Master-Biologie-fondamentale-1 - Fsa Agadir

La GFP
green fluorescent protein

Master Biologie fondamentale
Prsent par
HOURRA Fatima zahra

BOUDELLAH Abderrazzaq
ELHASSANI Sanaa
2016- 2017
Plan
INTRODUCTION
Dcouverte
Structure du GFP
Principe
Applications possibles
Conclusion
GFP
Introduction
La green fluorescent
protine (GFP) :est une
protine fluorescente verte
extraite de la mduse
Aequorea victoria , qui vit
dans les eaux du NordOuest Pacifique. Cette
protine a la particularit
dmettre de la
fluorescence sous UV sans
lajout de substrat ou de
cofacteurs.
GFP
Dcouverte
GFP
La protine GFP a t dcouverte en 1962

par Osamu Shimomura en extrayant la
protine ensemble avec son partenaire
naturel Aequorinde la mduse Aequoria
victoria.
En 2008, le Prix Noble de Chimie a t
attribu au japonais Osamu Shimomura et
aux deux amricains Martin Chalfie et
Roger Tsien pour la dcouverte et le
dveloppement de la GFP
La structure GFP
La GFP consiste de
238 acides amines
en 11 -feuillets
et une a-hlice
centrale.
Lensemble forme
un protine de 28
kDa avec une
structure appel
btonneau.
N-terminus et Cterminus sont
GFP
Fluorophore de la GFP
GFP
Le chromophore de la GFP est constitu des trois

acides amins Ser-Tyr-Gly en position 65 67. Sa
formation se produit aprs une cyclisation entre les
acides amins 65 et 67 puis une oxydation. Cest
seulement aprs loxygnation que la GFP peut tre
fluorescente.
Mcanisme de la GFP
GFP
En prsence doxygne, laequorine est une

protine dpendante du calcium couple la
coelentrazine. La fixation de calcium
provoque un changement conformationnel de
laequorine qui induit une oxygnation de la
coelentrazine. Cette raction doxydation
saccompagne dune mission de lumire
bleue. Il stablit alors un transfert dnergie
entre laequorine et la GFP. Ce transfert
dnergie conduit lmission dune lumire
verte de la GFP.
Mcanisme de la GFP
GFP
Aequorine
2X
(coelenteramide)
Ca2+
*
O2
O2
O2
Ca2+
CO2
Aequorine
(coelenterazine)
GFP
Aequorine
O2
Ca2+
Apoaequorine
Les applications de la GFP
La dcouverte de la GFP a permis de

concevoir de nombreuses applications pour
lobservation du monde du vivant :
Marqueur cellulaire
Marqueur molculaire
Gne rapporteur
GFP

la GFP(Green Fluorescent Protein) consiste intgrer
dans le gnome de la cellule observer un gne de
protine fluorescente, la protine synthtise est alors
fluorescente
Marquage cellulaire : Insertion du gne
codant la GFP dans une cellule (transfection)
Tri des cellules

(transformes ou
non) par cytomtrix
en flux

Marquage molculaire : Synthse dune protine
de fusion (protine dintrt/GFP)
Suivi de la protine de fusion par microscopie fluorescence

Gne rapporteur : Synthse dune protine possdant
une activit connue et dtectable (par exemple la
fluorescence).
Etude de lefficacit de promoteurs spcifiques, et les
facteurs influant sur lexpression dun gne dintrt
Vecteur de clonage : Expression et multiplication dun
fragment dintrt dans un hte. Production grande
chelle de protines (hormones de croissance par exemple)
CMV
MCS
pUC ori
EGFP
SV 40 Poly A
Kan
pEGFP N1
Fragment dintrt
MIAM !
C. Elegans produisant la
protine de fusion
C. Elegans
Aprs insertion de la
GFP et de ses mutants
au sein de diffrentes
bactries (Roger Tsien)
Exemple dapplication en mdecine

Cette fonction de la GFP consiste introduire le
gne codant pour la GFP celui codant pour une
autre protine, afin den faciliter le traage et
suivre son comportement dans des organes internes
dun organisme vivant et de ses cellules.
Pour cela, il insre le gne de la GFP, avant le
codon stop, qui met fin la traduction de lARN en
chane polypeptidique ( image 2 & 3)
La forte fluorescence mise par la GFP permet

une grande visibilit et un suivi prcis, et ne
ncessite lajout daucun composant.
Le suivi d'une tumeur chez une souris

La GFP permet de suivre galement la progression
d'une tumeur maligne cest pour cela en introduisant
dans l'organisme de la souris un virus spcifique au
cancer contenant dans sa squence en nuclotides le
gne codant pour la GFP. Ainsi le virus va
s'introduire dans la zone tumorale et l'illuminer
entirement et spcifiquement, ce qui permettra
ensuite d'observer l'volution de la tumeur in vivo,
sous lumire noire ( ou U.V ).
1ere semaine aprs l'insertion du virus
3 eme semaine apres insertion du virus
5eme semaine apres

insertion du virus
Sur les images ci dessus, le suivi se fait

l'aide de la RFP, variante de la GFP. La
souris, sans ses poils prsente une tumeur
du lobe parital droit. On observe son
volution ( voir images ci-dessous )
Conclusion
La GFP joue un rle trs important surtout dans

le domaine mdicale par ses principales
fonctions ( fusion , Marqueur. etc )

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HOURRA Fatima zahra

La protine GFP a t dcouverte en 1962

Le chromophore de la GFP est constitu des trois

En prsence doxygne, laequorine est une

Les applications de la GFP

La dcouverte de la GFP a permis de

Les applications de la GFP

Tri des cellules

Les applications de la GFP

Suivi de la protine de fusion par microscopie fluorescence

Les applications de la GFP

Les applications de la GFP

Les applications de la GFP

Les applications de la GFP

Exemple dapplication en mdecine

La forte fluorescence mise par la GFP permet

Le suivi d'une tumeur chez une souris

1ere semaine aprs l'insertion du virus

3 eme semaine apres insertion du virus

5eme semaine apres

Sur les images ci dessus, le suivi se fait

La GFP joue un rle trs important surtout dans

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