UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

Universidad del Perú. Decana de América.

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

SAPONINAS TRITERPENOIDES EN TÉ (Camellia sinensis) Y SU

ACTIVIDAD ANTITUMORAL EN HEPATOCARCINOMAS
Autores:

Fernandez Surco, Christian Edgar

Juárez de la Cruz, Jhonatan

Ponce Pantigoso, Iván Vladimir

Suarez Trujillo, Kenji Amilcar

Trujillo Caqui ,Renzo Giusepe

Asesor: Fritz Choquesillo Peña

Lima – 2021
 1. RESUMEN
La enfermedad de hepatocarcinoma celular es una de las principales causas
de muerte en todo el mundo, dentro de las cuales está muy relacionada la
línea celular HepG2. En los últimos años se va reconociendo diferentes
efectos antitumorales en una gran variedad de enfermedades cancerígenas.
El presente trabajo tiene como objetivo analizar el efecto de saponinas
triterpenoides presentes en té (Camellia sinensis) sobre la línea tumoral
HepG2 de hepatocarcinoma celular. Para ello se realizará una extracción con
n-butanol llevando el extracto hidroalcohólico a secar obteniendo un residuo
sólido que pasará por la reacción de Lieberman Burchand, Salkowsky para
verificar la presencia de saponinas triterpenoides. Ademas se realizará la
separación y cuantificación de las saponinas triterpenoides en té (Camellia
sinensis) para posteriormente verificar su efecto citotóxico en la línea tumoral
HepG2 en una muestra de 218 personas con una edad igual o mayor de 50
años en el departamento de Lima que tienen o hayan presentado
Hepatocarcinoma celular en el periodo de tiempo 2015 - 2021.

2. DESCRIPCIÓN DEL ESTUDIO

2.1 ANTECEDENTES

Las saponinas son un grupo de glucósidos vegetales de origen natural, que

se caracterizan por sus fuertes propiedades de formación de espuma en
solución acuosa. Se ha informado de la presencia de saponinas en más de
100 familias de plantas, de las cuales se ha descubierto que al menos 150
tipos de saponinas naturales poseen importantes propiedades
anticancerígenas (1).
Asimismo, en un estudio se evaluó el efecto de las saponinas triterpenoides
presentes en camellia sinensis, en este caso la chaka saponina mostró una
mayor actividad antiproliferativa por la vía apoptótica frente al carcinoma del
tracto digestivo (2).
En este estudio, las saponinas triterpenoides presentes en Camellia sinensis
han demostrado el efecto citotóxico de extractos de saponina del té en líneas
de carcinoma escamoso de lengua humana y hepatocarcinoma, la cual se
atribuye a más de 40 saponinas identificadas en el té verde. Siendo las
infusiones de té, las que brindan potentes beneficios para la salud (3).
La planta del té (Camellia sinensis) ha sido consumido por los humanos
durante miles de años ya sea por sus propiedades frente a la diabetes,
inflamación, vómitos, diarrea, enfermedades cardiacas y varios tipos de
cánceres, además se demostró con animales de experimentación que reduce
las lesiones hepáticas causadas por alcohol, hepatitis viral, reperfusión
isquémica también muestran que el té previene la hepatocarcinogénesis que
vendría a ser el crecimiento de células cancerosas a nivel del hígado (4).
El carcinoma hepatocelular (CHC) presenta gran incidencia y prevalencia en
el mundo y sobre todo en el Perú. Ésta en gran porcentaje, se origina en el
hígado cirrótico. El siguiente es un estudio de tipo descriptivo retrospectivo de
corte transversal, cuyo universo es conformado por los pacientes
transplantados de los cuales el 81% fueron de sexo masculino. El promedio
de edad fue de 59,7 años. La etiología cirrótica más frecuente fue NASH con
9 (35%) casos, seguida de VHC y OH con 23% (5).

Los botones florales de la Camellia sinensis que contienen saponinas

triterpenoides se demostró un efecto contra la obesidad a través de la
supresión de señales de apetito en el hipotálamo en función del extracto
metanólico, reduce el aumento de peso corporal en ratones alimentados con
dietas altas en grasas (6).
En el estudio del efecto de saponinas que se encontraron en los botones
florales de la Camelia sinensis de los cuales destacaron las chaka saponinas
I-III, tuvieron un efecto de disminución de triglicéridos citoplasmáticos y
controlando también los niveles de glucosa en sangre, para los cuales se
relacionaron con el vaciamiento gástrico al analizar este efecto en un grupo
de ratones, para los cuales se les preparó 30 minutos antes de la medición
del vaciamiento gástrico (7).
En cuanto a los Oligo Glicósidos triterpénicos presentes en botones florales
de Camellia sinensis y C. sinensis var. assamica, muestran efectos
antihiperlipidémicos, antihiperglucémicos, antiobesidad y gastroprotectores in
vivo, y actividades antialérgicas, inhibidoras de la lipasa pancreática e
inhibidoras de la agregación amiloide β (Aβ) in vitro. Aunque los efectos
biofuncionales de las hojas de té se han estudiado ampliamente, se ha
prestado menos atención a los botones florales de la planta del té (8).
A su vez, el método de cromatografía líquida / espectrometría de masas de
tiempo de vuelo (LC / TOF-MS) y LC / UV se usa para la cuantificación de
saponinas en extracto de hojas de té verde. Las saponinas presentan un
efecto inductivo en la disminución en los niveles de colesterol y triglicéridos
en el hígado y un aumento en la excreción fecal de colesterol, por lo que se
evidencia su actividad anti hipercolesterolémica al inhibir la absorción de
colesterol en los intestinos (9).
Algunos triterpenoides pentacíclicos presentes en Camellia sinensis se han
comercializado en algunos países como agentes terapéuticos para el
tratamiento de enfermedades relacionadas con el hígado, diabetes y como
agentes cicatrizantes de heridas por la relación estructura - función que
muestran (10).

Por otro lado, en otro artículo se relaciona la actividad del VHC sobre las
células tipo HepG2, el cual pudo ser tratado con actividad fitoquímica de
plantas locales (11). A partir del extracto de té negro (Camelia sinensis) el cual
es ampliamente usado en la medicina tradicional china, se estudió la
actividad antiproliferativa de las células cancerosas del hígado,
particularmente de la línea celular HepG2 a partir de los principales
 compuestos del té como flavonoles, TFS (theaflorasaponinas) y catequinas
mediante diversos mecanismos como los antitumorales (de tipo apoptótico),
control inmunológico del ingreso del VHB/C mediante catequinas y control
lipidémico (12).

2.2 PLANTEAMIENTO Y FORMULACIÓN DEL PROBLEMA

2.2.1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA.

A nivel mundial el hepatocarcinoma celular ocupa el sexto lugar como
neoplasia más frecuente, teniendo 841080 nuevos casos diagnosticados en
2018; y la segunda causa de muerte por cáncer. (13)
El contexto en latinoamérica para entender la etiología( causas) de la
hepatocarcinoma el predominio de hepatitis, cirrosis alcohólica, el hígado
graso serian los factores desencadenantes para el desarrollo de
hepatocarcinomas, teniendo ademas en el sexo masculino y la edad elevada
una mayor prevalencia de hepatocarcinoma. (14)
En Perú ocupa el decimotercer lugar como neoplasia más frecuente entre
2012 y 2017 y la segunda causa de muerte después del cáncer de estómago.
A pesar de estos datos, las tendencias de las tasas estandarizadas de la
mortalidad por el carcinoma de las células hepáticas en el Ministerio de Salud
del Perú según el año del registro de la defunción (2005-2016) indican una
disminución siendo las regiones que más resaltan en este aspecto Apurimac,
Lima, entre otros. (15)

2.2.3. FORMULACIÓN DEL PROBLEMA

Relación existente entre hepatocarcinoma celular (línea celular HepG2) con
el consumo de té (Camellia sinensis) y el efecto de chakasaponinas
(saponina triterpenoide).

2.3 JUSTIFICACIÓN
El presente trabajo se basa en las acción farmacológica de las saponinas sobre las
células del hepatocarcinoma, debido a que estas saponinas inducen la apoptosis en
las células tumorales estos son fármacos preferibles para evitar la necrosis en el
pacientes debido a que algunos de ellos se van dirigidos a la inhibición de la
angiogénesis tumoral al suprimir su inductor en las células endoteliales de los vasos
sanguíneos y luego a la prevención de la adhesión, invasión y metástasis de las
células tumorales(16).

Se da un mayor interés sobre las saponinas del té verde y té negro, estos fueron
analizaron por colorimetría y HPLC, con ensayo MTT y ensayos de formación de
colonias utilizados para evaluar la proliferación y viabilidad celular. Los efectos del té
negro y el té verde sobre la apoptosis de las células HepG2 se verificaron mediante
citometría de flujo, con la curación de heridas y experimentos de Transwell utilizados
para detectar la invasión celular y la metástasis. La expresión de la señalización de
PI3K / Akt y las proteínas relacionadas con la apoptosis, así como el factor
regulador de transición epitelial-mesenquimatosa (EMT) en las células HepG2.
Estos mostraron un efecto inhibidor en el crecimiento de las células HepG2 e
indujeron la apoptosis a través de PI3K / Akt e inhibieron la migración e invasión
celular a través de la vía de señalización de las MMP (17).

También se va a considerar el perfil de proteínas que se pueden encontrar en el

hepatocarcinoma humano en la línea celular SMMC-7721 para identificar las
proteínas que se pueden encontrar en el hepatocarcinoma humano y poder ver
algún fármaco que pueda actuar en contra. En el trabajo se identificó veintiún
proteínas identificadas con éxito entre ellas las más importantes serían la mitofilina,
la proteína del retículo endoplásmico ERp29; la proteína central del complejo
ubiquinol-citocromo C reductasa I; la enoil CoA hidratasa peroxisomal; la
peroxiredoxina-4 y el probable precursor de 3-oxoácido CoA transferasa 1 fueron las
seis nuevas proteínas identificadas en células o tejidos de hepatocarcinoma
humano. Las funciones específicas de las proteínas de choque térmico identificadas
fueron analizadas en detalle y los resultados sugirieron que estas proteínas podrían
promover la tumorigénesis mediante la inhibición de la muerte celular inducida por
varias tensiones relacionadas con el cáncer o mediante la inhibición de la apoptosis
en múltiples puntos de la vía de la señal apoptótica. Adicionalmente se analizaron
otras chaperonas identificadas y proteínas relacionadas con el cáncer (18).

2.4 HIPÓTESIS Y VARIABLES

Hipótesis
Las saponinas triterpenoides producirán efecto citotóxico en la línea tumoral Hepg2
de hepatocarcinoma celular.

Hipótesis nula
Las saponinas triterpenoides no producirán efecto citotóxico en la línea tumoral
Hepg2 de hepatocarcinoma celular.

Hipótesis alternativa
Las saponinas triterpenoides producirán efecto citotóxico en otras líneas tumorales

Variables

Variable independiente: Las saponinas triterpenoides de Camellia sinensis

Variable dependiente: El efecto citotóxico en la línea tumoral Hepg2
3. OBJETIVOS

Objetivo general:
Analizar el efecto de saponinas triterpenoides presentes en té (Camellia sinensis)
sobre la línea tumoral HepG2 de hepatocarcinoma celular.

Objetivos específicos:
● Extraer e identificar de saponinas triterpenoides en hojas de Camellia sinensis.
● Explicar el efecto citotóxico de saponinas triterpenoides presentes en té a partir
de su estructura química sobre la línea tumoral HepG2 de hepatocarcinoma
celular.

4. METODOLOGÍA
4.1 TIPO Y DISEÑO DE INVESTIGACIÓN
- Se identifica que el nivel de investigación es aplicada, debido a que le
daremos un uso citotóxico, con respecto al hepatocarcinoma de la línea
celular HepG2, a las chaka saponinas de la Camellia sinensis “té verde”
basados en el conocimiento previo establecido en investigación básica
con respecto a las propiedades citotóxicas de las saponinas
triterpenoides.
- Nuestro tipo de investigación es explicativo, correlacional debido a que
se estudiará la relación entre nuestras variables (chaka
saponinas-citotoxicidad HepG2)
- Nuestro tipo de estudio es cronológicamente prospectivo,
secuencialmente longitudinal, de finalidad analítica y de tipo experimental
e in vitro.

4.2 POBLACIÓN DE ESTUDIO Y MUESTRA

● Población de estudio
La población objetivo estará conformada por personas con edad igual
o mayor que 50 años que viven en Lima sin distinción de género.
Para nuestro estudio se consideran como población de estudio
personas con edad igual o mayor que 50 años que vivan en Lima y
que sufran de Hepatocarcinoma celular en el periodo de tiempo 2015 -
2021, la que está constituida de 1000 casos.
● Muestra de estudio
La muestra de estudio corresponde a la denominada muestra
probabilística aleatoria simple para la población de estudio.
Se estableció el tamaño de la muestra y el tipo de muestreo que se
utilizará para seleccionar la muestra.

a) Tamaño de la muestra
 Se determinó el tamaño de la muestra utilizando la siguiente
fórmula(19) que tiene en cuenta el tamaño de la población, el
nivel de confianza expresado en un coeficiente de confianza
redondeado y el margen de error.
DATOS:
Población (N) : 500 personas
Z : Valor de Z crítico, calculado en las tablas
del
área de la curva normal. Llamado también
nivel de confianza (95%)
pyq : Probabilidad de éxito y fracaso que tiene
cada
integrante de la población (p+q = 1)
d : Margen de error seleccionado (5%)

FÓRMULA:

2
500. 1.96 . 0.5.0.5
𝑛= 2 2
0.05 (500 − 1)+1.96 .0.5.0.5
𝑛 = 218 (𝑣𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑟𝑒𝑑𝑜𝑛𝑑𝑒𝑎𝑑𝑜)

b) Tipo de muestreo
Después de calcular el tamaño de la muestra, se utilizo el tipo
de muestreo probabilístico aleatorio simple para lo cual
seguimos los siguientes pasos:
1. Identificamos y definimos la población
2. Se realizó el listado de las unidades de población
3. Calculamos la muestra
4. Asignamos un número en una ficha
5. Extraemos hasta completar la muestra

4.3 MÉTODOS
4.3.1. Métodos de extracción
Reactivos
● Etanol
● n-butanol
● Agua
● HCl
● Acetato de etilo
● Reactivo de Salkowsky
● Reactivo de Lieberman Burchard
 ● Vainillina/H2SO4
Materiales
● Hojas de Camellia sinensis
● Pera de decantación
● Molino de cuchillas

Equipos
● Acquity UPLC
● Detector PDA
● Espectrofotómetro (UV-2550)

Recolección e identificación de la especie vegetal

Se procedió a recolectar la especie vegetal y verificar si la podemos encontrar en el
Perú a través de la información bibliográfica se ubico que la especie del té
mencionado la podemos encontrar en la provincia de La Convención (Cusco) donde
abunda el té siendo esta planta la más abundante, estas son capaces de sobrevivir
durante copas cerradas durante mucho tiempo. (20)
Aragón S., Salinas N., Nina A., Huaman V., Rayme G., Huaman W.,
Chambi P., Olarte J., Cruz R., Muñiz J., Salas C., Boza T., Tito R., Cosio
E., Román R. (2021) Aboveground
Se identificó esta especie a través de la página de trópicos donde se brindan los
datos necesarios para la investigación y se procede a entregar la especie a un
taxónomo botánico del Museo de Historia Natural de la UNMSM para corroborar si
concuerda con las características. (21) (22)

Clase: Equisetopsida
Subclase: Magnolidae
Orden: Ericales
Familia Theaceae
Género: Camellia
Especie: C. sinensis

Proceso de extracción

Para este caso se pulverizaron las hojas del té para reducir el tamaño de partícula y
se llevó a un proceso de maceración durante 48 horas con etanol al 70% durante 48
horas,luego se filtra y se reservan el extracto hidroalcohólico para luego concentrar
hasta obtener un residuo pastoso el cual se procederá a disolver en 20 ml agua y
pasa por un proceso de extracción en una pera de decantación con n-butanol
llevando nuestro extracto hidroalcohólico a secar obteniendo un residuo sólido y se
le realizará unas pruebas que verifican si encontramos saponinas triterpenoides
como la prueba de espuma , reacción de Lieberman Burchand, Salkowsky. (23) (24)

Proceso de separación
Se procedió a realizar la separación en el instrumento Acquity UPLC equipado con
un detector PDA (Waters, Milford, MA, EE. UU.) Y una columna Waters Acquity
UPLC HSS T3 (1.8 μm, 150 mm × 2.1 mm id, Waters, Milford, MA, EE. UU. ). El
detector de PDA se configuró para escanear un rango de 200 nm a 400 nm, y se
seleccionó la longitud de onda específica de 210 nm para detectar saponinas. La
fase móvil A era agua que contenía ácido fórmico al 0,1% y B era acetonitrilo que
contenía ácido fórmico al 0,1%. El gradiente de elución se realizó de la siguiente
manera: 0 a 4 min, 35 a 37% de B; 4-32 min, 37% B; 32 a 58 min, 37 a 45% B;
58-60 min, 35% B. El volumen de inyección de la muestra fue de 5 μL, la columna
se mantuvo a 30 ° C y la velocidad de flujo fue de 0,2 mL / min. (25)

Proceso de cuantificación

El contenido total de saponina de las hojas de té. Se hicieron reaccionar

secuencialmente 0,5 ml de solución de muestra con 0,5 ml de solución de etanol de
vainillina (8%, p / v ) y 4 ml de ácido sulfúrico diluido (72%, p / v ). Después de la
incubación a 60 ° C durante 10 min, la mezcla de reacción se enfrió en un baño de
agua helada durante otros 15 min y se escaneó de 450 a 800 nm mediante un
espectrofotómetro UV-VIS (UV-2550) Se utilizó Chakasaponina I (0,2-1,0 mg / ml)
como estándar de referencia para establecer la curva de calibración. (25)
4.3.2. Métodos de evaluación citotóxica

Para evaluar la actividad citotóxica de las chaka saponinas de Camellia

sinensis, se realizaron ensayos in vitro en la línea celular de carcinoma
hepatocelular humano HepG2. Se cultivaron en medio DMEM, se
complementaron con FBS al 10% y se cultivaron en una incubadora
(37ºC, 5% de CO2 y humedad saturada). Todas las células utilizadas
en los experimentos se recuperaron en dos meses desde su
almacenamiento en nitrógeno líquido. (26)(27)

a. Ensayo de viabilidad celular

Los efectos del té verde sobre la viabilidad celular de las células
HepG2 se examinaron mediante un ensayo MTT. Se hizo un cultivo
celular de la línea HepG2 y después de 24 h, las células se adhirieron,
luego se agregó una concentración específica de extracto de té verde
a las células durante 24 o 48 h. Se añadió solución de MTT a cada
cultivo y se incubó a 37 ° C durante 4 h en la oscuridad. Se retira el
medio, se agrega DMSO y agita en la oscuridad antes de medir la
absorbancia del sobrenadante a 570 nm utilizando un lector de
microplacas. Los valores de CI50 fueron calculados por Software.

b. Ensayo de formación de colonias

Las células HepG2 se trataron con extracto de té verde durante 48 h
en la fase de crecimiento logarítmico y se descartó el caldo de cultivo.
Las células tratadas se tripsinización para preparar una suspensión de
células individuales y se volvieron a inocular en una placa de seis
pocillos (1500 células / pocillo). Las células se cultivaron durante 10
días a 37 ° C en CO2 al 5% hasta que aparecieron grandes colonias
visibles a simple vista. Las células se lavaron con PBS, se fijaron
(metanol: ácido acético glacial: ddH2O = 1: 1: 8) durante 10 min, luego
se tiñeron con violeta cristal al 0,1% durante 30 min. Las colonias de
células teñidas se fotografiaron y se contaron.

c. Ensayo de migración celular

Las células HepG2 se sembraron en placas de cultivo y después de
que las células estaban completamente adheridas, se hizo una herida
usando artificialmente una punta esterilizada para dibujar una línea de
igual ancho en la parte inferior del plato. Los restos celulares
suspendidos se lavaron con PBS y se añadió medio basal libre de
FBS. A continuación, se añade una dosis específica de extracto de té
verde a las células tratadas durante 24 o 48 h, y se obtienen
fotografías de la herida de la célula tratada. Se tomaron cuatro campos
de visión en una posición fija en cada momento. Finalmente, el
 software Image Tool (Bechtel Nevada Inc., Los Alamos, NM) para
calcular la distancia de migración de las células tratadas y de control.
d. Análisis de citometría de flujo
El análisis de citometría de flujo se realizó usando un citómetro de flujo
para determinar la proporción de células HepG2 apoptóticas. Las
células HepG2 se dirigieron y se resuspendieron en PBS después del
tratamiento con la solución de té, luego se tiñeron con soluciones de PI
y anexina V, respectivamente, de acuerdo con las instrucciones del
fabricante en el kit de ensayo de apoptosis (Beyotime, China). La
proporción de células apoptóticas se analizó mediante citometría de
flujo utilizando el software FlowJo.
e. Análisis estadístico.
Todos los datos se expresan como media ± DE de al menos tres
experimentos independientes. Se utilizó el análisis de varianza ANOVA
bidireccional para la comparación entre múltiples grupos. Se utilizó el
software estadístico GraphPad Prism 7.0 (GraphPad Software Inc.,
San Diego, CA, EE. UU.) Para analizar los datos. P <0,05 y P <0,01 se
consideraron estadísticamente significativos.

5. RECOMENDACIONES
● Realizar más estudios de investigación sobre saponinas triterpenoides
presentes en Camellia sinensis orientados a su acción antitumoral, ya que si
bien es cierto, los hay, pero son muy escasos.
● Realizar estudios sobre saponinas triterpenoides de manera individual y
verificar su efecto antitumoral teniendo en cuenta la relación estructura
química y función.
● Por los estudios revisados, creemos en que el efecto antitumoral de las
saponinas triterpenoides puede darse como un “efecto séquito” al igual que
sucede con los cannabinoides en el caso de la planta de marihuana.
● Estudiar con profundidad el mecanismo de apoptosis del hepatocarcinoma
inducida por las saponinas y buscar métodos más efectivos para dar una
mejor actividad farmacológica

6. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1) Limao Fan, Yufeng He, Yujie Xu, Penghui Li, Jinsong Zhang & Jian Zhao
(2021) Triterpenoid saponins in tea (Camellia sinensis) plants: biosynthetic
gene expression, content variations, chemical identification and cytotoxicity,
International Journal of Food Sciences and Nutrition, 72:3, 308-323, DOI:
10.1080/09637486.2020.1798891
2) Ramírez-Soto M, Guevara-Cuadros J, Huichi-Atamari M. Mortalidad por
Hepatocarcinoma y cirrosis hepática en Apurímac: 2007-2010. Rev Peru
Epidemiol 2012; 16: 1-5. Disponible en:
https://www.redalyc.org/pdf/2031/203124341008.pdf
3) Piscoya A., Atamari-Anahui N., Ccorahua-Rios M.S., Del Riego A.P. National
trends of hepatocellular carcinoma mortality registered by the ministry of
health in Peru, from 2005 to 2016 | Tendencia nacional de la mortalidad por
hepatocarcinoma registrada en el ministerio de salud del Perú del 2005 al
2016. Rev. Acta Gastroenterológica Latinoamericana 2020, 50 (3), 292-299.
Disponible en:
https://www.redalyc.org/jatsRepo/1993/199364397013/199364397013.pdf
4) Le, Q.-U., Department of Tropical Agriculture and international Cooperation,
National Pingtung University of Science and Technology, Pingtung 91201,
Taiwan, Lay, H.-L., Wu, M.-C., Do, T.-N., Thai Nguyen University of Agriculture
and Forestry, Thai Nguyen, Vietnam, … Thai Nguyen University, Thai Nguyen
City, Vietnam. (2019). Camellia sinensis tea and cancer risk: A systematic
review. Journal of Ayurvedic and Herbal Medicine, 5(3), 110–116.
5) Zhao W. Li N. Zhang X. Wang W. Li J. Si Y.Cancer chemopreventive
theasaponin derivatives from the total tea seed saponin of camellia
sinensis.Journal of functional foods [Internet]. 2015 [citado 4 junio 2021] 12,
192-198 Disponible en:
https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1756464614003673
6) Xu X-H. Et al. Saponins from Chinese Medicines as Anticancer Agents.
Molecules [Internet]. 2016 [citado 21 junio 2021];21(10):1326–1353.
Disponible en:
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6272920/#B121-molecules-21-
01326
7) Chen D. Physiological genetics, chemical composition, health benefits and
toxicology of tea (Camellia sinensis L.) flower: A review. Food Research
International [Internet]. 2020 [citado 21 junio 2021];137. Disponible en:
https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0963996920306098
8) Uribe M. García M. Chávez N. Roman J. Carcinoma hepatocelular. Revista de
gastre. de México [Internet] Noviembre 2010 [Recuperado 28 Jun 2021] 75,
168-176 Disponible en:
http://www.revistagastroenterologiamexico.org/es-carcinoma-hepatocelular-art
iculo-X0375090610873905
9) López Panqueva, MD R. Neoplasias hepáticas malignas: 1.a parte.
Hepatocarcinoma: papel de la biopsia hepática, estudios de
inmunohistoquímica y otros aspectos importantes [Internet]. Scielo. 2015
[cited 29 June 2021]. Available from:
http://www.scielo.org.co/pdf/rcg/v30n2/v30n2a14.pdf
10)Ren N, Chen L, Li B, Rankin GO, Chen YC, Tu Y. Té purificado (Camellia
sinensis (L.) Kuntze) Saponinas de flores inducen la apoptosis intrínseca
p53-Dependiente De Las Células De Cáncer De Ovario Cisplatino
 Resistentes. International Journal of Molecular Sciences 2020;21:4324.
https://doi.org/10.3390/ijms21124324.
11) Yang H., Kim H.W., Kim Y.C. Cytotoxic activities of naturally occurring
oleanane-, ursane-, and lupane-type triterpenes on HepG2 and AGS cells.
Pharmacogn Mag [Internet]. 2017 [citado 4 junio 2021];13(49):118–122.
Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5307894/
12)Zhao P, Gao DF, Xu M, Shi ZG, Wang D, Yang CR, Zhang YJ. Triterpenoid
saponins from the genus Camellia. Chem Biodivers. 2011 Nov;8(11):1931-42.
doi: 10.1002/cbdv.201000265. PMID: 22083907.
13)R. Vilana, A. Forner, A. Á. García, C. Bru, C. Ayuso. Carcinoma
hepatocelular: diagnóstico, estadificación y estrategia terapéutica [Internet].
Elsevier.es. 2010 [citado el 24 de agosto del 2021]. Disponible en:
https://www.elsevier.es/es-revista-radiologia-119-pdf-S0033833810002195
14) Venook AP, Papandreou C, Furuse J, Ladrón de Guevara L. The Incidence
and Epidemiology of Hepatocellular Carcinoma: A Global and Regional
Perspective. The Oncologist [Internet]. 2010 [citado 14 julio 2021];15(4):5–13.
Disponible en:
https://theoncologist.onlinelibrary.wiley.com/doi/pdfdirect/10.1634/theoncologis
t.2010-S4-05
15) Piscoya, Alejandro, Atamari-Anahui, Noé, Ccorahua-Rios, Maycol Suker,
Parra del Riego, Angela, Tendencia nacional de la mortalidad por
hepatocarcinoma registrada en el Ministerio de Salud del Perú del 2005 al
2016. Acta Gastroenterológica Latinoamericana [Internet]. 2020; 50 (3):
292-299. Recuperado de:
https://actagastro.org/tendencia-nacional-de-la-mortalidad-por-hepatocarcino
ma-registrada-en-el-ministerio-de-salud-del-peru-del-2005-al-2016/

16) Man, S., Gao, W., Zhang, Y., Huang, L., & Liu, C., 2010. Chemical study and
medical application of saponins as anti-cancer agents. Fitoterapia, [online]
81(7), pp. 703–714. Disponible en:
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20550961/
17) Sun, L., Zhang, Y., Zhang, W., Lai, X., Li, Q., Zhang, L., & Sun, S., 2020.
Green tea and black tea inhibit proliferation and migration of HepG2 cells via
the PI3K/Akt and MMPs signalling pathway. Biomedicine & Pharmacotherapy,
[online]125, p.109893. Disponible en:
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/32004975/
18)Feng Y, Min Tian Z, Xi Wan M, Bin Zheng Z. Protein profile of human
hepatocarcinoma cell line SMMC-7721: Identification and functional analysis
[Internet]. NCBI. 2007 [citado el 24 de agosto del 2021]. Disponible en:
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4146824/
19)Aguilar-Barojas, S. Fórmulas para el cálculo de la muestra en investigaciones
de salud. Salud en Tabasco [Internet]. 2005;11(1-2):333-338. Recuperado de:
https://www.redalyc.org/articulo.oa?id=48711206
20)Biomass in secondary montane forests in Peru: Slow carbon recovery in
agroforestry legacies. Global Ecology and Conservation, 28;
e01696.[Internet]. [Recuperado el 28 Ago 2021]Disponible en:
https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S2351989421002468
21)Trópicos. Camellia sinensis L. [Internet] 2021 [Recuperado 28 Ago 2021]
Disponible en:https://www.tropicos.org/name/31600230
22)Museo de Historia Natural de la UNMSM. Etnobotánica y Botánica
Económica [Internet] 2021 [Recuperado 28 Ago 2021] Disponible en:
https://museohn.unmsm.edu.pe/etno.html
23)C.B. Castañeda, M.R. Manrique, V. L Ibañez. Estudio fitoquimico y
farmacologico de plantas con efecto hipoglucemiante [Internet] 2010
[Recuperado 24 Ago 2021] Disponible en:
https://www.revistacultura.com.pe/imagenes/pdf/18_02.pdf
24) C.H. Tomas. Huaman J. Aguirre R. Barrera T. Extracción y clasificación de la
saponina del Sapindus saponaria L. “ Boliche” [Internet] 2010 [Recuperado 24
Ago 2021] Disponible en:
https://revistasinvestigacion.unmsm.edu.pe/index.php/quim/article/view/4605/
3680
25)Xuejin Wu, Lingyan Jia, Jiafan Wu, Yawen Liu, Hyunuk Kang, Xiabou Liu et al
Simultaneous Determination and Quantification of Triterpene Saponins from
Camellia sinensis Seeds Using UPLC-PDA-QTOF-MS/MS [Internet] 2019
[Recuperado el 23 Ago 2021] 24 (20) Disponible en:
https://www.mdpi.com/1420-3049/24/20/3794/htm#B19-molecules-24-03794
26)Sun, L., Zhang, Y., Zhang, W., Lai, X., Li, Q., Zhang, L., & Sun, S., 2020.
Green tea and black tea inhibit proliferation and migration of HepG2 cells via
the PI3K/Akt and MMPs signalling pathway. Biomedicine & Pharmacotherapy,
[online]125, p.109893. Disponible en:
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/32004975/
27)Kitagawa N, Morikawa T, Motai C, Ninomiya K, Okugawa S, Nishida A,
Yoshikawa M, Muraoka O. The Antiproliferative Effect of Chakasaponins I and
II, Floratheasaponin A, and Epigallocatechin 3-O-Gallate Isolated from
Camellia sinensis on Human Digestive Tract Carcinoma Cell Lines. Int J Food
Sci Nutr [Internet]. 2016 [citado 26 junio 2021];17(12). Disponible en:
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5187779/