aula-5---cinetica-enzimatica

Estudo da velocidade da reação
enzimática e como ela se altera em

função de diferentes parâmetros
Importante abordagem para o
entendimento do mecanismo de ação
de uma enzima.
Vários fatores afetam a atividade de uma

enzima – pH, temperatura e substrato
Parâmetro mais importante para

comparar a atividade e o tipo de reação
das enzimas é a concentração do
substrato
Atividade enzimática é afetada pelo pH
O pH pode influenciar a atividade de uma enzima através de maneiras

distintas. Primeiramente, o pH pode levar à desnaturação proteica.
O pH também pode interferir na atividade de uma enzima alterando o

padrão de cargas de um determinado sítio ativo ou catalítico, ou alterando
a conformação geral da proteína.
Atividade enzimática é afetada pela temperatura
O aumento de temperatura aumenta a taxa de reação enzimática devido

ao aumento de energia cinética das moléculas participantes da reação.
A temperatura pode interferir nas interações que mantém as estruturas

secundárias e terciárias (pontes de hidrogênio e interações hidrofóbicas),
podendo levar à desnaturação protéica.
A concentração do substrato afeta a velocidade das
reações catalisadas por enzimas
enzima
Curva que relaciona [S] e V0 é uma hipérbole, concentrações
mais baixas aumento linear da velocidade, concentrações mais
altas velocidade atinge um valor máximo
Concentrações
baixas de
substrato ocorre
aumento linear
entre
Velocidade(V0) e o
Substrato [S]
 [S]  V0
aumenta cada vez
menos até atingir
um patamar (Vmax)
Curva relacionando [S] e V0 pode ser expressa algebricamente

Equação de Michaelis-Menten
Constante de Michaelis
TAREFA – Fazer para entregar a dedução da equação de Michaelis-Menten

É a concentração do substrato
O que é Km ? onde se obtém metade da
velocidade máxima da reação
TAREFA – Demonstrar algebricamente o que é Km usando a equação de

Michaelis-Mentem e a definição de Km.
Km e a Vmax varia de enzima para enzima caracterizando-
as e pode variar também com o substrato
Rubisco
•Km CO2 - 9μM
•Km O2 - 350 μM
Hexoquinase Glicose Km - 0,05 μM

Frutose Km -1,5 μM
Km não é uma medida de afinidade da enzima

pelo substrato mas sim a concentração do
substrato onde se obtém a metade da
velocidade máxima da reação
Equação de Michaelis-Menten
Transformações da equação de Michaelis-Menten
Equação de Lineweaver-Burk ou duplo-recíproco

Inversão dos dois lados da equação de Michaelis-Menten
Separação dos componentes do lado direito.
Equação de Lineweaver-Burk ou duplo-recíproco
inverter
Separar
componentes e
resolver
y = a x + b
Km 1
y
Com essa
transformação
matemática passa-se
a trabalhar com uma
reta e não com uma
hipérbole, mais fácil.
Várias informações
podem ser obtidas
com esse gráfico
x
a = coeficiente angular
y=0 b = coeficiente linear
x=0
Através da análise da cinética da reação pode-se descobrir qual
o mecanismo de ação da reação com relação ao substrato
A atividade de todas as enzimas pode ser
inibida por determinadas moléculas
Inibidores enzimáticos
São moléculas que interferem com a

catálise diminuindo ou interrompendo a
reação enzimática
Como são classificados os inibidores de
acordo com seu mecanismo de ação?
Reversíveis Irreversíveis
Inibição competitiva
Inibição incompetitiva
Inibição mista ou não competitiva
Como eles atuam?

Reversíveis - Inibição competitiva
Inibidor compete com o substrato pelo sitio ativa da enzima
Inibidor tem estrutura molecular semelhante à do substrato
 [S] deslocar inibidor do sítio

ativo e manter Vmax
V max é constante na presença do inibidor devido à

grande quantidade de substrato
Reversíveis - Inibição incompetitiva
Inibidor se liga em um
sítio diferente do centro
ativo, impede a reação do
complexo ES.
Independente da concentração do substrato o Km e a

Vmax estão alterados
Reversíveis - Inibição mista ou não competitiva
Inibidor se liga tanto ao

complexo ES como à
enzima, em um sítio
diferente do centro ativo
Independente da concentração do substrato o

Km e a Vmax estão alterados
Inibição irreversível
Inibidor se liga de maneira estável ou covalente

com um grupo funcional importante para a
atividade enzimática
Utilizados experimentalmente para definir os

aminoácidos essenciais do centro ativo das
enzimas
Inativar determinadas enzimas em situações

biológicas importantes
Este é o mecanismos de ação dos inseticidas organofosforados, como o
malathion e o parathion.
Reagem com o resíduo S1 de serino-enzimas, formando um complexo irreversível.

Uma das enzimas altamente sensível a esses compostos é a
acetilcolinesterase, responsável pela metabolização do neurotransmissor
acetilcolina em neurônios centrais e periféricos (envenenamento por
organofosforados)
Salicina, extraída da casca do Salgueiro Branco ou Chorão (Salix alba) - hoje sintetizada
No metabolismo celular
grupos de enzimas
trabalham em conjunto
onde o produto de uma é
o substrato da outra
Via metabólica
Nessas vias existe

sempre uma enzima que
determina a velocidade
com que o grupo vai
trabalhar – enzimas
reguladoras
•Regulam a velocidade das reações metabólicas
•São reguladas por determinados sinais
•Tipos:
Enzimas alostéricas
Enzimas reguladas por modificações
covalentes reversíveis
Enzimas reguladas por proteólise
Enzimas alostéricas
•Possui sítios reguladores

para a ligação do
modulador especifico
•Maiores e mais
complexas que as não
alostéricas (mais que uma
cadeia polipeptídica)
Sofrem modificações
conformacionais em
resposta à ligação do
modulador (positivo ou
negativo)
Enzimas reguladas por modificações
covalentes reversíveis
•Diferentes grupos podem se ligar á

molécula enzimática e regular sua atividade
•Grupos ligados covalentemente e
removidos pela ação de outras enzimas
Enzimas reguladas por proteólise
Enzimas proteolíticas – mecanismo de proteção/regulação
Enzimas digestivas
produzidas pâncreas e com
ação no duodeno.
Cadeias ligadas por ligações dissulfeto

Bothrops
(Jararacas)
90% acidentes no
Estado de SP –
janeiro a abril –
sexo masculino
Alteração nas enzimas

envolvidas na cascata
de coagulação do
sengue - hemorragia

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enzimática e como ela se altera em

Vários fatores afetam a atividade de uma

Parâmetro mais importante para

O pH pode influenciar a atividade de uma enzima através de maneiras

O pH também pode interferir na atividade de uma enzima alterando o

O aumento de temperatura aumenta a taxa de reação enzimática devido

A temperatura pode interferir nas interações que mantém as estruturas

Curva relacionando [S] e V0 pode ser expressa algebricamente

TAREFA – Fazer para entregar a dedução da equação de Michaelis-Menten

TAREFA – Demonstrar algebricamente o que é Km usando a equação de

Hexoquinase Glicose Km - 0,05 μM

Km não é uma medida de afinidade da enzima

Transformações da equação de Michaelis-Menten

Equação de Lineweaver-Burk ou duplo-recíproco

y=0 b = coeficiente linear

São moléculas que interferem com a

Como eles atuam?

 [S] deslocar inibidor do sítio

V max é constante na presença do inibidor devido à

Independente da concentração do substrato o Km e a

Inibidor se liga tanto ao

Independente da concentração do substrato o

Inibidor se liga de maneira estável ou covalente

Utilizados experimentalmente para definir os

Inativar determinadas enzimas em situações

Reagem com o resíduo S1 de serino-enzimas, formando um complexo irreversível.

Nessas vias existe

•Possui sítios reguladores

•Diferentes grupos podem se ligar á

Cadeias ligadas por ligações dissulfeto

Alteração nas enzimas

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