólitos com funções complementares

na defesa contra pragas e doenças, o que lhes atribuem a presença de vários princípios ativos.
Os metabólitos primários são responsáveis pelas funções orgânicas, enquanto os secundários
atuam na proteção da planta contra herbívoros, micro-organismos e efeitos externos
ambientais.
A classificação dos princípios ativos é feita de acordo com suas propriedades
químicas, físicas e biológicas. Os grupos mais conhecidos são os alcalóides (álcoois, aldeídos,
cetonas, éteres e ésteres), glucosídeos, compostos fenólicos, saponinas, mucilagens,
flavonóides, terpenóides (monoterpenos , sesquiterpenos, di e triterpenos), taninos e óleos
essenciais17, 8. Diversos fatores afetam a composição dos princípios ativos nas plantas, como:
estação do ano, tipo de solo e ciclo vegetativo26.
Os princípios ativos são os responsáveis pelo efeito principal exercido pelos
extratos vegetais nos organismos, existe o efeito sinérgico entre metabólitos secundários e
primários das plantas, sendo os metabólitos secundários potencializadores dos compostos
primários7. Apesar das plantas possuírem vários metabólitos secundários, apenas os presentes
em maior concentração são isolados e posteriormente estudados.
Algumas plantas produzem substâncias com propriedades antimicrobianas. No
entanto, os produtos derivados de plantas precisam ter seus efeitos avaliados e confirmados,
assim como deve ser garantida que sua administração a organismos vivos ocorra sem riscos
para sua saúde27.
Extratos e óleos vegetais adicionadas na alimentação animal com o intuito de
melhorar o desempenho zootécnico, são denominados fitogênicos, e ainda possuem
conhecimento limitado em relação a seus mecanismos de ação e sua aplicação28.
O efeito benéfico de extratos vegetais tem sido comprovado na alimentação de
animais monogástricos. O mecanismo mais importante pelo qual os extratos vegetais
beneficiam o desempenho animal esta associado às modificações na microbiota intestinal por
meio do controle de agentes patogênicos, sendo a capacidade digestiva melhorada no intestino
delgado, relacionada ao efeito colateral indireto dos fitogênicos que causam a estabilização da
população microbiana no trato gastrointestinal29. Para Brugalli30, os principais efeitos de
extratos vegetais são a atividade antioxidante; o aumento da palatabilidade da ração; o
estímulo da secreção de enzimas endógenas; a melhoria na digestibilidade e absorção de
nutrientes; a modificação da microbiota intestinal; a modificação morfo-histológica do trato
gastrintestinal e melhora na resposta imune; e a ajuda na redução de infecções subclínicas.
15
Para Toledo et al.31, além da função antibacteriana conferida aos extratos vegetais,
a melhoria no desempenho animal ocorre devido ao aumento da palatabilidade da ração,
estímulo das secreções digestivas, estímulo da produção de enzimas digestivas e pancreáticas,
aumentando a digestibilidade e a absorção de nutrientes, além de ajudar na redução de
infecções subclínicas.
Estudando os efeitos dos extratos vegetais em dieta de poedeiras, Bonato et al.32,
incluíram diferentes níveis de acidificante e extrato vegetal (mistura inespecífica de óleos
essenciais e extratos de plantas contendo saponina) na ração de poedeiras, isolados ou em
combinação, e observaram que a associação de 400 g/ton da mistura de ácidos orgânicos e
150 g/ton de extrato vegetal melhorou o desempenho das aves. Resultados insatisfatórios
sobre o desempenho e na qualidade de ovos foi observado por Pinheiro et al.33, que avaliando
a inclusão de , 0, 5, 10, 15 e 20% de torta de nabo forrageiro (Raphanus sativus) em rações de
poedeiras comerciais, verificaram a influência negativa de todos os níveis de inclusão sobre o
desempenho produtivo e as qualidades sensoriais dos ovos.
Em estudo com frango de corte, Toledo et al.31 incluiram na ração antibiótico e/ou
fitoterápico à base de orégano (carvacrol), canela (cinamaldeído), eucalipto (cineol), artemísia
(artemisinina) e trevo (trifolina) na ração e, não observaram nenhum efeito da inclusão de
antibiótico ou de fitoterápico sobre o desempenho.
Com relação à qualidade de carne, estudo comprova que a adição de aditivos
fitogênicos em dietas de frangos de corte contribui na estabilidade oxidativa da carne,
observando-se que os fitogênicos inibem a oxidação lipídica de ácidos graxos insaturados.
Avaliando a inclusão de alecrim e sálvia em 500 ppm em dietas de frangos de corte, Lopez-
bote et al.34 observaram que os extratos melhoraram a estabilidade oxidativa da carne de peito
e de coxa.
Em estudos com a utilização de extratos vegetais na digestibilidade dos nutrientes
em frangos de corte, verificou-se melhora da metabolizabilidade dos nutrientes, e que pode
ser influenciada pelos princípios ativos dos extratos vegetais, podendo ocorrer por meio de
dois mecanismos: estimulando o fígado a aumentar a secreção da bílis; estimulação para
maior produção e atividade das enzimas pancreáticas e do intestino delgado35. Com isso o
processo digestivo é acelerado e pode diminui no tempo de trânsito intestinal.
Hernández et al.36 avaliaram a metabolizabilidade de nutrientes da dieta de
frangos de corte alimentados com rações contendo mistura de óleos essenciais (capsaicina,
cinamaldeído e carvacrol) ou de extratos vegetais (sálvia, tomilho e alecrim) e observaram
melhora na metabolizabilidade aparente da matéria seca (MS) e do extrato etéreo (EE) e na
16
metabolizabilidade ileal de MS e de amido na fase inicial, e da proteína bruta (PB) na fase

final.
Ao incluir aditivos fitogênicos e ácidos orgânicos, isolados ou em combinação, na
alimentação de frangos de corte, Fascina8 verificou que os aditivos fitogênicos e ácidos
orgânicos melhoraram a metabolizabilidade dos nutrientes nas fases inicial e de crescimento,
e que o uso de ácidos orgânicos, isoladamente ou associados aos aditivos fitogênicos,
melhoraram o desempenho das aves aos 42 dias de idade.
Em relação à presença de microorganismos patogênicos, avaliando a atividade
antimicrobiana de vários extratos vegetais frente a bactérias resistentes a antimicrobianos,
Nascimento et al.37 observaram que dentre os extratos testados, o cravo apresentou alto
potencial antimicrobiano. Verificaram ainda que a associação dos extratos com antibióticos
sobre bactérias que já apresentavam resistência ao antimicrobiano utilizado melhorou na
inibição desses patógenos. Bona et al.38 observaram que óleo essencial de orégano, alecrim,
canela e extrato de pimenta vermelha na dose de 100 ppm teve potencial inibidor de
crescimento sobre o gênero Clostridium perfringens, no conteúdo do ceco de aves.
Avaliando a atividade antimicrobiana dos óleos essenciais de orégano, tomilho e
canela frente a amostras de Salmonella entérica, Santurio et al.39 verificaram que o óleo
essencial de orégano apresentou forte atividade antibacteriana, seguido do tomilho com
atividade moderada, sendo verificado menor atividade antibacteriana no óleo essencial de
canela.
Apesar de todos os efeitos benéficos de extratos vegetais em dietas de
monogástricos, o seu uso requer cautela e a realização de mais testes, visto que assim como os
antibióticos, o uso contínuo de extratos vegetais de forma incorreta poderá acarretar em
resistência por parte de determinadas bactérias patogênicas25. Além disso, mais estudos
devem ser realizados a fim de comprovar o modo de ação, a toxidade e eficácia zootécnica de
extratos vegetais, levando sempre em consideração estudos realizados anteriormente,
principalmente quanto às dosagens utilizadas. É importante também que haja a padronização
química dos extratos vegetais, garantindo a eficácia do produto40.
1.2 Copaíba
Popularmente conhecida como copaibeiras, pertencem a família das Leguminosae
e ao gênero Copaífera. São amplamente encontradas nas regiões amazônica e Centro-Oeste
do Brasil41. As Copaífera sp. em geral são árvores de grande porte, chegando a medir até 36
17
metros de altura, são conhecidas mais de 25 espécies sendo a maioria encontrada na América
do Sul42.
A copaíba é adaptada a uma grande variedade de ambientes. Ocorre em florestas
de terras firmes, terras alagadas, margens de lagos e igarapés da Bacia Amazônia e nas matas
do Cerrado do Brasil Central43.
Os índios chamavam as Copaífera sp. de copaíba do tupi “cupa-yba”: a árvore de
depósito, ou que tem jazida, em alusão clara ao óleo que guarda em seu interior41,44. Quando
os portugueses chegaram ao Brasil, os índios usavam bastante o óleo da copaíba para a
cicatrização e no umbigo de recém-nascidos para evitar o “mal-dos-sete-dias”. Há indícios de
que a utilização do óleo de copaíba começou após a observação do comportamento de
animais, que quando apresentavam alguma ferida, esfregavam-se nos troncos das árvores de
copaíba42, 45.
Para Veiga Junior & Pinto47, o termo adequado a ser designado ao óleo de copaíba
é óleo-resina, visto que ele é composto por uma fração de ácidos resinosos e de compostos
voláteis. O óleo-resina de copaíba é extraído do caule das copaibeiras adultas41, 46 tem aspecto
transparente de viscosidade variável, cheiro forte e coloração variando do amarelo ao
marrom41. Existem vários métodos de extração, no entanto o método mais utilizado é o uso do
trado como ferramenta de perfuração do tronco.
No Brasil o óleo-resina de copaíba é muito utilizado na medicina popular,
administrado oralmente, no uso tópico do óleo in natura, ou como pomadas47. O óleo-resina
de copaíba possui propriedades farmacológicas com atividades confirmadas, dentre elas
podemos citar, ação anti-inflamatória, cicatrizante e antibacteriana48-50, cicatrizante46, 51
,
analgésico50, etc. Sendo as propriedades anti-inflamatória conhecidas desde a colonização do
Brasil.
A constituição do óleo-resina de copaíba é majoritariamente de hidrocarbonetos
sesquiterpênicos47,52, sendo observado também a presença de diterpenos, em menor
proporção. Os sesquiterpenos representam mais de 90% da composição do óleo de copaíba e,
sendo atribuído a este composto as propriedades terapêuticas do óleo, ou seja, os
sesquiterpenos são os princípios ativos do óleo.
Os sesquiterpenos frequentemente encontrados no óleo-resina de copaíba são, β –
cariofileno, óxido de cariofileno, α – humuleno, δ – cadineno, α - cadinol, α - cubebene,α e β -
selineno, β - elemeno, α - copaeno,trans - α - bergamoteno e β –bisaboleno52, já os diterpenos
são, os caurano, labdano e cleorodano53.
18
Apesar de o óleo-resina ser o mais estudado, existe estudos também com o óleo
essencial, muito utilizado na indústria de perfumes como excelente fixador de odores46. O
óleo-resina é a parte bruta do óleo, aquela coletada diretamente do tronco das copaibeiras, e o
óleo essencial é a parte pura, obtida por meio de processos físicos (destilação a vapor d’água,
extração por solventes, CO2 supercrítico, prensagem, turbodestilação e hidrodestilação)31.
O efeito antimicrobiano é uma das características mais explorada dos óleos de
copaíba, apresentando bom potencial inibitório52. Mendonça e Onofre (2009) avaliaram o
efeito antimicrobiano in vitro do óleo-resina de copaíba (Copaifera multijuga) sobre bactérias
como Escherichia coli, Staphylococcus aureus e Pseudomonas aeruginosa. Os autores
observaram que o óleo-resina de copaíba aprecentou capacidade inibitória sobre o
crescimento dos três tipos de microorganismos estudados.
Pieri et al.54 avaliando a capacidade inibitória do óleo de copaíba (Copaifera
officinalis) no crescimento dos microorganismos Streptococcus mutans in vitro ,observaram
que a atividade antimicrobiana do óleo interferiu no crescimento dos microorganismos em
todas as concentrações testadas até 0,78 mL / mL de solução a 10% de óleo de copaíba.
Investigando in vitro o potencial antimicrobiano do óleo-resina da Copaifera
reticulata sobre isolados de Staphylococcus coagulase positiva, oriundos de casos de otite
externa em cães, Ziech et al.18 observaram que óleo-resina teve efeito bacteriostático e
bactericida até mesmo em cepas resistentes de Staphylococus. A atividade antimicrobiana e
inibitória do óleo de copaíba também foi observada por Pieri et al.55, em estudo in vitro, no
qual o óleo de copaíba foi capaz de inibir a aderência de bactérias (Streptococcus mutans)
formadoras de placa dental em cães.
Avaliando a inclusão do óleo-resina de copaíba na alimentação de poedeiras sobre
a qualidade física, composição e colesterol total de ovos frescos oriundos de poedeiras
alimentadas com rações contendo 0,03 e 0,06% de óleo-resina de copaíba, Ribeiro56 não
observou efeito dos níveis estudados sobre as variáveis estudadas.
Ao incluir 0,2, 0,4 e 0,6% de óleo-resina de copaíba, em dietas de frangos de corte
desafiados ou não por Escherichia coli, Guidotti57 verificou que os diferentes níveis não
apresentaram efeito sobre o desempenho das aves até os 28 dias de idade, no entanto o nível
de 0,2% apresentou efeito aditivo sobre a resposta imune humoral das aves. Alguns estudos
relataram os efeitos do óleo essencial de copaíba sobre o desempenho de frangos de corte.
Souza58, estudando a inclusão de 0,15; 0,30; 0,45 e 0.60% de óleo essencial de copaíba na
dieta de frangos de corte, verificou que a inclusão de 0,15% do óleo resultou em aves com
desempenho semelhante às aves submetidas ao tratamento contendo antibiótico, aos 21 dias
19
de idade. Aguilar et al.59, ao incluírem 0,15, 0,30, 0,45 e 0,60 mL/kg de óleo essencial de
copaíba em dietas de frangos de corte, observaram que quando incluído em baixas
concentrações (0,15mL/kg), o óleo essencial de copaíba demonstrou ser um promissor
melhorador de desempenho.
1.3 Barbatimão
O Barbatimão (Stryphnodendron adstringens) é uma árvore típica do Cerrado, que
tem ampla distribuição geográfica, podendo ocorrer em vários Estados, desde o Pará,
atravessando o Planalto Central, até o Norte do Paraná60. É bastante utilizado na medicina
popular. O uso da casca tem efeito considerado anti-inflamatório, anti-hemorrágico, ajuda no
combate a diarréias, cicatrizante, antisséptico61, antimicrobiano62 e ainda no tratamento de
problemas circulatórios, dor de garganta e gastrointestinais.
As cascas da Stryphnodendron adstringens são espessas, e apresentam
propriedades adstrigentes20 (taninos) permitindo que proteínas se precipitem, formando um
revestimento protetor contra a multiplicação bacteriana, promovendo uma ação anti-séptica61.
O barbatimão possui como metabólitos secundários alcalóides, flavonóides,
terpenos, estilbenos, esteróides, inibidores de proteases e taninos63-64, sendo os taninos os
componentes majoritários.
Estudos relataram a grande variação nos teores de taninos presentes na casca,
Texeira et al.64 encontrou de 10-37%; Lima et al.65 encontraram teores até 50% de taninos. De
acordo com Texeira et al.64, a variação dos teores depende diretamente do local de coleta do
material, bem como a parte da planta estudada. Santos et al.66, avaliando três espécies de
barbatimão (Stryphnodendron adstringens, Stryphnodendron polyphyllum e Dimorphandra
mollis), observaram diferença significativa na composição química entre os gêneros
Stryphnodendron e Dimorphandra.
Os taninos vegetais são distribuídos em dois grupos: hidrolisáveis e
condensados67, 68. Os taninos hidrolisáveis estão presentes em menor quantidade e dividem-se
em galotaninos e elagitaninos, que produzem respectivamente ácido gálico e ácido elágico
após hidrólise, com ação anti-inflamatória e antioxidante69.
Os taninos condensados ou proantocianidinas compõe a classe mais importante de
70
taninos , são estruturalmente complexos e resistentes à hidrólise, porém, dependendo da
estrutura do tanino, pode ser possível sua solubilidade em solventes orgânicos aquosos69. As
propriedades farmacológicas do barbatimão estão relacionadas com os teores de taninos
condensados presente na planta56, 71.
20
Existem três propriedades inerentes dos taninos que são responsáveis pela maior
parte das suas atividades farmacológica: complexação com íons metálicos (ferro, alumínio,
cálcio, cobre, etc), necessários ao metabolismo microbiano72, 73
; atividade antioxidante e
seqüestradora de radicais livres e habilidade de formar complexo com outras moléculas, como
por exemplo, proteínas e polissacarídeos73.
Soares et al.74, em estudos com camundongos, verificaram a ação do extrato
etanólico de Stryphnodendron adstringens e Caryocar brasiliensis (pequi) sobre a parasitemia
do Trypanosoma cruzi, e observou uma redução no número de parasitos no sangue. Em
estudo da atividade antimicrobiana do extrato de barbatimão in vitro, Pinho et al.75
observaram que as folhas de barbatimão tiveram efeitos inibitórios sobre o crescimento de
Staphylococcus aureus.
Em pesquisa com o objetivo de verificar o efeito do extrato de barbatimão como
substituto aos antibióticos, Santana76 testou a inclusão de 200, 400 e 600mg/kg de extrato de
barbatimão na ração de frangos, e observou que a inclusão da dose de 600 mg/kg resultou em
um peso médio das aves semelhante ao das alimentadas com rações contendo antibiótico, até
os 21 dias de idade. A conversão alimentar das aves suplementadas com 400 mg/kg foi
melhor que os demais tratamentos testados (controle, MOS, Avilamicina, 200 e 600 mg/kg de
barbatimão), até os 21 dias de idades.
Nogueira77 utilizou 1,5 e 3,0 ppm de extrato de barbatimão em dietas de frangos
de corte infectados por Eimeria maxima, e não observou efeitos significativos no desempenho
das aves. No entanto, a inclusão do extrato demonstrou ser efetivo no controle da coccidiose
aviária, pois a suplementação de 1,5 ppm promoveu a redução de eliminação de oocistos nas
fezes, e a inclusão de 3,0 ppm promoveu a redução de escore de lesão.
O extrato de barbatimão, também foi estudado em dietas de poedeiras por
56
Ribeiro , que avaliou a inclusão de 0,01 e 0,03% de extrato barbatimão em dietas de
poedeiras comerciais, na qualidade física e química de ovos frescos, e observou que a
inclusão do extrato não influenciou as características físicas do ovo. No entanto, as
características químicas foram influenciadas, sendo que o teor de colesterol total das aves
alimentadas com dietas contendo extrato de barbatimão foram superiores aos das aves dos
demais tratamentos (controle e pacari).
21
1.4 Escherichia coli

A Escherichia coli é uma enterobactéria Gram-negativa, anaeróbica facultativa,
não produz esporos e está presente na microflora intestinal da maioria dos animais e dos seres
humanos. Crescem em temperaturas de 18 a 44°C sendo 37°C é a temperatura ideal78.
Durante muitos anos a Escherichia coli foi considerada uma bactéria não
patogênica, isso por agir na microbiota intestinal prevenindo a ação de outros
microorganismos patogênicos. No entanto, clones de Escherichia coli têm adquirido fatores
de virulência, permitindo ocasionar várias infecções em seres humanos e animais79, 80
. As
linhagens de Escherichia coli patogênicas para as aves são denominadas Avian Pathogenic
Escherichia coli (APEC)79. APEC é vista como uma das principais causadoras de morbidade e
mortalidade de aves, contribuindo com perdas econômicas na indústria avícola81. A
Escherichia coli está inserida no grupo de coliformes fecais, assim pode ocorrer contaminação
fecal nos ovos comerciais, o que pode prejujicar a qualidade dos ovos e ocasionar prejuízos na
indústria avícola82.
Em aves a Escherichia coli pode ocasionar sérias complicações extra-intestinais
que se manifestam na forma de infecções sistêmicas (colibacilose)83. As infecções
ocasionadas pela presença da Escherichia coli têm resultado em grandes perdas econômicas
na avicultura industrial. A frequência de colibacilose, bem como os prejuízos ocasionados
pela sua presença na avicultura, tem incentivado estudos no intuito de investigar como a
infecção se dá e seu agente etiológico83.
A colibacilose afeta aves jovens (4-9 semanas) e adultas, no entanto as primeiras
são mais sensíveis a problemas respiratórios, e já nas segundas estão relacionadas a quadros
de salpingites (infecção do oviduto) e infecções sitêmicas79. A contaminação por Escherichia
coli em ovos não resulta em nenhuma característica visível, mas a bactéria se multiplica
rapidamente por razão da alta concentração de nutrientes no ovo e das temperaturas
ambientais favoráveis84. No entanto, a Escherichia coli é uma enterobactéria e possui
atividade proteolítica capaz de destruir algumas estruturas da casca do ovo, o que acarretaria
em maior risco de contaminação por outras bactérias, que poderia provocar a deterioração do
ovo.
Além disso, os alimentos devem ser livres de patógenos e suas toxinas, tendo em
vista que sua presença pode acarretar problemas à saúde humana. A ausência de patógenos
nos alimentos é considerada uma exigência primária, garantindo que os alimentos não sejam
vias de transmissão de enfermidades aos consumidores.
22
Outro fator importante ligado a resistência aos antimicrobianos, é a pouca

disponibilidade de antimicrobianos para o tratamento de infecções ocasionadas por
Escherichia coli disponíveis no mercado, o que contribui de maneira significativa para altos
níveis de resistência85.
Assim, considerando as propriedades antimicrobiana do extrato de barbatimão e
do óleo-resina de copaíba, realizou-se este estudo, para avaliar os efeitos da inclusão de óleo-
resina de copaíba ou extrato de barbatimão em rações para poedeiras comerciais desafiadas
com Escherichia coli, sobre o desempenho zootécnico, qualidade externa e interna de ovos e
ocorrência de Escherichia coli em ovos, folículos ovarianos e oviduto.
23
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31
CAPITULO 2. DESEMPENHO E QUALIDADE DE OVOS DE POEDEIRAS

ALIMENTADAS COM RAÇÕES CONTENDO EXTRATO DE BARBATIMÃO OU
ÓLEO DE COPAÍBA E DESAFIADAS COM Escherichia coli
RESUMO: Objetivou-se com este estudo avaliar a adição do óleo-resina de copaíba ou

extrato de Barbatimão como antimicrobiano na ração de poedeiras comerciais contaminadas
com Escherichia coli. Foram utilizadas 200 poedeiras comerciais da linhagem Isa Brow (64 a
76 semanas de idade) sendo todas as aves inoculadas via intravaginal com 0,5 mL de solução
salina esterilizada a 0,85% contendo 8,8 x 109 UFC/mL de Escherichia coli. O delineamento
foi em blocos ao acaso (sendo o peso das aves blocado), com quatro tratamentos e cinco
repetições de 10 aves. Os tratamentos foram: ração basal sem aditivos (controle); ração basal
+ 30 mg/kg de antibiótico (halquinol); ração basal + 30 mg/kg de óleo-resina de copaíba e
ração basal + 40 mg/kg de barbatimão. O experimento teve duração de três períodos de 28
dias, sendo avaliado desempenho e qualidade externa e interna de ovos. Os dados foram
submetidos a análise de variância e as médias, quando necessário, comparadas pelo teste de
Tukey (5%). A conversão alimentar piorou com a inclusão de 40mg/kg do extrato de
barbatimão em relação ao tratamento controle, embora tenha sido semelhante ao tratamento
com antibiótico. A adição do extrato de barbatimão na ração prejudicou a produção de ovos
em relação ao tratamento com antibiótico. A adição de 30 mg/kg de ração, do óleo-resina de
copaíba não influenciou no desempenho produtivo. A utilização do extrato de barbatimão
proporcionou ovos mais pesados em relação ao tratamento com antibiótico, no entanto,
apresentou pior espessura de casca e qualidade interna (UH) que o tratamento controle. A
adição do óleo-resina de copaíba resultou em melhor peso de ovo, porcentagem de albúmen e
índice de gema em relação ao tratamento com antibiótico. No entanto, a inclusão do óleo-
resina de copaíba resultou em porcentagem de gema inferior em relação ao tratamento com
antibiótico. É recomendada a inclusão do óleo-resina de copaíba em rações de poedeiras
comerciais, em substituição aos aditivos melhoradores de desempenho.
Palavras-chave: Aditivos, Copaífera, desempenho, poedeiras comerciais, qualidade de ovos,

Stryphnodendron adstringens
32
CHAPTER 2. PERFORMANCE AND EGG QUALITY OF LAYING HENS FED

DIETS CONTAINING BARBATIMÃO EXTRACT AND COPAIBA OIL AND
CHALLENGED WITH Escherichia coli
ABSTRACT: It was aimed to evaluate the addition of copaiba oleo resin or barbatimão
extract as antimicrobial in the diet of laying hens infected with Escherichia coli. A total of
200 Isa Brown commercial laying hens (64-76 weeks old) were intravaginally inoculated with
0.5 ml of 0.85% sterile saline solution containing 8.8 x 109 CFU / mL of Escherichia coli. It
was adopted a randomized block design (birds weight used as block criteria), with four
treatments and five replicates of 10 birds. The treatments consisted of: basal diet without
additives (control); basal diet + 30 mg / kg of antibiotic (halquinol); basal diet + 30 mg / kg of
copaiba oleo resin and basal diet + 40 mg / kg barbatimão extract. The experiment lasted three
periods of 28 days, in order to evaluate performance and external and internal egg quality.
Data were subjected to analysis of variance and means, when necessary, were compared by
Tukey test (5%). Feed conversion decreased with the addition of 40 mg / kg of barbatimão
extract compared to the control treatment, although it was similar to antibiotic treatment. The
addition of barbatimão extract in the diet decreased egg production, when compared to
antibiotic treatment. The addition of 30 mg / kg diet of copaiba oleo resin had no effect on
growth performance. The use of barbatimão extract lead to production of heavier eggs, in
relation to antibiotic treatment, however, they presented lower shell thickness and a worse
internal quality (UH) than the control diet. The addition of copaiba oleo resin resulted in
improved egg weight, albumen percentage and yolk index, in relation to antibiotic treatment.
However, the inclusion of copaiba oil resin resulted in a lower yolk percentage, when
compared to antibiotic treatment. The inclusion of copaiba oleo resin in the diet of laying
hens, in order to replace performance enhancing additives, is recommended.
Keywords: Additives, Copaífera, egg quality, laying hens, performance,

Stryphnodendronadstringens.
33
2.1 Introdução
O uso de aditivos melhoradores de desempenho na produção animal é realizado
desde a década de 50 com objetivo de alcançar melhores índices zootécnicos, acelerar o
crescimento e com finalidade terapêutica no tratamento de infecções1.
No entanto, as restrições ao uso de antimicrobianos melhoradores de desempenho
(AMD) vêm ocorrendo de maneira crescente, visto que o uso contínuo ou dosagens
subterapêuticas pode ocasionar resistência de cepas bacterianas. Assim, impulsionados por
essa problemática, pesquisadores se empenharam em encontrar substitutos ao uso dos
antibióticos melhoradores de desempenho. De acordo com Huyghebaert et al.2, os substitutos
devem proporcionar o mesmo efeito benéfico dos aditivos melhoradores de desempenho.
Produtos extraídos de plantas (extratos vegetais e óleos) têm sido estudados e
demonstram serem promissores substitutos aos aditivos sintéticos. O uso dos extratos resulta
em melhora da digestibilidade e absorção de nutrientes, na propriedade antisséptica, na
atividade antioxidante, e na melhora da resposta imunológica3.
O Cerrado brasileiro é rico em variedades de plantas com propriedades
farmacológicas, e isso se deve a presença de compostos químicos, taninos, terpenos, glucanos
e outros compostos, que agem como antimicrobianos. Dentre essas plantas podemos destacar
a copaíba e o barbatimão.
A copaíba (Copaífera sp ) possui propriedades farmacológicas, com ação anti-
inflamatória, cicatrizante e antibacteriana4, 5, 6, analgésico6, entre outras.
O óleo-resina de copaíba é constituído majoritariamente de hidrocarbonetos
sesquiterpênicos, sendo observada também a presença de diterpenos. No entanto, os
sesquiterpenos representam 90% da composição do óleo e a eles são atribuídos as
propriedades terapêuticas do óleo. Os sesquiterpenos frequentemente encontrados no óleo-
resina de copaíba são, β –cariofileno, óxido de cariofileno, α – humuleno, δ – cadineno, α -
cadinol, α - cubebene,α e β - selineno, β - elemeno, α - copaeno,trans - α - bergamoteno e β –
bisaboleno7.
Avaliando a atividade antimicrobiana in vitro do óleo-resina de copaíba
(Copaifera multijuga) sobre bactérias como Escherichia coli, Staphylococcus aureus e
Pseudomonas aeruginosa, Mendonça & Onofre8 observaram que o óleo-resina de copaíba
teve capacidade inibitória sobre o crescimento dos três tipos de microorganismos estudados.
O barbatimão (Stryphnodendron adstringens) possui propriedades adstrigentes e
medicamentosas, sendo considerado como anti-inflamatório, anti-hemorrágico, ajuda no
combate a diarréias, cicatrizante, antisséptico9, e ainda no tratamento de problemas
34
circulatórios, dor de garganta e gastrointestinais, e essas propriedades são atribuídas a

presença dos metabólitos secundários do barbatimão, alcalóides, flavonóides, terpenos,
estilbenos, esteróides, inibidores de proteases e taninos10-12, sendo os taninos os componentes
majoritários.
As propriedades farmacológicas do barbatimão estão relacionadas com os teores
de taninos condensados presente na planta13, 14
. Os taninos possuem a capacidade de se
complexar com íons metálicos, como ferro, alumínio, cálcio cobre, necessários ao
metabolismo microbiano15, 16
; atividade antioxidante e seqüestradora de radicais livres e
habilidade de formar complexo com outras moléculas, como por exemplo, proteínas e
polissacarídeos16.
Soares et al.17 testaram a atividade antibacteriana in vitro do extrato
hidroalcoólico de barbatimão (Stryphnodendron adstringens) sobre cepas de Enterococcus
faecalis, Streptococcus salivarius, Streptococcus sanguinis, Streptococcus mitis,
Streptococcus mutans, Streptococcus sobrinus e Lactobacillus casei. Os autores verificaram
que o extrato teve capacidade inibitória frente às cepas de Streptococcus mitis e Lactobacillus
casei, e Concentração Inibitória Mínima variando de 350 a >400 µg/mL.
Diante do exposto, é possível que a capacidade do óleo-resina de copaíba
(Copaifera sp.) e do extrato de barbatimão (Stryphnodendron adstringens) sejam prováveis
substitutos aos antimicrobianos melhoradores de desempenho (AMD) na produção de aves.
Assim, objetivou-se com a realização desse trabalho elucidar os efeitos da inclusão do óleo-
resina de copaíba e do extrato de barbatimão no desempenho e na qualidade de ovos de
poedeiras comerciais desafiadas com Escherichia coli.
2.2 Material e métodos
2.2.1 Local de realização do experimento

O experimento foi conduzido no Setor de Avicultura do Departamento de
Produção Animal da Escola de Veterinária e Zootecnia da Universidade Federal de Goiás.
Todos os procedimentos nesse estudo foram realizados em acordo com Protocolo Registro
CEUA/UFG 52/14 pela Comissão de Ética no Uso de Animais da Universidade Federal de
Goiás.
35
2.2.2 Alojamento das aves

As aves foram alojadas em galpão de postura de alvenaria, coberto com telhas de barro
e telado nas laterais. Permanecendo aos pares em gaiolas de arame galvanizado de dimensões
25x40x45cm e equipadas com comedouro lineares de alumínio e bebedouro tipo “nipple”.
2.2.3 Delineamento experimental

Foram utilizadas 200 poedeiras comerciais da linhagem Isa Brown com 64
semanas de idade e produção de 85%, distribuídas em delineamento em blocos ao acaso
(sendo todas as aves pesadas e separadas em: B1 – aves de 1,776-2,077 kg; B2 – Aves de
1,474-1,775 kg), com quatro tratamentos e cinco repetições de dez aves cada. Todas as aves
foram desafiadas com Escherichia coli.
Foram estudados quatro tratamentos, sendo um controle negativo, ou seja, aves
desafiadas com Escherichia coli e alimentadas com dietas sem aditivos (antibiótico, copaíba
ou barbatimão); aves desafiadas com Escherichia coli e alimentadas com rações contendo
30mg/kg de antibiótico (halquinol); aves desafiadas com Escherichia coli e alimentadas com
rações contendo 30mg/kg de óleo-resina de copaíba; e aves desafiadas com Escherichia coli e
alimentadas com rações contendo 40 mg/kg de extrato concentrado de barbatimão.
O óleo-resina de copaíba foi adquirido de uma empresa comercial. O extrato
concentrado de barbatimão foi preparado e analisado no Laboratório de Pesquisa de Produtos
Naturais da Faculdade de Farmácia – UFG. Foi realizado o doseamento de taninos do extrato
concentrado de barbatimão e doseamento dos teores de β-cariofileno do óleo bruto de copaíba
por meio do método de cromatografia líquida, validada pelo Laboratório de Pesquisas de
Produtos Naturais (LPPN), demonstrando um teor de 0,433mg/mL de taninos totais do extrato
concentrado de barbatimão e 213,1mg/mL de β-cariofileno do óleo de copaíba.
As rações experimentais utilizadas foram fareladas, isonutritivas e a base de milho
e farelo de soja, formuladas de acordo com a composição dos nutrientes dos alimentos e das
exigências propostas pelas tabelas brasileiras para aves e suínos18 (Tabela 1). O halquinol, o
óleo-resina de copaíba, e o extrato de barbatimão foram adicionados na ração basal em
substituição ao amido. Para realizar a melhor homogeneização o óleo de copaíba foi
inicialmente misturado ao óleo de soja e depois adicionado na mistura. O extrato concentrado
de barbatimão foi adicionado primeiramente na mistura dos micronutrientes e depois à ração.
O demarcar do experimento foi de 99 dias, sendo 15 dias de adaptação das aves
às condições experimentais, e 84 dias divididos em três períodos de 28 dias cada. Ao final de
36
cada ciclo foram determinadas as variáveis de desempenho zootécnico e qualidade interna e

externa de ovos.
TABELA 1 – Composição centesimal e valor nutricional calculado da ração basal

Ingredientes %
Milho grão 65,82
Farelo de soja 45% 20,79
Óleo de soja 1,50
Calcário calcítico 9,16
Fosfato bicálcico 0,99
Amido 0,50
Sal comum 0,45
DL-Metionina 0,25
L-Lisina HCL 0,25
L-Treonina 0,14
Vitini-ave* 0,10
Min-aves** 0,05
Total 100
Nutrientes Composição calculada
Energia Metabolizável (kcal/kg) 2.900
Proteína bruta (%) 15,6
Cálcio (%) 3,85
Fósforo disponível (%) 0,27
Lisina digestível (%) 0,85
Metionina + Cistina (%) 0,69
Metionina digestível (%) 0,47
Treonina digestível (%) 0,63
Sódio (%) 0,21
1
Suplemento vitamínico para poedeiras (composição/kg do produto): vitamina A 8.000,00 MUI, vitamina E
15.000,00 mg, vitamina D3 2.300,00 MUI, vitamina K3 1.000 mg, vitamina B1 200,00 mg, vitamina B2 3.000
mg, vitamina B6 1.700,00 mg, vitamina B12 10.000,00 mcg, niacina 20.000,00 mg, ácido fólico 500,00 mg,
Pant.Cálcio 9.600,00 mg, biotina 15,00 mg. 2Suplemento mineral para poedeiras (composição/kg do produto):
manganês 120.000,00 mg, zinco 120.000,00 mg, ferro 60.000,00 mg, cobre 18.000,00 mg, iodo 2.000,00 mg.
2.2.4 Manejo experimental

Durante todo o período experimental, as galinhas receberam ração e água à
vontade, sendo os comedouros abastecidos duas vezes ao dia. O programa de luz utilizado foi
de 17 horas de fotoperíodo, controlado por relógio automático, em conformidade com as
recomendações do manual da linhagem. A temperatura e umidade do ar foram registradas
diariamente.
37
2.2.5 Preparação do inóculo de Escherichia coli e infecção experimental

O inóculo foi preparado com Escherichia coli isoladas de amostra de campo
obtidas de coração de frangos de corte, cedidas pelo Laboratório de Bacteriologia da Escola
de Veterinária e Zootecnia da Universidade Federal de Goiás.
A cepa foi repicada em tubos de ensaio contendo 5 mL de caldo de cérebro e
coração (BHI) e incubada a 37°C por 18-24 horas. Em seguida as culturas foram suspensas
em solução salina tamponada esterilizada em diluições seriadas e sucessivas para se obter a
concentração de 8,8x109UFC/mL com auxílio da escala de Mac-Farland. As concentrações
foram confirmadas por plaqueamento das diluições seriadas em Ágar Maconkey.
Os isolados de E.coli padronizadas na concentração de 8,8x109UFC/mL foram
inoculados nas aves com auxílio de pipetas e seringas esterilizadas, via intravaginal, na
proporção de 0,1 mL/ave. No dia da inoculação as aves foram submetidas a situações de
estresse passando por um período de seis horas de jejum alimentar e expostas a temperatura
ambiental de aproximadamente de 35 C.
2.2.6 Variáveis estudadas

Ao final de cada ciclo de 28 dias, foi avaliado o desempenho das poedeiras por
meio das variáveis:
- Consumo alimentar: No final de cada período de 28 dias foram pesadas as sobras de ração.
A diferença da quantidade de ração fornecida no início do período pela quantidade de sobras
resultou na quantidade de ração consumida em cada unidade experimental. A mortalidade das
aves era considerada como critério de correção nos valores de consumo.
- Peso médio dos ovos: Nos três últimos dias de cada ciclo foram coletados todos os ovos
íntegros. A média do peso dos ovos foi obtida pela divisão do peso total dos ovos coletados
pelo número de ovos coletados, por unidade experimental.
- Conversão alimentar: A conversão alimentar calculada em dúzias de ovos (kg/dz) foi
obtida pela divisão do consumo de ração pela produção de ovos. A conversão alimentar
calculada pela massa de ovos (kg/kg), foi obtida pela divisão do consumo de ração pela
produção de ovos vezes o peso médio dos ovos de cada unidade experimental.
- Produção de ovos: A produção de ovos foi anotada diariamente, sendo duas coletas diárias
realizadas às 11:00 e 17:00 horas, sendo calculado em função das aves.
- Mortalidade: Quando observada a mortalidade, as aves e as sobras do cocho eram pesadas
e os valores anotados em planilhas para posterior correção do consumo.
38
As análises de qualidade interna e externa dos ovos foram realizadas nos três
últimos dias de cada ciclo, sendo utilizados três ovos por unidade experimental, coletados no
dia da análise. As variáveis analisadas foram:
- Gravidade específica: foi realizada pelo método de imersão do ovo em solução salina com
densidades variando de 1,065 a 1,110 e intervalos de 0,005.
- Porcentagem de gema, albúmen e casca (%): foram determinados os pesos de cada uma
das partes em balança digital, sendo esses valores divididos pelo peso do ovo e multiplicados
por 100. O peso da casca foi obtido após secagem.
- Altura e diâmetro de gema e albúmen (mm): os ovos de cada unidade experimental foram
pesados e quebrados em superfície plana para serem realizadas as medidas de altura e
diâmetro de albúmen e gema, realizadas com auxílio de um micrometro tripé e de um
paquímetro.
- Índice de gema: foi obtido pela divisão da altura da gema e do seu respectivo diâmetro.
- Índice do albúmen: foi obtido pela divisão da altura da gema e do seu respectivo diâmetro.
- Espessura de casca(mm): Após secagem em temperatura ambiente por 72 horas, as
medidas de espessura de casca foi coletada com o auxílio de um paquímetro.
- Unidade Haugh (UH): para determinar a qualidade interna dos ovos, expressos em
unidades Haugh (UH), levou-se em consideração a relação logarítmica entre altura do
albúmen denso (mm) e o peso dos ovos (g). Os valores foram aplicados na fórmula (BARNT
et al., 1951):
UH= 100 log. (H + 7,57 - 1,7 W0,37)
Em que:
H= altura do albúmen (mm)
W= peso do ovo (g).
2.2.7 Análise estatística

Os dados de desempenho e qualidade dos ovos foram submetidos à análise de
variância (ANOVA) e as médias, quando necessário, foram comparadas pelo teste Tukey
(P<0,05). Foi utilizado o programa SAS 9.219.
39
2.3. Resultados e discussão
2.3.1. Desempenho
Os dados de desempenho de poedeiras comerciais semi-pesadas alimentadas com
rações contendo copaíba ou barbatimão (Tabelas 2, 3, e 4) mostraram que, no primeiro e no
segundo período de produção houve efeito (p<0,05) dos tratamentos sobre a conversão
alimentar (kg/dz) e produção de ovos. Rações contendo extrato de barbatimão
proporcionaram pior conversão alimentar em relação ao tratamento controle (p<0,05). No
entanto, Moreira20, estudando a inclusão do extrato de barbatimão em três concentrações,
1000, 2000 e 3000 mg/kg, em dietas de poedeiras comerciais, não observou efeito da
inclusão do extrato para nenhuma das variáveis de desempenho estudadas no período de 24 a
40 semanas. As aves utilizadas neste estudo tinham idade superior (64 a 76 semanas) as das
aves estudadas por Moreira20 (24 a 40 semanas), e foram submetidas ao desafio com
Escherichia coli, o que pode ter influenciado os resultados.
TABELA 2 – Desempenho de poedeiras comerciais alimentadas com ração contendo extrato de

barbatimão ou óleo de copaíba, no período de 64 a 68 semanas de idade
CR Produção MO
Tratamentos CA (kg/dz) CA (kg/kg)
(g/ave/dia) (%) (g/ave/dia)
Controle 85,79 86,68 53,05 1,193b 1,618
Halquinol 89,12 81,68 49,31 1,293a 1,783
Copaíba 85,72 85,24 54,40 1,213ab 1,593
Barbatimão 88,17 82,46 50,63 1,289a 1,681
Valor de P
Tratamento 0,232 0,101 0,365 0,050 0,200
Bloco 0,160 0,606 0,526 0,067 0,311
CV% 3,38 3,74 9,16 4,85 8,46
CR= Consumo de ração, Produção= Produção de Ovos, MO= Massa de Ovos, PO= Peso do Ovo, CA= Conversão
Alimentar. Copaíba= 0,03g/kg de ração, Barbatimão= 0,04g/kg de ração.
C.V%: coeficiente de variação
* Médias seguidas de letras diferentes na mesma coluna diferem estatisticamente entre si pelo Teste de Student’s
(P<0,05).
A pior conversão aves alimentadas com rações contendo extrato de barbatimão em

relação ao tratamento controle, pode estar relacionada aos efeitos antinutricionais dos taninos,
composto majoritário desse produto, embora não tenha se observado efeito sobre o consumo
de ração. Warreham et al.21 relataram que os taninos condensados presentes em dietas de
monogástricos, formam complexos com proteínas, carboidratos, íons divalente de metais e
outros nutrientes, inibindo a atividade de várias enzimas digestivas, e ainda diminuindo a
40
absorção de outros nutrientes através da parede celular. Assuena et al.22 não encontraram
efeito prejudicial do tanino quando substituiu milho pelo sorgo baixo tanino em diversos
níveis (0%, 25%, 50%, 75% e 100%) em dietas de poedeiras.
Com relação ao tratamento com óleo-resina de copaíba (Tabela 2), pode-se
observar que a conversão alimentar (kg/dz) das aves foi semelhante aos tratamentos controle
(sem aditivos) e com antibiótico. A conversão alimentar das aves alimentadas com rações
contendo óleo-resina de copaíba foi semelhante aos relatos de Noleto23, em estudo com frango
de corte. O autor avaliou a inclusão de 2g/kg de óleo-resina de copaíba na dieta de frangos de
corte, na fase inicial, e verificou que a conversão alimentar das aves alimentadas com rações
contendo óleo-resina de copaíba também foi igual ao das aves do tratamento com antibiótico
(avilamicina) e controle (sem aditivos).
Do mesmo modo, Castejon24, estudando a inclusão do óleo de copaíba, nos níveis
de 100, 500, 900 e 1300 mg/kg, em dietas de frangos de corte na fase inicial, pré-inicial e de
crescimento, não observou diferença na conversão alimentar das aves dos tratamentos com
copaíba em relação as dos tratamentos controle e com avilamicina. Os dados de conversão
alimentar deste estudo mostraram que o grupo com antibiótico apresentou pior conversão
alimentar (kg/dz) (p<0,05) em relação ao grupo controle. Os resultados sugerem que nas
condições do experimento, com poedeiras desafiadas com Escherichia coli, o antibiótico
apresentou pior conversão alimentar em relação ao grupo controle e o mesmo não foi
observado para a copaíba.
Considerando o segundo período de produção (Tabela 3), pode-se observar que a
produção de ovos foi influenciada (p<0,05) pelos tratamentos.

barbatimão ou óleo de copaíba, no período de 68 a 72 semanas
CR Produção MO
Tratamentos CA (kg/dz) CA (kg/kg)
(g/ave/dia) (%) (g/ave/dia)
Controle 85,72 84,72ab 50,09 1,273 1,797
Halquinol 81,95 86,17a 51,64 1,176 1,633
Copaíba 84,30 85,37a 50,71 1,258 1,698
Barbatimão 83,46 79,58b 50,91 1,402 1,819
Valor de P
Tratamento 0,600 0,099 0,710 0,198 0,277
Bloco 0,904 0,453 0,925 0,263 0,193
CV% 4,96 4,97 3,89 12,43 9,28
CR= Consumo de ração, Produção= Produção de Ovos, MO= Massa de Ovos, PO= Peso do Ovo, CA= Conversão Alimentar.
Copaíba= 0,03g/kg de ração, Barbatimão= 0,04g/kg de ração.
* Médias seguidas de letras diferentes na mesma coluna diferem estatisticamente entre si pelo Teste de Student’s (P<0,05).
41
O barbatimão prejudicou (p<0,05) a produção de ovos em relação ao grupo com

antibiótico. Ao avaliar a inclusão do sorgo baixo tanino em substituição ao milho nos níveis
de 50% e 100%, Moreno et al.25 também observaram que a utilização de 100% de sorgo na
ração resultou em queda na produção de ovos de poedeiras comerciais leve.
As aves suplementadas com óleo-resina de copaíba apresentaram produção de
ovos (%) semelhante (p>0,05) ao das aves do tratamento com antibiótico e do grupo controle
(sem aditivos). Do mesmo modo, o grupo com antibiótico foi semelhante ao grupo controle
(sem aditivos).
Considerando os resultados de desempenho, pode-se concluir que o desafio
submetido às aves (Escherichia coli) pode não ter sido suficiente para que os aditivos
utilizados demonstrassem seus efeitos, visto que o tratamento controle (sem antibióticos)
apresentou resultados semelhantes (p>0,05) aos tratamentos com os aditivos. Esses resultados
sugerem que o desafio no galpão experimental foi baixo. Condições sanitárias adversas são
necessárias para que os aditivos melhoradores de desempenho sejam mais expressivos26.
A Escherichia coli faz parte da microbiota entérica de mamíferos e aves, e,
embora sempre presente nos ambientes de criação, tem ocasionado perdas econômicas na
avicultura industrial, uma vez que ocasiona infecções intestinais e extra-intestinais conhecidas
por colibacilose. Nas aves de postura a Escherichia coli é responsável por quadros de
Salpingite (infecção do oviduto) e pode resultar em morte das aves. No entanto, aves adultas
são menos susceptíveis a infecções ocasionadas por Escherichia coli, sendo observado em
maior frequência em aves jovens.
Em relação ao terceiro período de produção, de 72 a 76 semanas de idade, não
houve efeito entre os tratamentos para todas as variáveis de desempenho (p>0,05) (Tabela4).

barbatimão ou óleo de copaíba, no período de 72 a 76 semanas
CR Produção MO CA (kg/dz) CA (kg/kg)
Tratamentos (g/ave/dia) (%) (g/ave/dia)
Controle 89,79 79,99 51,04 1,467 1,928
Halquinol 84,52 71,76 48,57 1,324 1,789
Copaíba 86,94 81,36 52,99 1,344 1,728
Barbatimão 87,73 80,28 49,96 1,424 1,909
Valor de P
Tratamento 0,501 0,879 0,514 0,267 0,289
Bloco 0,988 0,427 0,391 0,851 0,904
CV(%) 5,83 6,34 9,26 8,52 9,64
42
Assim como no terceiro período de produção, no período total (64 a 76 semanas

de idade) (Tabela 5), não foram observadas diferenças entre os tratamentos para nenhumas
das variáveis de desempenho estudadas (p>0,05). Os resultados negativos do barbatimão
observados nos primeiro e segundo períodos não foram observados no período final de
produção, assim como no período total de produção. Moura et al.27, em estudo com codornas
japonesas na fase de postura, avaliaram a utilização do sorgo baixo tanino sobre o
desempenho e qualidade de ovos e não observaram influência dos possíveis efeitos
antinutricionais dos taninos sobre o peso, produção de ovos, peso dos ovos, massa de ovos e
conversão alimentar (g/g e g/dz) das aves.
TABELA 5 – Desempenho de poedeiras comerciais alimentadas com ração contendo extrato

de barbatimão ou óleo de copaíba no período total (64 a 76 semanas de idade)
CR Produção MO CA CA
Tratamentos (g/ave/dia) (%) (g/ave/dia) (kg/dz) (kg/kg)
Controle 87,10 83,79 51,39 1,311 1,639
Halquinol 85,19 82,20 49,84 1,264 1,571
Copaíba 85,65 83,99 52,70 1,272 1,546
Barbatimão 86,45 80,77 50,49 1,372 1,672
Valor de P
Tratamento 0,778 0,426 0,452 0,274 0,282
Blolco 0,585 0,941 0,889 0,256 0,350
CV% 3,43 4,02 5,61 7,07 6,81
Poucas pesquisas esclarecem os efeitos antinutricionais dos taninos, metabólitos

secundários majoritários do extrato de barbatimão, sobre o desempenho de poedeiras. Além
disso, temos a escassez de informações sobre o uso do extrato de barbatimão na alimentação
de poedeiras, além da ausência de padronização da utilização deste extrato. No entanto, com
os resultados encontrados neste ensaio, podemos supor que a utilização do extrato de
barbatimão não prejudicou o desempenho das aves, já que as variáveis de produção de ovos e
conversão alimentar, das aves alimentadas com rações contendo o extrato, apresentaram
resultados semelhantes ao das aves alimentas com rações sem antibióticos ou fitogênicos.
Do mesmo modo Moreira20, estudando a inclusão do extrato de barbatimão em
três concentrações, 1000, 2000 e 3000 mg/kg, em dietas de poedeiras comerciais (24 a 40
semanas de idade),não desafiadas, não observou efeito da inclusão do extrato sobre o
desempenho.
43
2.3.2. Qualidade dos ovos
Na avaliação de qualidade interna e externa de ovos, as variáveis foram

influenciadas (p<0,05) pelo uso do antibiótico, copaíba, e barbatimão em todos os períodos de
produção (Tabelas 6, 7, 8 e 9).
No primeiro período de produção, o peso do ovo, a porcentagem de casca, a
espessura da casca e a porcentagem de gema e albúmen apresentaram alterações significativas
(p<0,05) (Tabela 6). A inclusão do óleo-resina de copaíba resultou em ovos mais pesados que
os ovos do tratamento com antibiótico, e semelhante ao tratamento controle. O peso do ovo do
tratamento com barbatimão foi semelhante ao dos tratamentos controle (sem aditivo) e com
antibiótico.
A porcentagem e espessura de casca do tratamento com copaíba foram
semelhantes ao tratamento com antibiótico, embora tenha sido inferior ao tratamento controle
(sem aditivo). Com relação ao tratamento com barbatimão, a porcentagem e espessura de
casca apresentaram-se semelhantes aos tratamentos com antibiótico ou controle (p>0,05). A
porcentagem de casca do tratamento com antibiótico não diferiu dos demais tratamentos, com
relação à espe ssura de casca apresentou-se inferior em relação ao tratamento controle.
TABELA 6 – Qualidade de ovos de poedeiras comerciais alimentadas com ração contendo

extrato de barbatimão ou óleo de copaíba, no período de 64 a 68 semanas
Tratamentos PO (g) C (%) EC (mm) G (%) IG A (%) UH GE
Controle 61,74ab 13,46a 0,45a 25,89a 0,43 60,65b 85,76 1,103
Halquinol 60,66b 13,02ab 0,41bc 25,85a 0,43 61,14b 90,73 1,101
Copaíba 64,76a 12,39b 0,40c 24,26b 0,44 63,35a 89,69 1,099
Barbatimão 64,12ab 12,95ab 0,43ab 24,66ab 0,44 62,39ab 88,63 1,102
Valor de P
Tratamento 0,010 0,022 0,0002 0,013 0,125 0,005 0,148 0,132
Bloco 0,695 0,871 0,902 0,029 0,050 0,085 0,288 0,808
CV% 5,82 6,66 6,46 6,28 4,48 3,35 6,31 0,43
PO= Peso do Ovo, C= Porcentagem de casca, EP= Espessura de Casca, G= Porcentagem de gema, IG= Índice de
Gema, A= Porcentagem de Albume, U= Unidade Haugh, GE= Gravidade Específica. Copaíba= 0,03g/kg de
ração, Barbatimão= 0,04g/kg de ração.
* Médias seguidas de letras diferentes na mesma coluna diferem estatisticamente entre si pelo Teste de Tukey
(P<0,05).
A porcentagem e a espessura de casca estão relacionadas com a deposição de

carbonato de cálcio. Com o avançar do período de produção, o peso do ovo aumenta, e a
poedeira não consegue secretar carbonato de cálcio suficiente para envolver o conteúdo do
ovo, resultando em ovos com espessura de casca reduzida28.
44
Embora a espessura da casca tenha sido inferior para o tratamento com óleo-resina
de copaíba, a gravidade especifica dos ovos não diferiu dos outros tratamentos (p>0,05). Este
resultado não era esperado, visto que a gravidade específica está relacionada com a espessura
da casca29, quanto maior a gravidade específica, maior a espessura da casca30.
Considerando os resultados do extrato de barbatimão sobre a qualidade de casa,
pode-se concluir que embora os taninos, presentes no extrato, tenham a capacidade de se
complexar com íons metálicos16, 21, não influenciaram na deposição de cálcio na casca.
A porcentagem de gema dos ovos do tratamento com copaíba foi inferior (p<0,05)
ao dos tratamentos com antibiótico ou controle (sem aditivo). Entretanto, a porcentagem de
albúmen dos ovos do tratamento contendo copaíba foi melhor em relação aos tratamentos com
antibiótico e controle. A utilização do extrato de barbatimão resultou em ovos com
porcentagem de gema e albúmen semelhante aos demais tratamentos (p>0,05). Moreira20,
avaliando a qualidade interna e externa de ovos de poedeiras comerciais alimentadas com
rações contendo diferentes níveis de extrato de barbatimão (1.000, 2.000 e 3.000 mg/kg).
Resultado parcialmente semelhante a este estudo fora observado por Ribeiro13,
quando estudou a inclusão de óleo de copaíba em dois níveis, 0,03 e 0,06%, na dieta de
poedeiras comerciais, e não observou efeito da inclusão do óleo para nenhuma das variáveis
de qualidade interna.
Em relação ao segundo período de produção, as variáveis de peso do ovo,
espessura da casca e índice de gema foram influenciadas (p<0,05) pelos tratamentos (Tabela
7).

Controle 59,98b 13,68 0,37b 26,05 0,42b 60,27 89,45 1,099
Halquinol 59,77b 13,58 0,41a 25,36 0,43a 61,05 88,59 1,096
Copaíba 62,09ab 13,60 0,40a 25,26 0,44a 61,13 88,56 1,097
Barbatimão 64,03a 13,02 0,37b 25,17 0,43ab 61,73 88,61 1,094
Valor de P
Tratamento 0,008 0,516 0,0001 0,33 0,004 0,219 0,967 0,164
Bloco 0,994 0,638 0,264 0,04 0,077 0,014 0,908 0,581
CV% 5,94 8,66 5,73 5,15 3,72 2,88 5,89 0,47
(P<0,05).
45
O tratamento com copaíba resultou em ovos com peso semelhante (p>0,05) aos
ovos do ao grupo com antibiótico ou controle. A utilização do antibiótico resultou em ovos de
peso semelhante aos do tratamento controle. Com relação ao extrato de barbatimão, o peso do
ovo foi superior ao dos tratamentos com antibiótico ou controle (sem aditivo).
A inclusão do óleo-resina de copaíba resultou em ovos com espessura de casca
semelhante (p>0,05) ao tratamento com antibiótico e superior ao tratamento controle. Os ovos
do tratamento com barbatimão apresentaram espessura de casca inferior ao tratamento com
antibiótico e semelhante ao grupo controle. A menor espessura de casca do tratamento com
barbatimão em relação ao tratamento com antibiótico pode está relacionada a complexação
dos íons Ca pelos taninos15, no entanto quando comparado ao tratamento controle esse efeito
não foi observado. Oliveira31, avaliando os efeitos da inclusão de extrato de barbatimão em
dois níveis, 0,1 e 0,3%, sobre a qualidade física de ovos, não observou efeito negativo com a
utilização do extrato de barbatimão sobre a qualidade de casca de poedeiras comerciais leves
de 24 a 40 semanas.
O índice de gema do tratamento com copaíba foi semelhante ao tratamento com
antibiótico (p>0,05) e superior ao tratamento controle. Com relação ao tratamento com
barbatimão, o índice de gema não diferiu dos demais tratamentos (p>0,05).
No terceiro período de produção, houve efeito dos tratamentos sobre o índice de
gema e a unidade Haugh (p<0,05) (Tabela 8). O índice de gema dos tratamentos com copaíba
ou com barbatimão foi semelhante ao grupo com antibiótico. Entretanto, o índice de gema dos
ovos do tratamento com copaíba foi superior ao do tratamento controle, enquanto o
tratamento com barbatimão apresentou-se semelhante ao grupo controle.

Controle 63,95 13,28 0,40 26,29 0,44b 60,42 90,58b 1,099
Halquinol 61,95 13,09 0,41 25,76 0,44ab 61,15 93,11a 1,097
Copaíba 64,25 12,75 0,40 25,68 0,45a 61,57 91,93ab 1,097
Barbatimão 63,33 12,86 0,40 26,05 0,45ab 61,08 88,66b 1,096
Valor de P
Tratamento 0,286 0,36 0,259 0,60 0,064 0,41 0,096 0,454
Bloco 0,328 0,061 0,435 0,002 0,110 0,137 0,816 0,110
CV% 5,45 6,31 4,52 5,00 3,90 2,82 5,42 0,44
PO= Peso do Ovo, C= Porcentagem de casca, EP= Espessura de Casca, G= Porcentagem de gema, IG= Índice de Gema, A=
Porcentagem de Albume, U= Unidade Haugh, GE= Gravidade Específica. Copaíba= 0,03g/kg de ração, Barbatimão=
0,04g/kg de ração.
* Médias seguidas de letras diferentes na mesma coluna diferem estatisticamente entre si pelo Teste de Student’s (P<0,05).
46
Em relação a qualidade interna de ovos (UH), o tratamento com copaíba

apresentou resultado semelhante (p>0,05) ao tratamento com antibiótico e controle. Aves
alimentadas com rações contendo extrato de barbatimão apresentaram pior qualidade interna
de ovos (UH) em relação ao tratamento contendo antibiótico.
Considerando o período total de produção (64 a 76 semanas), o peso do ovo, a
porcentagem de gema, o índice de gema e a porcentagem de albúmen foram influenciados
(p<0,05) pelos fitoterápicos (Tabela 9). O peso do ovo das aves suplementadas com rações
contendo óleo-resina de copaíba ou extrato de barbatimão foi superior (p<0,05) ao grupo com
antibiótico, embora tenha sido semelhante ao tratamento controle (sem aditivo). Esses
resultados mostram os efeitos positivos do óleo-resina de copaíba e do extrato de barbatimão
em relação ao antibiótico. O peso do ovo do grupo controle não diferiu (p>0,05) dos demais
tratamentos.
Ovos oriundos de aves alimentadas com rações contendo copaíba apresentaram
porcentagem de gema semelhante ao grupo com antibiótico, e inferior ao tratamento controle.
Entretanto, o índice de gema do tratamento com copaíba foi superior ao dos tratamentos
controle ou com antibiótico. Com relação ao tratamento com barbatimão, a porcentagem de
gema apresentou-se semelhante aos demais tratamentos, e o índice de gema apresentou-se
semelhante ao tratamento com antibiótico e superior ao tratamento controle.
Tabela 9 – Qualidade de ovos de poedeiras comerciais alimentadas com ração contendo

extrato de barbatimão ou copaíba no período total (de 64 a 76 semanas)
Tratamentos PO (g) C EC (mm) G (%) IG A (%) UH GE
(%)
Controle 61,89ab 13,47 0,40 26,07a 0,42c 60,44b 88,59 1,100
Halquinol 60,79b 13,47 0,41 25,65ab 0,43bc 61,11ab 90,81 1,098
Copaíba 63,70a 12,91 0,40 25,06b 0,44a 62,01a 90,05 1,098
Barbatimão 63,82a 12,96 0,39 25,29ab 0,43ab 61,73a 88,63 1,097
Valor de P
Tratamento 0,002 0,106 0,238 0,017 0,0004 0,007 0,121 0,100
Bloco 0,785 0,646 0,437 <0,0001 0,0004 0,004 0,373 0,301
CV% 3,76 4,85 4,50 3,27 2,24 1,96 3,22 0,27
(P<0,05).
A porcentagem de albúmen dos ovos dos tratamentos com copaíba ou com

barbatimão foi semelhante ao tratamento com antibiótico e superior ao tratamento controle
47
(p<0,05). Esse resultado está relacionado com o aumento da porcentagem de gema dos
tratamentos. Esse resultado pode mostrar um efeito negativo dos extratos sobre a gema.
Embora a utilização do óleo-resina de copaíba melhorou o índice de gema. Os
valores médios de índice de gema para ovos frescos estão entre 0,40 e 0,4232. Compostos,
ainda não elucidados, presente na copaíba pode ter contribuído com essa melhoria, uma vez
que as propriedades terapêuticas do óleo ainda são as mais exploradas. Oliveira31, estudando a
inclusão de óleo de copaíba em três níveis, 0,03, 0,06 e 0,09%, na dieta de poedeiras
comerciais e sem efeitos na qualidade física de ovos, não observou efeito da adição do óleo
sobre o índice de gema de ovos frescos em relação aos demais tratamentos.
48
2.4 Conclusões
É recomendada a inclusão de 0,03 g/kg de óleo-resina de copaíba em substituição

aos aditivos melhoradores de desempenho, nas rações de poedeiras comerciais (de 64 a 76
semanas) desafiadas com Escherichia coli, sem prejudicar o desempenho e qualidade de ovos
das aves.
A inclusão de 0,04 g/kg de extrato de barbatimão em dietas de poedeiras
comerciais (de 64 a 76 semanas) nas condições experimentais testadas (desafio com
Escherichia coli) é recomendada, uma vez que não prejudicou o desempenho e qualidade de
ovos das aves e ainda proporcionou ovos com melhor espessura de casca que o tratamento
com antibiótico.
49
REFERÊNCIAS
1. Silva CR. Uso de probiótico em rações de frangos de corte: desempenho, digestibilidade

energia metabolizável [Dissertação]. Viçosa: Universidade Federal de Viçosa; 2008.
[acesso 12 mai 2013]. Disponível em:
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52
CAPITULO 3. OCORRÊNCIA DE Escherchia coli EM OVOS, FOLÍCULOS

OVARIANOS E OVIDUTO DE POEDEIRAS VERMELHAS DESAFIADAS COM
Escherichia coli E ALIMENTADAS COM RAÇÕES CONTENDO EXTRATO DE
BARBATIMÃO E ÓLEO DE COPAÍBA
RESUMO: A realização deste estudo teve como objetivo avaliar a inclusão do óleo-resina de
copaíba ou extrato de Barbatimão na ração de poedeiras comerciais desafiadas com
Escherichia coli sobre a frequência de isolados de Escherichia coli em ovos, folículos
ovarianos e oviduto. Foram utilizadas 200 poedeiras comerciais da linhagem Isa Brow (64 a
76 semanas de idade) sendo todas as aves inoculadas via intravaginal com 0,5 mL de solução
salina esterilizada a 0,85% contendo 8,8 x 109 UFC/mL de Escherichia coli. O delineamento
foi em blocos ao acaso (sendo o peso das aves blocado), com quatro tratamentos e cinco
repetições de 10 aves. Os tratamentos foram: ração basal sem aditivos (controle); ração basal
+ 30 mg/kg de antibiótico (halquinol); ração basal + 30 mg/kg de óleo-resina de copaíba e
ração basal + 40 mg/kg de barbatimão. O experimento teve duração de três períodos de 28
dias e em cada período foi realizado pesquisa de Escherichia coli em ovos e ao final do
experimento pesquisa de Escherichia coli em folículos ovarianos e oviduto. Houve menor
frequência de isolamento de Escherichia coli em amostras de suabes intravaginal do
tratamento com copaíba. A inclusão do barbatimão ou da copaíba proporcionou menor
frequência de isolamento de E. coli nos folículos ovarianos em relação ao tratamento com
antibiótico. O barbatimão proporcionou menor ocorrência de Escherichia coli no oviduto em
relação ao tratamento com antibiótico. Já o tratamento com óleo-resina de copaíba apresentou
maior frequência de isolamento de E. coli no oviduto que os demais tratamentos. A utilização
do óleo-resina de copaíba ou extrato de barbatimão resultou em menor frequência de
isolamento de Escherichia coli nas amostras de casca, albúmen e gema que o tratamento com
antibiótico. A inclusão de óleo-resina de copaíba foi satisfatória na substituição ao antibiótico
em dietas de poedeiras comercias.
Palavras-chave: Antimicrobianos, bacteriologia convencional, E. coli, fitogênicos, poedeiras

comerciais.
53
CHAPTER 3. OCCURRENCE OF Escherchia coli IN EGGS, OVARIAN FOLLICLES

AND OVIDUCT OF RED LAYING HENS CHALLENGED WITH Escherichia coli
AND FED DIETS CONTAINING BARBATIMÃO EXTRACT AND COPAIBA OIL
ABSTRACT: This study was performed aiming the evaluation of the inclusion of copaiba
oleo resin or barbatimão extract in the diet of laying hens challenged with Escherichia coli on
the frequency of isolates of Escherichia coli in eggs, ovarian follicles and oviduct. A total of
200 Isa Brown commercial laying hens (64-76 weeks old) were intravaginallyinoculated with
0.5 ml of 0.85% sterile saline solution containing 8.8 x 109 CFU / mL of Escherichia coli. It
was adopted a randomized block design (birds weight used as block criteria), with four
treatments and five replicates of 10 birds. The treatments consisted of: basal diet without
additives (control); basal diet + 30 mg / kg of antibiotic (halquinol); basal diet + 30 mg / kg of
copaiba oleo resin and basal diet + 40 mg / kg barbatimão extract. The experiment lasted three
periods of 28 days, and in each period it was performed the search for Escherichia coli in
eggs; and at the end of the total period, the search for Escherichia coli in ovarian follicles and
oviduct.There was a lower frequency of isolation of Escherichia coli in intra-vaginal swabs
samples from treatment with copaiba oilresin. The inclusion of barbatimão or copaiba
provided lower frequency of E. coli isolation in ovarian follicles, when compared to antibiotic
treatment.Barbatimão provided lower occurrence of Escherichia coli in the oviduct, in relation
to antibiotic treatment. The treatment with oleo resin copaiba showed higher frequency of
isolation of E. coli in the oviduct than the other treatments. The use of copaiba oleo resin or
barbatimão extract resulted in lower frequency of isolation of Escherichia coliin the shell,
albumen and yolk samples, in relation to antibiotic treatment. The inclusion of copaiba oleo
resin was satisfactory in substitution to the antibiotic in laying hens commercial diets.
Keywords: Antimicrobial, conventional bacteriology, laying hens,E. coli , phytogenic.

54
3.1 Introdução
A utilização dos antimicrobianos na avicultura vem sendo realizado com o intuito
de alcançar melhores índices zootécnicos, prevenir doenças e também como terapêuticos1.
Porém, o uso indiscriminado desses aditivos tem contribuído para o aparecimento de bactérias
multiresistentes, ocasionando sérios problemas para a avicultura industrial e para a saúde
pública2.
A preocupação com o aparecimento de bactérias resistentes ocasionou a restrição
do uso dos aditivos melhoradores de desempenho (AMD) na produção animal, impulsionando
assim o desenvolvimento de pesquisas em busca de possíveis substitutos dos AMD’s.
Estudos realizados com extratos e óleos vegetais têm revelado o grande potencial
desses produtos como antimicrobianos, além de melhorar a absorção dos nutrientes e
apresentar atividade antioxidante3,4. Plantas do Cerrado brasileiro estão sendo alvo de estudos
e suas propriedades medicinais têm sido comprovadas, sendo os seus efeitos benéficos
associados aos seus diferentes princípios ativos5. A copaíba (Copaífera sp) e o barbatimão
(Stryphnodendron adstringens) são exemplos de plantas do Cerrado com propriedades
comprovadas.
A copaíba possui ação analgésica, anti-inflamatória, cicatrizante e
antibacteriana6,7. Suas propriedades medicinais são associadas aos sesquiterpenos,
componente majoritário do óleo. Os principais sesquiterpenos encontrados no óleo são β –
cariofileno, óxido de cariofileno, α – humuleno, δ – cadineno, α - cadinol, α - cubebene,α e β -
selineno, β - elemeno, α - copaeno,trans - α - bergamoteno e β –bisaboleno8.
Assim como a copaíba, o barbatimão possui propriedades medicinais, dentre as
quais estão seus efeitos anti-inflamatório, cicatrizante9, antimicrobiano10, além de apresentar
propriedades adstringente11 e antioxidante12. Os efeitos farmacológicos do barbatimão estão
relacionados aos teores de taninos condensados presente na planta, sendo atribuído a esse
composto a capacidade de se complexar com proteínas e íons metálicos, prejudicando a
digestão de nutrientes e a absorção de íons de cálcio, ferro e cobre13.
Na avicultura, a ocorrência de infecções ocasionadas por Escherichia coli é
comum e são denominadas colibacilose. As colibaciloses são responsáveis por quadros como
septicemia, peritonite, pneumonia, aerossaculite, pericardite, onfalite e salpingite14. Na
avicultura de postura, a Escherichia coli é responsável principalmente por desencadear
inflamação do oviduto das aves (salpingite), e por afetar a qualidade dos ovos comerciais15.
A copaíba e o barbatimão possuem atividade antimicrobiana e, portanto podem
ser uma alternativa em rações de aves. No entanto, ainda é necessário determinar a dosagem
55
desses fitogênicos para poedeiras comerciais com intuito de melhorar a qualidade

microbiológica dos ovos. Assim, ainda é necessário determinar sua realização deste trabalho
teve como objetivo elucidar os efeitos da inclusão do óleo-resina de copaíba e do extrato de
barbatimão sobre a qualidade do ovo e da saúde do aparelho reprodutor de poedeiras
comerciais vermelhas desafiadas com Escherichia coli.
3.2 Material e métodos
3.2.1 Local de realização do experimento

O experimento foi conduzido no Setor de Avicultura do Departamento de
Produção Animal e no Laboratório de Bacteriologia do setor de Medicina Preventiva da
Escola de Veterinária e Zootecnia da Universidade Federal de Goiás.
Todos os procedimentos nesse estudo foram realizados em acordo com Protocolo
Registro CEUA/UFG 52/14 pela Comissão de Ética no Uso de Animais da Universidade
Federal de Goiás.
3.2.2 Alojamento das aves

As aves foram alojadas em galpão de postura de alvenaria, coberto com telhas de
barro e telado nas laterais. Permanecendo aos pares em gaiolas de arame galvanizado de
dimensões 25x40x45cm e equipadas com comedouro lineares de alumínio e bebedouro tipo
“nipple”.
3.2.3 Delineamento experimental

Foram utilizadas 200 poedeiras comerciais da linhagem Isa Brown com 64
semanas de idade e produção de 85%, distribuídas em delineamento em blocos ao acaso
(sendo todas as aves pesadas e separadas em: B1 – aves de 1,776-2,077 kg; B2 – Aves de
1,474-1,775 kg), com quatro tratamentos e cinco repetições de dez aves cada. Todas as aves
foram desafiadas com Escherichia coli.
Foram estudados quatro tratamentos, sendo um controle negativo, ou seja, aves
desafiadas com Escherichia coli e alimentadas com dietas sem aditivos (antibiótico, copaíba
ou barbatimão); aves desafiadas com Escherichia coli e alimentadas com rações contendo
30mg/kg de antibiótico (halquinol); aves desafiadas com Escherichia coli e alimentadas com
rações contendo 30mg/kg de óleo-resina de copaíba; e aves desafiadas com Escherichia coli e
alimentadas com rações contendo 40 mg/kg de extrato concentrado de barbatimão.
56
O óleo-resina de copaíba foi adquirido de uma empresa comercial. O extrato

concentrado de barbatimão foi preparado e analisado no Laboratório de Pesquisa de Produtos
Naturais da Faculdade de Farmácia – UFG. Foi realizado o doseamento de taninos do extrato
concentrado de barbatimão e doseamento dos teores de β-cariofileno do óleo bruto de copaíba
por meio do método de cromatografia líquida, validada pelo Instituto de Pesquisas de
Produtos Naturais (LPPN), demonstrando um teor de 0,433mg/mL de taninos totais do extrato
concentrado de barbatimão e 213,1mg/mL de β-cariofileno do óleo de copaíba.
As rações experimentais utilizadas foram fareladas, isonutritivas e a base de milho
e farelo de soja, formuladas de acordo com a composição dos nutrientes dos alimentos e das
exigências propostas pelas tabelas brasileiras para aves e suínos16 (Tabela 1). O halquinol, o
óleo-resina de copaíba, e o extrato de barbatimão foram adicionados na ração basal em
substituição ao amido. Para realizar a melhor homogeneização o óleo de copaíba foi
inicialmente misturado ao óleo de soja e depois adicionado na mistura. O extrato concentrado
de barbatimão foi adicionado primeiramente na mistura dos micronutrientes e depois à ração.
A duração do experimento foi de 99 dias, sendo 15 dias de adaptação das aves às
condições experimentais, e 84 dias divididos em três períodos de 28 dias cada. Ao final de
cada ciclo foram avaliados parâmetros de desempenho zootécnico e qualidade interna e
externa de ovos.
3.2.4 Preparação do inóculo de Escherichia coli e infecção experimental

O inóculo foi preparado com Escherichia coli isoladas de amostra de campo
obtidas de coração de frangos de corte, cedidas pelo Laboratório de Bacteriologia da Escola
de Veterinária e Zootecnia da Universidade Federal de Goiás.
A cepa foi repicada em tubos de ensaio contendo 5 mL de caldo de cérebro e
coração (BHI) e incubada a 37°C por 18-24 horas. Em seguida as culturas foram suspensas
em solução salina tamponada esterilizada em diluições seriadas e sucessivas para se obter a
concentração de 8,8x109UFC/mL com auxílio da escala de Mac-Farland. As concentrações
foram confirmadas por plaqueamento das diluições seriadas em Ágar Maconkey.
Os isolados de E.coli padronizadas na concentração de 8,8x109UFC/mL foram
inoculados nas aves com auxílio de pipetas e seringas esterilizadas, via intravaginal, na
proporção de 0,1 mL/ave. No dia da inoculação as aves foram submetidas a situações de
estresse passando por um período de seis horas de jejum alimentar e expostas a temperatura
ambiental de aproximadamente de 35 C.
57
TABELA 1 – Composição centesimal e valor nutricional calculado da ração basal

Ingredientes %
Milho grão 65,82
Farelo de soja 45% 20,79
Óleo de soja 1,50
Calcário calcítico 9,16
Fosfato bicálcico 0,99
Amido 0,50
Sal comum 0,45
DL-Metionina 0,25
L-Lisina HCL 0,25
L-Treonina 0,14
Vitini-ave* 0,10
Min-aves** 0,05
Total 100
Nutrientes Composição calculada
Energia Metabolizável (kcal/kg) 2.900
Proteína bruta (%) 15,6
Cálcio (%) 3,85
Fósforo disponível (%) 0,27
Lisina digestível (%) 0,85
Metionina + Cistina (%) 0,69
Metionina digestível (%) 0,47
Treonina digestível (%) 0,63
Sódio (%) 0,21
1
Suplemento vitamínico para poedeiras (composição/kg do produto): vitamina A 8.000,00 MUI, vitamina E
15.000,00 mg, vitamina D3 2.300,00 MUI, vitamina K3 1.000 mg, vitamina B1 200,00 mg, vitamina B2 3.000
mg, vitamina B6 1.700,00 mg, vitamina B12 10.000,00 mcg, niacina 20.000,00 mg, ácido fólico 500,00 mg,
Pant.Cálcio 9.600,00 mg, biotina 15,00 mg. 2Suplemento mineral para poedeiras (composição/kg do produto):
manganês 120.000,00 mg, zinco 120.000,00 mg, ferro 60.000,00 mg, cobre 18.000,00 mg, iodo 2.000,00 mg.
3.2.5 Variáveis estudadas

As variáveis estudadas foram pesquisa de E.coli em ovos e órgãos reprodutivos
(folículos ovarianos e oviduto). Além disso, foi realizada também análise bacteriológica de
suabes intravaginal colhidas no início do primeiro ciclo e no final do último ciclo.
Foram realizados suabes intravaginais em todas as aves antes da inoculação e no
final do período experimental, com o objetivo de avaliar a presença da Escherichia coli nesses
dois momentos. As amostras foram compostas por “pools” de dez suabes para cada repetição,
sendo 5 amostras por tratamento, totalizando 20 amostras de suabes intravaginal em cada
período de coleta. Os suabes foram transferidos para bolsas de coleta esterilizadas
(stomacher) contendo 10 mL de solução salina peptonada 0,1% e incubadas a 37°C por 18-24
58
horas. Após esse período, 1 mL de cada amostra foi transferido para meio de enriquecimento
Tryptic soy Broth (TSB ) e incubados a 37° C por 24 horas.
Posteriormente, a solução foi estriada em placas contendo ágar MacConkey e
incubada a 37°C por 24 horas. Após esse período, quatro colônias com características
sugestivas de Escherichia coli foram transferidas para tubos contendo ágar Tríplice açúcar e
ferro (TSI) e incubados a 37°C por 24 horas. Os tubos com TSI foram selecionados de acordo
com as características de crescimento e submetidos às provas bioquímicas: uréia, indol,
vermelho-metila e citrato. Foram consideradas amostras positivas aquelas que apresentaram
perfil bioquímico de Escherichia coli.
Na pesquisa de E. coli em ovos, as amostras de ovos foram coletadas no final de
cada período de produção, totalizando três coletas. Após as coletas dos ovos, realizadas de
maneira asséptica, os ovos foram identificados, encaminhados diretamente ao laboratório e
processados.
No laboratório separou-se quatro ovos, de cada repetição, que após assepsia com
álcool iodado a 2% na extremidade de menor diâmetro, foram quebrados e aquelas porções da
casca, que foram sanitizadas com álcool iodado a 2%, foram descartadas e o restante das
cascas, albumens e gemas foram separados. As frações separadas das amostras foram
colocadas em recipiente esterilizado.
Cada repetição originou três amostras: pool de 4 cascas, pool de 4 albumens e
pool de 4 gemas. As amostras foram homogeneizadas e 25g da casca, 25mL do albúmen e
25mL da gema foram colocados em bolsas de coleta esterilizadas (stomacher) contendo
225mL de solução salina peptonada a 1% e incubadas a 37oC/18-20h. Após esse período,
foram homogeneizadas e 1mL foi transferido para 9mL de caldo Trypticase Soy Broth (TSB)
seguindo-se a incubação a 37ºC/24h.
Após esse período, com auxílio de uma alça de níquel-cromo, alíquotas foram
plaqueadas por esgotamento em superfície para o ágar McConkey e novamente incubado a
37ºC/24h. Unidades Formadoras de Colônias (UFC) com características morfológicas de
Escherichia coli foram selecionadas e quatro UFC por placa foram transferidas para tubos
contendo tríplice açúcar ferro (TSI) e incubados a 37ºC/24h. As culturas em TSI com
crescimento sugestivo de Escherichia coli foram submetidos ao teste de urease, produção de
indol, vermelho metila, motilidade e teste do citrato de Simnons. Quando as provas
bioquímicas eram compatíveis com Escherichia coli as amostras foram consideradas
positivas.
59
Foram coletadas amostras de ovário e oviduto de três aves por unidade

experimental. As aves foram eutanasiadas por deslocamento cervical e foram coletados ovário
e oviduto.
Em condições assépticas, foram pesados 2,5g de oviduto, e coletados quatro a
cinco folículos ovarianos, obedecendo à ordem hierárquica de ovulação. As amostras foram
transferidas para bolsas de coleta contendo 22,5 mL de solução salina peptonada, foram
homogeneizadas e incubadas a 37°C por 24 horas.
Passado este período, 1 mL das amostras foram repicadas no meio de
enriquecimento TSA (trypticase soy agar) e incubados a 37° C por 18-24 horas. Após a
incubação, a alíquota dos caldos seletiva foi estriada em placas contendo ágar MacConkey e
incubada a 37°C por 24 horas. Transcorrido esse tempo, quatro colônias com as mesmas
características morfológicas foram transferidas para tubos contendo ágar TSI (tríplice açúcar e
ferro) e foram incubados a 37°C por 18-24 horas. Os tubos com TSI foram selecionados de
acordo com as características de crescimento e submetidos às provas: uréia, indol, vermelho-
metila e citrato. Foram selecionados os tubos que apresentaram perfil bioquímico de
Escherichia coli.
3.2.6 Análise estatística

Para interpretação dos resultados encontrados, os dados foram submetidos a
análise descritiva, com ênfase à distribuição de frequências absoluta e relativa dos resultados.
3.3. Resultados e discussão
3.3.1. Pesquisa de Escherichia coli

A frequência de Escherichia coli obtida de suabes intravaginal de poedeiras
comerciais alimentadas com rações contendo copaíba ou barbatimão, está demonstrada na
Tabela 2. Antes da inoculação experimental foram realizados suabes intravaginal e pode-se
verificar que as aves já estavam contaminadas com a Escherichia coli. Isso pode ser explicado
baseado no fato dessa bactéria fazer parte da microbiota intestinal da ave, no entanto, a
inoculação foi realizada para aumentar o desafio de campo. No final do período experimental,
quando aves já haviam sido alimentadas durante 12 semanas com rações contendo ou não os
aditivos verificou-se a presença da Escherichia coli, nos suabes intravaginal, de todos os
tratamentos.
60
Tabela 2 – Frequência de isolamento de Escherichia coli em suabes intravaginais de poedeiras

comerciais alimentadas com dietas contendo óleo de copaíba ou extrato de barbatimão antes e
após o período experimental
Período Controle Halquinol Copaíba Barbatimão
*
Antes (2 /5)** 40% (3/5) 60% (3/5) 60% (2/5) 40%
Final do exp. (2/5) 40% (1/5) 20% (1/5) 20% (2/5) 40%
Antibiótico (Halquinol)= 0,04g/kg de ração, Copaíba= 0,03g/kg de ração, Barbatimão=
0,04g/kg de ração.
* Uma Amostra corresponde a um “pool” de 10 suabes.
** Número de isolamentos positivos/ número de amostras analisadas.
No tratamento controle, no qual as aves foram alimentadas com rações sem

aditivos antimicrobianos, a freqüência de isolamentos de Escherichia coli nos suabes
intravaginal permaneceu estável, ou seja, não houve redução da frequência da bactéria. No
entanto, a frequência da presença de Escherichia coli, nos suabes intravaginal, reduziu para os
tratamentos com antibiótico ou com o óleo-resina de copaíba após as aves serem alimentadas
por um período de 12 semanas. Os tratamentos com antibiótico ou com óleo-resina de copaíba
apresentaram menor presença dessa bactéria em relação ao tratamento controle (sem aditivos),
20% (1/5). Os resultados sugerem que a inclusão dos aditivos, antibiótico ou óleo-resina de
copaíba nas rações experimentais podem ter contribuído para a redução da frequência de
isolados de Escherichia coli nas amostras.
O tratamento com barbatimão apresentou presença de Escherichia coli em suabes
intravaginal semelhante ao tratamento controle, em que a bactéria foi isolada em duas das
cinco amostras analisadas 40% (2/5), em amostras coletadas antes da inoculação
experimental. No entanto, após as aves serem alimentadas com ração com extrato de
barbatimão, a frequência do isolamento da Escherichia coli se manteve estável, ou seja, não
houve efeito benéfico do extrato de barbatimão para a redução da presença dessa bactéria em
suabes intravaginal. Esse resultado sugere que a dose de barbatimão incluída na ração pode
não ter sido suficiente para resultar em redução ou evitar a colonização da Escherichia coli.
Desse modo, a capacidade dos taninos presente no barbatimão em alterar o metabolismo das
membranas celulares de micro-organismos e formar complexos com íons metálicos,
necessários ao metabolismo microbiano17, não foi observado nesta análise. O nível de extrato
de barbatimão estudado nesta pesquisa foi baseado nos resultados obtidos por Moreira18,
sendo que esse nível (178,4% tanino na ração) não influenciou o desempenho das aves.
Os resultados de pesquisa de Escherichia coli em amostras de folículos
ovarianos e oviduto, no final do período experimental, estão apresentados na Tabela 3. Foi
observado nos folículos ovarianos do tratamento com óleo-resina de copaíba, que a frequência
61
de isolados de Escherichia coli foi semelhante ao tratamento controle (sem aditivos) com
6,7% (1/15). Esses dados sugerem que o óleo-resina de copaíba não reduziu a contaminação
dessa bactéria nos folículos, embora tenha reduzido nos suabes intravaginal.
Tabela 3 – Frequência de isolamento de Escherichia coli em folículos ovarianos e oviduto de

poedeiras comerciais alimentadas com dietas contendo óleo de copaíba ou extrato
de barbatimão, no final do período experimental
Estrutura reprodutiva
Tratamentos
Folículos Oviduto
Controle (1/15)** 6,7% (1/15) 6,7%
Antibiótico (2/15) 13,3% (3/15) 20,0%
Copaíba (1/15) 6,7% (4/15) 26,7%
Barbatimão (0/15) 0% (2/15) 13,3%
Antibiótico (Halquinol)= 0,04g/kg de ração, Copaíba= 0,03g/kg de ração, Barbatimão= 0,04g/kg de ração.
** Número de isolamentos positivos/ número de amostras analisadas
Nas aves do grupo alimentadas com rações contendo antibiótico foi verificada
a maior frequência da Escherichia coli, 13,3% (2/15) nos folículos ovarianos. No entanto,
para as aves do tratamento com extrato de barbatimão não houve, em nenhuma das amostras,
presença da Escherichia coli (0%).
Com relação ao estudo da presença de Escherichia coli no oviduto, todos os
tratamentos apresentaram amostras positivas. O tratamento com óleo-resina de copaíba
apresentou maior número de amostras positivas 26,7% (4/15) em relação ao tratamento
controle 6,7% (1/15) ou com antibiótico 20,0% (3/15).
Com relação ao tratamento com barbatimão, foi observada menor quantidade de
amostras positivas para Escherichia coli em relação ao tratamento com antibiótico, em que os
tratamentos com barbatimão e com antibiótico, 13,33%(2/15) e 20%(3/15), respectivamente,
das amostras de oviduto foram positivas para Escherichia coli. Assim, o tratamento com
barbatimão demonstrou-se mais eficiente, quanto a sua ação antimicrobiana, em relação ao
tratamento com antibiótico.
Nas condições experimentais proposta, aves velhas (64-76 semanas de idade) e
desafiadas com Escherichia coli, a ocorrência da bactéria foi relativamente baixa quando se
considera a quantidade de amostras analisadas. Porém, vale ressaltar que aves mais velhas são
menos susceptíveis a contaminações, visto que possuem uma microbiota mais madura e um
sistema imunológico mais eficiente19.
Em relação à frequência de isolamento de Escherichia coli nas diferentes
estruturas dos ovos (Tabela 4), pode-se observar que a frequência de contaminação da
62
bactéria na casca foi maior, seguida da contaminação da gema, a qual foi maior do que do
albúmen.
Tabela 4 – Frequência de isolamento de Escherichia coli em ovos de poedeiras comerciais

alimentadas com dietas contendo óleo de copaíba ou extrato de barbatimão no
período de 64 a 76 semanas
Período de
Controle Halquinol Copaíba Barbatimão
produção
Casca*
1° período (1/5)** 20% (2/5) 40% (0/5) (0/5)
2° período (1/5) 20% (1/5) 20% (0/5) (1/5) 20%
3° período (0/5) (1/5) 20% (0/5) (0/5)
Albúmen*
1° período (0/5) (1/5) 20% (0/5) (0/5)
2° período (0/5) (1/5) 20 % (2/5) 40% (0/5)
3° período (0/5) (0/5) (0/5) (0/5)
Gema*
1° período (0/5) (1/5) 20% (0/5) (0/5)
2° período (1/5) 20% (1/5) 20% (1/5) 20% (1/5) 20%
3° período (0/5) (0/5) (0/5) (0/5)
Antibiótico (Halquinol)= 0,04g/kg de ração, Copaíba= 0,03g/kg de ração, Barbatimão= 0,04g/kg de ração, 1° período= 64 a
68 semanas, 2° período= 68 a 72 semanas, 3° período= 72 a 76 semanas.
*Amostra corresponde a um “pool” de 4 ovos.
** Número de isolamentos positivos/ número de amostras analisadas.
Esse resultado já era esperado, visto que ocorre maior incidência de contaminação
na casca do ovo. A contaminação da casca do ovo pela bactéria pode ocorrer por via
horizontal, com o contato do ovo com as fezes no momento da passagem do ovo pela cloaca 20
ou logo após a ovoposição, pois nos primeiros minutos a cutícula ainda é imatura e permite a
penetração da Escherichia coli. No entanto, para que o agente permaneça na casca e migre
para o conteúdo, ele deve vencer as barreiras intrínsecas, como a cutícula, membranas da
casca e uma camada formada de material denso que delimita a membrana da casca e o
albúmen. A bactéria também pode se alojar nas membranas e ser impedida de penetrar no
conteúdo, pois as membranas da casca servem como filtros e retêm os microrganismos 21.
Provavelmente, estas barreiras intrínsecas contribuiram para menores índices de
contaminação no conteudo dos ovos quando comparado à frequencia de detecção de
Escherichia coli nas cascas.
Foi constatada a presença de E.coli na casca nos tratamentos controle, nos dois
primeiros períodos, 20% (1/5), sendo que no terceiro período não foi encontrado a presença
da bactéria. As cascas dos ovos das aves alimentadas com rações contendo antibiótico
apresentaram maior frequência da bactéria no primeiro período, 40% (2/5), havendo redução
63
da frequência no segundo e no terceiro período, 20% (1/5). No entanto, os tratamentos com

rações contendo óleo-resina de copaíba ou extrato de barbatimão eliminaram ou reduziram a
presença da bactéria na casca dos ovos. Esses resultados sugerem que o antibiótico apresentou
efeito positivo, provocando redução da presença da bactéria na casca e o óleo-resina de
copaíba e o extrato barbatimão mostraram maior capacidade em reduzir a quantidade de
bactérias em cascas de ovos.
Não foi observada contaminação do albúmen pela Escherichia coli nos
tratamentos controle, ou com barbatimão no primeiro, segundo e terceiro período de
produção. As amostras de albúmen do tratamento com óleo-resina de copaíba apresentaram-
se positivas para a presença de Escherichia coli em 40% (2/5) das amostras apenas no
segundo período de produção. Já nas amostras de albúmen do tratamento com antibiótico 20%
(1/5) apresentaram positividade para a Escherichia coli no primeiro e segundo período de
produção, não sendo verificada a ocorrência da bactéria no terceiro período de produção.
Assim, foi observado que, embora as amostras de albúmen do tratamento com óleo-resina de
copaíba tenham apresentado maior frequência de Escherichia coli em relação ao tratamento
com antibiótico no segundo período de produção, os resultados mostram que a copaíba obteve
resultados semelhantes ao antibiótico no último período estudado.
Pela análise dos resultados, houve menor número de isolados em amostras de
albúmen, em relação às amostras de casca, ou gema. A baixa frequência de isolados em
albúmen pode estar relacionada à atividade antimicrobiana de algumas proteínas encontradas
no albúmen, como por exemplo, a lisozima, a ovotransferrina, ovomucina, dentre outras19.
A contaminação do albúmen pode ter ocorrido via oviduto, uma vez que foi
observada a presença de Escherichia coli nessa estrutura, mesmo que em baixa frequência, e
que a infecção na porção do oviduto pode levar a deposição do microorganismo no albúmen22.
No entanto, vale ressaltar que a contaminação do albúmen via oviduto não é a principal via de
contaminação no albúmen, sendo considerados fatores, como temperatura e armazenamento,
os principais responsáveis pela contaminação23.
As amostras de gema apresentaram frequência de isolamento de Escherichia coli
em todos os tratamentos em pelo menos um dos três períodos de produção estudados. Foi
verificada a presença da bactéria em 20% (1/5) na gema e, apenas no segundo período de
produção, nos tratamentos controle, com copaíba, ou com barbatimão. As amostras de gema
do tratamento com antibiótico apresentaram positividade para Escherichia coli em 20% (1/5)
no primeiro e segundo período de produção, e no último período de produção os resultados
64
foram semelhantes aos demais tratamentos, em que não foi observada a ocorrência de
Escherichia coli.
Com esses resultados é possível sugerir que a contaminação observada em
folículos pode não resultar em ovos com gemas contaminadas por Escherichia coli, visto que
a frequência de isolamento da bactéria foi baixa nas amostras analisadas de gema. A gema
constitui-se em um substrato adequado para a multiplicação bacteriana e, diferente das outras
estruturas do ovo, não contem mecanismos que impeçam o desenvolvimento de bactérias24.
Isso permite inferir que a contaminação pode ser oriunda do folículo ovariano infectado de
aves portadoras inaparentes.
A contaminação do albúmen e da gema pode não estar relacionada à
contaminação da casca, visto que a penetração de microorganismos via casca ocorre em maior
frequência com o maior período de armazenamento. Os ovos utilizados para realização deste
estudo foram coletados após a postura e mantidos em temperatura de aproximadamente 28ºC
por aproximadamente 24 horas. Assim, provavelmente, não houve tempo para que ocorressem
alterações na membrana vitelínica, devido a liquefação do albúmen, que facilitaria a perda de
íons de ferro e de nutrientes da gema para o albúmen, e com isso, atrair microrganismos25. Por
outro lado, a contaminação da gema e do albúmen do ovo pode ter ocorrido no momento da
formação do ovo. De acordo com Oliveira19, o contato das estruturas do ovo com patógenos
pode ocorrer ainda no ovário ou no oviduto da ave (via transovariana/contaminação vertical),
ou por relação direta com contaminantes fecais (via contaminação da casca/ contaminação
horizontal).
65
3.4 Conclusões
A inclusão de 0,03 g/kg de ração de óleo-resina de copaíba em rações de
poedeiras comerciais é recomendada, uma vez que a adição desse produto contribuiu para
diminuir a frequência de isolados dessa bactéria nos folículos ovarianos e nos ovos.
É recomendada a inclusão de 0,04 g/kg de extrato de barbatimão em rações de
poedeiras comerciais, para reduzir a contaminação de Escherichia coli nos folículos
ovarianos, oviduto e ovos.
O uso do óleo-resina de copaíba ou do extrato de barbatimão reduziu a ocorrência
de Escherichia coli, podendo substituir o antibiótico.
66
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Salmonella. Avian Pathol. 2008; 37(4):399-406.
68
CAPÍTULO 4. CONSIDERAÇÕES FINAIS
A realização deste trabalho é fundamentada na crescente preocupação em realizar

a substituição dos antibióticos na avicultura de postura, sem que haja prejuízo ao desempenho
animal e ainda não represente risco a saúde humana.
Produtos extraídos de plantas, como o óleo-resina de copaíba e o extrato de
barbatimão, tem se revelado excelentes alternativos ao uso dos antibióticos, devido aos seus
vários efeitos positivos. Os efeitos desses fitogênicos são atribuídos aos diversos compostos,
que agem individualmente ou em conjunto, presentes em suas estruturas.
Na avicultura de postura, o óleo-resina de copaíba e o extrato de barbatimão, têm
sido testados quanto ao seu potencial antimicrobiano, além de seus efeitos como antioxidante.
No entanto, existe uma grande variação nos resultados encontrados, sugerindo a realização de
mais estudos para melhor elucidar os efeitos desses fitogênicos. A grande variação dos
resultados encontrados estão relacionados com o modo de ação das substâncias presentes nas
diferentes formas disponíveis de copaíba e de barbatimão, além da ausência de metodologias
mais eficientes e padronizadas, dificultando com isso o aproveitamento adequado desses
fitogênicos.
A utilização do óleo-resina de copaíba e do extrato de barbatimão proporcionou
alterações em algumas variáveis utilizadas para testar o potencial antimicrobiano desses
fitogênicos, sugerindo a utilização desses em substituição aos antibióticos utilizados na
alimentação de poedeiras comerciais.

Dissertação - Aleane Francisca COrdeiro Barbosa - 2015

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UNIVERSIDADE FEDERAL DE GOIÁS

ESCOLA DE VETERINÁRIA E ZOOTECNIA

ÓLEO-RESINA DE COPAÍBA E EXTRATO DE BARBATIMÃO NA

Aleane Francisca Cordeiro Barbosa

ALEANE FRANCISCA CORDEIRO BARBOSA

ÓLEO-RESINA DE COPAÍBA E EXTRATO DE BARBATIMÃO NA

Dissertação apresentada para

A minha família, em especial a minha mãe Enide

“Eu sou o que posso, na medida que me permitem.

Padre Fábio de Melo

CAPÍTULO 1. CONSIDERAÇÕES INICIAIS ....................................................................... 12

2.2.2 Alojamento das aves ........................................................................................................ 35

2.2.3 Delineamento experimental ............................................................................................. 35

2.2.4 Manejo experimental ....................................................................................................... 36

2.2.5 Preparação do inóculo de Escherichia coli e infecção experimental .............................. 37

2.2.6 Variáveis estudadas ......................................................................................................... 37

2.2.7 Análise estatística ............................................................................................................ 38

2.3. Resultados e discussão....................................................................................................... 39

2.3.2. Qualidade dos ovos......................................................................................................... 43

2.4 Conclusões .......................................................................................................................... 48

3.2.2 Alojamento das aves ........................................................................................................ 55

3.2.3 Delineamento experimental ............................................................................................. 55

3.2.4 Preparação do inóculo de Escherichia coli e infecção experimental .............................. 56

3.2.5 Variáveis estudadas ......................................................................................................... 57

3.2.6 Análise estatística ............................................................................................................ 59

3.3. Resultados e discussão....................................................................................................... 59

3.4 Conclusões .......................................................................................................................... 65

TABELA 1. Composição centesimal e valor nutricional calculado da ração

TABELA 1. Composição centesimal e valor nutricional calculado da ração

Óleo-resina de copaíba e extrato de barbatimão na dieta de poedeiras

Palavras-chave: Aditivos, Copaífera, fitogênicos, galinhas, Stryphnodendron adstringens.

Keywords: Additives, Copaífera, phytogenics, hens, Stryphnodendron adstringens.

CAPÍTULO 1. CONSIDERAÇÕES INICIAIS

Os aditivos melhoradores de desempenho são utilizados na produção animal desde

1.1 Uso de aditivos fitogênicos na avicultura

As plantas desenvolvem uma série de metabólitos com funções complementares

metabolizabilidade ileal de MS e de amido na fase inicial, e da proteína bruta (PB) na fase

1.4 Escherichia coli

Outro fator importante ligado a resistência aos antimicrobianos, é a pouca

1. Silva CR. Uso de probiótico em rações de frangos de corte: desempenho, digestibilidade

3. Bellaver C. O uso de microingredientes (aditivos) na formulação de dietas para suínos e

5. Miltemburg G. Promotores e aditivos de crescimento em Avicultura. Conferência apinco

6. Huyghebaert G, Ducatelle R, Van Immerseel F. An update on alternatives to

11. Telles VP. Manejo Tradicional No Cerrado Resumos do II Congresso Brasileiro de

22. Bardal D. Atividade antimicrobiana de barbatimão Stryphnodendron adstringens

24. Almeida E. Aditivos digestivos e equilibradores da microbiota intestinal para frangos de

30. Brugalli I. Alimentação alternativa: a utilização de fitoterápicos ou nutracêuticos como

49. Cascon V, Gilbert B. Characterization of the chemical composition of oleo resins of

51. Masson DS. Atividade cicatrizante e antimicrobiana do óleo-resina de copaíba (Copaifera

57. Guidotti M. O efeito do óleo-resina de copaíba sobre o desempenho e imunidade de

2015]. Disponível em: http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0100-

70. Moreira JS. Extratos de barbatimão (stryphnodendron adstringens) e pacari (lafoensia

71. Fonseca P, Librandi APL. Avaliação das características físico-químicas e fitoquímicas de

72. Scalbert A. Antimicrobial properties of tannins. Phytochemistry. 1991; 30(12):3875-83.

77. Nogueira FA. Efeito do barbatimão verdadeiro (Stryphnodendron adstringens mart.)

CAPITULO 2. DESEMPENHO E QUALIDADE DE OVOS DE POEDEIRAS

RESUMO: Objetivou-se com este estudo avaliar a adição do óleo-resina de copaíba ou

Palavras-chave: Aditivos, Copaífera, desempenho, poedeiras comerciais, qualidade de ovos,

CHAPTER 2. PERFORMANCE AND EGG QUALITY OF LAYING HENS FED

Keywords: Additives, Copaífera, egg quality, laying hens, performance,