Trabalho de Conclusão de Curso Diamantino

UNIVERSIDADE FEDERAL DO MARANHÃO
CENTRO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS E DA SAÚDE – CCBS
CURSO DE FARMÁCIA
DIAMANTINO ALVES
FRACIONAMENTO DO EXTRATO DO CAROÇO DE JUÇARA

(Euterpe oleracea Mart.) EM MATRIZES DE AFINIDADE
GALACTOSE-MANOSE (Adenantherapavonina) E DE GLICOSE
(Caesalpiniaspinosa).
São Luís
2017
DIAMANTINO ALVES
FRACIONAMENTO DO EXTRATO DO CAROÇO DE JUÇARA

(Euterpe oleracea Mart.) EM MATRIZES DE AFINIDADE
GALACTOSE-MANOSE (Adenantherapavonina) E DE GLICOSE
(Caesalpiniaspinosa).
Projeto de Pesquisa apresentado ao

Curso de Farmácia da Universidade
Federal do Maranhão como pré-
requisito para a monografia - Trabalho
de Conclusão do Curso.
Orientadora: Dra. DENISE FERNANDES

COUTINHO MORAES
Coorientador: WALBERT EDSON MUNIZ FILHO

Farmacêutico, Doutorando da Rede
Nordeste em Biotecnologia –
RENORBIO, Mestre em Bioquímica.
SUMÁRIO
1. INTRODUÇÃO
2.JUSTIFICATIVA
3.OBJETIVOS
3.1 Objetivogeral
3.2 Objetivos específicos
4.MATERIAL E MÉTODOS
4.1Obtenção do extrato hidroalcoólico do caroço de Euterpe oleracea MART
4.2Preparação das colunas cromatográficas
4.3Fracionamento do extrato bruto de E. oleracae nas colunas cromatográficas
4.4Ensaio de hemaglutinação
5.CRONOGRAMA
6. REFERÊNCIAS
1.INTRODUÇÃO
O câncer consiste no processo de crescimento e disseminação celular sem controle que

pode afetar praticamente qualquer parte do corpo e disseminar-se no organismo,
constituindo problema de saúde crescente em todo o mundo.
No Brasil, estima-se que o câncer de próstata é o mais incidente em todas as regiões do

país, está relacionado com aumento da expectativa de vida, da melhoria e evolução dos
métodos diagnósticos e da qualidade dos sistemas de informação (INCA, 2014a).
A carcinogênese é conhecida como uma das etapas do processo oncogênico, onde

ocorrem diversas alterações moleculares e celulares, onde os fitoquímicos podem
bloquear ou reverter o estágio pré-maligno (WATTENBERG, 1985).
O Estado do Maranhão economicamente possui o extrativismo vegetal como uma das

atividades mais importantes. Quanto aos recursos mais explorados destacam-se o
babaçu e oaçaí (juçara) cientificamente chamadaEuterpe oleracea Mart.
As plantas possuem compostos naturais com importantes propriedades bioativas, os

quais podem fornecer alternativas aos medicamentos atuais, com a descoberta de novas
drogas. Os fitoquímicos são compostos presentes nos alimentos derivados de plantas,
que têm atividades antioxidante, anti-proliferativa, antiangiogênica e antiestrogênica
(SEERAM, 2008).
Visto a atividade antineoplásica do extrato do caroço do açaí ter sido identificada na

linhagem de adenorcarcinoma mamário receptor hormonal positivo (MCF-7) (SILVA et
al., 2014,busca-se investigar a presença de lectina no referido extrato.
As lectinas são definidas como proteínas que se ligam, de um modo estável, a hidratos de
carbono de origem não imunológica, capazes de aglutinar células ou precipitar complexos de
hidratos de carbono, sem qualquer tipo de atividade enzimática para os que são alvo da sua
ligação (Goldstein et al., 1980). Este reconhecimento entre proteínas e hidratos de carbono é de
importância fundamental em muitos processos biológicos como infecções virais, bacterianas, a
micoplasma e a parasitas e, ainda, na marcação de células e componentes solúveis, fertilização,
metástases cancerígenas e no crescimento e diferenciação celular.
2.JUSTIFICATIVA
A juçara é considerada alimento de alto valor calórico e nutricional, com elevado

percentual de lipídeos, proteínas e minerais, o qual representa a principal base alimentar
da população ribeirinha da região do estuário do Rio Amazonas. O extrato de açaí tem
variados componentes polifenólicos, em maior quantidade, estes: orientina, isoorientina
e ácido vanílico, bem como as antocianinas: cianidina-3-glucoside e cianidina-3-
rutinoside. O estudo composicional do Euterpe oleracea Mart. tem revelado rico perfil
de ácidos graxos, conteúdo mineral, taninos, polifenóis, antocianinas. Tal composição
expressa intervenção eficaz na promoção do envelhecimento saudável e da redução do
dano oxidativo (YAMAGUCHI et al., 2015).
No estado do Maranhão, o câncer de próstata também é o mais incidente, com 910 casos
novos e taxa bruta de incidência de 27,68por 100 mil habitantes. A capital São Luís
apresenta 230 novos casos e a taxa bruta de 49,02 (INCA, 2014b).
A carcinogênese é conhecida como uma das etapas no processo oncogênico, onde

ocorrem diversas alterações moleculares e celulares, onde os fitoquímicos podem
bloquear ou reverter o estágio pré-maligno (WATTENBERG, 1985).
3.OBJETIVOS
3.1 Objetivo geral
Verificar a existência de moléculas no caroço da juçara capazes de ligarem-se às matrizes de

afinidade galactose – manose e de glicose específicas.
3.2 Objetivos específicos
Efetuar ensaios de hemaglutinação com as frações do extrato do caroço da juçara.
4.MATERIAL E MÉTODOS
4.1 Obtenção do extrato hidroalcoólico do caroço de Euterpe oleraceaMART.
A obtençãodo extrato hidroalcoólico do açaí, será feita de acordo com o processo

desenvolvido pelo Prof. Dr. Roberto Soares de Moura (SOARES DE MOURA et al.
2011, 2012), do Departamento de Farmacologia da Universidade do Estado do Rio de
Janeiro (UERJ) e depositado na World InternationalPropertyOrganization sob o registro
nº PI0418614-1.
Para a presente pesquisa, o açaí será separado em frações diferentes: (1) o fruto total,
compreendendo a casca e o caroço, (2) a casca, (3) o caroço. (4)e o palmito que também
será trabalhado.
4.2 Preparações das colunas cromatográficas

A construção das colunas cromatográficas de Adenanthera pavonina,(galacto-manose
específica ) e Tamarindus indica, ( glicose específica ) seguem a metodologia
desenvolvida pela Profa. Dra. Ivone Garros Rosa do Departamento de Patologia da
UFMA, compreendem as seguintes etapas: Amostragem, Reticulação dos
Polissacarídeos e a Montagem das Colunas Cromatográficas.
4.3 Preparações das farinhas e extração das proteínas
O fruto total (a casca e o caroço ), a casca, o caroço e o palmito. Estes serão trituradas
manualmente até obter farinhas finas. Estas serão estocadas em frascos hermeticamente
fechados e mantidos à temperatura ambiente, para posterior uso.
As farinhas serão submetidas a extrações com solução de NaCl 0,15 M, na proporção de 1:10
(m:v), com agitação constante, durante três horas. As suspensões serão centrifugadas a 15.000,
por 20 minutos a 7 °C e os resíduos obtidos submetidos a uma nova extração, com a mesma
solução extratora, por mais 15 minutos. Os sobrenadantes destas soluções serão reunidos e
utilizados para fracionamento posterior por precipitação com sulfato de amônio de modo a
atingir 80% de saturação e as suspensões foram deixadas em repouso por 12 horas. Em seguida
as misturas foram centrifugadas a 15.000 x g, por 20 minutos, a 7°C. Os precipitados serão
redissolvidos em água e dialisados exaustivamente contra água, até eliminação total do sal. O
material obtido será liofilizado e guardado para uso posterior
4.4 Ensaio de hemaglutinação
Os testes de atividade hemaglutinante das frações obtidas após a cromatografia e análise de

espectrofotometria serão realizados segundo MOREIRA& PERRONE (1997). Alíquota de 50 µL
de cada fração obtida por matriz e por eluição será submetida a diluições duplo-seriadas (1:2,
1:4, 1:6, 1:8,...) em solução salina (NaCl 0,15 M) em placas de microtitulação. Em seguida será
adicionado a estas diluições o mesmo volume de suspensão de hemácias a 2%. As placas serão
mantidas em repouso por 30 minutos e em seguida faremos a leitura dos resultados.
5. CRONOGRAMA
ATIVIDADES
Levantamento
Bibliográfico
Coleta de amostras
Realização de reações
Elaboração da Monografia –Trabalho de Conclusão de Curso
Defesa da monografia
Submissão para publicação do Artigo à Revista Especializada
REFERÊNCIAS
Estimativa 2014: Incidência de Câncer no Brasil. In: INSTITUTO NACIONAL DE

CÂNCER JOSÉ ALENCAR GOMES DA SILVA (INCA). Câncer de próstata.2014a.
Disponível em: <http://www.inca.gov.br/estimativa/2014/sintese-de-resultados-
comentarios.asp>. Acessoem: 29 out. 2015.
WATTENBERG, L. W. Chemoprevention of cancer. Cancer Research, Chicago, v.45,

n. 1, p.1–8, Jan. 1985.
SEERAM, N. P. Berry fruits for cancer prevention: current status and future prospects.
Journal of agricultural and food chemistry, Washington, v. 56, n. 3, p. 630-635, Feb.
13 2008.
SILVA, D. F.; VIDAL, F. C. B.; SANTOS, D.; COSTA, M. C. P.; MORGADO-DÍAZ, J.

A.; NASCIMENTO, M. D. S. B.; MOURA, R. S. Cytotoxic effects of Euterpe oleracea
Mart. in malignant cell lines. BMC Complementary and Alternative
Medicine.London, v. 14, n. 175, May 29 2014. Disponívelem:
<http://www.biomedcentral.com/1472-6882/14/175>. Acesso em: 29 out. 2015.
GOLDSTEIN,I.J.; HUGAES,R.C.;MONSIGNY,M.;OSAWA,T. & SHARON,N. What should be called a

lectin? Nature, 285: 66, (1980).

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FRACIONAMENTO DO EXTRATO DO CAROÇO DE JUÇARA

FRACIONAMENTO DO EXTRATO DO CAROÇO DE JUÇARA

Projeto de Pesquisa apresentado ao

Orientadora: Dra. DENISE FERNANDES

Coorientador: WALBERT EDSON MUNIZ FILHO

3.2 Objetivos específicos

4.1Obtenção do extrato hidroalcoólico do caroço de Euterpe oleracea MART

4.2Preparação das colunas cromatográficas

4.3Fracionamento do extrato bruto de E. oleracae nas colunas cromatográficas

O câncer consiste no processo de crescimento e disseminação celular sem controle que

No Brasil, estima-se que o câncer de próstata é o mais incidente em todas as regiões do

A carcinogênese é conhecida como uma das etapas do processo oncogênico, onde

O Estado do Maranhão economicamente possui o extrativismo vegetal como uma das

As plantas possuem compostos naturais com importantes propriedades bioativas, os

Visto a atividade antineoplásica do extrato do caroço do açaí ter sido identificada na

A juçara é considerada alimento de alto valor calórico e nutricional, com elevado

A carcinogênese é conhecida como uma das etapas no processo oncogênico, onde

3.1 Objetivo geral

Verificar a existência de moléculas no caroço da juçara capazes de ligarem-se às matrizes de

3.2 Objetivos específicos

Efetuar ensaios de hemaglutinação com as frações do extrato do caroço da juçara.

4.1 Obtenção do extrato hidroalcoólico do caroço de Euterpe oleraceaMART.

A obtençãodo extrato hidroalcoólico do açaí, será feita de acordo com o processo

4.2 Preparações das colunas cromatográficas

4.3 Preparações das farinhas e extração das proteínas

4.4 Ensaio de hemaglutinação

Os testes de atividade hemaglutinante das frações obtidas após a cromatografia e análise de

Estimativa 2014: Incidência de Câncer no Brasil. In: INSTITUTO NACIONAL DE

WATTENBERG, L. W. Chemoprevention of cancer. Cancer Research, Chicago, v.45,

SILVA, D. F.; VIDAL, F. C. B.; SANTOS, D.; COSTA, M. C. P.; MORGADO-DÍAZ, J.

GOLDSTEIN,I.J.; HUGAES,R.C.;MONSIGNY,M.;OSAWA,T. & SHARON,N. What should be called a

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