EFECTOS MODULADORES DEL TÉ VERDE Y EXTRACTOS DE ALOE VERA SOBRE LA

FIBROSIS PULMONAR INDUCIDA EXPERIMENTALMENTE EN RATAS: ESTUDIO

Resumen:
Antecedentes: la fibrosis pulmonar (FP) es una enfermedad multifactorial en el ser humano. Los
agentes terapéuticos existentes presentan efectos adversos desfavorables. En consecuencia, el
descubrimiento de nuevos agentes terapéuticos para la prevención y el tratamiento de la FP sigue
siendo un desafío.
Objetivo del trabajo: Evaluación del efecto modulador de los extractos de té verde y aloe vera (AV)
sobre la fibrosis pulmonar inducida por bleomicina en ratas.
Materiales y métodos: se utilizaron cincuenta ratas macho adultas y se dividieron por igual en 5
grupos. El primero sirvió como grupo de control, el segundo fue el grupo de bleomicina (BLM) (dosis
IP diaria de 10 mg / kg de peso corporal durante 10 días), el tercero fue el grupo de té verde (GTE)
que recibió una dosis oral diaria de GTE (150 mg / kg bw) durante 14 días con la administración IP
concomitante de BLM durante 10 días consecutivos, el cuarto fue el grupo Aloe vera (AV) al que se
administró una dosis oral diaria de AV (300 mg / kg bw) durante 14 días con la administración IP
concomitante de BLM durante 10 días consecutivos, el quinto fue el grupo GTE y AV. Se tomaron
muestras de pulmón 14 días después del tratamiento. Se prepararon secciones de parafina para
histología; H&E y tinción tricrómica de Masson y estudio inmunohistoquímico.
Resultados: el grupo de té verde reveló bronquiolos normales, alvéolos con septos interalveolares
aparentemente delgados, poca infiltración celular y eritrocitos extravasados e indujo una disminución
significativa (P≤0.05) en la acumulación de fibras de colágeno y en la expresión de caspasa-3 en
comparación con el grupo BLM. El grupo IV (AV) y el grupo V (GTE y AV) revelaron alvéolos con
septos interalveolares aparentemente más gruesos, más infiltración celular, vasos sanguíneos
congestionados y glóbulos rojos extravasados en comparación con el grupo de GTE. El grupo IV
mostró una disminución insignificante (P≤0.05) en la acumulación de fibras de colágeno en
comparación con el grupo BLM, mientras que la disminución fue significativa en la expresión de
caspasa-3. El grupo V mostró una disminución insignificante (P≤0.05) en la acumulación de fibras de
colágeno y en la expresión de caspasa-3 en comparación con el grupo BLM. Conclusión: el té verde y
el aloe vera alivian parcialmente la fibrosis pulmonar inducida por la bleomicina en ratas. Respaldar
los beneficios potenciales del uso de aloe vera y té verde como posibles agentes terapéuticos
novedosos en la dieta. Palabras clave: GTE, AV, vasos sanguíneos, fibrosis pulmonar.
Introducción
Hay un resurgimiento global del interés por la medicina herbal. La importancia de los productos
botánicos y herbales está siendo reconocida por los países desarrollados. El uso de la medicina
complementaria o alternativa ha aumentado enormemente en Occidente, ya que cada vez más países
creen en sus beneficios, que ahora están regulando y otorgando licencias para la venta de productos
herbales en sus países [1]. El té verde, un producto de las hojas secas de Camellia sinensis, es la
bebida más consumida en el mundo sin efectos secundarios graves conocidos [2]. El té verde está
siendo ampliamente estudiado por su efecto beneficioso en el tratamiento y prevención de
enfermedades humanas. Se considera que es antiinflamativo, antioxidante, antimutagénico y
anticancerígeno y puede prevenir trastornos cardíacos [3]. Los polifenoles del té verde han demostrado
importantes propiedades antioxidantes, anticancerígenas, antiinflamatorias, termogénicas y
antimicrobianas en numerosos estudios en humanos, animales e in vitro [4].
Aloe vera L. (Sin .: Aloe barbadensis Miller) es una planta perenne similar a un cactus que pertenece
a la familia Liliaceae (subfamilia de las Asphodelaceae), nativa del norte de África y cultivada en áreas
climáticas cálidas [5]. Aloe vera (AV) consiste en un alto contenido de compuestos fenólicos,
glucósidos (aloínas), derivados de 1,8-dihidroxianantquinona (aloe emodina), manano beta-1,4
acetilado, manosa-fosfato y glucoproteína alprogen [6]. Investigaciones científicas recientes sobre las
propiedades medicinales de AV lo convirtieron en un novedoso ingrediente mundial valioso para la
industria alimentaria, cosmética y farmacéutica [7]. Los exudados foliares y el gel mucilaginoso de Aloe
poseen actividades antiinflamatorias, antioxidantes, antifúngicas, antibacterianas, antiartríticas,
antirreumatoides [8], anticancerígenas [9], citoprotectoras, estimulantes cardíacas e
inmunomoduladoras [10]. Se utiliza para proteger contra la ulceración gástrica, el remedio contra una
variedad de trastornos de la piel, promueve la curación de heridas [11].
La fibrosis pulmonar es la etapa final de un grupo de enfermedades crónicas categorizadas como
neumonías intersticiales idiopáticas [12]. La fibrosis pulmonar afecta a un número creciente de
personas en todo el mundo, con un aumento de las tasas de morbilidad y mortalidad [13]. Múltiples
factores, incluido el factor de crecimiento transformante (TGF) -b1, el factor de crecimiento del tejido
conectivo (CTGF), el factor de crecimiento derivado de las plaquetas (PDGF), las citocinas
inflamatorias, el ligando 2 de quimiocinas (motivo CC) / la proteína-1 quimiocompresor de monocitos
(CCL2) , han sido implicados en la patogénesis de la fibrosis pulmonar [4]. Actualmente, hay pruebas
sólidas que demuestran que el estado redox celular y el equilibrio oxidante / antioxidante desempeñan
funciones importantes en la patogénesis de la fibrosis pulmonar [15]. El estrés oxidativo induce la
apoptosis estructural de las células y regula la síntesis de citoquinas proinflamatorias. Las
desregulaciones en el equilibrio de algunos factores de crecimiento inducidas por el estrés oxidativo
posiblemente desempeñan un papel importante en la distinción entre la reparación de tejido normal y
patológica [13]. La fibrosis pulmonar se desarrolla en una serie de enfermedades clínicas, incluidas las
enfermedades pulmonares intersticiales y las neumonías idiopáticas intersticiales, como parte de
varias enfermedades sistémicas del tejido conectivo y los síndromes de enfermedades pulmonares
intersticiales infantiles, y en respuesta a muchos tipos de lesión pulmonar, incluida la radiación y
algunos fármacos quimioterapéuticos. . Terapias iniciales centradas en el tratamiento antiinflamatorio
agresivo; sin embargo, este enfoque no ha mejorado la pérdida de la función pulmonar o la
supervivencia. Actualmente, no existen terapias médicas antifibróticas aprobadas para la fibrosis
pulmonar [16].
El objetivo del presente estudio fue evaluar el efecto modulador del té verde y los extractos AV en la
fibrosis pulmonar inducida por bleomicina en ratas.
Materiales y métodos
En este estudio, se utilizaron 50 ratas albinas macho adultas de un peso promedio de 150 a 200 g.
Los animales se obtuvieron de la casa de animales, facultad de medicina veterinaria Moshtohor, ciudad
de Benha, ciudad de Moshtohor, Egipto. Se utilizaron medidas estrictas de cuidado y limpieza para
mantener al animal en un estado normal de salud; los animales se mantuvieron en jaulas de animales
bajo las condiciones atmosféricas prevalecientes. Se mantuvieron en una dieta equilibrada normal y
agua del grifo. Todos los protocolos éticos para el tratamiento de animales se siguieron y fueron
supervisados por las instalaciones de los animales. Todos los experimentos con animales recibieron
la aprobación del Comité Institucional de Cuidado de Animales. El sulfato de bleomicina (Merck
Millipore, MA, Estados Unidos) se adquirió de NOOR SCIENTIFIC & TRADE (8 El Noor St,
Shoubra El Khaema, Kaliobyea, Egipto). La bleomicina (BLM) se disolvió en solución salina normal y
se administró por vía intraperitoneal (IP) en una dosis de 10 mg / kg / día / 10 días para inducir la
fibrosis pulmonar [17]. El extracto de té verde (GET) se obtuvo de Technomade Group (Nasr City, El
Cairo, Egipto) como un extracto en polvo de 350 g. Se disolvió recientemente en agua destilada antes
de la administración mediante un tubo gástrico a una dosis de 150 mg / kg de peso corporal [18]
Preparación del extracto de Aloe vera
Se recogió el gel sólido AV en el centro de la hoja y se homogeneizó, obteniéndose homogeneizado
mucilaginoso, espeso y de color paja, y se liofilizó. Luego la muestra liofilizada se extrajo usando etanol
al 95%. El filtrado se recogió y se evaporó a sequedad a presión reducida en un evaporador rotatorio
a 60ºC. El residuo se almacenó en pequeños recipientes esterilizados a 4 ° C hasta su uso posterior.
Las soluciones farmacológicas se prepararon cada vez más. El horario de dosificación utilizado fue
una vez al día. Los extractos se administraron por vía oral diariamente a ratas mediante un tubo
gástrico a una dosis de 300 mg / kg de peso corporal [19].

Procedimiento experimental
Las ratas se dividieron en cuatro grupos de 10 animales en cada grupo (n = 10) de la siguiente manera:
Grupo I: ratas normales de control
Grupo II (grupo BLM): BLM indujo ratas con fibrosis pulmonar.
Grupo III (grupo de té verde): A las ratas se les administró una dosis oral diaria de GTE durante 14
días con la administración IP concomitante de BLM durante 10 días consecutivos.
Grupo IV (grupo AV): Las ratas recibieron dosis orales diarias de extracto de gel de hoja AV durante
14 días con la administración IP concomitante de BLM durante 10 días consecutivos.
Grupo V (té verde y grupo AV): A las ratas se les administró una dosis oral diaria de GTE y extracto
AV en gel de hoja durante 14 días con la administración IP concomitante de BLM durante 10 días
consecutivos
Después de 14 días de tratamiento, se sacrificaron las ratas en ayunas. Una pequeña porción de
pulmón se fijó en formalina al 10% para H&E y la tinción tricrómica de Masson [20] y la detección
inmunohistoquímica de caspasa-3 utilizando un sistema de complejo de avidina-biotina peroxidasa
estándar según el kit utilizado (Neomarkers) seguido de diaminobenzidina (DAB) Visualización [21].
Las secciones se contrastaron con hematoxilina [22].
Estudio morfométrico
El porcentaje de área media de la acumulación de fibras de colágeno y de la expresión de caspasa-3
se cuantificó en 10 imágenes para cada grupo utilizando el programa Image-Pro Plus versión 6.0
(Media Cybernetics Inc., Bethesda, Maryland, EE. UU.). La acumulación de fibras de colágeno y la
expresión de caspasa-3 en el grupo III, IV y V en comparación con el grupo II (grupo afectado) usando
la prueba t, con P<0.05 como nivel de significación estadística. Los análisis estadísticos se llevaron a
cabo utilizando el software IBM SPSS Statistics para Windows, Versión 20 (IBM Corp., Armonk, NY,
EE. UU.)

Resultados
H&E
El grupo de control mostró una arquitectura histológica normal del pulmón con muchos alvéolos, saco
alveolar, conductos alveolares, bronquiolos, vasos sanguíneos (Figura 1A) y tabique interalveolar
delgado (Figura 1B). El grupo II (grupo BLM) mostró bronquiolos pulmonares, alvéolos con septos
interalveolares gruesos que invadían los alvéolos (alvéolos colapsados), infiltración celular, vasos
sanguíneos congestionados dilatados y glóbulos rojos extravasados (GRS) (Figura 1C). Las secciones
del grupo III (grupo de té verde) revelaron bronquiolos, alvéolos con septos interalveolares
aparentemente delgados, poca infiltración celular y eritrocitos extravasados (Figura 1D). En las
secciones del Grupo IV (grupo AV) se revelaron alvéolos con septos interalveolares aparentemente
más gruesos, más infiltración celular, vasos sanguíneos congestionados y glóbulos rojos extravasados
en comparación con el grupo de té verde (Figura 1E). En las secciones de la arquitectura pulmonar
del Grupo V (té verde y grupo AV), alveolos, septos interalveolares gruesos, infiltración celular y vasos
sanguíneos congestionados aparecieron cerca de los del grupo BLM (Figura 1F).
Tricrómico de Masson
El grupo de control mostró fibras de colágeno muy finas alrededor de los alvéolos o dentro de los
septos interalveolares (Figura 2A). El grupo BLM mostró una acumulación extensa de fibras de
colágeno alrededor de los alvéolos o dentro de los septos interalveolares (Figura 2B). El grupo de té
verde mostró una acumulación mínima de fibras de colágeno en los septos interalveolares (Figura 2C),
mientras que la acumulación de fibras de colágeno fue moderada en el grupo AV (Figura 2D) El grupo
V (té verde y grupo AV) mostró una acumulación marcada de fibras de colágeno alrededor de los
alvéolos o dentro de Septa interalveolar (figura 2E).
Estudio inmunohistoquímico
Tinción inmunohistoquímica positiva de caspasa-3 demostrada como tinción citoplásmica marrón
(índice para el grado de apoptosis nuclear). Se encontró tinción citoplásmica negativa de caspasa-3
en citoplasma de células bronquiales, septales alveolar e interalveolar ya lo largo del revestimiento
endotelial de vasos sanguíneos del grupo de control (Figura 3A). En el grupo BLM, la caspasa-3 se
expresó altamente (Figura 3B), en el grupo de té verde, se expresó levemente (Figura 3C) mientras
que la caspasa-3 fue moderada en el grupo AV (Figura 3D). El grupo V (té verde y grupo AV) mostró
una alta expresión de caspasa-3 en el citoplasma de las células alveolares (Figura 3E).
Resultados morfométricos
El área media% de la acumulación de fibras de colágeno y de la expresión de caspasa-3 para todos
los grupos se representó en las Tablas 1 y 2) y (Histogramas 1 y 2). Hubo una disminución significativa
(P≤0.05) en la acumulación de fibras de colágeno y en la expresión de caspasa-3 en el grupo III en
comparación con el grupo II (grupo BLM), mientras que esta disminución fue insignificante en el grupo
V. El grupo IV mostró una disminución insignificante (P≤0.05) en la acumulación de fibras de colágeno
en comparación con el grupo II, mientras que la disminución fue significativa en la expresión de
caspasa-3.
Discusión
La fibrosis pulmonar es una enfermedad pulmonar intersticial difusa crónica, progresiva y letal. Ha
resurgido como un foco de estudio científico, debido a su creciente incidencia [23] y hasta ahora no ha
habido una medicación efectiva para esta enfermedad progresiva [24]. El grupo de fibrosis pulmonar
inducida por BLM (grupo II) en el presente estudio mostró septos interalveolares gruesos que invadían
los alvéolos (alvéolos colapsados), infiltración celular, vasos sanguíneos congestionados dilatados con
glóbulos rojos extravasados, acumulación extensa de fibras de colágeno alrededor de los alvéolos o
dentro del septa interalveolar y Reacción de caspasa-3 altamente expresada. De acuerdo con estos
hallazgos, algunos investigadores informaron que en los modelos inducidos por BLM de fibrosis
pulmonar se observaron muchas células inflamatorias, incluidos neutrófilos y esinófilos, en los alvéolos
e intersticios, daño de las células alveolares, proliferación de fibroblastos y posterior deposición de
colágeno y obliteración del alveolar. espacio [25-27]. Otro investigador informó que la bleomicina
aumenta la apoptosis de las células epiteliales de los pulmones de una manera dependiente de las
especies reactivas de oxígeno (ROS) [28]. La fibrosis pulmonar inducida por BLM fue explicada por
algunos autores que informaron que el mecanismo quimioterapéutico de BLM es el resultado de la
quelación de los iones de hierro con oxígeno, lo que conduce a la producción de superóxido que separa
el ADN, y también a los radicales libres del hidróxido [29]. Es el aumento de la producción de ROS que
conduce a la toxicidad pulmonar de la bleomicina, y puede conducir eventualmente a la fibrosis
pulmonar. También investigaciones anteriores informaron que se ha demostrado que las especies
reactivas de oxígeno activan directamente el factor de crecimiento transformante-β (TGF-β) en el
pulmón. TGF-β promueve el desarrollo de la inflamación y aumenta la actividad en los sitios de
inflamación, e induce la proliferación de los fibroblastos, lo que lleva a fibrosis pulmonar grave [30,31].
El grupo de té verde (grupo III) en el presente estudio mostró septos interalveolares delgados, poca
infiltración celular y eritrocitos extravasados y una disminución significativa (P≤0.05) en la acumulación
de fibras de colágeno y en la expresión de caspasa-3 en comparación con el grupo BLM. De acuerdo
con estos hallazgos, estudios previos [18] la fibrosis parcheada; también la determinación cuantitativa
de hidroxiprolina confirmó la reducción de la deposición de colágeno [18]. Otros estudios informaron
que el GTE constituye una fuente importante de antioxidantes. Además de los polifenoles, el GTE
contiene antioxidantes adicionales, como los carotenoides, los tocoferoles (derivados de la vitamina
E) y la vitamina C. El té también contiene minerales que funcionan como cofactores en las enzimas
antioxidantes: zinc, selenio y manganeso. Los polifenoles tienen mecanismos adicionales en los que
reducen el nivel de oxidación además del papel directo como antioxidantes [32,33]. El efecto
antifibrótico del GTE explicado por algunos autores que informaron que podría ser a través de la
inhibición ejercida por el GTE en las gelatinasas involucradas en el daño a la matriz extracelular de
pulmón, las metaloproteinasas de la matriz [18] y otros han demostrado que el GTE inhibe la
transducción de señales del TGF. -β uniéndose al receptor del factor de crecimiento transformante II
(TGFR) y atenúa la expresión de la actina del músculo liso α (α-SMA) en las células MRC-5
(fibroblastos de pulmón humano), que es una línea celular de miofibroblastos, cuando se estimula por
TGF-β. Los miofibroblastos juegan un papel crucial en la patogénesis de la fibrosis tisular [34].
Algunos científicos informaron que la actividad del peróxido de glutatión, las enzimas superóxido
dismutasa y un antioxidante fenólico estaban presentes en el gel de Aloe vera, que puede ser
responsable de sus efectos antioxidantes [35,36]. A pesar de esto, el grupo AV (grupo IV) en el
presente estudio mostró alvéolos con septos interalveolares aparentemente gruesos, infiltración
celular, vasos sanguíneos congestionados y eritrocitos extravasados y una disminución insignificante
(P≤0.05) en la acumulación de fibras de colágeno, mientras que la disminución fue significativa en la
expresión de caspasa-3 en comparación con el grupo BLM. Estos resultados pueden ser explicados
por investigadores previos que informaron que el polipéptido de alto peso molecular que forma parte
del gel AV como glucomanano, un polisacárido rico en manosa y giberelina, una hormona del
crecimiento, interactúa con el receptor del factor de crecimiento en el fibroblasto, estimulando así
actividad y proliferación, que a su vez aumenta la síntesis de colágeno después de la aplicación tópica
y oral [35,37,38]. Algunos investigadores informaron que la administración de múltiples antioxidantes
podría ser un modo más efectivo utilizado en el tratamiento de enfermedades pulmonares obstructivas
[39] y otros afirmaron que el par de hierbas que consiste en dos hierbas individuales presenta una
eficacia farmacológica significativamente mejor que las hierbas individuales debido a las interacciones
sinérgicas entre los componentes de las hierbas contribuyen en gran medida a mejorar su eficacia
terapéutica [40]. Al contrario de esto, el grupo V (té verde y grupo AV) del presente estudio reveló
gruesos interalvéolos, alvéolos colapsados, infiltración celular, vasos sanguíneos congestionados
dilatados con glóbulos rojos extravasados y una disminución insignificante (P≤0.05) en la acumulación
de fibras de colágeno y en Expresión de caspasa-3 en comparación con el grupo BLM. Estos
resultados pueden explicarse por investigaciones anteriores que demostraron que no había una
capacidad antioxidante sinérgica cuando los compuestos de flavonoides se utilizaron en combinación
y la combinación de dos antioxidantes fuertes no necesariamente engendra una mayor eficacia, incluso
puede producir una interacción antagónica. En contraste, cuando se combinó un antioxidante más
débil con uno más fuerte, el primero puede regenerar el último, mejorando así la capacidad general de
extinción de radicales libres de la combinación [41].
Conclusión
El té verde y el aloe vera alivian parcialmente la fibrosis pulmonar inducida por la bleomicina en ratas.
Respaldar los beneficios potenciales del uso de aloe vera y té verde como posibles agentes
terapéuticos novedosos en la dieta.