T3 - Aula - Enzimas

Bioquímica Geral
Licenciatura em Fisioterapia
Enzimas
• Enzimas
Enzimas
• São proteínas especializadas na catálise de

reações biológicas
• Possuem um centro funcional denominado

local ativo, onde os substratos são
transformados em produtos
Enzimas
Local ativo
Enzimas
• As enzimas possuem:
 Grande poder catalítico

 Especificidade
 Capacidade de regulação
Enzimas
• As enzimas podem acelerar reações por um

fator de pelo menos 1 milhão de vezes!
A maioria das reações nos sistemas biológicos não

ocorre na ausência de enzimas
Enzimas
Enzimas
• As enzimas são muito específicas, tanto na

reação que catalisam como no substrato que
escolhem!
 Uma enzima cataliza normalmente um único tipo

de reação química ou uma série de reações
relacionadas
 A especificidade para o substrato pode ser absoluta

Enzimas
• A atividade das enzimas pode ser regulada:
 Regulação alostérica
 Modificação covalente reversível
 Clivagem proteolítica
Enzimas
• Quase todas as enzimas são de natureza

proteica constituídas por uma ou mais
cadeias polipeptídicas. Umas são proteínas
simples, outras possuem uma parte não
proteica designada por cofator.
Os cofatores podem ser iões metálicos e

compostos orgânicos
Enzimas e cofatores
Coenzimas
Exemplos : FAD e NAD+

Cofatores: elementos inorgânicos
Isoenzimas
Enzimas com estruturas diferentes, mas que

catalizam a mesma reação são conhecidas por
isoenzimas.
Significado fisiológico- a mesma reação deve

ocorrer em meios biológicos diferentes
Tipos de enzimas
Mecanismo de ação enzimática
• Para que uma reação enzimática ocorra é

necessário que:
 Os substratos colidam
 A colisão ocorra na orientação correta
 Os reagentes possuam energia suficiente – energia

de ativação
Energia de ativação
• As enzimas aumentam a probabilidade de uma
orientação correta dos reagentes
• As enzimas baixam a energia de ativação das reações
• A diferença de energia entre reagentes e produtos não

é contudo, alterada
 Esta diferença de energia determina o ponto de

equilíbrio da reação
 A formação do complexo ES diminui assim, a
energia de ativação de uma reação (Ea)
 Ao diminuir a Ea, aumenta a velocidade da reação
 As enzimas são catalisadores pelo que não alteram

as constantes de equilíbrio das reações
• A energia de ativação é assim a diferença

entre as energias do estado fundamental dos
reagentes e do estado de transição
Complexo enzima-substrato (ES)
• A ligação do substrato à enzima ocorre num
local específico - local ativo
• O local ativo contém resíduos que participam

diretamente no processo catalítico
• Em geral os substratos ligam-se às enzimas
por meio de múltiplas interações fracas :
 ligações de hidrogénio
 forças de van der Waals
 interacões hidrofóbicas
 ligações eletrostáticas
• A ligação do substrato é muito seletiva daí a

especificidade catalítica de muitas enzimas
• A atividade de algumas enzimas é regulada

neste passo
• Para uma dada [E], a taxa de reação aumenta com o
aumento de [S], até atingir a velocidade máxima (Vmáx)
por ocupação dos centros ativos da enzima
- modelos de interação
• Dois modelos de interação definem a ligação

do substrato à enzima:
 mecanismo “chave-fechadura”
 mecanismo de encaixe induzido (”induced fit”)

Mecanismo “chave-fechadura”
Mecanismo “induced fit”
A complementaridade dos
locais ativos e do substrato
são criados após a ligação
do substrato
Mecanismo “chave-fechadura”
Cinética enzimática
• A cinética enzimática é o estudo da

velocidade das reações catalisadas por
enzimas
• Os fatores que afetam a velocidade de uma
reação catalisada por uma enzima são:
 temperatura
 pH
 concentração de substrato
 concentração de enzima
 presença de ativadores/inibidores
• Leonor Michaelis (1875-1949) e Maud
Menten (1879-1960) foram os pioneiros da
cinética enzimática
• Uma reação enzimática pode ser

esquematizada por:
Cinética de Michaelis-Menten
• A velocidade desta reação é expressa pela
equação de Michaëlis-Menten
Vmaxvelocidade máxima atingida

quando todos os locais ativos estão
ocupados pelo substrato
Kmconstante de Michaelis-Menten,
correspondente à concentração de
substrato em que se atinge ½ da
velocidade máxima
• Os parâmetros Km e Vmax caraterizam uma
reação enzimática
• O valor de Vmax traduz a eficiência catalítica
da enzima
• O valor de Km traduz a afinidade da enzima

para o substrato
Quanto menor o Km maior a afinidade

da enzima para o substrato, já que é
menor a [S] necessária para atingir ½ da
velocidade máxima
• A cinética de saturação da reação, traduz um
nº finito de locais ativos
Efeito do pH
• O pH afeta as taxas das reações enzimáticas
Este efeito resulta de tanto os substratos como as

enzimas possuirem grupos funcionais ácidos ou
básicos, cujo estado de ionização depende do pH
• Este efeito é dependente da enzima

Efeito do pH
Efeito da temperatura
• A taxa de uma reação enzimática aumenta

com a temperatura
 reações muito rápidas (Ea=0) são independentes da

temperatura
 reações lentas (Ea elevadas) são dependentes da

temperatura
Efeito da temperatura
• A temperaturas elevadas as enzimas

desnaturam e perdem a sua atividades
• Os valores de Km e Vmax são obtidos a partir
de representações gráficas lineares da equação
de Michaëlis-Menten:
 Equação de Linweaver-Burk
Linweaver-Burk
-1/Km
Inibição enzimática
• É um importante mecanismo de controlo em

sistemas biológicos
• Pode ser reversível ou irreversível
 Um inibidor reversível dissocia-se rapidamente

do complexo enzima-inibidor (EI)
Um inibidor irreversível dissocia-se lentamente

do complexo EI, porque liga fortemente à enzima
Exemplo: gases neurotóxicos, Aspirina

• A inibição reversível pode ser:
• Competitiva
• Não competitiva
Inibição competitiva
• Os inibidores competitivos competem com o

substrato para a ligação ao local ativo
Inibição competitiva
• Muitos inibidores assemelham-se ao substrato
• A inibição pode ser revertida por aumento da

concentração de substrato
Exemplos: Antibiótico sulfamidas

Vmax mantém-se constante
Km aumenta
Inibição não competitiva
• Os inibidores não competitivos ligam à

enzima num local diferente do local ativo
• A enzima liga simultaneamente o substrato e

o inibidor
• A inibição não pode ser revertida por

aumento da concentração de substrato
Vmax diminui
Km mantém-se constante
Enzimas alostéricas
• São formadas por várias subunidades

• A ativação da enzima é possível por interação
alostérica através da ligação cooperativa de moléculas
reguladoras ou efetores alostéricos - que ligam a locais
diferentes dos centros catalíticos
Ativadores ou inibidores
Regulação da atividade enzimática
• A atividade das enzimas pode ser regulada:
 Regulação alostérica
 Modificação covalente reversível
 Clivagem proteolítica
• Regulação alostérica
 É um tipo de regulação reversível

 Ocorre por ligação de um inibidor (ou ativador)
alostérico a um local regulador diferente do local
ativo
Muitas vezes a enzima

que cataliza o 1º passo
de uma via
biossintética é inibida
de forma alostérica
pelo último produto
dessa via
 É vulgarmente designada por inibição por feedback

• Modificação covalente reversível
>A modificação enzimática é também um

mecanismo de regulação enzimática
 A fosforilação de resíduos específicos regula a

atividade enzimática
 É efetuada por enzimas específicas
 É revertida por hidrólise

ATP P ADP
Fosforilação
P
(Cinase)
Enzima Enzima
Desfosforilação
(Fosfatase)
P
• Clivagem proteolítica
Algumas enzimas são sintetizadas na forma
de precursores inativos, proenzimas ou
zimogénios, que são posteriormente
ativados no local e altura apropriados
 As enzimas digestivas são um bom exemplo

precursor inativo
enzima ativa

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Bioquímica Geral

• São proteínas especializadas na catálise de

• Possuem um centro funcional denominado

 Grande poder catalítico

• As enzimas podem acelerar reações por um

A maioria das reações nos sistemas biológicos não

• As enzimas são muito específicas, tanto na

 Uma enzima cataliza normalmente um único tipo

 A especificidade para o substrato pode ser absoluta

• A atividade das enzimas pode ser regulada:

 Modificação covalente reversível

• Quase todas as enzimas são de natureza

Os cofatores podem ser iões metálicos e

Exemplos : FAD e NAD+

Enzimas com estruturas diferentes, mas que

Significado fisiológico- a mesma reação deve

• Para que uma reação enzimática ocorra é

 A colisão ocorra na orientação correta

 Os reagentes possuam energia suficiente – energia

• As enzimas baixam a energia de ativação das reações

• A diferença de energia entre reagentes e produtos não

 Esta diferença de energia determina o ponto de

 As enzimas são catalisadores pelo que não alteram

• A energia de ativação é assim a diferença

• O local ativo contém resíduos que participam

• A ligação do substrato é muito seletiva daí a

• A atividade de algumas enzimas é regulada

• Dois modelos de interação definem a ligação

 mecanismo de encaixe induzido (”induced fit”)

• A cinética enzimática é o estudo da

• Uma reação enzimática pode ser

Vmaxvelocidade máxima atingida

• O valor de Km traduz a afinidade da enzima

Quanto menor o Km maior a afinidade

• O pH afeta as taxas das reações enzimáticas

Este efeito resulta de tanto os substratos como as

• Este efeito é dependente da enzima

• A taxa de uma reação enzimática aumenta

 reações muito rápidas (Ea=0) são independentes da

 reações lentas (Ea elevadas) são dependentes da

• A temperaturas elevadas as enzimas

• É um importante mecanismo de controlo em

• Pode ser reversível ou irreversível

 Um inibidor reversível dissocia-se rapidamente

Um inibidor irreversível dissocia-se lentamente

Exemplo: gases neurotóxicos, Aspirina

• A inibição reversível pode ser:

• Os inibidores competitivos competem com o

• Muitos inibidores assemelham-se ao substrato

• A inibição pode ser revertida por aumento da

Exemplos: Antibiótico sulfamidas

Vmax mantém-se constante

• Os inibidores não competitivos ligam à

• A enzima liga simultaneamente o substrato e

• A inibição não pode ser revertida por

• São formadas por várias subunidades

• A atividade das enzimas pode ser regulada:

 Modificação covalente reversível

 É um tipo de regulação reversível