BILIRRUBINA TOTAL DPD

MÉTODO DPD
Para la determinación “in vitro” de bilirrubina total en suero o plasma

PRINCIPIO PROCEDIMIENTO
Los tensoactivos presentes en el reactivo liberan la bilirrubina indirecta
permitiendo que reaccione, junto con la conjugada, con la sal de diazonio
(DPD) formando un compuesto de azobilirrubina de color rojo en medio ácido. Técnica BL M PR
mL mL
La intensidad del color producida en la reacción es directamente proporcional a
la concentración de bilirrubina total presente en la muestra. Tampón (A) 0,8 0,8
Dis. salina 0,2 --
UTILIDAD DIAGNÓSTICA
La bilirrubina es un producto de degradación de la hemoglobina que se transporta Sustrato (B) -- 0,2
al hígado unida a la albúmina. Allí se conjuga con ácido glucorónico y se excreta Muestra 0,08 0,08
a través de la bilis. Esta bilirrubina conjugada es la llamada bilirrubina directa,
mientras que la bilirrubina no conjugada se denomina bilirrubina indirecta. La
Mezclar e incubar a la temperatura de reacción (37ºC).
bilirrubina total en el suero equivale a la bilirrubina directa más la bilirrubina
indirecta. Leer exactamente a los 5 min.
El aumento de la bilirrubina indirecta o de la total puede indicar alteraciones
hepáticas, obstrucciones biliares, enfermedades hemolíticas, ictericia neonatal Lectura
fisiológica, enfermedad Gilbert o intolerancia a la fructosa. Longitud de onda: 546 nm
Una única prueba de laboratorio no permite establecer un diagnóstico. Los Blanco: H2O
resultados se han de evaluar en el contexto de todos los datos clínicos y de Cubeta: 1 cm de paso de luz
laboratorio obtenidos.
CÁLCULOS
REACTIVOS Δ Abs = Abs PR - Abs BL M
Kit 1 x 300mL. (Ref 99 05 39). Contiene: Donde:
A. 1 x 240mL Tampón Ref. 99 07 49 Abs. PR: Absorción de la muestra
B. 1 x 60mL Sustrato Ref. 99 07 89 Abs BLM: Absorción del blanco de muestra

PREPARACIÓN DEL REACTIVO DE TRABAJO Δ Abs x 17.4* = mg bilirrubina total / dL

Los reactivos están listos para su uso. *Factor obtenido con el reactivo QCA y el autoanalizador BT3500.

COMPOSICIÓN DEL REACTIVO Unidades SI

La concentración en la disolución es: mg / dL x 17,1 = μmol / L
Reactivo (A)
HCl 50mM VALORES DE REFERENCIA
Tensoactivos <2% Adultos: hasta 1,2 mg/dL
Recién nacidos:
Reactivo (B) < 14 días 0,19 - 16,6 mg/dL
HCl 150 mM < 15 días-1 año 0,05 - 0,68 mg/dL
2,4-DPD >2mM 1-3 años 0,05- 0,40 mg/dL
Conservantes Estos valores son orientativos. Se recomienda que cada laboratorio establezca
sus propios valores de referencia.
CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD PRESTACIONES. CARACTERISTICAS DE FUNCIONAMIENTO.
Los componentes del kit almacenados a 2-8ºC son estables hasta la Las características de funcionamiento de un producto dependen tanto del
fecha de caducidad indicada en la etiqueta, protegidos de la luz y evitando reactivo como del sistema de lectura empleado. Se recomienda calcular los
contaminaciones. siguientes datos para cada sistema concreto. Los resultados siguientes se han
Indicaciones de alteración de los reactivos: obtenido con un analizador automático BT3500.
Presencia de partículas. Blanco del reactivo de trabajo > 0,300.
MATERIAL NECESARIO NO SUMISTRADO Sensibilidad, como límite de detección: 0,06 mg/dL
Material común de laboratorio. Margen de reacción: Hasta 28,1 mg/dL. Para concentraciones superiores a
Espectrofotómetro, analizador automático o fotómetro termostatizado a 37ºC. 28,1 mg/dL, se aconseja diluir 1/10 la muestra con salina (Na Cl 0,9%).
Cubeta de 1cm de paso de luz. Multiplicar el resultado final por 10.
MUESTRA Exactitud, como % de recuperación: 102%
Suero o plasma exento de hemólisis. El suero/plasma separado es estable 2 Precisión en la serie, como CV%: 1,63%
días a temperatura ambiente y 4-7 días si están a 2-8ºC. Congeladas a -20ºC Precisión entre series, como CV%: 4,74%
pueden conservarse estables más de 3 meses. Veracidad. Los resultados obtenidos con el reactivo no presentan diferencias
Proteger siempre de la luz. La bilirrubina sérica disminuye en un 50 % después significativas al compararlo con el reactivo considerado de referencia.
de 1 hora expuesta a la luz solar directa. Los datos detallados del estudio de las prestaciones del reactivo están
PRECAUCIONES disponibles bajo demanda.
Las indicaciones de seguridad se encuentran en la etiqueta de los productos.
Manipular con precaución. INTERFERENCIAS
Se aconseja consultar la ficha de datos de seguridad antes de la manipulación No se observan interferencias por hemoglobina hasta los 125mg/dL. Muestras
del reactivo. La eliminación de residuos debe hacerse según la normativa local lipídicas pueden interferir. Proteger las muestras de la luz.
vigente.
Para evitar errores al determinar bilirrubina total, es muy importante efectuar la
CONTROL DE CALIDAD
lectura exactamente a los 5 minutos de haber añadido el último reactivo.
Es recomendable la inclusión de sueros control, Seriscann Normal (Ref.
994148/996571) y Seriscann Anormal (Ref. 994685/999329) en cada proceso
BIBLIOGRAFÍA
de medida para verificar los resultados. Se recomienda calibrar con el Calibrador
Doumas, B. T.; et al. (1987) Clin. Chem., 33, 769-774.
para Autoanalizadores (Ref. 996280) siempre que se cambie el lote de reactivo
Malloy, H. et.al, (1937), 119, 481-490.
y/o calibrador y/o los sueros control no entren dentro de los márgenes.
Tietz, NW., Textbook of Clinical Chemistry 6th Edition, W.B. Saunders,
Se aconseja que cada laboratorio establezca su propio programa de control
Philadelphia (2018).
de calidad y los procedimientos de corrección de las desviaciones detectadas.
CLSI Guidelines and Standards, CLSI, Wayne, P.A
AUTOANALIZADORES Young D.S., Effect of drugs on Clinical Lab. Test, 5th Ed. AACC Press (2007).
Adaptaciones a distintos analizadores automáticos están disponibles bajo Modrovich, US5112769 (1992).
demanda.

QUIMICA CLINICA APLICADA S.A.

Empresa Certificada ISO 9001 / ISO 13485
A 7 Km 1081 – P.O. Box 20 - E43870 AMPOSTA / SPAIN
Tel. ++ 34 (977) 70. 62. 30 Fax ++ 34 (977) 70. 30. 40
Revisión: 01.2022 PRO4-9_BITDPD_1
DPD TOTAL BILIRUBIN
DPD METHOD
For “in vitro” determination of total bilirubin in serum or plasma

PRINCIPLE PROCEDURE
The surfactants present in the reagent release indirect bilirubin allowing it to
react, together with the conjugate, with the diazonium salt (DPD) forming a red
Technique BL S SA
azobilirubin compound in an acid medium. The intensity of the color produced in mL mL
the reaction is directly proportional to the concentration of total bilirubin present
in the sample. Buffer (A) 0.8 0.8
Saline 0.2 --
DIAGNOSTIC USE
Substrate (B) -- 0.2
Bilirubin is a breakdown product of hemoglobin that is transported to the liver
together with albumin. There it is conjugated with glucuronic acid and is secreted Sample 0.08 0.08
through bile. This conjugated bilirubin is the direct bilirubin, while unconjugated
bilirubin is called indirect bilirubin. Total bilirubin in serum is equivalent to direct Mix and let stand at reaction temperature (37ºC)
bilirubin plus indirect bilirubin. Read exactly at 5 minutes
High level of indirect or total bilirubin may indicate liver disorders, biliary
obstructions, hemolytic diseases, physiological neonatal jaundice, Gilbert’s Reading
disease or fructose intolerance. Wavelength: 546 nm
Blank: H2O
Single test result could not be used to make a clinical diagnosis. It should Cuvette: 1 cm light-path
integrate clinical and laboratory data.
CALCULATIONS
REAGENTS Δ Abs = Abs SA - Abs BL S
Kit 1 x 300mL. (Ref 99 05 39). Contains:
Where:
A. 1 x 240mL Buffer Ref. 99 07 49
Abs SA: Sample Absorption
B. 1 x 60mL Substrate Ref. 99 07 89
Abs BLS: Sample blank Absorption
WORKING REAGENT PREPARATION
Reagents are ready to use. Δ Abs x 17.4* = mg total bilirubin / dL
*Factor obtained with the QCA reagent and the BT3500 autoanalyzer.
REAGENTS COMPOSITION
Concentrations in the reagent solutions are: SI Units
mg / dL x 17.1 = μmol / L
Reagent (A)
HCl 50mM REFERENCE VALUES
Detergents <2% Adults: up to 1.2 mg/dL
Pediatric:
Reagent (B) < 14 days 0.19 - 16.6 mg/dL
HCl 150 mM < 15 days-1 year 0.05 - 0.68 mg/dL
2,4-DPD >2mM 1-3 years 0.05- 0.40 mg/dL
Preservatives The stated values are for guidance. Each particular laboratory should establish
its own normal range.
STORAGE AND STABILITY
The kit components stored at 2-8ºC are stable until the expiration date indicated on PERFORMANCE CHARACTERISTICS
the label, protected from light and contamination. Performance features depend on the reagent as well as the used analyzer. It is
recommended to calculate these data for each particular test system. The following
Signs of reagent deterioration: results have been obtained using an automated analyzer BT500.
Presence of particles in the reagent. Working reagent blank >0.300

ADDITIONAL EQUIPMENT Sensitivity, as detection limit: 0.06 mg/dL

General laboratory equipment. Reaction range: Up to 28.1 mg/dL. Concentrations higher than 28.1 mg/dL, it is
Spectrophotometer or photometer thermostatable at 37ºC. Cuvette: 1 cm light- recommended in such a case, to carry out a 1/10 dilution of the sample with saline,
path. (NaCl 0.9%) and then to multiply the final result by 10.
Accuracy: 102%
SAMPLE Repetitivity, as CV%: 1.63%
Serum or plasma free of hemolysis. The separated serum/plasma is stable for 2 Reproducibility, as CV%: 4.74%
days at room temperature and 4-7 days at 2-8ºC. Frozen at -20ºC samples can Trueness: Results obtained with this reagent did not show systematic differences
be kept stable for more than 3 months. when compared with reference reagent.
Always protect from light. Serum bilirubin decreases by 50% after 1 hour Details of the comparison experiments are available on request.
exposed to direct sunlight.
CAUTION
INTERFERENCES
The safety statements are on the label. Handle the reagent with care.
Haemoglobin interferences are not observed up to 125mg/dL. Lipdic samples could
It is advisable to read the SDS before the reagent manipulation.
interfere. Protect samples from the light.
The disposal of the residues has to be made according to local regulations.
QUALITY CONTROL To avoid possible errors when assaying for total bilirubin, it is very important to read
Control serum, Seriscann Normal (Ref. 994148/996571) and Seriscann Anormal the corresponding absorbance exactly 5 min. after the reagents have been added.
(Ref. 994685/999329) should be included in each test series. It is recommended
to calibrate with the Calibrator for Autoanalyzers (Ref. 99 62 80) whenever the
REFERENCES
batch of reagent and/or calibrator is changed and/or the control sera do not fall
Doumas, B. T.; et al. (1987) Clin. Chem., 33, 769-774.
within the margins.
Malloy, H. et.al, (1937), 119, 481-490.
Each particular laboratory should establish its own control program.
Tietz, NW., Textbook of Clinical Chemistry 6th Edition, W.B. Saunders,
AUTOANALYZERS Philadelphia (2018).
Adaptations to different autoanalyzers are available on request. CLSI Guidelines and Standards, CLSI, Wayne, P.A
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Revision: 01.2022 PRO4-9_BITDPD_1
BILIRUBINE TOTALE DPD
MÉTHODE DE DPD
Pour la détermination in vitro de la bilirubine totale dans le sérum ou le plasma

PRINCIPE TECHNIQUE
Les tensioactifs présents dans le réactif libèrent de la bilirubine indirecte lui
permettant de réagir, conjointement avec le conjugué, avec le sel de diazonium
(DPD) formant un composé azobilirubine rouge en milieu acide. L’intensité Technique BL E ESSAI
mL mL
de la couleur produite dans la réaction est directement proportionnelle à la
concentration de bilirubine totale présente dans l’échantillon. Tampon (A) 0,8 0,8
Solution saline 0,2 --
UTILITÉ DE DIAGNOSTIC
La bilirubine est un produit de dégradation de l’hémoglobine qui est transporté Substrat (B) -- 0,2
vers le foie avec l’albumine. Là, il est conjugué à l’acide glucuronique et est Échantillon 0,08 0,08
excrété par la bile. Cette bilirubine conjuguée est appelée bilirubine directe,
tandis que la bilirubine non conjuguée est appelée bilirubine indirecte. La Mélanger puis incuber à température du 37ºC.
bilirubine totale dans le sérum est équivalente à la bilirubine directe plus la Lire exactement au bout de 5 minutes.
bilirubine indirecte.
Une augmentation de la bilirubine totale ou indirecte peut indiquer une maladie Lecture
du foie, une obstruction biliaire, une maladie hémolytique, un ictère néonatal Longueur d’onde: 546 nm
physiologique, une maladie de Gilbert ou une intolérance au fructose. Blanc: H2O
Cuvette: 1 cm de trajet optique.
Un test de laboratoire unique ne peut pas établir un diagnostic. Les résultats
doivent être évalués dans le contexte de toutes les données cliniques et de
CALCULS
laboratoire obtenus.
Δ Abs. = Abs. Essai - Abs. BL E
RÉACTIFS Où:
Kit 1 x 300 mL. (Réf. 99 05 39). Contenu: Abs. ESSAI= Absorption de l’essai.
A. 1 x 240 mL Solution tampon Réf. 99 07 49 Abs. BL E = Absorption de Blanc de l’échantillon.
B. 1 x 60 mL Substrat Réf. 99 07 89
Δ Abs. x 17,4* = mg bilirubine totale / dL
PRÉPARATION DU RÉACTIF DE TRAVAIL *Facteur obtenu avec le réactif QCA et l’autoanalyseur BT3500.
Les réactifs A et B sont prêts à l’emploi.
Unités SI
COMPOSITION DES RÉACTIFS (mg / dL) x 17,1 = μmol / L
Les concentrations dans les solutions réactives sont les suivantes:
VALEURS DE RÉFÉRENCE
Réactif (A) Adultes: jusqu’à 1,2 mg/dL
HCl 50mM Pédiatrique
Tensoactif <2% < 14 jours 0,19 - 16,6 mg/dL
< 15 jour-1 année 0,05 - 0,68 mg/dL
Réactif (B) 1-3 année 0,05- 0,40 mg/dL
HCl 150 mM
2,4-DPD >2mM Il est recommandé que chaque laboratoire établisse ses propres valeurs de
Conservanteur référence.
PERFORMANCE. CARACTÉRISTIQUES DE FONCTIONNEMENT
CONSERVATION ET STABILITÉ
Les caractéristiques de performance d’un produit dépendent à la fois du réactif
Les composants du kit stockés à 2-8ºC sont stables jusqu’à la date de
et du système de lecture utilisé. Il est recommandé de calculer les données
péremption indiquée sur l’étiquette, à l’abri de la lumière et en évitant toute
suivantes pour chaque système spécifique. Les résultats suivants ont été
contamination.
obtenus avec un analyseur automatisé BT3500.
Indications d’alteration du réactif:
Présence de particules. Blanc du réactif de travail > 0,300 Sensibilité comme limite de détection: 0.06 mg/dL
MATÉRIEL NÉCESSAIRE MAIS NON FOURNI Marge de la réaction: jusqu’à 28.1 mg/dL. Pour des concentrations supérieures à
Matériel courant de laboratoire. 28.1 mg/dL, il est conseillé de diluer au 1/10 l’échantillon avec la solution saline
Spectrophotomètre, analyseur automatique ou photomètre thermostaté à 37 ºC. (NaCl 0,9 %). Multiplier le résultat final par 10.
Récipient de 1 cm de trajet optique. Exactitude: le pourcentage de récupération est de 102%.
ÉCHANTILLON Coefficient de variation dans la série: 1.63%
Sérum ou plasma sans hémolyse. Le sérum/plasma séparé est stable pendant Coefficient de variation entre les séries: 4.74%
2 jours à température ambiante et 4 à 7 jours à 2 à 8 °C. Congelés à -20°C, ils Justesse. Les résultats obtenus avec le réactif ne sont pas significativement
peuvent être conservés stables pendant plus de 3 mois. différents par rapport au réactif de référence considéré.
Toujours protéger de la lumière. La bilirubine sérique diminue de 50 % après 1 L’étude détaillée de la performance du réactif est disponible sur demande.
heure d’exposition directe au soleil.
PRÉCAUTIONS INTERFÉRENCES
Les avertissements de sécurité sont indiqués sur l’étiquette. Manipuler avec Aucune interférence d’hémoglobine n’est observée jusqu’à 125mg/dL. Les
précaution. On conseille de consulter la fiche des données de sécurité avant de échantillons de lipides peuvent interférer. Protéger les échantillons de la lumière.
manipuler le réactif. L’élimination des déchets doit être effectuée conformément
Pour éviter des erreurs dans la détermination de la bilirubine totale, il est très
aux normes en vigueur.
important de faire la lecture exactement 5 minutes après avoir ajouté le dernier
CONTRÔLE DE QUALITÉ réactif.
Nous recommandons l’inclusion de sérums de contrôle Seriscann normale (Réf.
994148/996571) et Seriscann anormale (Réf. 994685/999329) dans chaque
BIBLIOGRAPHIE
processus de mesure pour vérifier les résultats. Il est recommandé de calibrer
Doumas, B. T.; et al. (1987) Clin. Chem., 33, 769-774.
avec le Calibrateur pour Autoanalyseurs (Réf. 99 62 80) chaque fois que le lot
Malloy, H. et.al, (1937), 119, 481-490.
de réactif et/ou de calibrateur est changé et/ou que les sérums de contrôle ne
Tietz, NW., Textbook of Clinical Chemistry 6th Edition, W.B. Saunders,
rentrent pas dans les marges.
Philadelphia (2018).
Nous suggérons que chaque laboratoire d’établir son propre programme et les
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procédures de correction des écarts dans les mesures de contrôle qualité.
Young D.S., Effect of drugs on Clinical Lab. Test, 5th Ed. AACC Press (2000).
AUTOANALYSEURS Modrovich, US5112769 (1992).
Des adaptations aux différents analyseurs automatiques sont disponibles sur
demande.

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