HISTOTECNIA

Dra. Ana María Enríquez M.
HISTOTECNIA
Los métodos para la obtención de preparaciones histológicas ocupadas en los estudios de
microscopia óptica, se engloban en la Técnica Histológica. La Técnica Histológica o
Histotecnia abarca varios procedimientos a los que se somete un tejido para proporcionar
los cortes como se conocen, montados bajo un cubre objeto con imágenes de estructuras
contrastadas, para su estudio bajo microscopia óptica o electrónica.
Para empezar con la técnica histológica se debe obtener una MUESTRA DEL TEJIDO a
estudiar y existen 2 formas:
 Necropsia: Examen u obtención de tejido de un organismo muerto.
 Biopsia:(del griego bios = vida y oasis = visión) Examen u obtención de tejido de un
organismo vivo. Puede ser incisional, excisional, por sacabocado, por punción y
absorción, por raspado, por trepanación.
FIJACIÓN:
Este proceso se refiere al tratamiento del tejido con sustancias químicas que tienen varias
finalidades:
1. Conservar los tejidos de forma que muestren el mayor parecido posible a su estado
in vivo.
2. Aumentar la dureza del tejido para facilitar la preparación de finas películas de éste.
3. Destruir bacterias y gérmenes que pudieran encontrarse en ellos.
4. Interrumpir los procesos celulares dinámicos que ocurren a la muerte de la célula.
Esto se logra al inactivar ciertas enzimas celulares que de otra manera iniciarían la
Autolisis y llevarían a la DEGENERACIÓN POST MORTEM.
La fijación mantiene las estructuras al estimular la formación de enlaces cruzados entre
las proteínas.
Los agentes más usados para Microscopia de Luz son:
Formaldehído al 5%, Formol al 10% o Formalina (Solución de Formaldehído
especial)
 Reacciona con los grupos aminos de las proteínas, formando enlaces transversales y
conservando las estructuras de la célula.
 Es el más usado es el Formol al 10%.
Glutaraldehído al 2.5%, Tetróxido de Osmio, Líquido de Helly y Fijador de

Bowie
 Estos funcionan formando enlaces transversales en las proteínas y manteniendo las
estructuras de la célula.
Cloruro de Mercurio y Ácido Pícrico

 Precipitan las proteínas.
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Para Microscopia Electrónica se usan como fijadores:

 Glutaraldehído al 2.5%, Paraformaldehído, Tetróxido de Osmio y
Permanganato de Potasio
 Permiten conservar detalles estructurales finos, ya que otros fijadores como el
formaldehído, son muy enérgicos en su acción con las proteínas.
 Actúan como colorantes electrodensos, permitiendo observar al tejido con el haz de
electrones.
 Una solución de Glutaraldehído al 2.5% en un tampón a pH 7.4, evita la violenta
desnaturalización de las proteínas guardando detalles finos de la célula. Es el más
usado en Microscopia Electrónica.
Regla de Oro para la Fijación

 La mejor fijación es cuando ha pasado el menor tiempo entre la muerte del tejido y la
fijación, cerca de 12 horas.
 Tamaño de la Muestra que debe ser de 2-3 cm. variando el estudio para lo cual se va a
utilizar.
DESHIDRATACIÓN
Después que la muestra ha sido fijada se elimina el fijador y se deshidrata.
Debido a que una gran parte del tejido está constituida por agua, se aplica una serie
gradual de soluciones acuosas de menor a mayor de agente deshidratante, por ejemplo,
Alcohol Etílico o Acetona. Iniciando con alcohol al 50 %, luego con una solución de 60%,
70%, 80%, 90%, 96% y alcanzando de manera paulatina el alcohol al 100 % para eliminar
el agua. Esto se hace porque si se colocara el tejido en una solución al 100% de alcohol
inmediatamente, el agua saldría muy rápido del tejido y se deformaría. Tiempo 6 a 24
horas.
ACLARAMIENTO O DIAFANIZACIÓN
Luego de deshidratar el tejido, se pasa a una solución de una sustancia que es miscible
tanto con el alcohol como con el medio de inclusión a utilizar (en la mayoría de los casos
se utiliza como medio de inclusión Parafina líquida). La sustancia comúnmente utilizada
es el Xileno o Xilol. De la misma manera se coloca la muestra de tejido en un recipiente
de Xilol, el Xilol solo es soluble en alcohol al 100%. Se llama aclaramiento ya que el tejido
se torna transparente o claro en el xileno, esto se debe a que cambia su índice de
refracción. También se pueden utilizar Tolueno, Benzol o Cloroformo como medios de
aclaramiento. Tiempo de 1 a 6 horas.
NOTA: El alcohol y el xileno disuelven los lípidos de la célula y por lo cual al
extraerse también se extraen las grasas y los lípidos de la célula, por lo que se
utilizan colorantes de Sudan.
INCLUSIÓN O IMPREGNACIÓN
A fin de que se puedan obtener cortes suficientemente finos para ser observados al
microscopio, los tejidos tienen que ser incluidos y envueltos por una sustancia de
consistencia firme. Las sustancias usadas para este fin son: gelatina y parafina.
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El objeto de la inclusión es:

 Distinguir entre sí las células superpuestas en un tejido y la matriz extracelular.
 Tener un objeto lo suficientemente duro para su manejo y corte.
La inclusión se logra al infiltrar la parafina liquida o cualquier medio de inclusión en estado

líquido al tejido, que disuelve el medio de aclaramiento y penetra en el tejido. Por lo
general se coloca la muestra de tejido en un recipiente y se le agrega la parafina fundida a
60º C, colocando la muestra en una estufa de 30 minutos a 6 horas manteniendo la
temperatura a 60º C.
Debido al calor, el xilol o el benzol se evaporan y los espacios anteriormente ocupados
por ellos son ahora ocupados por la parafina. Después se coloca la pieza y un poco de
parafina fundida en un molde de papel o metal de forma rectangular y se deja solidificar a
temperatura ambiente, formándose un bloque sólido de parafina con el trozo de tejido
incluido, a este bloque se le denomina Taco.
Los medios de inclusión para Microscopia Electrónica comúnmente utilizados son resinas
polimerizadas.
SECCIÓN O CORTE
El taco ahora se puede cortar en secciones lo suficientemente delgadas como para
permitir el paso de la luz. La mayor parte de los preparados para microscopia óptica
tienen un grosor entre 3 a 10 micrómetros. Para estos cortes se utiliza un aparato
llamado MICROTOMO.
Cuando deseamos estudiar grasas o lípidos que se extraen en el proceso de aclaramiento
o enzimas que quedan inactivadas por el calentamiento de la inclusión, nos auxiliamos
con la Técnica de Congelación de Tejidos. Un tejido congelado, es los suficientemente
duro para ser cortado.
Se sumerge la muestra de tejido en Nitrógeno líquido para tener una congelación rápida.
Luego se corta con un aparato especial denominado MICROTOMO DE CONGELACIÓN,
existe un aparato más elaborado y eficiente para los cortes de congelación llamado
CRIOSTATO. La ventaja de esta técnica es que los cortes que se obtienen son muy
rápidos, se puede utilizar en el diagnóstico de material patológico, tomado en
intervenciones quirúrgicas y el resultado se obtiene en el transcurso de una operación.
Para Microscopia Electrónica se requieren cortes más delgados (denominados ultra fino)
de aproximadamente 25 a 100 nm. de espesor y de 0.5 mm. de lado medio. Para esto se
utiliza un MICROTOMO CON HOJA DE VIDRIO O DIAMANTE. Una vez preparados, se
montan sobre rejillas de cobre con un diámetro de 3mm.
MONTAJE Y TINCIÓN
Los cortes todavía no son aptos para su examen con el microscopio, puesto que los
tejidos se hallan infiltrados en parafina y carecen de color.
Los cortes se colocan sobre portaobjetos a los que se les ha agregado una pequeña
cantidad de Albúmina, la cual actúa como adhesivo.
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La parafina se elimina en un solvente orgánico, de nuevo se incluyen en Xilol, y la

muestra se rehidrata haciéndola pasar por una serie de graduaciones decrecientes de
alcohol etílico hasta llegar a una solución 100% de agua.
Ya rehidratado se TIÑE EL TEJIDO. Los colorantes más utilizados son la
HEMATOXILINA Y la EOSINA. Una vez teñido, se deshidrata de nuevo, de tal manera
que pueda fijarse de modo permanente el CUBREOBJETOS con un medio adecuado
para el MONTAJE (por ejemplo una gota de Bálsamo de Canadá o similar). Los medios
de montaje pueden ser miscibles o no miscibles en agua, si son miscibles en agua ya no
es necesaria la deshidratación después del teñido, se puede montarlo directamente. El
cubreobjetos no solo protege el tejido, sino que se requiere para observar el corte con un
microscopio.
Los colorantes pueden agruparse en 3 clases:
 Colorantes que diferencian los componentes ácidos y básicos de la célula.
 Colorantes especializados que distinguen los componentes fibrosos de la matriz
extracelular.
 Sales metálicas que se precipitan en los tejidos y forman depósitos de metales con
ellos.
www.youtube.com/watch?v=56ypQVoZB_Q video para recapitular

BIBLIOGRAFÍA
Leslie, G. (2015). Histologia, Texto y Atlas. Mexico: Mc Graw.
Ross, P. (2015). Histologia Texto y Atlas Color. Mexico: Panamericana.
Sobbota, H. (2013). Atlas en color de Anatomia Microscopica. Mexico: Panamericana.

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Glutaraldehído al 2.5%, Tetróxido de Osmio, Líquido de Helly y Fijador de

Cloruro de Mercurio y Ácido Pícrico

Para Microscopia Electrónica se usan como fijadores:

Regla de Oro para la Fijación

El objeto de la inclusión es:

La inclusión se logra al infiltrar la parafina liquida o cualquier medio de inclusión en estado

La parafina se elimina en un solvente orgánico, de nuevo se incluyen en Xilol, y la

www.youtube.com/watch?v=56ypQVoZB_Q video para recapitular

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