116070M - ANÁLISIS INSTRUMENTAL II - UNIVERSIDAD DEL VALLE - ESTEBAN TORO, Msc

TALLER PRIMER PARCIAL

Angie Vanessa Santana Trujillo. 1727567

PREGUNTAS

1. Cuando un haz de luz atraviesa una celda, se genera una atenuación. Explique porque se da
esta atenuación y como se contrarresta.

R/. El ritmo de absorción depende de la intensidad inicial de luz y de la concentración de

moléculas. De esta manera, cuando un haz de luz de intensidad recorre una distancia dL en
una muestra con una concentración de moléculas [B], se produce una atenuación de
intensidad dI dada por: [23]

2. Mencione las fuentes utilizadas en los equipos de IR, Raman y Luminiscencia. Explique
con detalle el funcionamiento de cada una, así como las ventajas y desventajas de las
mismas.
R/Las fuentes más utilizadas en el Espectrofotómetro de Infrarrojo son:
Filamento de Nernst: Está constituido por óxidos de torio, circonio, cerio, itrio y erbio, que
forman un cilindro con un diámetro de 1 a 2 mm y una longitud de unos 20 mm. En los
extremos del cilindro se sellan unos cables de platino para permitir la conexión eléctrica,
formando un conjunto que equivale a un elemento de calentamiento resistente. Al pasar la
corriente se calienta el emisor a 2000K aproximadamente.
Fuente globar: el cual es una barra de carburo de silicio que por lo general mide 5 cm de
longitud y 5 mm de diámetro. Se calienta también eléctricamente (1300 a 1500 K), y tiene la
ventaja de poseer un coeficiente de resistencia positivo, presenta la desventaja de que ser
susceptible a la oxidación, produce una radiación IR en el intervalo de 4000-200 cm^-1.
Filamento de Nicromo o Filamento incandescente: Consiste en una espiral muy apretada de
alambre de Níquel-cromo, que se calienta por el paso de una corriente eléctrica a 1100K y
produce una radiación IR en el intervalo de 4000 - 200 cm^-1. Un filamento de rodio caliente y
sellado a un cilindro de cerámica presenta propiedades semejantes.
Lámpara de filamento de tungsteno: Una lámpara de filamento de tungsteno común es una
fuente adecuada para la región del infrarrojo cercano de 4000 a 12 800 cm^-1 (2.5 a 0.78 μm).
Fuente láser de dióxido de carbono: Para el control de la concentración de ciertos
contaminantes atmosféricos y para determinar especies absorbentes en soluciones acuosas se
utiliza como fuente infrarroja un láser sintonizable de dióxido de carbono. Un láser de dióxido
de carbono produce una banda de radiación en el intervalo de 900 a 1100 cm^-1 (de 11 a 9
μm), que consta de unas 100 líneas discretas y muy juntas.
Arco de mercurio: Para la región espectral del infrarrojo lejano (λ>50 μm) se utiliza un arco de
mercurio de alta presión que consta de un tubo revestido con cuarzo que contiene vapor de
mercurio a una presión mayor que una atmosfera. El paso de la electricidad a través del vapor
origina una fuente de plasma interna que proporciona una radiación continua en la región del
 infrarrojo lejano.[1]

3. ¿Por qué los instrumentos con interferómetro en los equipos de IR han sido mas
comerciales en los últimos años?
R/ Esto es sucede gracias a las ventajas que este tiene y su economía; Las ventajas de este
método son básicamente dos:
1. mejorar la resolución de los espectros
2. obtener mayor sensibilidad
La mejora de sensibilidad es consecuencia de una mayor energía de flujo del haz de luz hasta llegar
al detector y de la mejora de la relación señal/ruido (S/N) por promediación de interferogramas. Es
tan notable el avance de sensibilidad que en el momento en que tecnológicamente se pudieron
hacer interferómetros de Michelson baratos y precisos prácticamente todos los
espectrofotómetros comerciales IR en la actualidad contienen interferómetros.[2]

4. El IR lejano antes de los equipos con transformada de Fourier (FT) presentaban una
desventaja; ¿Cuál es esta desventaja?
R/ Una desventaja del uso de la espectroscopia infrarroja es que requiere instrumentos
muy sensibles y ajustados correctamente. Cualquier instrumento infrarrojo básico
puede ver el espectro infrarrojo, pero ser capaz de centrarse lo suficientemente
bien como para dar sentido a lo que está siendo visto requiere de herramientas que
estén bien sintonizadas. Además, más de la sintonía y el enfoque, un conjunto de
herramientas que pasan a ser más caras para comprar y mantener en el largo plazo.
5. ¿Qué condición o condiciones se deben cumplir para que se pueda obtener un espectro
IR de un compuesto?
R/ La espectroscopía IR se usa especialmente para analizar sustancias orgánicas porque
permite obtener mucha información. Esto incluye la identificación de polímeros,
fármacos, productos farmacéuticos o productos químicos industriales, así como la
determinación de contenido como el agua en el aceite. La espectroscopía IR es muy
flexible, y sus aplicaciones son tan numerosas que puede encontrar usuarios de IR en
todas las áreas de investigación y industria.[3]
6. ¿Qué ocurrió para que la técnica IR pasará de ser un análisis cualitativo e iniciarán
estudios cuantitativos?
R/ Esto sucedió gracias a la transformada de Fourier, gracias a ella hubo un avance en el
análisis[2]
7. ¿Qué debe ocurrir para que se de una absorción, a nivel energético en IR?
R/ La absorción de la radiación IR por las moléculas en vibración. Una molécula absorberá la
energía de un haz de luz infrarroja cuando dicha energía incidente sea igual a la necesaria para
que se de una transición vibracional de la molécula. Es decir, la molécula comienza a vibrar de
una determinada manera gracias a la energía que se le suministra mediante luz infrarroja.
Pueden distinguirse dos categorías básicas de vibraciones: de tensión y de flexión. Las
vibraciones de tensión son cambios en la distancia interatómica a lo largo del eje del enlace
 entre dos átomos. Las vibraciones de flexión están originadas por cambios en el ángulo que
forman dos enlaces. En la siguiente figura se representan los diferentes tipos de vibraciones
moleculares.[4]

8. ¿Qué causa el ensanchamiento de las líneas IR en los líquidos y sólidos? ¿Qué ocurre en
los gases, también se ve ensanchamiento?
R/Las líneas espectrales se extienden sobre un rango de frecuencias, en vez de una sola frecuencia
(es decir tienen un ancho de línea diferente de cero). Existen varios factores que hacen que la línea
se ensanche y cada uno de ellos le dará diferente forma a la misma. Estos factores pueden ser
debidos a condiciones locales o a condiciones externas. Los primeros ocurren dentro del objeto
emisor, usualmente dentro de una zona lo suficientemente pequeña como para que se pueda dar
un equilibrio termodinámico local. Los segundos se tratan de cambios en la distribución espectral
de la radiación al tiempo que esta atraviesa el medio que se pudiera encontrar entre el observador
y el objeto.

Ensanchamiento natural.El principio de incertidumbre de Heisenberg para la energía y el tiempo

establece que si existe una incertidumbre ∆T en el tiempo en que permanece un sistema en un
estado de energía, entonces el sistema tiene una energía dentro de un rango ∆E , en vez de una
energía específica, lo que se traduce en un rango de frecuencias en los fotones emitidos. Un
electrón en un nivel de energía diferente del estado base tiende a permanecer un cierto tiempo en
este nivel hasta que finalmente decae hacia un nivel de energía inferior. El tiempo exacto durante
el cual permanece en ese estado no es el mismo en cada decaimiento; es aleatorio, por lo que no
se puede calcular analíticamente. Sin embargo, por medio de estadística, se puede calcular un
tiempo de vida promedio.
En la teoría cinética de los gases, la temperatura de un gas es una consecuencia de la energía
cinética de las partículas que lo conforman. La velocidad a la que las partículas se mueven depende
de la temperatura que dicho gas tenga.​Sin embargo, las partículas tendrán diferentes velocidades.
Cuando el gas se encuentra en equilibrio termodinámico, el número de partículas que poseen una
cierta velocidad se puede conocer haciendo uso de la estadística de Maxwell-Boltzmann. A partir
de esta, se puede llegar a la distribución de Maxwell-Boltzmann, que nos relaciona la fracción 𝓕 de
átomos con un cierto intervalo infinitesimal de velocidades y la temperatura del gas.[5]
En los fluidos, la presión es una consecuencia de las colisiones de las partículas que los conforman.​
Una superficie dentro de un fluido (por ejemplo, la pared del contenedor de un gas) recibe, en
promedio, la misma cantidad de colisiones en un mismo período. Esto se traduce en una fuerza
constante dentro de esa área, lo que da lugar a la presión.​Cuanta mayor presión exista en un gas,
mayor será el número de colisiones sobre un área determinada.

En lo que respecta a una partícula aislada, otras partículas dentro del gas al cual pertenece
colisionará con ella con una frecuencia mayor cuanto mayor sea la presión. Estas colisiones
afectarán la forma de la radiación que emite la partícula de formas muy diversas, dependiendo del
tipo de interacción que exista entre las partículas al momento del choque. Asimismo, existen
muchas clases de interacciones que vuelven este problema muy complejo de tratar
matemáticamente [5]
 9. Calcule el número de onda y la longitud de onda aproximados de la absorción fundamental
correspondiente a la vibración de estiramiento de un grupo carbonilo.

10. Explique brevemente en qué consiste el funcionamiento de un interferómetro.

R/El interferómetro es un instrumento que emplea la interferencia de las ondas de luz para
medir con gran precisión longitudes de onda de la misma.

Hay muchos tipos de interferómetros, en todos ellos se utilizan dos haces de luz que recorren
dos trayectorias ópticas distintas, determinadas por un sistema de espejos y placas que,
finalmente, convergen para formar un patrón de interferencia [6]

11. Cuáles son las ventajas de los equipos de transformada de Fourier. Explique brevemente la
teoría detrás de la transformada de Fourier.
R/ Las ventajas principales de la transformada de Fourier son:
• Rendimiento o ventana Jaquinot: Radiación mas potente en el detector
• Ventaja Fellget o Multiplex: Mayor relación señal – ruido
• Alta resolución: Menor a 0,1 cm-1
• Reproducibilidad de la longitud de onda
• Menor tiempo de análisis: llegada simultánea de las señales al detector.
La transformada de Fourier es una transformación matemática usada para transformar señales
entre el dominio del tiempo o espacio al dominio de la frecuencia, y viceversa. El concepto de
‘transformada de Fourier’ se refiere a varios conceptos de forma simultánea:
● Operación de transformación de una función.
● Función resultado de la operación.
● Espectro de frecuencias de una función.
La función original suele recibir el nombre de x(t), siendo muy común que ‘t’ sea el tiempo,
mientras que la función transformada suele recibir el nombre de X(f), en mayúscula, siendo ‘f’ la
frecuencia.[7]

12. Elabore un diagrama de flujo donde se observen todas las partes fundamentales de un
Espectrómetro IR con y sin interferómetro.
R/
 13. Escriba las ventajas y desventajas de un equipo de un solo haz y uno de doble
haz.
R/ En espectrofotómetros de haz simple, el haz de luz originado en la lámpara se
guía directamente a través de la cubeta de muestra hasta el detector.
En cambio, en la configuración de espectrofotómetros de doble haz, el haz de luz de
la lámpara se divide en dos haces de intensidades iguales: un haz de referencia y un
haz de muestra. Cada haz pasa por una cubeta diferente, la de referencia (con el
solvente) y la de muestra, de forma simultánea.
Las intensidades de ambos haces se miden al mismo tiempo mediante dos
detectores (o fotodiodos). En otros instrumentos, los dos haces pasan a través de un
bloqueador que impide el paso de un haz. El detector alterna entre la medida del haz
de muestra y la de referencia.
En mediciones por debajo de 300 nm, hay que tener en cuenta el valor de
absorbancia de los solventes, que puede ser alta. Esto puede originar errores, puesto
que la absorción debida a la muestra es pequeña en comparación con la absorción
total.[8]

14. Explique la diferencia entre un filtro y un monocromador

R/ Un monocromador consiste, en general, de una rendija de entrada que proporciona
una imagen estrecha y casi coherente de la fuente de radiación, un colimador que hace
paralela la radiación procedente de la rendija de entrada, una red o prisma para
dispersar la radiación incidente, otro colimador para formar la imagen de la rendija de
entrada sobre la rendija de salida y una rendija de salida para aislar la banda espectral
deseada; La función primordial del monocromador es proporcionar un haz de energía
radiante con una longitud de onda y una anchura de banda dada.
Los filtros proporcionan un alto rendimiento de radiación. Su montaje es relativamente
fácil para, quizá, hasta cinco longitudes de onda, aunque en colorimetría se llega en
algunos casos a 16 longitudes de onda. El paso de banda puede ser similar al que se
obtiene con el montaje de redes de difracción.Los tipos de filtros más utilizados son los
filtros de absorción y los filtros interferenciales.
En los filtros de absorción los efectos se derivan de las interacciones totales de la
radiación con el material. Algunos tipos se basan en dispersiones selectivas y en otros
predomina la absorción iónica. La transmisión de radiación es una función que decrece
uniformemente con el espesor y se describe mediante una ley exponencial.
Los filtros interferenciales se basan en las interferencias ópticas y en su caso más simple
consiste en una película espaciadora dieléctrica insertada entre dos películas paralelas
de metal parcialmente reflejante, generalmente plata. El espesor de la película
dieléctrica es controlado para tener una, dos o tres medias ondas.[9]
15. ¿Cómo funciona un monocromador de RED?
R/ son un gran número de líneas paralelas situadas a distancias iguales entre sí y son hendiduras
sobre un vidrio o una superficie metálica. Cada una de estas hendiduras se comporta como un
pequeño prisma.[10]
16. ¿Cuáles son las características que me hablan de la calidad de un selector de longitud
de onda?
R/a obtención de un espectro de infrarrojo de calidad, esto es, que sus picos sean lo más claros
(por ejemplo, su altura) y representativos de la muestra ensayada, puede ser afectada por una
serie de factores, como los mencionados a continuación:
● Calidad del contacto entre la muestra y el cristal del ATR:es necesario asegurar un
adecuado contacto de la muestra con el cristal de reflexión de la radiación infrarroja
con el propósito de obtener un espectro de calidad, es decir con las bandas
características de la muestra bien definidas.
● Influencia de la forma física de la muestra: algunas veces una muestra líquida podría
dar una señal espectral acorde con nuestras expectativas, es decir la interferencia que
provoca el agua contenida en la muestra no es de vital importancia, como sucede
frecuentemente en una muestra de la familia de los carbohidratos, cuyas bandas
principales de absorción de manera general aparecen en diversas posiciones en la
región del espectro comprendidas entre 1500 y 700 cm-1 .
● Señal residual del background en el espectro: Desde hace tiempo, y en función de los
modernos equipos de cómputo acoplados a los espectrómetros el background se resta
automáticamente del espectro de FTIR de la muestra, y con ello se elimina la
interferencia natural que tiene el haz de infrarrojo con el aire ambiente cada vez que se
realiza la obtención de un espectro de FTIR de una muestra.
● La interferencia del solvente en un espectro:La influencia de de solventes en muchos
casos puede “tapar” todo rastro de otros compuestos (a menudo en bajísimas
concentraciones) presentes en una muestra o dificultar la identificación de sus picos de
absorción.[11]

17. ¿Cuáles son las características de los recipientes para la muestra en IR? Explique cuáles
se usan para muestras líquidas, sólidas y gaseosas.
R/ Las cubetas (o celdas) que contienen las soluciones de la muestra y de la referencia deben
tener sus ventanas perfectamente paralelas y perpendiculares al haz de radiación. Las cubetas
cilíndricas, utilizadas en espectrofotómetros de bajo coste, deben cuidar su posición a fin de
lograr una buena reproducibilidad. Las cubetas utilizadas tienen, por lo general, 1 cm de espesor,
aunque pueden utilizarse desde 0,1 cm o menos. Las cubetas deben construirse con materiales
que no absorban la radiación en la región de interés. El cuarzo es transparente desde los 190 nm
en el ultravioleta hasta los 3 ó 4 µm en el infrarrojo. Los vidrios desde los 350 nm hasta los 2 µm
y los plásticos desde 380 hasta los 780 nm en el visible. Para obtener buenos resultados, las
cubetas deben manejarse por pares que pueden obtenerse de los fabricantes, pero conviene
comprobarlo analizando muestras idénticas en cada cubeta. Las cubetas deben limpiarse antes y
después de ser utilizadas y nunca se debe tocar con los dedos las caras por donde pasa la
radiación pues la grasa y las huellas dactilares pueden hacer variar la transmitancia de la
cubeta.[9]

18. Explique el funcionamiento de los detectores usados en IR, mencione las ventajas
y desventajas de cada uno.
R/ Tubos fotomultiplicadores de electrones, o tubos fotomultiplicadores, son una
combinación de un cátodo fotoemisor y una cadena interna de dínodos multiplicadores
de electrones. La radiación incidente expulsa fotoelectrones del cátodo que son
enfocados por un campo electrostático y acelerados hacia un electrodo curvo, que
corresponde al primer dínodo, el cual está recubierto por un material que expulsa
varios electrones como resultado del impacto de un electrón de alta energía. La forma
redondeada que tienen los dínodos hace converger a los electrones sobre el siguiente
dínodo.Una de las mayores ventajas de los tubos fotomultiplicadores es la capacidad
que poseen de variar la sensibilidad en un intervalo muy amplio, cambiando
simplemente el voltaje de alimentación
Los tubos fotoemisores de vacío son combinaciones simples de fotocátodo - ánodo
alojados en una cubierta con vacío. El fototubo de vacío de un solo paso contiene un
cátodo sensible a la radiación y un ánodo delgado situado en el eje del cilindro rodeado
por el cátodo.
Los fotodiodos operan según un principio completamente distinto al de los detectores
anteriormente descritos. Una unión semiconductora p -n posee una polarización
inversa, de modo que no existe flujo de corriente. Cuando un fotón interactúa con el
diodo, los electrones son llevados hasta la banda de conducción donde pueden actuar
como portadores de carga. De esta manera, la corriente generada es proporcional a la
potencia radiante incidente.La mayoría de estos dispositivos detectan únicamente
radiación en el visible y en el infrarrojo cercano y su respuesta es, al menos, un orden
de magnitud superior a los tubos fotoemisores de vacío, pero muchos órdenes de
magnitud menos que los tubos fotomultiplicadores. Muchos fotodiodos pequeños se
pueden ensamblar en disposiciones lineales o bidimensionales, en los cuales cada
diodo capta una señal en forma simultánea con los demás. Un condensador pequeño
se acopla a cada diodo y se carga hasta un nivel dado antes de que el diodo se ilumine.
Al iluminarse se produce la descarga del condensador. Después de que se obtienen las
señales, se barre cada elemento del conjunto, se registra la pérdida de carga y se
recarga el condensador. De esta forma se obtienen datos en una y, en algunos casos,
dos dimensiones.[9]
19. El espectro infrarrojo del CO presenta una banda de absorción vibracional centrada
en 2170 cm-1.
a) ¿Cuál es la constante de fuerza del enlace del CO?
b) ¿En qué número de onda se presentaría el correspondiente pico del 14CO?
20. ¿Por qué con frecuencia los instrumentos IR no dispersivos se usan para
determinar gases en lugar de los espectrómetros IR dispersivos?
R/Los espectrofotómetros dispersivos son los primeros que se utilizaron, aunque muy
pocos quedan activos en la actualidad para medidas de rutina en el IR-medio. Emplean
un dispositivo para restringir la longitud de onda que se mide de forma sucesiva. [13]
Un dispositivo infrarrojo no dispersivo es un simple equipo espectroscópico de uso
frecuente como detector de gas. Es decir, estudia la radiación electromagnética y la
materia por medio de la absorción o emisión de energía.Primero se bombea o difunde
el gas a la cámara donde se encuentra la muestra. Es decir que el aire se divide y envía
hacia la celda de referencia.
La luz infrarroja se corta y modula para que las señales del fondo térmico sean
eliminadas del componente deseado. Luego se direcciona por medio de un divisor
periódico de forma alterna. Este refleja el haz luminoso para que atraviese dicho
compartimento y transmita la muestra al monocromador, es decir al prisma o rejilla.
Todo con el fin de llevarlos al detector.
Este último cuenta con un filtro óptico que elimina la luminosidad, pero salva la
longitud de onda que pueden absorben las moléculas del gas seleccionado. Además,
gracias a la deformación de la membrana de un condensador, mas concretamente,
variación de su capacidad, el detector infrarrojo no dispersivo convierte todo el proceso
en señales eléctricas.
Para que los resultados sean efectivos, es necesario compensar las componentes de
interferencia. Esto se debe a que muchos gases se absorben bien en el área del
infrarrojo. Un ejemplo de ello serían las emisiones de moléculas de agua y dióxido de
carbono, las cuales poseen sensibilidad cruzada en el espectro luminosos. El dióxido de
azufre y el dióxido de nitrógeno en bajas concentraciones tampoco aplicarían.[12]

21. ¿Qué es el DRIFT? Mencione las ventajas y desventajas. ¿Qué se requiere adaptar para
usar en un equipo de IR?
R/ La espectrometría de reflectancia difusa (DRIFT) es una forma eficaz de obtener espectros
en el infrarrojo directamente sobre muestras pulverizadas con un mínimo de preparación de la
misma. Además de ahorrar tiempo en la preparación de la muestra, permite la obtención de
datos de la región espectral del infrarrojo convencional de muestras que no han sufrido una
alteración apreciable de su estado original.
Accesorios
Celdas desmontables: El tipo más sencillo de celda consta de dos ventanas circulares de unos
25 mm de diámetro separadas por un espaciador de aluminio o Teflón con un grosor variable
entre 10 y 500µm dependiendo de la intensidad y concentración del espectro a medir. (Figura
8) El camino óptico que dicta el espaciador no se define de forma precisa, ya que está
influenciado por la cantidad y viscosidad de la muestra que quede entre el mismo y la ventana.
Por este motivo las celdas desmontables sólo se utilizan en medidas cualitativas.
Celdas con camino óptico definido: Al igual que las anteriores tienen dos ventanas con un
espaciador del grosor adecuado, aunque en este caso una de las ventanas presenta dos orificios
para el llenado del la celda. Estos orificios continúan en el anillo intermedio y el soporte para
acabar en un cuello que se cierra con un tapón de Teflón. Una vez cerradas pueden contener
disolventes con puntos de ebullición por encima de 60ºC, aunque hay que tener en cuenta que
la muestra se calienta con el paso de la radiación y que el consiguiente aumento de presión
puede traducirse en la evaporación parcial o completa de la muestra por fugas entre las
ventanas y el espaciador.
Celdas para gases: De acuerdo con la menor densidad de los gases se necesita un camino
óptico mayor que típicamente puede estar entre 5 y 10 cm (esta última se muestra en la Figura
10). Una celda consiste en un cilindro de unos 45 mm de diámetro con dos orificios que se
puedan cerrar y resistentes a vacío, terminada en dos ventanas paralelas en torno a 50 mm de
diámetro. Cuando hay que determinar trazas en gases poco absorbentes se usan celdas de
multireflexión, que mediante un sistema de espejos permiten alcanzar caminos ópticos incluso
de 40m.
Soportes para pastillas y films: Se pueden utilizar dos pastillas de KBr de unos 13 mm de
diámetro colocadas en un soporte simple adecuado para estudios rutinarios. Otra opción es
fijar directamente films o láminas de polietileno entre las que se coloca una suspensión de la
muestra en una pieza de cartón perforada que además se ajuste a los raíles dispuestos para la
sujeción de los soportes estándar. [13]

22. ¿Qué es el ATR? Mencione aplicaciones y como funciona la absorción en esta técnica.
R/ reflectancia total atenuada: Esta gama de dispositivos son especialmente útiles para
obtener espectros IR de muestras que no pueden ser colocadas en los soportes habituales
para el método de transmisión;La RTA ocurre cuando un haz de radiación entra desde un
medio más denso (con un mayor índice de refracción) en un medio menos denso (con un
menor índice de refracción). La fracción del haz incidente reflejado se incrementa cuando
aumenta el ángulo de incidencia. Toda la radiación incidente se refleja en la interfaz cuando
el ángulo de incidencia es mayor que el ángulo crítico (que es función del índice de
refracción). El haz penetra una distancia muy pequeña más allá de la interfaz hacia el medio
menos denso antes de que suceda la reflexión completa. Esta penetración se llama «onda
evanescente» y se produce a una profundidad de unas pocas micras. Su intensidad se ve
atenuada por la muestra en las regiones del espectro IR donde la muestra absorbe.
El espectro resultante RTA-IR se asemeja al espectro IR convencional, pero con algunas
diferencias: las posiciones de las bandas de absorción son idénticas en ambos espectros,
pero las intensidades relativas de las bandas correspondientes son diferentes. Aunque los
espectros RTA se pueden obtener usando instrumentos dispersivos o por transformada de
Fourier, estos últimos permiten obtener espectros de mayor calidad en situaciones en las
que la intensidad de la señal se halla limitada. [13]

23. ¿Por qué los espectros de infrarrojo rara vez presentan regiones en que la
transmitancia sea de 100%?
R/ La reflexión y la absorción por las paredes celulares y la cancelación inexacta de la
absorción del solvente pueden resultar en la atenuación del haz incluso en regiones donde
el analito no absorbe. Esto da lugar a transmitancias en estas regiones menos del 100%. [14]
24. ¿Qué es la espectroscopia Raman? ¿Por qué se toman los espectros a 90
grados?
R/ La espectroscopia Raman es una técnica espectroscópica molecular que usa la
interacción de la luz con la materia para obtener información sobre la composición o
las características de un material, como FTIR. La información proporcionada por la
espectroscopia Raman es el resultado de un proceso de dispersión de la luz,
mientras que la espectroscopia IR se basa en la absorción de la luz. La
espectroscopia Raman proporciona información sobre las vibraciones
intramoleculares e intermoleculares y puede proporcionar una comprensión
adicional sobre una reacción. Tanto la espectroscopia FTIR como Raman
proporcionan un espectro característico de las vibraciones específicas de una
molécula (“huella molecular”) y son valiosas para identificar una sustancia. Sin
embargo, la espectroscopia Raman puede proporcionar información adicional sobre
los modos de frecuencia más baja y las vibraciones que permiten comprender la red
cristalina y la estructura molecular de la columna vertebral. [15]
Los dos usos principales de los lentes dentro de un espectrómetro Raman son el
enfoque del laser sobre la muestra y la recolección de la radiación esparcida, que en
conjunto, forman la geometría de esparcimiento.
El esparcimiento se colecta y se transmite formando un ángulo recto respecto a la
dirección de propagación del láser. Bajo este esquema, la luz del láser atraviesa la
muestra, por lo cual, es necesario el uso de recipientes hechos de materiales no
fluorescentes como el cuarzo para contener el material bajo prueba (generalmente
líquidos ó gases).[16]

25. Explique el resultado de las líneas Stokes y Antistokes.

R/ Se llaman líneas Stokes a aquellas que cumplen la ley de Stokes que establece la
longitud de onda de la radiación fluorescente es mayor o igual a la radiación de
excitación, en caso contrario son llamadas anti-Stokes.

El desplazamiento anti-Stokes es más útil en el estudio de muestras fluorescentes. A

pesar de ello, el esparcimiento Stokes puede ser hasta 100 veces más intenso y
como es más fácil detectar esta señal, se acostumbra trabajar con el lado positivo
del espectro.El modelo clásico predice que las intensidades en las bandas Stokes y
AntiStokes serán iguales, pero en la práctica las bandas Stokes son más intensas. De
acuerdo con la teoría cuántica, a temperatura ambiente la probabilidad de que las
moléculas se encuentren en el estado base es mucho mayor y sólo una pequeña
parte estará en un estado de mayor energía, lo cual da lugar a la diferencia de
intensidad en las bandas. De hecho, al aumentar la temperatura del material el
esparcimiento anti-Stokes aumenta en relación con el esparcimiento Stokes.[16]
26. ¿Qué es la difusión de Rayleigh? ¿Por qué es importante en Raman?
R/ En 1871 el físico Inglés John William Strutt tercer barón de Rayleigh, a quién se conoce
simplemente como Lord Rayleigh, analizó el esparcimiento de la luz solar en términos de
osciladores moleculares. Asumió que el tamaño de las partículas es mucho menor que la
longitud de onda λ de la luz de excitación y concluyó que la intensidad de la luz esparcida es
proporcional a λ −4 . En su honor, el esparcimiento en partículas de tamaño menor a λ/15 es
llamado esparcimiento Rayleigh.
El esparcimiento inelástico Tiene como característica principal que la longitud de onda de la luz
esparcida difiere de la luz de excitación . A causa de la naturaleza aleatoria del esparcimiento, la
propagación de la luz esparcida sucede en todas direcciones excepto en la dirección del eje del
dipolo. Este proceso sin cambio en la frecuencia es llamado esparcimiento elástico[16]
27. ¿Cómo se realiza la excitación espectral en Raman?
R/ Muchos sistemas Raman cuentan con el láser de 785 nm. La energía del láser se transmite a
la muestra y se recoge de ella mediante cables de fibra óptica. Se utiliza un filtro de hendidura o
de borde para eliminar la dispersión de Rayleigh y anti-Stokes y la luz dispersa restante de
Stokes se transmite a un elemento de dispersión, normalmente una rejilla holográfica. Un
detector CCD captura la luz, lo que da lugar al espectro Raman. Dado que la dispersión Raman
produce una señal débil, es muy importante que en el espectrómetro Raman se usen
componentes de alta calidad, ópticamente bien adaptados.[15]

28. Realice un esquema de un equipo de Raman, mencione sus partes y explique cada una
de ellas; sus ventajas y desventajas.

● Componentes Ópticos: Los sistemas de formación de imágenes son fundamentales en la

óptica y tienen como objetivo final la reducción del tamaño de una imagen, como en la
fotografía y la televisión, ó para ampliarlo, como sucede en los telescopios y
microscopios. Los espejos con superficies curvas y los lentes son componentes
esenciales dentro de dichos sistemas. Se denomina componente óptico a los elementos
diseñados para absorber, dirigir ó transmitir la luz. Entre los dispositivos más comunes
están los lentes, los espejos, los prismas, los polarizadores y los divisores de haz. Por lo
general se fabrican con vidrio óptico, que es un material en el cual las propiedades
ópticas como el índice de refracción, el coeficiente de transmisión y la dispersión, son
controladas con gran precisión durante el proceso de fabricación.
 ❖ lentes
❖ Geometrias de esparcimiento
❖ Filtrado
● Fuente de Excitación Monocromática: En el experimento realizado por Raman se utilizó
un telescopio para enfocar la luz solar y, mediante un filtro de absorción se obtuvo
iluminación monocromática violeta con la cual se iluminaba la muestra. Sin embargo, la
dificultad de obtener altas densidades de energía para amplificar el efecto fue uno de los
factores que limitaron la aplicación de la técnica. Todo esto cambio con la invención del
láser. Un láser es un dispositivo que genera luz de gran coherencia y direccionalidad y su
nombre proviene del acrónimo inglés Light Amplification by Stimulated Emission of
Radiation. Un láser amplifica la luz y consta de tres componentes principales:
❖ Medio activo. Es un material con niveles de energía que pueden poblarse de
forma selectiva.
❖ Fuente de bombeo. Es una fuente de energía que produce inversión de
población entre los niveles de energía del medio activo.
❖ Resonador. Mantiene la coherencia del campo electromagnético mediante la
retroalimentación.
● Espectrómetro: Un espectrómetro es un instrumento que separa la luz de entrada en las
diferentes longitudes de onda que la componen mediante un elemento de difracción el
cual puede ser un prisma o una rejilla de difracción. En un monocromador, el elemento
dispersivo se rota para seleccionar la longitud de onda de salida. Por el contrario, el
espectrógrafo emplea detectores con múltiples elementos, como son arreglos de
fotodiodos ó CCDs, que miden todos los componentes espectrales en una sola
exposición.
❖ Rejilla de surcos
❖ Rejillas holograficas
❖ Rejillas holograficas de volumen
● Sistema de Procesamiento: Este subsistema agrupa tanto la unidad de procesamiento,
como los detectores. Por su complejidad, los programas necesarios para procesar la
señal serán tratados en un capítulo posterior, así que únicamente resta revisar los
detectores. [16]
29. ¿A qué longitudes de onda, en nanómetros, aparecerían las líneas de Raman Stokes y anti
stokes del tetracloruro de carbono ( ��ν̆ 218, 314, 459, 762 y 790 cm-1) si la fuente fuera
a) ¿un láser de helio/neón (632.8 nm)?
b) ¿un láser de iones argón (488.0 nm)?
30. Explique las diferencias, a nivel energético, entre Fluorescencia y
Fosforescencia.
R/ La fluorescencia absorbe la energía de la luz ultravioleta e, inmediatamente,
emite la radiación luminosa. La fosforescencia almacena la energía y la emite poco a
poco durante minutos u horas sin importar que la fuente de radiación excitadora
inicial haya sido apagada.[17]
31. Haga una tabla comparativa entre las ventajas y desventajas entre
Fluorescencia y Fosforescencia.

FLUORESCENCIA

VENTAJAS DESVENTAJAS

● Una sensibilidad entre 1 y 3 órdenes de ● Tiene lugar solo mientras el material esta
magnitud mayor siendo activado por la energia ultravioleta.
● Mayor intervalo de respuesta lineal. ● los métodos de fluorescencia se aplican
● Determinación de sustancias inorganicas menos que los de absorción ya que no todos
● Se pueden detectar concentraciones muy los sistemas químicos son capaces de
pequeñas de moléculas orgánicas. fluorescer
● El agua es transparente a radiación UV y VIS. ● equipamiento necesario es mucho más
● Se pueden analizar las moléculas biológicas costoso que el de la espectroscopia de
en soluciones acuosas sin interferencia del absorción
solvente. ● La fluorescencia de una molécula se reduce
en presencia del disolvente
● Disminuye a aumentar la temperatura

FOSFORESCENCIA

● Cuando se desea exaltar la fosforescencia ● es mas lenta que la fluorescencias

se incorporan con frecuencia a los ● Disminuye a aumentar la temperatura
disolventes compuestos que contienen
átomos pesados

32. Mencione los procesos de desactivación en la luminiscencia molecular.

R/ Existen varios mecanismos por los cuales la energía puede ser transferida de modo
no radiativo (sin absorción o emisión de fotones) entre dos colorantes, uno aceptor y
uno donador.
transferencia de energía de resonancia de Förster (FRET o FET): es un mecanismo de
desactivación dinámico debido a que la transferencia ocurre mientras el donador se
encuentra en un estado excitado. El mecanismo en el cual se basa FRET son las clásicas
interacciones dipolo-dipolo entre los dipolos transitorios que se producen en el
donador y el aceptor.
transferencia electrónica Dexter: La transferencia Dexter es un fenómeno de corto
alcance que disminuye con la distancia en relación e−R y depende del solapamiento
espacial entre los orbitales moleculares de donador y aceptor. En la mayor parte de las
situaciones donde intervienen un donador, un aceptor - fluoróforo y un desactivador, el
mecanismo Förster es mucho más importante que el mecanismo Dexter.
exciplejo (complejo de estado excitado)
desactivación estática: puede ser el mecanismo dominante en algunas sondas
moleculares que se basan en el principio de desactivación de la fluorescencia. A
diferencia del mecanismo dinámico, la desactivación estática ocurre cuando ambas
moléculas (la donadora y la aceptora) se encuentran en estado basal. El donador y el
aceptor se unen para formar un aducto, un complejo en estado basal, es decir un
dímero intramolecular con propiedades únicas (diferentes a la de los compuestos que lo
forman), tales como el no ser fluorescente y poseer un espectro de absorción diferente
y distintivo. [18]
33. Explique cada una de las variables que afectan la fluorescencia y la fosforescencia.
R/ Rendimiento cuántico: El rendimiento cuántico o la eficacia cuántica de la
fluorescencia es simplemente las relación entre el número de moléculas que emiten
fluorescencia respecto al número total de moléculas excitadas. Las moléculas
altamente fluorescentes, por ejemplo, la fluoresceina, tienen eficiencias cuánticas que,
en ciertas condiciones, se aproximan a la unidad. Las especies no fluorescentes tienen
eficiencias que son prácticamente cero.
Estructura: La fluorescencia más intensa y la más útil es la que presentan los
compuestos que contienen grupos funcionales aromáticos. Los compuestos que
contienen estructuras alifáticas y alicíclicas de carbonilo o estructuras con dobles
enlaces muy conjugados pueden presentar también fluorescencia.
Rigidez estructural: Empíricamente se encuentra que la fluorescencia está
particularmente favorecida en moléculas que poseen estructuras rígidas.La influencia
de la rigidez también tiene importancia en el aumento de la fluorescencia de ciertos
quelatantes orgánicos cuando están formando un complejo con un ion metálico.
Temperatura y disolvente: La eficacia cuántica de la fluorescencia disminuye en
muchas moléculas con el aumento de la temperatura, ya que el aumento de la
frecuencia de las colisiones a temperatura elevada hace aumentar la probabilidad de
desactivación no radiante ( conversión externa ). Una disminución en la viscosidad del
disolvente también aumenta la probabilidad de conversión externa y produce el mismo
resultado.
Efecto del pH: La fluorescencia de un compuesto aromático con sustituyentes ácidos o
básicos en el anillo depende normalmente del pH. Tanto la longitud de onda como la
intensidad de emisión son probablemente diferentes para la forma ionizada y no
ionizada del compuesto. Por lo tanto será muy frecuente en los métodos fluorimétricos
el control estricto del pH.
Efecto de la concentración: La potencia de la radiación fluorescente F es proporcional a
la potencia radiante del haz de excitación que es absorbido por el sistema. [19]
34. Replique el ejemplo 15.1 del libro de skoog 6ta edición. Página 408-409
35. ¿Cuáles son las diferencias entre un fluorómetro y un espectrofluorómetro?
R/ Una de las diferencias entre fluorímetro y espectrofluorímetro es por donde pasa el
haz de radiación, pasando por un filtro en el fluorímetro y por un monocromador en el
espectrofluorímetro.[20]
36. Haga un esquema de un equipo de luminiscencia y describa cada una de sus partes.
Mencione los componentes y la variedad de modificaciones que puede tener.
R/

Fuente de radiación: como fuente de excitación, proporciona la energía que excita el

compuesto de interés emitiendo luz. Pueden ser lámparas de xenón, lámparas de
mercurio, láseres, LED’s… La lámpara de Xenón es la más utilizada debido a su alta
intensidad y a su amplio rango de longitud de onda, el espectro de esta lámpara es
continua de 250nm a 600nm, con un pico de máxima intensidad a 470nm.
Monocromador de excitación: permiten seleccionar la longitud de onda y la tolerancia. Es
importante que la longitud de onda de excitación se superponga con la región de la
longitud de onda de emisión. Generalmente se utilizan rejilla de difracción.
Cubeta de muestra: lugar donde se deposita la muestra. Es diferente dependiendo del
estado de la muestra a medir, ya sea sólida o líquida. En fluorescencia se utilizan celdas de
vidrio común cuando la radiación es de rango visible, para ultravioleta se utiliza cuarzo o
sílice.
Monocromador de emisión: al igual que el monocromador de excitación, es un selector
de la longitud de onda que ayuda a asegurar que la región de la longitud de onda de
emisión no se superponga con el de la excitación. Determina a qué longitud de onda se
desea terminar la fluorescencia emitida. También permite detectar bandas de
fluorescencia cuando hay múltiples bandas presentes. Son importantes para el rechazo de
la luz dispersa. Los más utilizados son los de rejilla.
Detector: es el encargado de contar el flujo de fotones emitido por la muestra a la
longitud de onda seleccionada. La detección del haz de excitación para monitorizarlo se
realiza generalmente con un contador de contadores cuánticos o un fotodiodo antes de la
muestra, donde una pequeña fracción del haz de excitación se separa del resto.[20]
 37. ¿Por qué se deben utilizar dos selectores de onda en los equipos de
fotoluminiscencia?
R/ Al tener dos monocromadores se pueden registrar dos tipos de espectros: el
espectro de excitación y el espectro de emisión. En el espectro de excitación se ve la
intensidad de fluorescencia observada en función de la longitud de onda de excitación a
una determinada longitud de onda de emisión y en el espectro de emisión la intensidad de
la emisión de la fluorescencia en función de la longitud de onda de emisión, a una longitud
de onda de excitación determinada. Para obtener el espectro de excitación se mantiene
fija la longitud de onda de emisión y se van variando las longitudes de onda de excitación,
para obtener el espectro de emisión, se mantiene constante la longitud de onda de
excitación y se mide la radiación emitida a diferentes longitudes de onda de emisión. Los
espectros de emisión van a aparecer a longitudes de onda mayores que los espectros de
excitación. Puede que alguna banda de mayor longitud de onda del espectro de absorción
esté superpuesta con las bandas de menor longitud de onda de emisión, estas bandas se
producen como consecuencia de transiciones entre niveles vibracionales cero de los
estados fundamentales y primer estado singlete excitado.[20]
38. ¿En qué consiste la quimioluminiscencia? ¿Hay diferencias con la
bioluminiscencia? Explique cada fenómeno.
R/ La bioluminiscencia es un caso particular de quimioluminiscencia que tiene lugar en
los organismos vivos. Mientras que la energía de activación en la quimioluminiscencia
proviene de una reacción química, en la fotoluminiscencia la activación se produce por
absorción de fotones.
La quimioluminiscencia se define como el fenómeno por el que se emite radiación
electromagnética en la región del visible o infrarrojo cercano cuando tiene lugar una
reacción química; Las medidas de la intensidad de emisión de dicha radiación pueden
utilizarse con fines analíticos, ya que ésta es función de la concentración de las especies
participantes en la reacción.La quimioluminiscencia ha despertado un interés progresivo a
lo largo de los años por ser una alternativa simple, económica y sensible para la detección
analítica tanto cualitativa como cuantitativa de una gran variedad de compuestos
La bioluminiscencia es un proceso natural que ocurre tanto en algunos organismos vivos
como en los minerales; consiste en la generación de energía, a través de una reacción
química, que se manifiesta en forma de luz. Se trata de la conversión directa de energía
química en energía lumínica. Como ya se ha comentado muy sucintamente, la
bioluminiscencia es un tipo de quimioluminiscencia, ya que la emisión de luz que se
produce en esta transformación no genera calor. De hecho, la bioluminiscencia es
denominada “luz fría” debido a que tan solo el 20% de la luz genera radiación térmica o
calor.[21]
39. Los métodos quimioluminiscentes para detectar gases se originaron por la necesidad
de encontrar medios muy sensibles para determinar contaminantes atmosféricos,
como el ozono, los óxidos de nitrógeno y los compuestos azufrados. Explique cómo se
detecta monóxido de nitrógeno por esta técnica.
R/El NCD utiliza un quemador para realizar la combustión a altas temperaturas de los
compuestos de nitrógeno y formar el monóxido de nitrógeno (NO). Un tubo
fotomultiplicador detecta la luz producida por la reacción quimioluminiscente del monóxido
de oxigeno con el ozono. Esta reacciona produce una respuesta lineal y equimolar de los
 compuestos de azufre, eliminando la interferencia del resto de compuestos que contiene la
matriz.
Los detectores NCD permiten el análisis a niveles de picrogramos y se pueden configurar en
paralelo con otro detector, Actualmente existen diferentes métodos ASTM aprobados para
este detector. Este detector responde al amoníaco, hidracinas, cianuro de hidrógeno y NOx,
está disponible la opción con un doble quemador de plasma para el análisis de
nitrosaminas.[22]
40. ¿Para cuál de los siguientes pares de compuestos se espera una mayor eficacia cuántica de
fluorescencia? Explique brevemente.

R/ La Fluoresceína , ya que tienen eficiencias cuánticas que, en ciertas condiciones, se aproximan a

la unidad. Las especies no fluorescentes tienen eficiencias que son prácticamente cero.[19]

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