Estudio de la morfología celular

Tinción del frotis

Frotis sanguíneo Con el fin de mejorar la visualización de las células, puede
Para el estudio de la morfología de las células sanguíneas emplearse una tinción. Las más usadas son las tinciones
se examinan al microscopio extensiones de sangre o frotis basadas en la tinción de Romanowsky, como la de tinción
sanguíneos. Estas muestras pueden teñirse para facilitar de Giemsa o la modificación de Wright (May Grunwald-
su visualización. Esta técnica no es cuantitativa, por lo Giemsa). Dicha tinción está compuesta por varios
que no se puede realizar un recuento de las células colorantes neutros, por el azul de metileno, que actúa
sanguíneas. como colorante básico, y por eosina, colorante ácido. El
Para realizar un frotis o extensión sanguínea, necesitamos procedimiento es muy sencillo: se fija la muestra con
una gota de sangre, bien de sangre venosa (generalmente metanol, a continuación se tiñe con la tinción de Giemsa
anticoagulada con EDTA) o bien capilar. Se coloca esta (diluida en PBS) y finalmente se lava el exceso de
gota (5ul) en un portaobjetos limpio y, con la ayuda de colorante.
otro portaobjetos (extensora) colocado en un ángulo de Examen del frotis
45°, se extiende la gota. Se deja secar la extensión al aire, Una vez teñida la extensión sanguínea, se observa al
preferentemente abanicando el portaobjetos, nunca por microscopio óptico. Se puede comprobar la morfología de
calor, ya que se pueden deformar los eritrocitos. las células, su tamaño y color.
Primero se debe obs la extensión completa con poco
aumento 10x y 40x y ocular de 10x, para obtener
rápidamente un panorama general sobre la cantidad y
calidad de las células y distribución en la preparación.
Post, la diferenciación y obs correcta de las células se
realiza con 100x y con ayuda de aceite de inmersión. Se
recomienda abrir el diafragma del microscopio como
mínimo a la mitad y subir el condensador para conseguir
más luz para la obs de la extensión.
El frotis de sangre se considera normal si hay una
apariencia eritrocitaria normal y una fórmula leucocitaria
normal.
Partes del frotis Los resultados anormales, en los que hay una anomalía en
Si el frotis está bien realizado, distinguiremos tres partes: el tamaño, forma, color o recubrimiento de los glóbulos
cabeza, cuerpo y cola. Es en el cuerpo donde realizaremos rojos, se pueden clasificar en una escala de 4 puntos:
los estudios.

Cuando se analiza una extensión con alta sospecha de enf

hematológica, se deben buscar células inmaduras en los
Cabeza: zona inicial y más gruesa, mayor proporción de extremos de la extensión. Existen diversas alteraciones de
linfo y gr apilados. los glóbulos rojos del tamaño (anisocitosis, microcitosis,
Cuerpo: zona media de espesor apropiado. Zona ideal. macrocitosis, megacitosis), de la forma (poiquilocitosis,
Cola: zona final y más fina, mayor proporción de leuco acantocitosis, dianocitosis, drepanocitosis, eliptocitosis,
grandes y plaquetas y hematíes deformados en los que no equinocitosis, esferocitosis, esquistocitosis,
se aprecia la zona central. estomatocitosis, excentrocitosis y keratocitosis) y del
color (anisocromía, hipocromía, hipercromía y
policromasia). Además, pueden presentar inclusiones determinados parámetros funcionales, como el estado
como los cuerpos de Howell-Jolly o los cuerpos de Heinz. redox, el potencial de membrana o el pH.
Partes
Estudio citoquímico El sistema fluido, el sistema óptico y el sistema eléctrico.
- Tinción de peroxidasa: ac^vidad El sistema fluido permite el paso de las células, de una en
mieloperoxidasa. Discrimina células del es^rpe una, por un punto iluminado con un láser, que pertenece
mieloide y linfoide. al sistema óptico, al igual que el sistema de captura de
- Tinción PAS: presencia de carbohidratos, señales, incluidos los detectores de fluorescencia. El
patologías serie eritroide. sistema eléctrico convierte la señal luminosa en señal
- Tinción de alfa na_il esterasa: citoplasma de eléctrica interpretable al sistema informático.
monocitos. Dif. de leu. Monoci^cas. Procedimiento
- Tinción de Perls o azul de Prusia: depósitos de En primer lugar, las células se incuban con an^cuerpos
fierro, estudio dif. De anemia. marcados con fluorescencia (fluorocromos) frente a los
anegenos de interés. El uso de moléculas fluorescentes
dis^ntas permite el análisis simultáneo de varios
Recuento de células marcadores o anegenos celulares.
Camara de Neubauer A con^nuación, se inyecta la muestra en el citómetro. Las
Recuento manual de los diferentes tipos de células. Cada células pasan, de una en una, por delante de un láser. Al
cámara consta de dos zonas de conteo. A su vez, cada atravesar la luz, las células la dispersan. Basándonos en la
zona tiene una retícula de 3 mm de lado, subdividida en 9 dispersión de la luz en sen^do frontal, se puede evaluar el
cuadrados de 1 mm. Estos cuadrados también pueden tamaño de las células (Forward Sca+er o FS) y de manera
estar subdivididos a su vez en cuadraditos más pequeños. lateral se evalúa su granularidad o complejidad (Side
Sca+er o SS). Los detectores de fluorescencia evalúan la
presencia de los marcadores fluorescentes (FL1, FL2, FL3).
Los citómetros presentan los resultados mediante
histogramas (cuando se representa solo una variable), con
gráficos dot-plot (dos variables) o, incluso, gráficos
tridimensionales.
Existen citómetros de flujo FACS (Fluorescence-Ac9vated
Cell Sor9ng) capaces de separar poblaciones celulares de
caracterís^cas determinadas (por ejemplo, los linfocitos T
El procedimiento consiste en lo siguiente: se inocula en la CD4+ de los CD8+) en dis^ntas fracciones finales, a la vez
cámara (entre el portaobjetos y el cubreobjetos) una que realizan el recuento de las células presentes en la
pequeña cantidad de sangre (preferentemente muestra.
anticoagulada con EDTA) con una micropipeta. Se observa Aplicaciones
al microscopio y se cuentan las células que hay en 3 de los - Estudio de poblaciones celulares: linfocitarias en
cuadrados de 1 mm de lado. Después, se hace la media, pte VIH.
se multiplica por el factor de dilución y por 10.000 (factor - Inmunofeno^po de las leucemias: valor dx,
de la cámara). De esa forma, sabremos el número de pronos^co y de ko.
células/mL de la muestra. - Seguimiento de la enfermedad mínima residual
en leucemias: valor pronos^co.
Citometría de flujo -
-
Dx de inmunodeficiencias primarias.
Dx y seguimiento de pctes con hemoglobinuria
Para la tipificación y el recuento de las células, ya que paroxís^ca nocturna.
permite obtener información cualitativa y cuantitativa - Dx. Y seguimiento de alteraciones plaquetas:
de una muestra sanguínea. Además, existen citómetros
an^cuerpos an^plaquetas, alteraciones
de flujo que permiten separar células en función de sus
plaquetas.
características.
- Leucorreducción: cuan^ficación del contenido de
Un citómetro de flujo es un instrumento capaz de
progenitores hematopoyé^cos que con^enen los
determinar las características morfológicas (tamaño y
productos de trasplante de sangre periférica.
forma de la célula, gránulos en el citoplasma) y
antigénicas (marcadores expresados en la superficie
celular) de las células. También permite el estudio de
Emergencias hematológicas
Leucemias agudas
- Promieloci^ca (LAM3): translocación t(15;17)
(q22;q12) genera un gen de fusión que da lugar a
una proteína de fusión PLM-RAR, que bloquea la
maduración de los promielocitos. Estos son
sensibles al ácido transre^noico (ATRA) que
induce su maduración. Dos variantes
morfológicas: hipergranular (hipergranulación,
as^llas y núcleo en hachazo) e hipogranular
(granulación escasa, núcleos grandes y lobados,
signo de hachazo).
Inclusiones eritrocitarias
- Plasmodium sp: eritrocitos parasitados por
trofozoítos de Plasmodium sp.
Cristales verdes de la muerte
- Inclusiones de color verde azulado: en el interior
de los neutrófilos debido a la fagocitosis del
parénquima hepá^co, indican fallo hepá^co
agudo. Riesgo alto de mortalidad en las 72h.
Trombocitopenia extrema
Inferior 50.000/ul y mas grave 30.000/ul. Riesgo de
sangrado o trombótico.
- Purpuras trombocitopénicas microangiopá^cas,
CID, trombocitopenia incluida por heparina.