UNIVERSIDADE FEDERAL DE JATAÍ

COORDENAÇÃO DE MEDICINA VETERINÁRIA

PRODUÇÃO DE EMBRIÕES IN VITRO COM SEMEN SEXADO DE

TOUROS NELORE
Artigo Científico

Eduarda Letícia da Silva Barrozo

Orientador: Prof. Dr. Vinício de Araújo Nascimento

JATAÍ
2022
 EDUARDA LETÍCIA DA SILVA BARROZO

PRODUÇÃO DE EMBRIÕES IN VITRO COM SEMEN SEXADO DE

TOUROS NELORE
Artigo Científico

Trabalho de Conclusão de Curso de Graduação

para obtenção de título de Médico Veterinário
junto ao curso de Medicina Veterinária da
Universidade Federal de Jataí

Área de Concentração:
Reprodução animal
Orientador:
Prof. Dr. Vinício de Araújo Nascimento

JATAÍ
2022
 Ficha de identificação da obra elaborada pelo autor, através do
Programa de Geração Automática do Sistema de Bibliotecas da UFJ.

Barrozo, Eduarda Letícia da Silva

PRODUÇÃO DE EMBRIÕES IN VITRO COM SEMEN SEXADO
DE TOUROS NELORE / Eduarda Letícia da Silva Barrozo. - 2022.
20, v f.: il.

Orientador: Prof. Dr. Vinício de Araújo Nascimento .

Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação) - Universidade
Federal de Jataí, Unidade Acadêmica Especial de Ciências Agrárias,
Medicina Veterinária, Jataí, 2022.
Bibliografia. Anexos. Apêndice.
Inclui siglas, fotografias, abreviaturas, símbolos, tabelas, lista de
figuras, lista de tabelas.

1. Biotécnicas da Reprodução. 2. Bovinos. 3. Conversão

embrionária . 4. Eficiência Reprodutiva. I. Nascimento , Vinício de
Araújo , orient. II. Título.

CDU 639.09
 AGRADECIMENTOS
Primeiramente, agradeço a Deus por guiar meu caminho e dar-me sabedoria para
cada escolha feita até aqui, agradeço pela força para perseverar e não desistir diante das
barreiras impostas na jornada. Em segundo lugar agradeço a Minha Nossa Senhora por sempre
interceder por mim diante do filho dela, pois tenho certeza que a passo meu você se fez presente,
defendendo-me com unhas e dentes como uma mãe faz com um filho.
Agradeço imensamente a minha família, em especial meus pais, Genivaldo da Silva
Barrozo e Antonia Célia Rodrigues, por serem meus alicerces em todos os momentos desta
minha trajetória de vida. Agradeço por sempre expressarem palavras positivas, pelo amor e
carinho que sempre recebi de vocês, sem o apoio de vocês jamais teria superado todos os
momentos difíceis, vocês sem dúvidas foram a peça fundamental para a realização deste sonho.
Agradeço a minha tia Maria Lucilene da Silva Barrozo por todo o carinho e ajuda durante minha
trajetória de estudos, sempre acreditando no meu potencial. Agradeço com todo meu coração
aos meus irmãos Eduardo Kaic da Silva Barrozo, Pedro Henrique da Silva Barrozo e Carla
Karine pela a força e compreensão nos momentos que estive longe devido aos estudos, agradeço
por vocês se fazer sempre presente em minha vida mesmo que por vídeo chamada ou ligações,
tenho convicção que sem vocês metade desse sonho não seria realizada, pois sempre procurei
ser alguém em quem vocês podem espelhar-se.
Dedico também meu carinho e agradecimentos ao meu namorado Diego da Silva
Conceição, por sempre incentivar-me e apoiar-me, segurando na minha mão e pronunciando
que não estava sozinha e de fato não estava, a cada obstáculo encontrado procuramos uma
solução e superamos juntos. Você tem minha gratidão por sempre motivar-me e estar ao meu
lado principalmente nesta reta final da minha graduação.
A todos os meus amigos, em especial ao Alisson Oliveira Costa, Flávia Viana Leso,
Márcio Batistela e Paula Marinho, por todos os momentos de apoio nos momentos difíceis, por
todas as horas divididas estudando juntos para cada prova ou atividade, por todos os tererés e
cafés com bolos na casa do Alisson e por todos os outros momentos de amizade, felicidades,
choro, dificuldades e companheirismo, que vivenciamos juntos durante esses 5 anos. Agradeço
as frases de apoio que recebi de cada um de vocês nos momentos que pensei que não chegaria
até aqui.
Agradeço a todos os mestres, em especial Prof. Dr. Dirceu Guilherme de Souza
Ramos, ao Prof. Dr. Vinício de Araújo Nascimento e ao Prof. Dr. Klaus Casaro Saturnino pelos
ensinamentos, e os conselhos extraclasse que vão muito além da sua função de ensinar, mas de
carinho e amizade. Vocês foram muitas vezes um pouco pai, dando aquele apoio especial em
momentos difíceis da faculdade, puxando as orelhas quando necessário ou apenas dando aquele
apoio com suas frases motivacionais e reflexivas.
Agradeço ao meu orientador Prof. Dr. Vinício de Araújo Nascimento, pela
paciência, dedicação e disponibilidade em me auxiliar na elaboração deste trabalho mesmo com
tantas outras atribuições profissionais e pessoais. Agradeço por todo aprendizado que obtive
com você, desde a sala de aula até o presente momento de orientador.
Agradeço imensamente a toda equipe da PECPLAN ABS da filial de Xinguara-PA por
todo o conhecimento compartilhado, pela oportunidade, por toda a dedicação e paciência em
tirar dúvidas, obrigada por compartilharem comigo um pouco da experiência de cada um, pois
com certeza todo o aprendizado obtido será de grande importância para minha vida acadêmica
e profissional. Agradeço também a minha supervisora Nayara Gonçalves, a qual é um exemplo
de líder e profissional a ser seguida, gratidão pela oportunidade do estágio. Deixo também meus
agradecimentos a Sara Gessica Paiva por toda ajuda e paciência durante o estágio, por dúvidas
que você sanou, por toda ajuda recebida para a formulação deste trabalho, meu muito obrigada
pois, sem você essa obra não seria possível.
 i

SUMÁRIO

RESUMO v

1. INTRODUÇÃO 1
2. OBJETIVOS 4
2.1 OBJETIVO GERAL 4
2.2 OBJETIVO ESPECÍFICO 4
3. PRODUÇÃO DE EMBRIÕES IN VITRO COM SÊMEN SEXADO DE TOUROS
NELORE 5
4. CONSIDERAÇÕES FINAIS 16
REFERÊNCIAS 17
ANEXOS 18
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LISTA DE FIGURAS

Figura 1-Oócitos em criotubos no meio de MIV, prontos para passar no meio de lavagem e em seguida
iniciar o processo da fertilização in vitro. ................................................................................................8
Figura 2- Oócitos prontos para iniciar o processo de fertilização in vitro (A), oócitos em contato com o
sêmen (B). ................................................................................................................................................9
Figura 3- Zigotos no início do cultivo in vitro (A). Zigotos em divisão celular durante o cultivo (B). .10
Figura 4- Embriões produzidos no processo da PIVE. ..........................................................................10
 iii

LISTA DE TABELAS

Tabela 1- Oócitos expostos na FIV, zigotos cultivados e porcentagem da conversão de oócitos em

zigotos após a fecundação com o uso de sêmen convencional e sexado de touros da raça Nelore e a
diferença do valor-P em relação a produção individual de cada sêmen .................................................11
Tabela 2- Zigotos cultivados e os zigotos clivados, com respectiva porcentagem de clivagem com o uso
de sêmen convencional e sexado por touros da raça Nelore, e a diferença do valor-P em relação a
produção individual de cada sêmen .......................................................................................................12
Tabela 3- Zigotos clivados e embriões produzidos, com respectiva porcentagem de embriões viáveis
com o uso de sêmen convencional e sexado por touros da raça Nelore, e a diferença do valor-P em
relação a produção individual de cada sêmen. .......................................................................................13
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LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS

ASBIA Associação brasileira da indústria de produtos para animais de estimação

BE Blastocisto Eclodido
BI Blastocisto Inicial
BL Blastocisto
BX Blastocisto Expandido
CIV Cultivo in vitro
CO2 Gás Carbônico
°C Graus Celsius
Hg Mercúrio
FIV Fertilização in vitro
IBGE Instituto brasileiro de geografia e estatística
IA Inseminação Artificial
IATF Inseminação Artificial em Tempo Fixo
IETS Sociedade Internacional de Transferência de Embriões
MIV Maturação in vitro
MO Mórula
mm Milímetros
ml Mililitros
OPU Ovum pick up
PIVE Produção in vitro de embriões
SOF Synthetic oviduct fluid
SBTE Sociedade Brasileira de Tecnologia de Embriões
SAS Statistical Analysis System
TE Transferência de embriões
TO Transportadora de oócitos
UFJ Universidade federal de Jataí
UNESP Universidade Estadual Paulista
% Porcento
 v

RESUMO

Objetivou-se avaliar o efeito do tipo de sêmen na conversão embrionária na produção de embriões in

vitro (PIVE) de bovinos, utilizando espermatozóides provenientes de sêmen convencional e sêmen
sexado de touros da raça Nelore. Os dados comparativos são pertencentes a empresa Pecplan ABS
Importação e Exportação Ltda, especificamente da filial de Xinguara, localizada no sudeste do estado
do Pará, a qual atendeu propriedades em todo o estado do Pará e nos estados vizinhos Maranhão,
Tocantins e Mato Grosso durante a estação de monta realizada no ano de 2021 a 2022. Foram
utilizados nove touros da raça nelore, produtores de ambos os tipos de sêmen convencional e sexado,
de forma a avaliar e comparar a conversão embrionária nas seguintes etapas da PIVE: Fertilização in
vitro, Cultivo in vitro e a quantidade final de embriões viáveis produzidos por cada tipo de sêmen. Os
oócitos foram maturados in vitro e fertilizados in vitro com sêmen convencional e sexado, os zigotos
produzidos foram cultivados in vitro durante sete dias, sendo realizada a classificação e envase dos
embriões produzidos no dia sete para transferência a fresco ou envase para congelamento rápido, a
técnica de vitrificação, ou congelamento lento, a técnica de Direct transfer. Foram maturados e
fertilizados com sêmen convencional 1.285 oócitos e 1.155 oócitos com sêmen sexado, obtendo 1.167
(90,55%) e 1.051 (90,68%) zigotos na fecundação com sêmen convencional e sexado,
respectivamente (P=0,8411). No cultivo in vitro durante sete dias, avaliou-se a clivagem no dia
quatro, ocorrendo a clivagem embrionária em 769 (67,42%) dos zigotos provenientes de sêmen
convencional e 540 (55,12%) dos zigotos provenientes de sêmen sexado (P=0,8411). Não houve
diferença estatística em ambas as variáveis analisadas, a FIV e a clivagem no dia 4 de cultivo in vitro.
No dia 7, avaliou-se a quantidade de embriões viáveis produzidos, sendo 428 (53,55%) embriões
provenientes do sêmen convencional e 138 (30,64%) embriões viáveis provenientes de sêmen sexado
(P=0,0001). Houve diferença significativa na quantidade de embriões viáveis de sêmen convencional
em relação ao sexado. Portanto, há melhor conversão embrionária na produção de embriões in vitro
com o uso de sêmen convencional em relação ao sêmen sexado de touros da raça Nelore.
Palavras-Chave: Biotécnicas da Reprodução, Bovinos, Conversão embrionária, Eficiência
Reprodutiva
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1. INTRODUÇÃO

No mercado externo o crescimento da competitividade trouxe consigo maior necessidade de

produção de carne, sendo indispensável a busca pelo aumento da eficiência reprodutiva e produtiva
do rebanho bovino no Brasil, que no ano de 2020 atingiu o total de 218,2 milhões de cabeças (IBGE,
2021). Desta maneira, a economia Brasileira nas últimas décadas sofreu várias modificações no que
tange ao setor pecuário, alterações diretamente ligadas às biotecnologias empregadas na reprodução
bovina, tanto na bovinocultura de leite quanto na de corte, permitindo assim ampliar o potencial
reprodutivo do rebanho nacional.
Uma das primeiras biotecnologias usadas como ferramenta para o melhoramento genético foi
a inseminação artificial (IA) que teve o seu primeiro registro em 1912, pelo Médico Veterinário
Epaminondas Alves de Souza, cujos principais avanços datam da década de 1930 (SEVERO, 2015).
A estratégia do uso da inseminação artificial em tempo fixo (IATF) aprimorou a biotécnica IA com
a sincronização da ovulação das fêmeas, padronização dos rebanhos e concentração dos nascimentos.
A maior utilização da IA trouxe melhorias ao rebanho nacional pelo melhoramento genético dos
animais com o sêmen de touros geneticamente superiores.
No Brasil e no mundo o enredo da trajetória da inseminação artificial está intimamente ligado
à PECPLAN ABS. A empresa foi fundada nos Estados Unidos em 1941, quando Rockefeller Prentice
e Phil Higley desenvolveram tecnologia para congelar sêmen em um mini canudo para depositá-lo
artificialmente no útero de fêmeas bovinas. Esta revolução tecnológica abriu as portas para uma nova
era de expansão internacional na indústria pecuária. Em 1959, o Brasil recebeu sua primeira dose de
sêmen da ABS Global. Em 1970 foi criada a Pecuária Planejada (Pecplan), empresa pioneira na
importação e distribuição de materiais necessários para a inseminação em todo o país.
O uso de sêmen sexado na produção de embriões in vitro objetivou agregar no mercado de
melhoramento genético de forma a acelerar a produção dos rebanhos de leite ou corte,
consequentemente viabilizar a produção em grande escala de fêmeas e machos do rebanho mundial.
A técnica de sexagem espermática bovina agrega ao produtor de forma vantajosa, visto que
permite o produtor escolher o sexo das proles do rebanho, conforme o foco da produção da
propriedade (TRIGAL et al., 2012). Essa tecnologia aumenta o melhoramento genético de ambos os
segmentos tanto de corte quanto de leite, permitido aos criadores de gado leiteiro a manutenção do
rebanho através de novas matrizes, enquanto para os criadores de gado de corte, viabiliza o aumento
de machos para a produção de carne (MOORE; THATCHER, 2006). A citometria de fluxo é a técnica
mais utilizada para a sexagem de sêmen, a qual realiza a separação dos espermatozoides X e Y, com
 2

uma eficiência e sensibilidade acima de 90%, para produzir animais do sexo desejado (JOHNSON;
FLOOK; HAWK, 1989)
No Brasil o sêmen sexado através da citometria de fluxo é comercializado desde 2004. As
empresas fornecedoras de sêmen sexado anunciam a acurácia mínima de 85% para o sexo dos
bezerros. A técnica da citometria de fluxo consiste na emissão de raios laser, coloração diferencial
dos espermatozoides e as forças hidrodinâmicas que os direcionam durante a separação (Garner,
2006). A separação dos espermatozoides no aparelho de citometria de fluxo se dá através da
intensidade de fluorescência emitida após a adição de um corante fluorescente.
Para a realização da técnica de sexagem tem-se um alto custo, o que consequentemente reflete
no preço das doses de sêmen sexado, além desse tem outro fator que reduz o seu uso comercialmente,
a concentração espermática a qual é consideravelmente menor em relação ao sêmem convencional,
cerca de dois milhões de espermatozoides por palheta no sêmen sexado, enquanto tem-se vinte
milhões de espermatozoides por palheta no sêmen convencional. O uso dessa técnica é mais indicado
para a produção de embriões in vitro especificamente na etapa da fertilização in vitro ou a micro
injeção de espermatozoides, desta forma maximiza o uso do reduzido número de espermatozoides
sexado (WINDSOR et al., 1993).
O mercado de implementações genéticas cresceu substancialmente nos últimos anos,
permitindo o desenvolvimento de outras biotécnicas, a Transferência de Embriões (TE) e a Produção
in vitro de embriões (PIVE). A Sociedade Brasileira de Tecnologia de Embriões (SBTE) realizou em
2019 um levantamento de dados estatísticos sobre a produção e transferência de embriões bovinos no
Brasil, estimando que houve um total de 304.269 embriões somada as duas técnicas coletas de
embriões in vivo e produzidos in vitro, em ambos os segmentos leite e corte, sendo informado que a
maior parte dos embriões foram gerados in vitro. Através destes dados tem-se uma visão mais ampla
do tamanho do mercado brasileiro, de forma a reafirmar a posição considerável do país no cenário
mundial da PIVE, o qual ocupou o 2º maior produtor de embriões bovinos no ano 2019 (VIANA,
2021)
Entre os anos de 2012 e 2013, o Brasil conquistou um marco importante, o qual tornou-se
líder no uso da biotécnica PIVE, tornando-se modelo para ser observado por outros países nos anos
subsequentes (VIANA, 2012). Atualmente, apresenta uma importância significativa no cenário da
PIVE, visto que possui uma das maiores empresas de Biotecnologia do mundo a ABS Pecplan, a qual
está na vanguarda da genética e tecnologia animal desde 1941. O emprego elevado das tecnologias
de embriões causou impacto nos programas de melhoramento e, consequentemente, na evolução
genética dos rebanhos de corte e leite (VIANA et al., 2017).
A perspectiva de comercialização e produção no mercado de embriões bovino deve continuar
em ascensão, tendo em vista que a produção de embriões in vitro potencializa mais e mais o
 3

melhoramento genético na pecuária de corte e leite. Sendo esta técnica cada vez mais procurada por
produtores brasileiros.
 4

2. OBJETIVOS

2.1 OBJETIVO GERAL

Objetivou-se comparar o uso de sêmen sexado e de sêmen convencional de touros da raça

Nelore na produção in vitro de embriões (PIVE), durante a estação de monta do ano de 2021 a
2022, realizada na empresa ABS Pecplan, laboratório de Xinguara (PA).

2.2 OBJETIVO ESPECÍFICO

Avaliar de forma comparativa o desempenho produtivo de sêmen convencional e sexado

na produção de embriões in vitro, por meio da análise das variáveis oócitos fertilizados, zigotos
cultivados e embriões produzidos de touros da raça nelore.
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3. PRODUÇÃO DE EMBRIÕES IN VITRO COM SÊMEN SEXADO DE

TOUROS NELORE
In vitro embryo production with sexed semen of nelore bulls.

1-
Médica Veterinária – Universidade Federal de Jataí – UFJ, Campus Jatobá – GO.
E-mail: [email protected]. ORCID: https://orcid.org/0000-0001-9850-6111
2-
Docente do curso de Medicina Veterinária – Universidade Federal de Jataí – UFJ, Campus Jatobá – GO.
______________________________________________________________________

Resumo

Objetivou-se analisar o efeito do tipo de sêmen, convencional e sexado, na produção in vitro de embriões. Foram
maturados e fertilizados com sêmen convencional 1.285 oócitos e 1.155 oócitos com sêmen sexado, obtendo 1.167
(90,55%) e 1.051 (90,68%) zigotos na fecundação com sêmen convencional e sexado, respectivamente (P=0,8411). No
cultivo in vitro, avaliou-se a clivagem embrionária em 769 (67,42%) dos zigotos provenientes de sêmen convencional e
540 (55,12%) dos zigotos de sêmen sexado (P=0,8411). Não houve diferença estatística em ambas as variáveis analisadas.
No dia 7, avaliou-se a quantidade de embriões viáveis produzidos, sendo 428 (53,55%) embriões convencional e 138
(30,64%) embriões viáveis provenientes de sêmen sexado (P=0,0001). Houve diferença significativa, portanto, obteve
melhor conversão embrionária com o sêmen convencional em relação ao sêmen sexado de touros da raça Nelore.

Palavras-chave: Biotécnicas da Reprodução, Bovinos, Conversão embrionária, Eficiência Reprodutiva

Abstract

The objective was to analyze the effect of the type of semen, conventional and sexed, on the in vitro production of
embryos. A total of 1,285 oocytes and 1,155 oocytes with sexed semen were matured and fertilized with conventional
semen, obtaining 1,167 (90.55%) and 1,051 (90.68%) zygotes in fertilization with conventional and sexed semen,
respectively (P=0.8411). In in vitro culture, embryo cleavage was evaluated in 769 (67.42%) of zygotes from conventional
semen and 540 (55.12%) from zygotes from sexed semen (P=0.8411). There was no statistical difference in both analyzed
variables. On day 7, the number of viable embryos produced was evaluated, being 428 (53.55%) conventional embryos
and 138 (30.64%) viable embryos from sexed semen (P=0.0001). There was a significant difference, therefore, it obtained
better embryonic conversion with conventional semen in relation to sexed semen of nelore bulls.

Keywords: Reproduction Biotechniques, Cattle, Embryonic Conversion, Reproductive Efficiency.

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1. Introdução

A Produção in vitro de embriões (PIVE) é umas das biotécnicas de reprodução que atualmente
vem ganhando destaque acentuado na pecuária brasileira, visto que possibilita introduzir no rebanho,
animais de alto valor genético a partir, de óvulos e espermatozoides geneticamente selecionados e
avaliados, objetivando produzir mais descendentes em menor intervalo de tempo, de forma a
maximizar o melhoramento genético mundial. Assim, é a biotécnica que possibilita a difusão da
seleção genética materna. No ciclo estral in vivo apenas um oócito chega até a ovulação, com a técnica
da PIVE espera-se que inúmeros oócitos tornem-se embriões (MERTON et al., 2003, p. 651).
Segundo BERTOLINI e BERTOLINI (2009, p. 184), houve quatro gerações de tecnologia da
reprodução assistida em humanos e animais. A primeira geração foi marcada pela: Inseminação
Artificial (IA) e a criopreservação de gametas e embriões; já na segunda geração tem-se a
superovulação e transferência de embriões; enquanto na terceira geração foi marcada pela sexagem
espermática e embrionária, a fertilização in vitro e recuperação de oócitos; e a quarta geração que
inclui a clonagem por transferência nuclear de células embrionárias e/ou somáticas, a transgenia e a
biologia de células-tronco. Portanto, a cada geração houve uma evolução significativa pela relação
entre as gerações.
No que tange ao uso de sêmen convencional e sexado, a pecuária Brasileira vem registrando
ano após ano, elevados índices de coletas de doses de sêmen bovino, sendo registrado o maior número
de coleta no primeiro semestre de 2021, total de 10.788.006 doses de sêmen, em virtude de maior uso
das biotécnicas de reprodução, as quais têm potencializado cada vez mais o mercado de
melhoramento genético (ASBIA, 2021).
Segundo os dados da Associação Brasileira de Inseminação Artificial (ASBIA, 2018), o uso
do sêmen sexado aumentou significativamente em 2018 especificamente de janeiro a setembro, sendo
comercializada um total de 306.052 doses de sêmen sexado para pecuária de leite e corte, senda estas
doses para importação e comercialização nacional, no mesmo período de janeiro a setembro de 2019
foram comercializadas 384.515 doses registrando (alta de 25,64%), no ano de 2020 chegou a
comercializar 503.078 doses, havendo um crescimento de 30,83%. Esse crescimento se dá em virtude
da importância para a pecuária de leite, visto que a seleção de fêmeas para o pecuarista de leite é mais
importante, enquanto o pecuarista de corte se beneficia com o nascimento de ambos os sexos. Além
disso, outras vantagens do uso dessa tecnologia de sexagem se aplica na redução de partos distócicos,
redução da taxa de descartes de machos, acelera o melhoramento genético do rebanho, aumenta a
taxa de nascimento de fêmeas, além disso essa ferramenta da sexagem pode ser usada em conjunto
com as estratégias de uso do sêmen convencional no rebanho, de forma que o sexado seja usado
 7

preferencialmente em novilhas, visto que as jovens são mais fáceis de emprenhar ou em vacas com
ótimo desempenho reprodutivo.
A técnica de congelamento de sêmen em palhetas, viabilizou a realização da técnica de
produção de embriões in vitro, visto que para a realização da etapa da Fertilização in vitro na PIVE
faz-se o uso de sêmen convencional ou sexado. A junção de ambas as biotécnicas promoveram de
forma significativa o melhoramento genético por meio de acasalamentos de animais de alto valor
genético, gerando descendentes geneticamente superiores.
No Brasil tem-se uma comercialização e utilização mais elevada de sêmen convencional em
relação ao sêmen sexado, em virtude do elevado preço do sêmen sexado decorrente do processo de
sexagem, além deste tem-se uma baixa taxa de prenhez quando comparado com o convencional. O
processo de sexagem mais utilizado atualmente é a técnica de citometria de fluxo, através desta é
possível realizar a sexagem do sêmen bovino, promovendo a separação dos espermatozoides X e Y,
deste modo possibilita ao produtor a escolha do sexo feminino ou masculino, tanto para bovinos de
corte como de leite. Mesmo assim, o sêmen convencional é bastante utilizado, por conter maior
concentração espermática nas palhetas em comparação com o sexado, o que afeta diretamente a
fertilidade e, consequentemente, a produção de embriões.
Assim, objetivou-se avaliar o uso de sêmen convencional e sexado na produção de embriões
in vitro, considerando o desenvolvimento embrionário.

2. Material e métodos

Utilizou-se os dados da estação de monta do ano de 2021 a 2022, realizada pela empresa
PECPLAN ABS Importação E Exportação Ltda, na filial situada na cidade Xinguara localizada no
sudeste do estado do Pará, o laboratório durante a estação de monta atende todo o Pará e também
propriedades localizadas nos estados vizinhos como Maranhão, Tocantins e Mato Grosso.
Todos os touros usados no comparativo pertencem a raça nelore, sendo estes selecionados de
forma que o mesmo touro seja fornecedor tanto de sêmen sexado quanto convencional. Foram
selecionados nove touros, produtores de sêmen Convencional e Sexado, sendo, portanto, nove touros
para sêmen convencional e nove touros para o sêmen sexado os quais foram utilizados na produção
de embrião in vitro durante o período de estação de monta, obtendo assim um resultado comparativo
mais fidedigno.
O Laboratório da ABS de Xinguara é voltado para a produção e comercialização de embriões
bovinos. Esta produção engloba desde o trabalho realizado a campo: aspiração folicular (ovum pick
up OPU) para coleta de oócitos até a fase de diagnóstico de gestação (DG), enquanto a parte
laboratorial envolve a: recepção dos oócitos para maturação in vitro (MIV), fertilização in vitro (FIV),
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cultivo in vitro (CIV) e posteriormente o envase dos embriões para que estes sejam transferidos as
receptoras previamente selecionadas. Além destes, o laboratório também realiza o processo de
criopreservação dos embriões.
Na técnica da PIVE foram realizadas etapas sequenciais para a produção do embrião
propriamente dito, as quais foram: Aspiração folicular (OPU), Maturação oocitária in vitro (MIV),
Fertilização in vitro (FIV) e o Cultivo in vitro (CIV).
Após ser realizada a coleta e seleção dos oócitos, os mesmos foram transportados até o
laboratório devidamente armazenado sob uma temperatura de 38,5 ºC, com uma atmosfera com 5%
de CO2 em ar e com umidade de 95%, iniciando assim a fase de maturação in vitro (Figura 1). Os
oócitos foram colocados em criotubos contendo meio de MIV, a partir do momento que os oócitos
entraram em contato com o meio iniciou-se a fase MIV. Este processo deve durar 22-24 horas e os
criotubos devem ser transladados até o laboratório em transportadora de oócitos (TO) contendo a
presença de CO2 no seu interior e vedação com rolhas.

Figura 1-Oócitos em criotubos no meio de MIV, prontos para passar no

meio de lavagem e em seguida iniciar o processo da fertilização in vitro.

O período de maturação variou de 18 a 24 horas em atmosfera controlada contendo 5% de

CO2 em ar e umidade saturada nas incubadoras as quais mantém uma atmosfera e temperatura
controladas e adequadas.
Depois ocorreu a combinação do material genético dos gametas, ou seja, o espermatozoide
entrou em contato com o oócito (Figura 2), havendo a formação do zigoto, o qual no decorrer do seu
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desenvolvimento deu origem ao estádio de blastocisto. O processo de fertilização in vitro ocorreu

entre um período 22-24 horas com temperatura de 39ºC em estufa de 5% de CO2.

Figura 2- Oócitos prontos para iniciar o processo de fertilização in vitro

(A), oócitos em contato com o sêmen (B).

Para a realização da Fertilização in vitro, faz-se necessário realizar o preparo do sêmen,

essa etapa envolve a capacitação dos espermatozoides tornando-os aptos e eficientes na fecundação.
No preparo realizava o descongelamento do sêmen no descongelador de sêmen por 45 a 60 segundos
a uma temperatura de 37ºC para não os danificar e posteriormente foi realizado a centrifugação do
sêmen selecionado pelo método Gradiente descontínuo de Percoll (45/90%) separando a fração dos
espermatozoides viáveis dos não viáveis e do plasma seminal.
Na fase de cultivo in vitro (CIV) conforme a (Figura 3), basicamente ocorre o
desenvolvimento dos zigotos até o estágio de blastocisto. O cultivo dos zigotos iniciava após 24 h da
FIV, sendo necessário antes realizar o desnudamento com uma pipeta para em seguida transferir para
o meio de cultivo in vitro. O cultivo estendeu-se por sete dias após a fecundação in vitro, sendo neste
período realizado a avaliação dos embriões quanto à clivagem e a qualidade embrionária para
transferência ou criopreservação.
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Figura 3- Zigotos no início do cultivo in vitro (A). Zigotos em divisão celular

durante o cultivo (B).

Durante esse período de sete dias considera-se a Fertilização in vitro no Dia zero (D0),
passando mais 24h inicia o cultivo in vitro com 48h no Dia um (D1), nos dia dois e três (D2 e D3)
mantém na incubadora para continuar as divisões celulares, no Dia quatro (D4) realiza a avaliação da
clivagem e retorna para a incubadora, no Dia seis (D6) é realizada a previsão de quantidade de
embriões, no Dia sete (D7) ocorreu a classificação e saída dos embriões (Figura 4) para envase a
fresco ou congelamento de embriões produzidos.

Figura 4- Embriões produzidos no processo da PIVE.

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A classificação dos embriões foi quanto a qualidade e morfologia, sendo estas: Mórula (MO),
Blastocisto Inicial (BI), Blastocisto (BL), Blastocisto Expandido (BX), Blastocisto Eclodido (BE) às
quais podem ser observadas no (Anexo 1) segundo o manual da Sociedade Internacional de
Transferência de Embriões (IETS, 1998, p. 112)
Foram avaliadas as seguintes variáveis: oócitos fecundados, clivagem e a quantidade de
embriões viáveis produzidos. Para a obtenção da variável porcentagem de oócitos fecundado
considerou-se os valores dos oócitos maturados em relação aos valores obtidos no cultivo; para a
variável porcentagem de clivados considerou-se os valores obtidos de zigotos cultivados e para a
variável porcentagem de embriões viáveis considerou os valores obtidos na clivagem.
Essas variáveis foram avaliadas considerando o efeito do tipo de sêmen (convencional e
sexado) na produção de embriões in vitro por regressão logística no programa Statistical Analysis
System (SAS, P<0,05) considerando o efeito do touro.

3. Resultados e discussão

Não houve diferença (P>0,05) para o tipo de sêmen ao avaliar o percentual de oócitos
fecundados (Tabela 1). Foram maturados e fertilizados com sêmen convencional 1.285 oócitos e
1.155 oócitos com sêmen sexado, obtendo 1.167 (90,55%) e 1.051 (90,68%) zigotos na fecundação
com sêmen convencional e sexado, respectivamente (P=0,8411).

Tabela 1- Oócitos expostos na FIV, zigotos cultivados e porcentagem da conversão de oócitos em zigotos após a
fecundação com o uso de sêmen convencional e sexado de touros da raça Nelore e a diferença do valor-P em relação
a produção individual de cada sêmen
OÓCITOS ZIGOTOS OÓCITO ZIGOTOS
TOURO FIV/ CULTIVADO/ S FIV/ CULTIVADO VALO
% de FIV % de FIV
CONVENCI CONVENCI SEXAD / RP
ONAL ONAL O SEXADO
1 43 38 88,37 38 37 97,37 -
2 143 120 83,92 116 107 92,24 -
3 131 113 86,26 110 102 92,73 -
4 222 219 98,65 242 214 88,43 -
5 231 204 88,31 234 211 90,17 -
6 131 125 95,42 113 110 97,35 -
7 57 51 89,47 61 45 73,77 -
8 271 244 90,04 201 189 94,03 -
9 56 53 94,64 40 36 90,00 -
TOTAL 1285 1.167 90,56 1.155 1.051 90,68 0,8411

Analisando os zigotos cultivados e clivados (Tabela 2), obteve-se um total de 1.167 zigotos
provenientes da FIV com sêmen convencional e 1.051 zigotos provenientes da FIV com sêmen
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sexado cultivados in vitro. Dos 1.167 zigotos provenientes do sêmen convencional, apenas em 769
realizou a clivagem e dos 1.051 zigotos provenientes de sêmen sexado, apenas 540 realizou a
clivagem, obtendo um percentual de 67,42% clivados com sêmen convencional e um percentual de
55,12% clivados provenientes do sêmen sexado. Em ambas as variáveis de fecundados e cultivados
o valor P foi de (P=0,8411) não havendo diferença estatística significativa para os valores percentuais
obtidos na FIV e na Clivagem.

Tabela 2- Zigotos cultivados e os zigotos clivados, com respectiva porcentagem de clivagem com o uso de sêmen
convencional e sexado por touros da raça Nelore, e a diferença do valor-P em relação a produção individual de cada
sêmen
ZIGOTOS ZIGOTOS Nº DE Nº DE
CULTIVAD CLIVADO ZIGOTOS ZIGOTOS % DE
TOURO % DE
OS/ S/ CULTIVA CLIVADO CLIVAGE VALOR P
CLIVAGEM
CONVENC CONVENC DOS / S/ M
IONAL IONAL SEXADO SEXADO
1 38 30 78,95 37 31 86,49 -
2 120 97 80,83 107 60 56,07 -
3 113 94 83,19 102 28 27,45 -
4 219 189 86,30 214 85 39,72 -
5 204 139 68,14 211 105 49,76 -
6 125 39 31,20 110 55 50,00 -
7 51 28 54,90 45 17 37,78 -
8 244 112 45,90 189 129 68,25 -
9 53 41 77,36 36 29 80,56 -
TOTAL 1.167 769 67,42 1.051 540 55,12 0,8411

MELLO (et al. 2016, p. 1773) ao contrário do observado neste experimento, observaram
diferenças para clivagem e a produção de blastocistos em relação ao uso de sêmen convencional e
sexado, o qual foi obtido 58,89% de clivagem e 76,42% de blastocisto ao usar sêmen convencional,
enquanto o sexado obteve menores taxas de 27,50% de clivagem e 23,13% de blastocisto
evidenciando uma melhor taxa de clivagem e produção de blastocisto do sêmen convencional na
produção de embriões in vitro.
Foi possível observar diferenças de conversões embrionárias do sêmen convencional e sexado
por touro (P<0,05), com menor conversão embrionária do sexado (Tabela 3). (TRIGAL et al. 2012,
p. 1465) relata que obtiveram na PIVE uma maior taxa de blastocisto ao utilizar sêmen convencional
do que sexado. BLONDIN et al. (2009, p. 30), reafirmam que obtiveram melhores resultados para
produzir blastocisto in vitro ao usar sêmen convencional do que sexado. Essa menor taxa de produção
de embriões do sêmen sexado pode ser em virtude do processo de sexagem do sêmen conforme
afirmam alguns autores (MOCE et al, 2006, p. 66) no processo de sexagem tem-se a aceleração da
reação acrossômica e, consequentemente, a capacitação espermática, as quais induz alterações na
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membrana espermática prejudicando a fertilização e o desenvolvimento do embrião. O menor

percentual de embriões viáveis para sêmen sexado pode ser devido a danos nos espermatozoides os
quais ocorre no processo de separação, diluição, centrifugação, coloração, raios laser e a exposição a
alta pressão (SEIDEL 2002, p. 124; GARNER 2002, p. 59). De forma a interferir na motilidade e no
tempo de viabilidade espermática (SCHENK et al, 2006, p. 65).

Tabela 3- Zigotos clivados e embriões produzidos, com respectiva porcentagem de embriões viáveis com o uso de sêmen
convencional e sexado por touros da raça Nelore, e a diferença do valor-P em relação a produção individual de cada sêmen.
ZIGOTOS EMBRIÕES Nº DE
CLIVADOS % DE ZIGOTOS EMBRIÕES % DE
TOURO PRODUZIDO/ VALOR
/ EMBRIÕES CLIVADO PRODUZIDO/ EMBRIÕES
CONVENCIO P*
CONVENC VIÁVEIS / SEXADO VIÁVEIS
IONAL NAL SEXADO
1 30 18 60,00 31 13 40,63 -
2 97 5 52,58 60 28 46,67 -
3 94 89 94,68 28 0 0,00 -
4 189 60 31,75 85 5 5,88 -
5 139 67 48,20 105 30 28,57 -
6 39 2 5,13 55 20 36,36 -
7 28 3 10,71 17 13 76,47 -
8 112 102 91,07 129 22 17,05 -
9 41 36 87,80 29 7 24,14 -
TOTAL 769 428 53,55 540 138 30,64 <0,0001
*Nível de probabilidade associado a 5%.

É importante frisar que por mais que a taxa de conversão embrionária do sêmen sexado seja
inferior ao sêmen convencional, isso não interfere na qualidade genética do embrião produzido e
consequentemente não interfere na genética da prole, conforme afirma o estudo investigativo sobre o
efeito do sêmen sexado na qualidade embrionária realizado por BERMAJO et al, (2010, p. 13)
demonstrando que a produção de embriões viáveis com sêmen sexado e com sêmen convencional,
ambos exibem os mesmos padrões para expressão gênica para o sexo-específica, portanto o estudo
confirma que a utilização do sêmen sexado na produção de embriões in vitro não altera a qualidade
genética do embrião.
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4. Conclusão

Ao utilizar sêmen sexado na produção de embriões in vitro percebe-se uma menor conversão
embrionária em relação ao sêmen convencional, está baixa conversão pode estar relacionada ao
processo de sexagem o qual expõe os espermatozoides a um processamento que pode danificar os
gameta, em consequência disto observou-se nos resultados obtidos uma notória diferença na taxa de
conversão embrionária com o uso do sêmen sexado de touros da raça Nelore, deixando em evidência
a maior eficiência de conversão embrionária do sêmen convencional em relação ao sêmen sexado.
Há a necessidade de mais estudos para conhecimento das possíveis causas e que haja melhoramento
na eficiência do uso de sêmen sexado na PIVE em busca do retorno econômico.

5. Conflitos de interesse

Não houve conflito de interesses dos autores.

6. Contribuição dos autores

Eduarda Letícia da Silva Barrozo - ideia original, leitura e interpretação das obras e escrita;
Vinício Araújo Nascimento - orientação, correções e revisão do texto.

Referências bibliográficas

ABS GLOBAL. Sobre a ABS: Nossa História. In: Sobre a ABS - Genética bovina: Touros, sêmen e
embriões. [S. l.], 8 fev. 2000. Disponível em: https://www.absglobal.com/br/sobre-a-abs/. Acesso em: maio
de 2022.

ASBIA. Setor de Embriões da ABS Global bate recorde de produção em um único mês: História. [S. l.],
18 set. 2021. Fonte: http://www.asbia.org.br/coleta-de-semen-bovino-no-brasil-cresceu-mais-de-100-no-
primeiro-semestre-revela-asbia/. Acesso em: maio de 2022.

BERTOLINI, M.; BERTOLINI, L.R. Advances in reproductive technologies in cattle from artificial
insemination to cloning. Revista de la Facultad de Medicina Veterinaria y de Zootecnia, v.56, p.184-94,
2009. Fonte: https://www.redalyc.org/pdf/4076/407639221004.pdf. Acesso em: maio de 2022.

BERMEJO, A.P.; RIZOS, D.; RATH, D.; LONERGAN, P.; GUTIERREZ, A.A. Sex determines the
expression level of one third of the actively expressed genes in bovine blastocysts. Proceedings of the
National Academy of Sciences, v.107, n.8, p.3394-3399, 2010. Fonte:
https://www.pnas.org/doi/abs/10.1073/pnas.0913843107. Acesso em: maio de 2022.

BLONDIN, P.; BEAULIEU, M.; FOURNIER, V.; MORN, N.; CRAWFORD, L.; MADAN.; KING, W.A.
Analysis of bovine sexed sperm for ivf from sorting to the embryo. Theriogenology, v.71, n.1, p.30-38, 2009.
 15

Fonte: https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0093691X08006754. Acesso em: maio de

2022.

MELLO, R.R.C.; MELLO, M.R.B.; SOUSA, S.L.G.; FERREIRA, J.E. Parâmetros da produção in vitro de
embriões da raça Sindi. Pesquisa Agropecuária Brasileira, v.51, n.10, p.17773-1779, 2016. Fonte:
https://www.scielo.br/j/pab/a/sxDBNz5WQTcPdVTs3kmMxMC/?lang= pt & format=html. Acesso em: maio
de 2022.

MERTON, J.S.; DE ROOS, A.P.W.; MULLAART, E.; DE RUIGH, L.; KAAL, L.; VOS, P.L.A.M.;
DIELEMAN, S.J. Factors affecting oocyte quality and quantity in commercial application of embryo
technologies in the cattle breeding industry. Theriogenology, v.59, n.2, p.651-674, 2003. Fonte:
https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0093691X02012463. Acesso em: maio de 2022.

MOCE, E.; GRAHAM, J.K.; SCHENK J.L. Effect of sex-sorting on the ability of fresh and cryopreserved bull
sperm to undergo an acrosome reaction. Theriogenology, v.66, n.4, p.929–36, 2006. Fonte:
https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0093691X0600135X. Acesso em: maio de 2022.

SEIDEL Jr., G.E.; GARNER, D.L. Current status of sexing mammalian spermatozoa. Reproduction, v.124,
n.6, p.733-743, 2002. Fonte: https://europepmc.org/article/med/12537000. Acesso em: maio de 2022.

SEIDEL Jr., G.E. Economics of selecting for sex: the most important genetic trait. Theriogenology, v.59, n.2,
p.585-598, 2003. Fonte: https://europepmc.org/article/med/12537000. Acesso em: maio de 2022.

SCHENK, J.L.; SUH T.K.; SEIDEL Jr., G.E. Embryo production from superovulated cattle following
insemination of sexed sperm. Theriogenology, v.65, p.299–307, 2006. Fonte:
https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0093691X05002074. Acesso em: maio de 2022.

STRINGFELLOW, D.A.; SEIDEL, S.M. Manual da Sociedade Internacional de Transferência de

Embriões. IETS, p.112-113, Illinois, 1998.

TRIGAL, B.; GÓMEZ, E.; CAAMAÑO, J.N.; MUÑOZ, M.; MORENO, J.; CARROCERA, S.; DIEZ, C. In
vitro and in vivo quality of bovine embryos in vitro produced with sex-sorted sperm. Theriogenology, v.78, n.7,
p.1465-1475, 2012. Fonte: https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0093691X12003676. Acesso
em: maio de 2022.
 16

4. CONSIDERAÇÕES FINAIS

É de grande importância o uso do sêmen sexado na produção de embriões in vitro, visto

que este agrega de forma vantajosa para ambos os segmentos da pecuária mundial. Através do sêmen
sexado o produtor eleva a produção de acordo com o objetivo de comercialização da propriedade.
Por mais que o valor aquisitivo da dose de sêmen sexado seja um pouco mais elevada que
o sêmen convencional, ainda sim, é economicamente viável o uso do saxado na reprodução de
bovinos visto, que a rentabilidade adquirida é superior quando comparada com a rentabilidade
adquirida com o sêmen convencional.
O uso do sêmen sexado na reprodução de bovinos promove um melhoramento genético
acentuado quando associado a técnica de Produção In Vitro de Embriões (PIVE), visto que se obtém
um maior número de descendentes de alto valor genético em um curto intervalo de tempo.
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REFERÊNCIAS

1. GARNER, D.L. Flow cytometric sexing of mammalian sperm. Theriogenology, v.65, n.5,
p.943-957, 2006.
2. IBGE. INSTITUTO BRASILEIRO DE GEOGRAFIA E ESTATÍSTICA. PPM 2020: O
rebanho bovino cresce 1,5% e chega a 218,2 milhões de cabeças. [S. l.], 29 set. 2021.
3. JOHNSON, L.A.; FLOOK, J.P.; HAWK, H.W. Sex preselection in rabbits: live births from X
and Y sperm separated by DNA and cell sorting. Biology and Reproduction, v.41, n.2,
p.199-203, 1989.
4. MOORE, K.; THATCHER, W.W. Major advances associated with reproduction in dairy
cattle. Journal of Dairy Science, v.89, n.4, p.1254-1266, 2006.
5. SEVERO, N.C. História da inseminação artificial no Brasil. Revista Brasileira de
Reprodução Animal, v.39, n.1, p.17-21, 2015.
6. TRIGAL, B.; GÓMEZ, E.; CAMAÑO, J.N.; MUÑOZ, M.; MORENO, J.; CARROCERA, S.;
MARTÍN, D.; DIEZ, C. In vitro and in vivo quality of bovine embryos in vitro produced with
sex-sorted sperm. Theriogenology, v.78, n.1, p.1465-1475, 2012.
7. VIANA, J.H.M. Levantamento estatístico da produção de embriões bovinos no Brasil em
2011: mudanças e tendências futuras. O Embrião, v.16, n.51, p.6-10, 2012.
8. VIANA, J.H.M.; FIGUEIREDO, A.C.S.; SIQUEIRA L.G.B. Brazilian embryo industry in
context: pitfalls, lessons, and expectations for the future. Animal Reproduction, v.14, n.3,
p.476-481, 2017. Disponível em: https://www.animal-reproduction.org/article/10.21451/1984-
3143-AR989/pdf/animreprod-14-3-476.pdf. Acesso em: maio de 2022.
9. VIANA, J.H.M. A pandemia e o mercado de embriões. Jornal O Embrião, ed.XXXVI,
2021.
10. WINDSOR, D.P.; EVANS G.; WHITE, I.G. Sex predetermination by separation of x and y
chromosome-bearing sperm: A review. Reproduction, Fertility and Development, v.5, n.2,
p.155-171, 1993.
 18

ANEXOS

Anexo - Classificação morfológica de embriões segundo o Manual da Sociedade Internacional de Transferência

de Embriões (IETS). Fonte: STRINGFELLOW e SEIDEL (1998).
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 UNIVERSIDADE FEDERAL DE JATAÍ
COORDENAÇÃO DE ESTÁGIOS DO CURSO DE MEDICINA VETERINÁRIA

DECLARAÇÃO DE AUTORIA E PUBLICAÇÃO

Eu, Eduarda Letícia da Silva Barrozo, matrícula, 201714327, e-mail

[email protected], declaro, para os devidos fins e sob pena da lei, que o Trabalho de
Conclusão de Curso intitulado: “ PRODUÇÃO DE EMBRIÕES IN VITRO COM SÊMEN SEXADO
DE TOUROS NELORE” , é de minha e exclusiva autoria.
Autorizo a Universidade Federal de Jataí – UFJ pelo curso de Medicina Veterinária a
disponibilização do texto integral ou partes deste trabalho. Autorizo a publicação do trabalho pelo(a)
orientador(a), podendo perder a posição de autor principal caso não publique no prazo de até 90 da
dias após a data da defesa do TCC.
Declaro também que o trabalho foi corrigido seguindo as orientações do(a) orientador(a)
antes de ser entregue a versão final à Coordenação de Estágio, como também a correção das sugestões
consideradas pertinentes pelo(a) orientador(a) da banca e seguindo as normas do Manual em relação a
modalidade escolhida.

Nome do(a) aluno(a)

Jataí, 10 de Junho de 2022 .