Universidad de Carabobo

Facultad de Ciencias de la Salud

Escuela de Ciencias Biomédicas y Tecnológicas
Departamento de Ciencias Morfológicas y Forenses

Consideraciones Teórico - Prácticas

Morfología Microscópica
Docentes
Prof. Dora González
Prof. Ana Hernández
Prof. Carlena Navas
Prof. Beatriz Coelho
Prof. Heidi Roballo
Prof. Zulma Rodríguez
Prof. José Nuñez

Preparador:
Br. Marcelo Perdomo

Nombre: ________________________________________ C.I.: ______________ Grupo: ____________________

 normales. De allí que este paso es fundamental para
preservarlo. Para los cual se debe fijar el tejido por alguno de
Práctica 1: Técnicas para la preparación de los métodos que se explican a continuación:
un corte histológico
Química: por inmersión o perfusión
Física: congelación

En esta práctica se considera solo la fijación química por

inmersión que consiste en sumergir el tejido en una
sustancia química fijador, por un tiempo determinado, el cual
Objetivos: es proporcional al tamaño del tejido. Este hecho se
1. Describir los pasos de la técnica histológica fundamenta en que, el fijador tiene coeficiente de
2. Comprender el fundamento e importancia de la técnica penetración en el tejido; entonces a mayor tamaño del tejido,
histológica mayor será el tiempo de fijación y mayor la cantidad de
fijador utilizado; sin embargo hay que tener en cuenta que
Técnica histológica: la morfología microscópica de los los trozos de tejido que se manipulan deben ser
tejidos se estudia acondicionando un órgano o un trozo del preferiblemente pequeños, así el fijador penetra más rápido.
mismo. En las prácticas histológicas el estudiante debe Si tomamos una muestra grande cuando el fijador penetre
conocer los pasos a seguir en la preparación del órgano en hasta el centro del tejido, éste ya estaría estructuralmente
el cual, una vez procesado identificará microscópicamente alterado. Las causas que alteran la morfología del tejido son:
los tejidos y estructuras que lo conforman. El proceso a el ataque bacteriano externo y la autolisis interna debido a
seguir para obtener una lámina con el corte del órgano sus propias enzimas celulares.
debidamente coloreado se denomina «Técnica Histológica
para Microscopía Óptica» o «Técnica de la Parafina», dicha Existen muchos tipos de fijadores, como el cloruro de
técnica consta de varias etapas, a saber: mercurio, ácido pícrico, Bouin, Zenker, formalina, entre otros,
siendo éste último el fijador más usado, que es una
- Obtención de la muestra: extracción de pequeños disolución de formol en agua al 10%.
trozos de tejido de un órgano específico, proveniente de un
animal de experimentación o de seres humanos. - Deshidratación: como su nombre lo indica, es una etapa
- Fijación: es una etapa muy importante y su propósito es en la que se extrae el agua del tejido y se reemplaza con
mantener la morfología del tejido lo más parecida posible a la alcohol, utilizando para ello una serie de baños crecientes de
que éste tenia antes de hacer la extracción. Con este paso alcohol, comenzando con alcohol al 70%, 95% y 3 baños de
se evita la alteración del tejido, ya que al tomar un alcohol al 100% por 30 minutos en cada uno. Lo que se
fragmento, éste se muere y pierde sus características busca con este paso es preparar al tejido para su encuentro
________ con el medio de inclusión, que en este caso es la parafina.

- Aclaramiento: una vez deshidratado el tejido, debemos

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sustituir el alcohol por una solución miscible en el medio de la fase anterior, se debe desplazar con agua. Esto se logra
inclusión. Generalmente se usa xilol. La duración de este con baños de alcohol con agua en concentraciones
paso es de 30 minutos. decrecientes, es decir, de alcohol al 100% al 70% y al 50%.
Este paso es fundamental para que ocurra la coloración,
- Inclusión: una vez aclarado el tejido se coloca en el pues la reacción química que ocurre entre el colorante y las
medio de inclusión, que en este caso es la parafina a 60ºC, estructuras celulares requiere un medio acuoso.
se pasa por dos o tres envases con parafina líquida, a fin de
que sustituya el xilol que había penetrado en el tejido. Por - Tinción: para microscopia óptica se cuenta con un gran
último se coloca el tejido en un molde y se añade parafina a número de colorantes, pero la coloración de rutina es la
temperatura ambiente hasta que solidifique y luego se saca Hematoxilina y Eosina (H-E).
del molde el tejido incluido en la parafina. Ahora tenemos
formado un bloque sólido llamado taco que se lleva al - Montaje: es el último paso de la técnica y consiste en
micrótomo para hacer los cortes. Es necesario endurecer el deshidratar el tejido para evitar la descomposición y así la
tejido lo suficiente como para obtener delgadísimos cortes lámina se conserva por mucho más tiempo, colocar una gota
con la hojilla del micrótomo. de Bálsamo de Canadá sobre el tejido (que está sobre la
lámina portaobjetos) y cubrirlo finalmente con una laminilla o
- Cortes: para realizar el corte del tejido el taco se coloca lámina cubreobjetos.
en el micrótomo (micro: pequeño, tomo: corte), que es un
aparato equipado con una hoja de acero y un brazo que Coloraciones utilizadas en microscopia óptica:
hace avanzar al bloque tisular en incrementos iguales y
específicos, para obtener cortes sumamente delgados, cuyo 1. Hematoxilina-Eosina (H-E): es una coloración que
grosor para microscopía óptica varia entre 5-10 micrómetros. utiliza dos tipos de colorantes. Fundamento: la hematoxilina
que es un colorante básico, colorea los componentes ácidos
Este paso es muy importante y se debe tener cuidado en de la célula (núcleo) de color morado y la eosina que es un
obtener cortes verdaderamente delgados que permitan el colorante ácido se une a estructuras básicas de la célula
paso de luz a través del tejido para la formación de la imagen (citoplasma) otorgándole una tonalidad rosada. Es decir, que
y la visualización de los más pequeños detalles. ocurre una reacción química entre una base y un ácido para
formar una sal coloreada.
Una vez hechos los cortes, se colocan en una piscina de
agua y de allí se montan en una lámina portaobjeto, en Esta mezcla de colorantes permite diferenciar el núcleo y
donde la muestra de tejido queda disponible para seguir el el citoplasma celular ya que ambas estructuras adquieren
proceso. colores (violeta y rosado), así la coloración H-E evidencia
fundamentalmente la forma y estructura externa del núcleo.
- Aclaramiento: la muestra que fue colocada en la lámina También la sustancias extracelulares se tiñen con la eosina,
contiene parafina la cual se extrae usando nuevamente el por lo que podrás observarlas de color ____________,
xilol que disuelve la parafina. mientras que las sustancias que se tiñen con hematoxilina
las observarás de color _____________.
- Rehidratación: el xilol que penetró en la muestra durante
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 Completar (2ptos): colorantes. Para demostración diferencial y selectivamente
las fibras colágenas y del músculo.
- Los tejidos que reaccionan con un colorante básico (o con
______________) se dice que son ____________ y que 7. La Orceína y la Fucsina resorcina: son colorantes para
presentan _____________, un ejemplo de ello es el núcleo. fibras elásticas. La orceína es un colorante específico para
fibras elásticas, la cual veremos entre bordes castaño
- Los componentes texturales que se tiñen de colorantes oscuro, mientras que las demás estructuras tisulares se tiñen
ácidos se dice que son ______________ y que presentan de color marrón pálido. Las fibras elásticas teñidas con
_______________. Ejemplo de ello es la mayor parte del resorcina fucsina las veremos de color más violáceo o
citoplasma. azulado.

2. Ácido Periódico – Schiff (PAS): se usa para 8. Carmín de Best: para tinción nuclear y detección de
determinar la presencia de macromoléculas ricas en glúcidos glucógeno.
como glucógeno, glicoproteínas y Glucosaminoglucanos.
Una lámina de tejido coloreada con PAS se observará de Artificios de Técnicas:
color fucsia al microscopio óptico.
Son todas las alteraciones que se producen en los
3. Coloración con Azán (Tricrómico): se obtiene tres preparados histológicos por defectos o fallas en una o más
colores diferentes: Azul oscuro en los núcleos de la célula; de las etapas de la técnica.
rojo en el músculo, queratina y citoplasma celular, y azul
claro en el mucinógeno y colágeno, o sea en el tejido - Defectos de fijación, deshidratación, inclusión, pueden
conjuntivo. causar desgarros y retracciones.
- Durante el corte puede aparecer desgarros por
4. Coloración con metales: varios metales se emplean en melladuras en la cuchilla.
las técnicas histológicas, más que como colorantes actúan - Si el corte no es cuidadosamente extendido pueden
impregnando a ciertos componentes celulares. Las sales de aparecer pliegues o arrugas.
plata se usan para demostrar aparato de Golgi, y las - Defectos en la coloración son inherentes a la calidad y
Neurofibrillas. El Tetróxido de Osmio es útil para demostrar preparación de los colorantes así como escasez o exceso de
ciertos lípidos como la mielina de los nervios motores y el colorante, genera una coloración poco definida de las
Cloruro de Oro se usa en Neurohistología para demostrar las estructuras.
terminaciones nerviosas.
Interpretación de los cortes histológicos:
5. Coloración con hematoxilina férrica: útil para estudiar
detalles celulares finos. Ej. Las fibras elásticas y las Una vez que se obtiene el corte de tejido en una lámina , el
mitocondrias presentes en el citoplasma de ciertas células. estudiante debe imaginarse lo que verá al microscopio,
primero debe conocer el órgano que va a estudiar y
6. Tricrómico de Cajal y Gallego: implica el uso de tres visualizarlo en tres dimensiones, entender sus
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características macroscópicas y tener nociones sobre su Responda las siguientes preguntas: (4ptos. c/u)
estructura interna. Recordando que los órganos son
estructuras tridimensionales y cuando se realiza un corte, lo 1. A su criterio ¿Cuál es el paso clave de la Técnica de la
que veremos en la lámina estará en dos dimensiones. Parafina? ¿Por qué?
Completar la siguiente imagen en base al tipo de corte 2. Mencione y explique los tipos de Microtomo.
señalado para éste órgano tubular: (2ptos) 3. Explique en que consiste la técnica de inclusión en medio
sólido.
4. Investigue los conceptos de: Biopsia, Biopsia Excisional,
Biopsia Incisional y Autopsia.

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