Interna : Garrido Ortiz Judith E

Salmonella

El genero Salmonella recibe el nombre en honor al

microbiólogo americano Daniel Elmer Salmon (1850 – 1914)
quien en 1876 fue reconocido como el primer doctor en
medicina veterinaria graduado en un universidad de los
Estados Unidos, junto a Theobald Smith (1859 -1934),
conocido por su trabajo con anafilaxis, fueron quienes
descubrieron los gérmenes designados como salmonelas ,
en 1885, aislándolos de cerdos con cólera.
Salmonella spp es el grupo más complejo de todas las enterobacterias con más de dos mil cuatrocientos serotipos
descritos en el esquema Kauffman White, determinados por la composición de los antígenos somáticos (O),
flagelares (H), o de superficie Vi(k).
CARACTERÍSTICAS GENERALES DE SALMONELLA SPP

 Es una bacteria zoonotica

El género Salmonella pertenece a la familia de las Enterobacteriaceae.
está integrada por bacilos Gram negativos, anaerobios facultativos, no
esporulados.
generalmente móviles por flagelos perítricos ,excepto S. Gallinarum y
S.Pollorum que son inmóviles.
 utilizan citrato como única fuente de carbono y poseen metabolismo de
tipo oxidativo y fermentativo.
Miden de 0.7 – 1.5 µm de ancho x 2 – 5 µm de largo.
 El pH de crecimiento oscila entre 4-9 con un óptimo
entre 6.5 y 7.5.

 Su crecimiento se inhibe completamente a

temperaturas inferiores a 7ºC,
pH <3.8

Para su crecimiento no requieren cloruro de sodio pero pueden crecer en concentraciones que van desde 0.4%
al 4%.
La mayoría de los serotipos de Salmonella crecen en un rango de temperatura que va desde 5ºC a 47ºC, con
una temperatura óptima de 35ºC-37ºC, algunas pueden llegar a crecer a 2ºC o 4ºC y hasta 54ºC.
 ESTRUCTURA ANTIGÈNICA

Hay dos tipos de factores somáticos:

 Hay más de 60 especificidades o fases
 Los factores mayores: identifican el grupo
antigénico. antigénicas flagelares.
Ej.: S. Typhimurium (4), S. Enteritidis (9).
 La mayoría de las serovariedades de
 Los factores menores: tienen poco o nulo
valor discriminativo porque Salmonella tienen 2
 siempre están asociados a otro factor. Ej.: fases antigénicas flagelares. (difásicas)
factor 12 siempre está
 asociado al 2, 4 y antigénica
Los estructura 9. somática se  Pocas salmonelas tienen 1 especificidad
denomina con la letra O seguida de números
antigénica
arábigos separados por comas.
flagelar. (monofásicas).

S. Typhimurium: O: 1, 4, 12.
 Los antígenos flagelares se pueden
clasificar en mayores
S. Enteritidis: O: 1, 9, 12.
y menores.
-
VÍAS DE TRANSMISIÓN
La Salmonella puede llegar a los alimentos por varias vías:

1. En origen: en las explotaciones avícolas y ganaderas por una inadecuada manipulación de los alimentos
derivados de los animales. La presencia de Salmonella spp. en los alimentos de origen animal es debida,
mayoritariamente, a contaminación de origen fecal durante los procesos de obtención, aparte de la
contaminación endógena de los huevos.

2. En proceso por falta de higiene e inadecuada

manipulación de los alimentos:
 • Contaminación cruzada en los mataderos, en las
fases posteriores de transformación de los alimentos,
y en la preparación y cocinado de los alimentos en el
hogar.
 • Personas: Los manipuladores de alimentos pueden
ser portadoras de Salmonella, de forma que al
manipular los alimentos, sin tener en cuenta unas
buenas prácticas de higiene, contaminan los
alimentos.
 • Agua: El agua de riego puede estar contaminada con
Salmonella, transmitiéndose a las frutas y verduras
 DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO DE
SALMONELLA SPP.

Los métodos microbiológicos tradicionales para la detección de Salmonella, no van encaminados al conteo de
esta bacteria, se considera una técnica cuyo resultado se expresa cualitativamente, determinando su
presencia o ausencia en diferentes matrices.

La detección está basada en el empleo de medios de cultivo selectivos y posterior caracterización de las
colonias mediante pruebas bioquímicas y serológicas.

El método estándar o prueba de oro en clínica es el coprocultivo, el cual tiene gran valor en estudios
epidemiológicos, pero, por su carga de trabajo, costo y volumen, suele ser de bajo rendimiento y bajo costo-
efectividad, siendo la positividad de 1.8% a 4.4 %,
La Association of Official Analytical Chemist (AOAC) , describe los pasos a seguir para obtener
buenos resultados, los cuales pueden demorar entre 4 a 5 días. El aislamiento e identificación de
Salmonella en una muestra requiere de cuatro etapas que se precisan a continuación:

A. ETAPA DE PRE-ENRIQUECIMIENTO.
a.- ETAPA DE PRE- ENRIQUECIMIENTO
Se realiza a partir de medios de cultivo no
selectivos como agua peptonada, caldo
nutritivo, caldo lactosado o agua destilada
estéril adicionada con solución de verde
brillante al 0,1% en el caso de leche en polvo .
Es necesario una incubación a 37º durante
18 a 24 horas.
 Objetivo:
Revivificación de las salmonellas lesionadas, incrementar
su vitalidad y que adquieran las condiciones fisiológicas
adecuadas para su desarrollo.

Medio de cultivo: .
Agua peptonada y tamponada o caldo lactosado.
- La peptona y los fosfatos revitalizan el germen.
- El buffer evita que haya cambios bruscos de pH, que
perjudican el desarrollo de Salmonella.

Procedimiento:
 Se prepara una solución de 1/10.
(25 gr de la muestra en 225 ml de agua peptonada y
tamponada.)
 Incubar a 37 °C durante 24 hs.
 B. ETAPA DE ENRIQUECIMIENTO SELECTIVO.

Esta etapa estimula y favorece el crecimiento de Salmonella spp. inhibiendo el crecimiento de

la flora acompañante; los medios de cultivo utilizados son: Caldo Tetrationato-Bilis-Verde
Brillante según Mueller-Kauffmann, Caldo Rappaport-Vasiliadis (RV) y Selenito Cistina (SC).

En el medio selectivo caldo tetrationato- Bilis-Verde Brillante

 el tetrationato inhibe el crecimiento de coliformes y otras bacterias intestinales.
 la bilis estimula el crecimiento de Salmonella e inhibe la flora competitiva.
 el verde brillante impide el desarrollo de la flora gram positiva y el carbonato cálcico actúa
como tampón para mantener el pH.

Se coloca 1 ml del caldo de pre-enriquecimiento en 10 ml de caldo de tetrationato. Incubar a 37°C durante

24 hs. (Otros medios: caldo de selenito-cistina, RVS (Caldo Rappaport
Incubar 24Vassiliadis
hs peptona de Soja).
 C. ETAPA DE AISLAMIENTO EN MEDIOS
SELECTIVOS.
Esta etapa permite la diferenciación de colonias de Salmonella de otras bacterias, esta diferenciación radica
en la composición de los distintos medios que permiten el crecimiento de las colonias con aspectos
característicos.
Para aislar y diferenciar las colonias de Salmonella, los medios de cultivo contienen sustancias inhibitorias
tales como:
antibióticos, sales biliares, desoxicolato, verde brillante, bismuto de sulfito .
Los medios más empleados son: agar Entérico Hektoen (EH) , agar Xilosa, Lisina, Desoxicolato (XLD) y agar
Bismuto sulfito (BS).
Procedimiento: Se colocan dos ansadas del cultivo del caldo de tetrationato y se siembra en una placa de
Hektoen, realizando cuatro estrías para obtener colonias aisladas. Incubar a 37°C durante 24 a 48 hs.

Incubar 48 hs
En Agar entérico Hektoen (HE): Colonias azules o verde
azuladas con o sin centro negro.
Muchos cultivos de Salmonella spp pueden producir
colonias con un centro negro grande brillante o colonias
casi completamente negras.
En Agar Xilosa Lisina Desoxicolato (XLD):
Colonias rosadas con o sin centro negro.
Muchos cultivos de Salmonella sp pueden
producir colonias con un centro negro grande
brillante o colonias casi completamente
negras.
En Agar Bismuto Sulfito (BS): Colonias
marrones, gris o negras, a veces con brillo
metálico.
El medio es usualmente marrón al principio
se torna negro conforme se incrementa el
tiempo de incubación, produciéndose el
llamado efecto “halo”
Es un medio ideal para aislar Salmonella, a partir de muestras con flora normal
numerosa, ej.: materia fecal.

Componentes del medio:

- Sales biliares: inhiben bacterias gram-positivas y retarda a los coliformes.

- Lactosa y peptonas. (Fuente de energía)
- Azul de bromotimol (AB) Indicador de pH: . --Vira a pH alcalino.
- Fucsina ácida (FA) Colorante: -------------Precipita a pH ácido. (reacciona c/azul de
timol produce color amarillo y rosado cuando baja el pH)
- Citrato férrico de amonio.

El AB y la FA sirven para diferenciar las colonias lactosa negativas y positivas.

Bacterias lactosa negativas: utilizan las peptonas--alcalinizan el medio. El medio es de

color verde-azulado. (Ej.: Salmonella).
Bacterias lactosa positivas: utilizan la lactosa– acidifican el medio. El medio es de color
rosado o salmón.
(Por ej.: E. coli). Colonias naranjas o rosa salmón.
El citrato férrico sirve para revelar la producción de Sh2. Se observa un ennegrecimiento
en la colonia.

Aspecto de las colonias de Salmonella:

Objetivo:
Obtener un cultivo puro a partir de 1 colonia de aspecto compatible con Salmonella
para realizar posteriormente las pruebas bioquímicas.

 Medio de cultivo: Agar Tripticasa Soya (ATS).

 Procedimiento: A partir del cultivo de la placa de Hektoen seleccionar una colonia

sospechosa de Salmonella y repicarla en una placa de ATS.
Incubar a 37°C durante 18 a 24 hs.

 Aspecto de las colonias de Salmonella en ATS: convexas, bordes netos, blancas

(producen pigmento), superficie lisa y brillosas.
Características: Es un medio selectivo y diferencial.

 Selectivo: Contiene sales biliares y cristal violeta que inhibe las bacterias
gram-positivas.

 La lactosa es el único hidrato de carbono.

 El medio tiene un indicador de pH que es el rojo neutro. (pH acido=rojo)

 Las bacterias fermentadoras de lactosa producen colonias con distintos

tonos de rojo, debido a la conversión del colorante rojo neutro (rojo pH ≤
6,8) por la producción de ácidos mixtos.
 Las bacterias no fermentadoras de lactosa producen colonias
transparentes.

Aspecto de las colonias de Salmonella:

Colonias incoloras.

Salmonella al no fermentar la lactosa no vira el pH del medio y el indicador

rojo neutro no cambia de color.
Colonia lactosa Colonia lactosa
positiva negativa
- Es un medio altamente selectivo formulado para inhibir la mayoría de
los coliformes y permitir el desarrollo de Salmonella y Shigella.

- Tiene el mismo fundamento que el Agar Mc Conkey.

- La lactosa es el único hidrato de carbono y el rojo neutro es el
indicador de pH.
- Las altas concentraciones de sales biliares y el citrato de sodio
inhiben a los gram-positivos y a los coliformes.

El agar SS además contiene citrato férrico y tiosulfato de sodio. Las

bacterias productoras de sulfuro de hidrógeno (Sh2) se detectan por
un precipitado negro.

Aspecto de las colonias de Salmonella:

Colonias incoloras, centro negro, medio amarillo.
PRUEBAS BIOQUIMICAS
 Fermentación de Glucosa con producción de acido y gas (excepto S.
typhi)
 Oxidasa Negativo
 Catalasa Positivo
 Indol y Voges – Proskauer (VP) Negativo
 Rojo de Metilo y Citrato de Simmons Positivo
 Producen H2S
 Urea Negativo
 Lisina, Ornitina y Descarboxilasa positivo
 Reducción de Nitratos a Nitritos
 No desaminan la fenilalanina
D. PRUEBAS BIOQUÍMICAS
DIFERENCIALES.

En esta etapa se diferencian las

bacterias por
su actividad metabólica.

La identificación o confirmación de las

colonias
presuntivas de Salmonella, se lleva a
cabo en dos medios diferenciales
usados simultáneamente como el agar
triple azúcar hierro (TSI) y el agar
Lisina hierro (LIA) , también se realizan
pruebas bioquímicas complementarias
como urea, fermentación del dulcitol,
crecimiento en caldo KCN, utilización
del malonato de sodio y producción del
indol (ver tabla 2).
 Para identificar el género Salmonella spp.
se realizan dos pruebas bioquímicas de
tamizaje:
1) AGAR TRIPLE AZÚCAR HIERRO (TSI)

2) AGAR LISINA HIERRO (LIA).

TSI LIA
 LIA
Fundamento:
 En el LIA, hay glucosa (escasa cantidad) y lisina que es la principal fuente de energía. Para aprovechar la
lisina la bacteria necesita tener alguna de las enzimas que la pueden degradar.
 Enzimas: La enzima lisina decarboxilasa (Anaerobiosis) o la lisina desaminasa (Aerobiosis).

Condiciones para que se realice la reacción enzimática:

 El medio debe tener pH acido, por lo tanto primero tiene que fermentar la glucosa.
 Anaerobiosis. (La reacción se produce en el fondo del tubo).

 Reacción decarboxilación de la lisina: Lisina-------Cadaverina. (Color púrpura)

 Reacción desaminación de la lisina: Lisina-------Acido Cetocarbónico. (color pardo-rojizo).

Componentes del medio LIA:

 Contiene lisina y glucosa.
 El indicador de pH es el púrpura de bromocresol.

Posibles reacciones en el LIA:

 Si la bacteria decarboxila la lisina a cadaverina se alcaliniza el medio y vira a color violeta.
 Si la bacteria no decarboxila la lisina, fermenta la glucosa, acidifica el medio y vira todo el medio al color
amarillo.
 Si la bacteria desamina la lisina, se observa el pico de flauta de color pardo-rojizo.
 TSI
Lactosa: Negativo
•Pico: Alcalino (K) (rojo).
•Fondo: Acido (A) (amarilla). K
•La producción de Hidrógeno Sulfurado K
(Sh2)(negro) oculta el fondo amarillo.

K
LIA:
Lisina: Positivo A
• Pico y fondo: Alcalino (K) (púrpura).
• Producción de Sh2.

LIA TSI
 PRINCIPIO
Es una sal del acido cítrico.
CITRATO Algunas bacterias pueden obtener energía de fuentes distintas de la fermentación de los
hidratos de carbono, con el citrato como única fuente de carbono.
La medición de esta característica es importante para identificar muchos miembros de la
familia Enterobacteriaceae. Cualquier medio usado para detectar la utilización del citrato por
las bacterias que se van a probar debe carecer de proteínas e hidratos de carbono como
fuente de carbono.
RESULTADOS
La prueba positiva
PROCEDIMIEN esta representada por
TO Se toma una la producción de color
colonia bien azul oscuro en el
aislada de la termino de 24 a 48
superficie de un horas, que indica que
medio de el microorganismo en
aislamiento prueba ha sido capaz
primario y se de utilizar el citrato
siembra en contenido en el medio,
forma de estría con formación de
única en el pico productos alcalinos.
de flauta (agar
El tubo se incuba a 35 °C durante 24 a 48 horas
inclinado) del
 PRINCIPIO.
UREASA Es una diamida del acido carbónico
Todas las amidas se hidrolizan fácilmente, con liberación de amoniaco y dióxido de
carbono.
El amoniaco reacciona en solución para formar carbonato de amonio, lo que produce
alcalinización y aumento de pH del medio.
PROCEDIMIENTO El medio liquido se siembra con un ansa de cultivo puro del
microorganismo por probar.
La superficie inclinada del agar (pico de flauta) se siembra en
estría con el microorganismo por probar. Ambos medios se
incuban a 35 °C durante 18 a 24 horas.

RESULTADOS Caldo de Stuart:

Un color rojo en todo el medio indica
alcalinización e hidrolisis de la urea.

. Ausencia de hidrolisis de la urea: el

medio conserva su color amarillo original.
VOGES - PROSKAUER
PROCEDIMIENTO Sembrar un tubo de caldo MR/VP con un cultivo puro del microorganismo por
probar. Incubar 24 horas a 35 °C.
Finalizada la incubación, transferir 1 ml del caldo a un tubo de ensayo limpio. Agregar 0,6 ml de a-
naftol al 5%, seguidos de 0,2 ml de KOH al 40%.
Es esencial que los reactivos sean agregados en ese orden. Agitar suavemente el tubo para
exponer el medio al oxigeno atmosférico y dejar el tubo en reposo durante 10 a 15 minutos.
RESULTADOS Positivo: desarrollo de color rojo 15 minutos o mas después del agregado de
los reactivos, que indica la presencia de diacetilo, el producto de oxidación de la acetoina.

La prueba no debe leerse mas allá de una hora después

de dejar los tubos en reposo, porque los cultivos Voges-
Proskauer negativos pueden producir un color cobrizo,
que se puede interpretar como un positivo falso.
 La prueba del rojo de metilo es una prueba cuantitativa de la producción
de acido, que requiere que los microorganismos positivos produzcan
ROJO DE METILO ácidos fuertes (lactico, acetico, formico) de la glucosa.

PROCEDIMIENTO Sembrar el caldo MR/VP con un cultivo puro del

microorganismo en estudio. Incubar el caldo a 35 °C durante 48 a 72 horas
(no menos de 48 horas).
2. Finalizada la incubación, agregar 5 gotas del reactivo de rojo de metilo
directamente al caldo.

RESULTADOS Positivo: El desarrollo de color rojo estable en la

superficie del medio indica la suficiente producción de acido como para
disminuir el pH a 4,4.
Negativo: Como otros microorganismos pueden
producir pequeñas cantidades de acido del sustrato
probado, puede observarse un color naranja,
intermedio entre amarillo y rojo.
Esto no indica una prueba positiva.
 PRINCIPIO Es uno de los productos de degradación metabólica del aminoácido triptófano.
INDOL La prueba del indol se basa en la formación de un complejo de color rojo cuando el indol
reacciona con el grupo aldehído del p-dimetilaminobenzaldehido.

En la practica se utilizan medios combinados, como el medio de sulfuro indol para motilidad
(SIM), el medio para motilidad indol omitina (MIO) o el medio indol nitrato.
SIM: Sulfuro indol movilidad
Determinar si un organismo es móvil o inmóvil, si es capaz de liberar ácido
sulfhídrico por acción enzimática de los aminoácidos que contienen azufre
produciendo una reacción visible de color negro y por último la capacidad de
desdoblar el indol de la molécula de triptófano.

Producción de ácido sulfhídrico

Producción de Indol

Movilidad
MIO: PRINCIPIO : El MIO se utiliza para la identificación de
Movilidad, Indol, enterobacterias sobre la base de movilidad, la producción de
Ornitina ornitina descarboxilasa e indol.

• Composición del medio: 1. Descarboxilación de ornitina

• Extracto de levadura 2. Producción de indol
• Peptona 3. Movilidad
• L-Ornitina
• Dextrosa
• Agar
• Agua
• Indicador de pH: púrpura de bromocresol
• Ácido: amarillo pH 5.2
• Alcalino: Púrpura pH 6.8
• Medio no inoculado: Púrpura intenso brillante pH 6.0
Descarboxilación de ornitina:
mide la capacidad enzimática de
un organismo para descarboxilar
un aminoácido para formar una
amina, con la consiguiente
alcalinidad.
PRODUCCION DE INDOL
El triptófano es un aminoácido que puede Indol:
ser oxidado por ciertas bacterias para formar Positivo: Anillo rojo en la superficie del medio
tres metabolitos principales: indol, escatol e Negativo: No se produce color /Color naranja en la superficie del
indolacético. medio indica desarrollo de escatol, un compuesto metilado que
La formación de indol se produce solamente puede ser precursor de la formación de indol.
en aquellos organismos capaces de fermentar
los hidratos de carbono.
MOVILIDAD
Positiva: los organismos móviles
migran de la línea de siembra y se
difunden en el medio provocando
turbiedad.
Negativa: Crecimiento bacteriano
acentuado siguiendo la línea de
siembra.
 PRODUCCION DE ACIDO SULFHIDRICO
La bacteria reacciona con el tiosulfato de sodio por medio de una reacción de reducción que da un sulfito y un
sulfato.
El gas incoloro SH2 reacciona con una sal pesada, citrato
férrico de amonio para producir un precipitado negro
insoluble, sulfato ferroso.
AGAR SIM: sembrar con asa recta, por picadura central
hasta la mitad del tubo.
Principio: EN AGAR SIM se determina la capacidad e un
microorganismo de moverse (presencia e flagelos), de
producir INDOL y H2S.

Lectura: Se efectúa de 18 a 24 horas de incubación a

37ºC. Agregar 10 gotas de reactivo de ERLICH.

Fundamento: el INDOL es uno de los productos del

metabolismo del aminoádico TRIPTOFANO. Las bacterias
que poseen la enzima TRIPTOFANASA son capaces de
hidrolizar y desaminar el triptófano con producción de
indol, ácido pirúvico y amoniaco.
El indol se puede detectar en un medio adecuado
observando el desarrollo de un color rojo después de
agregar el reactivo de Erlich o de Kovacs indicando una
prueba POSITIVA, debido a que el indol reacciona con el
grupo aldehído del p- dimetilaminobenzaldehido
 Características generales de
Shigella.
El género Shigella produce disentería bacilar
que se caracteriza por diarrea con moco y Shigella es un género bacteriano perteneciente a la
sangre. Esta bacteria sólo afecta al hombre. familia Enterobacteriaceae, integrado por bacterias de
forma bacilar, no esporuladas, inmóviles, pero animados
de movimiento pendular (oscilación) in situ.
Shigella carece de flagelos por lo cual es inmóvil
 Son gram negativos, aerobios-anaerobios facultativos.
 Citocromo-oxidasa negativos.
 Fermentan la glucosa sin producción de gas; no
obstante, se han encontrado algunos biotipos que
producen gas de la glucosa.
 No descarboxilan la lisina. No fermentan la lactosa.
 No utilizan el citrato como única fuente de carbono.
 No crecen en el medio cianuro potásico.
 Su actividad bioquímica es muy reducida.

El género Shigella se divide en cuatro especies: S.

Fases del aislamiento e identificación de Shigella, Filtración de Membrana y Pre
enriquecimiento en medio líquido.
Aislamiento diferencial sobre medios sólidos selectivos.
Confirmación bioquímica de las colonias sospechosas.
F. Fase 2.-Aislamiento diferencial en medios
sólidos selectivos
En esta etapa se utilizan medios de cultivo diferenciales que por su composición permiten que las colonias
de Shigella crezcan con un aspecto característico en cada uno de ellos (colonias típicas)

A partir del Agar Agar

cultivo Xilosa- Mac
obtenido en Lisina- Conk
ey
el pre Desoxicol
enriquecimie ato
nto sembrar, (Xylose
por Lysine
duplicado, Desoxych
con asa de olate:
cultivo XLD)
sobre:
Agar
(S-S):
CRECIMIENTO AGAR XILOSA-LISINA-DESOXICOLATO (XLD):
CARACTERÍSTICO CRECIMIENTO CARACTERÍSTICO

Las colonias Las colonias

sospechosas sospechosas de
de Shigella Shigella crecidas sobre
crecidas en Agar Xilosa Lisina
Agar Desoxicolato (XLD)
Salmonella- son transparentes y del
Shigella son mismo color que el
transparentes, medio de cultivo (rojo).
translúcidas u
opacas y Este género bacteriano
suelen ser lisas. al no fermentar la
En este medio xilosa, la lactosa ni la
las colonias de sacarosa, no da lugar a
otros que vire a amarillo el
microorganismo rojo fenol. Como
s que tampoco descarboxilan
fermentan la la lisina, no se produce
AGAR MAC CONKEY: CRECIMIENTO
CARACTERÍSTICO

Las colonias sospechosas de Shigella en Agar

Mac Conkey son incoloras y transparentes. En
este medio las colonias de otros
microorganismos que fermentan la lactosa
(coliformes) son colonias rojizas.
Identificación Bioquímica
Esta identificación se suele realizar en 2 subfases:

 Subfase 4A: Identificación bioquímica inicial con unas pruebas determinadas: Generalmente, fermentación
de glucosa y lactosa (TSI), descarboxilación de la lisina (LIA) y utilización de la urea.

 Subfase 4B: Identificación bioquímica final con un sistema multipruebas: Esta subfase sólo se realiza con
las cepas seleccionadas en la subfase
Subfase 4A. Identificación bioquímica inicial

Aislar, como mínimo, dos colonias con aspecto típico de Shigella de cada uno de los medios de
aislamiento selectivo utilizados.
Sembrar cada
Sembrar, por
colonia en Agar
picadura en el
Hierro Triple
fondo y por estría
Azúcar (TSI),
en la superficie
con aguja de
inclinada del medio
cultivo, primero
Agar Lisina Hierro
en el fondo por
(LIA).
picadura y
luego, en la
superficie
inclinada por
Sembrar,
.
con asa
de
siembra
en Caldo
Urea

Incubar los tubos de

TSI y Urea a 37 ºC
durante 24 horas y
los de agar LIA a 37
ºC durante 24-48
horas.
 REACCIONES POSITIVAS DE LAS PRUEBAS AGAR LISINA-HIERRO
BIOQUÍMICAS:
AGAR TRIPLE-AZUCAR-HIERRO

Shigella da la Shigella da la
siguiente siguiente
reacción sobre reacción sobre
TSI: LIA:
- Alcalina (rojo) - Alcalina (color
en la superficie púrpura) en la
inclinada. superficie
- Ácida inclinada.
(amarillo) en el - Ácida (amarillo)
fondo. en el fondo.
- Sin - Sin Producción
producción de de SH2
SH2 (sin (ennegrecimiento
ennegrecimient del fondo del
o del fondo del tubo). LCD (-), SH2 (-)
tubo).
Lactosa (-), Glucosa (+), SH2 (-) con o sin gas
CALDO UREA

Las Shigella no son capaces de

utilizar urea.
El medio urea contiene un REACCIÓN NEGATIVA
indicador de pH que vira a color
rosa fuerte cuando la reacción es
positiva.
La reacción debe ser negativa:
urea (-).
Permanece el mismo color que
antes de la incubación

REACCIÓN POSITIVA
RM
POSITIVO. INDOL CITRATO
VP UREASA
NEGATIVO. POSITIVO NEGATIVO. NEGATIVA
(fermenta /NEGATIVO. (no utiliza
Es la (no poseen
glucosa, por Presencia de sales amonio
busqueda de enzima
la vía mixta. triptofanasa como fuente
diacetil = ureasa)
Con (+/-) de nitrgeno)
producto final
producción
del acetil-
de
metil-carbinol
metabolitos)
.
Subfase 4B. Identificación bioquímica final
 Becton Dickinson GmbH

PRINCIPIOS Y EXPLICACION DEL PROCEDIMIENTO

USO PREVISTO Método microbiológico.
BD Salmonella El agar Salmonella- Shigella es una modificación del agar
Shigella Agar citrato desoxicolato descrito por Leifson1. Se le considera
(agar SS) es un un medio moderadamente selectivo según el nivel de
medio selectivo y inhibición de los microorganismos gram positivos y
de diferenciación Enterobacteriaceae diferentes de Salmonella y Shigella,
para el que inhibe por contenido de sales biliares, verde brillante
aislamiento de y citratos.
bacilos entéricos En BD Salmonella Shigella Agar, la diferenciación de los
patógenos, en organismos entéricos se logra mediante la incorporación
especial los de lactosa en el medio. Los organismos que fermentan
pertenecientes al lactosa producen ácido que, en presencia del indicador
género rojo neutro, propicia la formación de colonias de color
Salmonella, a rojo. Los organismos no fermentadores de lactosa forman
partir de colonias incoloras. Este último grupo incluye la mayoría
muestras de los patógenos intestinales, incluidas Salmonella y
clínicas. Shigella.
El tiosulfato sódico y el citrato férrico permiten la
detección de producción de ácido sulfhídrico, como lo
Salmonella Shigella Agar.
Medio de cultivo utilizado para el aislamiento de Salmonella spp. y de algunas especies de Shigella spp. a
partir de heces, alimentos y otros materiales en los cuales se sospeche su presencia.

Fundamento
Es un medio de cultivo selectivo y diferencial.
La selectividad, esta dada por la sales biliares y el verde brillante, que inhiben el
desarrollo de bacterias Gram positivas, de la mayoría de los coliformes y el desarrollo
invasor del Proteus spp.
Es diferencial debido a la fermentación de la lactosa, y a la formación de ácido
sulfhídrico a partir del tiosulfato de sodio.
Los pocos microorganismos fermentadores de lactosa capaces de desarrollar,
acidifican el medio haciendo virar al rojo el indicador de pH, obteniéndose colonias
rosadas o rojas sobre un fondo rojizo.
Salmonella, Shigella y otros microorganismos no fermentadores de lactosa, crecen
bien en el medio de cultivo, y producen colonias transparentes.
La producción de ácido sulfhídrico se evidencia como colonias con centro negro
debido a la formación de sulfuro de hierro.
Para aumentar la selectividad, se recomienda incubar previamente la muestra en
Selenito caldo (B02-120-05).
 Incubación
Fórmula (en gramos por litro) Instrucciones Durante24-48 horas a 35-37 °C, en
Pluripeptona 5.0
aerobiosis.
Extracto de carne 5.0
Lactosa 10.0 Microorganismos Colonias
Suspender 60 g del polvo por litro de agua destilada.
Mezcla de sales biliares 8.5 Reposar 5 minutos y mezclar hasta homogeneizar. Salmonella typhimurium ATCC 14028 Transparentes, centro negro
Citrato de sodio 8.5 Calentar a ebullición durante 2 o 3 minutos. NO
Shigella flexneri Incoloras
Tiosulfato de sodio 8.5 ESTERILIZAR EN AUTOCLAVE. Enfriar a 45-50°C y
Shigella sonnei Incoloras
Citrato férrico 1.0 distribuir unos 20 ml por placa. Secar la superficie
del medio unos minutos en la estufa. Proteus mirabilis ATCC 43071 Transparentes, centro negro
Agar 13.5
Escherichia coli ATCC 25922 Rosadas a rojas
Verde brillante 0.00033
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Rosadas cremosas y mucosas
Rojo neutro 0.025
Enterococcus faecalis ATCC 29212 Incoloras, de muy escaso crecimiento
pH final: 7.0 ± 0.2

Siembra
Sembrar por estriado la superficie del medio
de cultivo.
Recomendaciones, se aconseja sembrar en
forma conjunta una placa de agar E.M.B.
(B02-101-05) o de agar Mac Conkey (B02-
114-05).