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    Tecnicas Histológicas

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    Tecnicas Histológicas

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    Título original

    2. TECNICAS HISTOLÓGICAS

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    ESCUELA SUPERIOR POLITÉCNICA DE CHIMBORAZO

    FACULTAD DE CIENCIAS
    ESCUELA DE BIOQUIMICA Y FARMACIA

    CITOLOGÍA E HISTOLOGÍA
    Organización tisular métodos histológicos

    CUARTO SEMESTRE
    MSc. Diego Vique
    DOCENTE FC-ESPOCH
    UNIDAD 2
    ORGANIZACIÓN TISULAR MÉTODOS
    HISTOLÓGICOS

    OBJETIVO DE LA UNIDAD
    Identificar la organización tisular y métodos histológicos
    mediante el uso de fundamentos teóricos para su
    aplicación práctica.

    LOGROS DE APRENDIZAJE
    Revisa apropiadamente los diferentes tejidos que existe
    en el cuerpo humano en un normal funcionamiento.
    NIVELES DE
    ORGANIZACIÓN DE
    LOS SERES VIVOS
    NIVEL SUBATÓMICO

    Formado por las partículas constituyentes del átomo


    (protones, neutrones y electrones).
    Átomo
    Parte más pequeña
    de un elemento
    químico. Ejemplo:
    el átomo de hierro
    o el de carbono.
    Moléculas

    Agrupaciones de dos o más átomos


    iguales o distintos. Dentro de este
    nivel se distinguen las
    macromoléculas, formadas por la
    unión de varias moléculas.
    Las células se organizan en tejidos
    TEJIDOS

    Conjunto organizados de
    células con funciones
    especificas
    Matriz extracelular
    Tipos de tejidos
    Conjunto de procedimientos aplicados a un
    material biológico (animal o vegetal) con la
    finalidad de prepararlo y conferirle las
    condiciones óptimas para poder observar,
    examinar y analizar sus componentes
    morfológicos a través de los microscopios
    fotónicos y electrónicos.
    Examen microscópico de un trozo de tejido o
    una parte de líquido orgánico que se extrae de
    un ser vivo.

    Examina las células o tejidos bajo un


    microscopio para verificar si hay daños o
    enfermedad
    1. Obtención del material
    2. Fijación -Mantener las estructuras
    en el estado más parecido al
    que poseían in vivo.
    -Evitar la lisis celular y
    la proliferación bacteriana
    -Dar cierta solidez o
    dureza al tejido o material.
    -Detiene los procesos
    vitales pero en ciertas
    condiciones mantiene las
    actividades de algunos
    componentes moleculares,
    Alcohol etílico por ejemplo la actividad de
    Alcohol metílico algunas enzimas
    Esto se consigue inmovilizando (por coagulación o precipitación) las
    moléculas proteínicas e inhibiendo principalmente las enzimáticas
    haciéndolas insolubles. Esta acción garantiza la integridad de las células
    y tejidos; se efectúa por mediante agentes químicos denominados
    fijadores.
    Requisitos de un buen fijador
    • Actuar rápido para detener los
    procesos de Autolisis
    • Poder de penetración
    • Conservación
    • No interferir en procesos siguientes
    • Endurecer los tejidos
    • Darle Mayor consistencia
    El tiempo de la fijación
    depende del tamaño
    de la muestra.
    3. Deshidratación
    Esto se hace por que si se
    colocara el tejido en una
    solución al 100% de alcohol
    inmediatamente, el agua
    saldría muy rápido del tejido y
    se deformaría.

    Serie gradual de soluciones acuosas de menor a


    mayor de agente deshidratante, por ejemplo, Alcohol
    Etílico o Acetona.
    4. Aclaramiento El tejido se torna transparente o claro en el xileno,
    esto se debe a que cambia su índice de refracción.

    Tolueno, Benzol o
    Cloroformo

    Eliminación de alcohol
    5. Infiltración e Inclusión

    La inclusión se logra al infiltrar la parafina


    liquida o cualquier medio de inclusión en
    estado líquido al tejido, que disuelve el medio
    de aclaramiento y penetra en el tejido.

    Por lo general se coloca la muestra de tejido


    en un recipiente y se le agrega la parafina
    fundida a 60º C, colocando la muestra en una
    estufa de 30 minutos a 6 horas manteniendo
    la temperatura a 60º C.
    6. Selección o corte
    ❑El taco ahora se puede cortar en secciones lo
    suficientemente delgadas como para permitir el
    paso de la luz.

    ❑La mayor parte de los preparados para


    microscopia óptica tienen un grosor entre 3 a 10
    micrómetros.

    ❑ Para estos cortes se utiliza un aparato llamado


    MICROTOMO .
    7. Coloración y Montaje
    Las tinciones son combinaciones de colorantes
    ácidos y básicos que permiten obtener suficiente
    contraste de color en los cortes histológicos
    comunes
    Hematoxilina y
    Eosina: La PAS (Ácido Tricrómico de
    hematoxilina al Peryódico de Nissl: Tiñe de
    Masson: Tiñe de
    ser básica tiñe Schiff): Tiñe color morado el
    color azul la
    ácidos de color carbohidratos retículo
    colágena, de rojo
    morado (núcleos (mucopolisacári endoplásmico
    la queratina, y
    con DNA y dos) de color rugoso y los
    de morado los
    RNA), mientras rojo, por corpúsculos de
    núcleos (muy
    que la eosina es ejemplo las Nissl en las
    utilizada para los
    un ácido y tiñe células neuronas.
    cortes de piel).
    bases de color caliciformes en
    rosado el intestino.
    (citoplasma).
    ⚫Pentacrómico de Movat: Tiñe de
    amarillo la colágena, los músculos de
    color rojo, de azul mucopolisacáridos, la
    elastina de color negro, y los núcleos de
    morado.

    ⚫Wright: utilizado en frotis sanguíneos,


    permite observar todas las células
    sanguíneas, coloreando los eritrocitos de
    color rosado, con un centro claro.
    Permite observar todas las células
    sanguíneas, coloreando los eritrocitos de
    color rosado, con un centro claro.

    ⚫Reyes Mota: Tiñe la elastina de


    color morado
    EJEMPLOS DE COLORACIONES Tricrómico de Van Gieson.
    Resultados:
    Coloración Hematoxilina-Eosina
    Células:
    Resultados:
    - Núcleos: negro - azul
    Núcleos y material basófilo en
    - Citoplasma: amarillo
    tonos de morado.
    Citoplasma en tonos de rosado Colágeno: rojo intenso

    Glándula salival Sublingual, Piel humana, objetivo 40X


    objetivo 40X

    Impregnación Argéntica
    Resultados:
    Célula (neurona):
    -Soma y prolongaciones
    (dendritas, axón) de color
    pardo oscuro

    Corteza cerebral de rata,


    objetivo 40X
    Ácido Periódico de Schiff (PAS)
    Hematoxilina
    Resultados:
    - Núcleos: azul
    -Células caliciformes y Chapa
    estriada en fucsia

    Intestino delgado, objetivo 40X

    Corte de piel con tricrómico de Masson


    Para observar adecuadamente los cortes teñidos con
    el microscopio óptico, se ha de proceder a cubrir las
    preparaciones mediante un cubreobjetos.

    Para ello se requiere la utilización de una sustancia


    cementante o medio de montaje.

    Si durante la técnica de tinción se han empleado


    colorantes hidrosolubles, deben utilizarse medios de
    montaje no-acuosos, es decir hidrofóbicos.

    Si por el contrario, los colorantes utilizados son no-


    iónicos, es preceptivo utilizar un medio de montaje
    hidrosoluble. Antes de su aplicación, los cortes deben
    hidratarse convenientemente.

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