Inserto BILI T&D

BILIRUBIN T&D
Bilirrubina Total y Directa

DMSO. Colorimtrico
Determinacin cuantitativa de bilirrubina
IVD
CLCULOS
Con Calibrador:
( A ) Muestra ( A )Blanco Muestra
x Conc. Calibrador = mg/dL de bilirrubina
( A ) Calibrador ( A )Blanco Calibrador
Conservar a 2-8C
PRINCIPIO DEL MTODO
La bilirrubina se convierte en azobilirrubina mediante el cido sulfanlico
diazotado midindose fotomtricamente. De las dos fracciones presentes en
suero, bilirrubin-glucurnido y bilirrubina libre ligada a la albmina, slo la
primera reacciona en medio acuoso (bilirrubina directa) precisando la segunda
la solubilizacin con dimetilsulfxido (DMSO) para que reaccione (bilirrubina
indirecta). En la determinacin de la bilirrubina indirecta se determina tambin
la directa, correspondiendo el resultado a la bilirrubina total. La intensidad del
color formado es proporcional a la concentracin de bilirrubina presente en la
1,2
muestra ensayada .
Con Factor:
((A) Muestra (A) Blanco Muestra) x Factor* = mg/dL bilirrubina en la muestra
*Factor:
Concentrac in del Calibrador

( A ) Calibrador ( A ) Blanco Calibrador
Factor terico: Bilirrubina (T) = 19,1 ; Bilirrubina (D) = 14

Factor de conversin: mg/dL x 17,1 = mol/L.
SIGNIFICADO CLNICO
CONTROL DE CALIDAD
La bilirrubina se origina por la degradacin de la hemoglobina.

Es transportada del bazo al hgado y se excreta en la bilis.
La hiperbilirrubinemia es el resultado de un incremento de la bilirrubina en
plasma. Causas ms probables de la hiperbilirrubinemia:
Bilirrubina Total (T): Aumento de la hemlisis, alteraciones genticas, anemia
neonatal, alteraciones eritropoyticas, presencia de drogas.
Bilirrubina Directa (D): Colestasis heptica, alteraciones genticas y
1,5,6
alteraciones hepticas .
El diagnstico clnico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos
clnicos y de laboratorio.
Es conveniente analizar junto con las muestras sueros control valorados:

SPINTROL H Normal y Patolgico (Ref. 1002120 y 1002210).
Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia, revisar el
instrumento, los reactivos y el calibrador.
Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y establecer
correcciones en el caso de que los controles no cumplan con las tolerancias.
REACTIVOS
R 1 (D)
R 2 (T)
R3
cido sulfanlico
cido clorhdrico (HCl)
cido sulfanlico
cido clorhdrico (HCl)
Dimetilsulfxido (DMSO)
30 mmol/L
150 mmol/L
30 mmol/L
50 mmol/L
7 mol/L
Sodio nitrito
Opcional
29 mmol/L
BILIRRUBIN CAL
Ref: 1002250
PRECAUCIONES
VALORES DE REFERENCIA
Bilirrubina Total
Hasta 1,10 mg/dL
18,81 mol/L
Bilirrubina Directa
Hasta 0,25 mg/dL
4,27 mol/L
Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio establezca sus
propios valores de referencia.
CARACTERISTCAS DEL MTODO

Rango de medida: Desde el lmite de deteccin de (T) 0,099 mg/dL (D) 0.04 mg/dL
hasta el lmite de linealidad de 18 mg/dL.
Si la concentracin de la muestra es superior al lmite de linealidad, diluir 1/2 con ClNa
9 g/L y multiplicar el resultado final por 2.
Precisin:
Bilirrubina T
Intraserie (n= 20)
Interserie (n= 20)
Media (mg/dL)
1,12
5,36
1,01
5,28
SD
0,02
0,12
0,03
0,12
CV (%)
2,33
2,27
2,70
2,32
R1/R2/RT: Corrosivo (C): R35: Provoca quemaduras graves.

S26: En caso de contacto con los ojos, lvense inmediata y abundantemente
con agua y acudir a un mdico.
Bilirrubina D
Media (mg/dL)
SD
CV (%)
PREPARACIN
Todos los reactivos estn listos para su uso.
Intraserie (n= 20)

0,64
2,28
0,01
0,02
1,91
1,10
Sensibilidad analtica:
CONSERVACIN Y ESTABILIDAD
Todos los componentes del kit son estables hasta la fecha de caducidad
indicada en la etiqueta del vial, cuando se mantienen los viales bien cerrados a
2-8C, protegidos de la luz y se evita la contaminacin durante su uso. No usar
reactivos fuera de la fecha indicada.
Indicadores de deterioro de los reactivos:

-
Presencia de partculas y turbidez.

Desarrollo de color en el R 2.
MATERIAL ADICIONAL
-
Espectrofotmetro o analizador para lecturas a 555 nm.

Cubetas de 1,0 cm de paso de luz.
Equipamiento habitual de laboratorio.
Condiciones del ensayo:

Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . 555 nm (530-580)
Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. .1 cm paso de luz
Temperatura . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 15-25C
Ajustar el espectrofotmetro a cero frente a agua destilada.
Pipetear en una cubeta:
R 1 (D) (mL)
R 2 (T) (mL)
R3
( L)
(Nota 1)
Muestra
/Calibrador ( L)
4.
5.
Blanco
-1,5
-100
B. Total
-1,5
50
100
Blanco
1,5
--100
Mezclar e incubar exactamente 5 minutos a 15-25C.

Leer la absorbancia (A).
BSIS36-E
28/06/11
cuando se comparan con otros reactivos comerciales.

Los resultados obtenidos con 50 muestras para Bilirrubina D fueron los siguientes:
Coeficiente de correlacin (r): 0.99
Ecuacin de la recta de regresin: y=0.9933x + 0.0039
Los resultados obtenidos con 50 muestras para Bilirrubina T fueron los siguientes:
Coeficiente de correlacin (r): 0.996
Ecuacin de la recta de regresin: y=0.0884x + 0.0208
Las caractersticas del mtodo pueden variar segn el analizador utilizado.
La presencia de hemlisis disminuye el valor de bilirrubina .

Se han descrito varias drogas y otras substancias que interfieren con la determinacin
3,4
de bilirrubina .
NOTAS
1.
2.
PROCEDIMIENTO
3.
1 mg/dL = 0,073 A (D).

Exactitud: Los reactivos SPINREACT no muestran diferencias sistemticas significativas
1,2
MUESTRAS
2.
1 mg/dL = 0,015 A (T).
INTERFERENCIAS
Suero o plasma libre de hemlisis (separado lo antes posible de los hemates).

Proteger de la luz.
Estabilidad de la muestra separada ya de los hemates: 4 das a 2-8C o 2
meses a 20C.
1.
Interserie (n= 20)

0,68
2,53
0,02
0,05
2,51
1,95
Para la determinacin de bilirrubina en neonatos, pipetear 50 L de muestra.

Multiplicar el resultado obtenido por 2.
SPINREACT dispone de instrucciones detalladas para la aplicacin de este
reactivo en distintos analizadores.
BIBLIOGRAFA
1.
2.
B. Directa
1,5
-50
100
3.
4.
5.
6.
Kaplan A et al. Bilirubin. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis. Toronto.
Princeton 1984; 1238-1241. 436 and 650.
Malloy H T. et al. The determination of bilirubin with the photoelectric colorimeter.
J. Biol Chem 1937; 112, 2; 481-491.
Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995.
Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
PRESENTACIN
Ref: 1001044
Cont.
R 1 (D): 1 x 150 mL
R 2 (T): 1 x 150 mL
R 3: 1 x 10 mL
SPINREACT,S.A./S.A.U. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN

Tel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99. e-mail: [email protected]

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Concentrac in del Calibrador

Factor terico: Bilirrubina (T) = 19,1 ; Bilirrubina (D) = 14

La bilirrubina se origina por la degradacin de la hemoglobina.

Es conveniente analizar junto con las muestras sueros control valorados:

CARACTERISTCAS DEL MTODO

R1/R2/RT: Corrosivo (C): R35: Provoca quemaduras graves.

Intraserie (n= 20)

Indicadores de deterioro de los reactivos:

Presencia de partculas y turbidez.

Espectrofotmetro o analizador para lecturas a 555 nm.

Condiciones del ensayo:

Mezclar e incubar exactamente 5 minutos a 15-25C.

cuando se comparan con otros reactivos comerciales.

La presencia de hemlisis disminuye el valor de bilirrubina .

1 mg/dL = 0,073 A (D).

1 mg/dL = 0,015 A (T).

Suero o plasma libre de hemlisis (separado lo antes posible de los hemates).

Interserie (n= 20)

Para la determinacin de bilirrubina en neonatos, pipetear 50 L de muestra.

SPINREACT,S.A./S.A.U. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN

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