Mariam
Mariam
Mariam
EUROPA
PROYECTO DE INVESTIGACIN
EFECTOS FOTOQUMICOS DE LA PLANTA
KALANCHOE EN EL TRATAMIENTO DE
PACIENTES CON CNCER
Marzo 2017
DEDICATORIA
Dedico esta investigacin, con mucho aprecio a los seres queridos que componen mi
familia : mi hermana Juana y mis hijos Victor y Maribel, por el constante apoyo , y la
paciencia que han generado en m para seguir avanzando en este camino de la Naturopata
y Medicina Alternativa, ya que son ellos mi verdadero motor a seguir . En mencin
especial a mi esposo Cres, pues fue tolerante frente a este nuevo rumbo, adems l fue el
que ms me apoyo y brind nimos para investigar sobre las patologas de las
enfermedades y sus tratamientos,y as, de esta manera, poder brindar ayuda prxima y
luz de esperanza mediante la naturopata a las personas de mi alrededor quienes la
necesitan.
AGRADECIMENTO
Agradezco a Dios, mis profesores Lic.Oscar Chvez, Dr. Santos Sotelo y la Lic. Nancy
Quispitpac por motivarme en el conocimiento acadmico, y finalmente, a la persona
quien puso en mis manos un ejemplar de la especie Kalanchoe diagremontiana, Elenita,
quien despert mi inters en averiguar sobre esta planta.
I. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
Dulce Esther Lpez Daz, 2011 en su tesis ANALISIS DEL RNm DEL GEN
QUE CODIFICA PARA LA ENZIMA ESCUALENO SINTASA (sqs) EN
CULTIVO DE CELULAS DE Kalanchoe daigremontiana, para obtener el
grado de Maestra en Ciencias en Desarrollo de Productos Biticos en el
INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL, Mxico.
OBJETIVO. El objetivo del presente estudio fue analizar la expresin del gen
que codifica para la enzima ESCUALENO SINTASA (sqs) [ porque esta enzima
desempea un papel muy importante en la biosntesis y acumulacin de
bufadienlidos; stos presentan actividad citotxica contra diferentes lneas
celulasres cancergenas] as como detectar la presencia de bufadienlidos en
clulas diferenciadas cultivadas in vitro de Kalanchoe daigremontiana.
METODOLOGIA. Se estableci un cultivo de clulas in vitro de esta planta
utilizando explantes creciendo en un medio Murashige y Skoog (MS)
adicionado con una mezcla de dos fotoreguladores bencilaminopurina (BA1
mg/L) Y CIDO 2,4- DICLOROFENOXIACTICO (2,4 D 0,5 mg/L). El
tiempo de duplicacin y la velocidad relativa molecular se realiz con un
anlisis tipo Northern blot. El RNAm se extrajo y cuantific de raz, hoja y callo
de k. diagremontiana. E l plasmidio que contiene el gen de la SQS se btuvo
mediante u protocolo de maxi-preparacin y se purific con el GeneClean II kit
BIO 101. La sonda heterloga fue marcada no radioactivamente , posteriormente
se realiz la hibridadin y se detect a travs de una reaccin colorimtrica
utilizando el Kit Biotin DeeaLabel DNA Labeling. La obtencin de un
precipitado azul fue caracterstico de la presencia de RNAm. Por ltimo los
bufadionlidos se extrajeron con disolventes de diferente polaridad y se
identificaron mediante cromatografa de capa fina y tricloruro de antimonio
como un revelador especfico.
RESULTADOS. Se obtuvieron callos de color verde-claro en el dcimo da del
cultivo. La cintica mostr que el crecimiento de callo present un tiempo de
duplicacin de 5,35 das y la velocidad de crecimiento relativo de 0,87 d
tambin cuatro etapas de desarrollo de callo se observaron: adaptacin, el
crecimiento exponencial, estacionaria y muerte. Apartir de estos datos, cuatro
das de crecimiento fueron seleccionados con el objeto de detectar la presencia
de bufadienlidos , as como l expresin del gen (sqs) que codifica para las
enzima SQS. En cuanto a la deteccin de bufadienlidos usando la
cromatografa de capa fra, estos fueron encontrados en las cuatro etapas del
crecimiento de callos de k. daigremontiana. Los resultados mostraron que la
etapa ms notable fue la fase estacionaria seguido de la fase muerte. Durante las
etapas de adaptacin y crecimiento se mostraron los precursores y
bufadienlidos. Por otro lado la expresin del gen sqs se encontr en todas las
etapas. El RNAm del gen sqs fue claramente perceptible tanto en la fase
estacionaria como la de muerte, mientras que en la etapa de crecimiento se
encontr en niveles bajos; en la etapa de adapacin, la expresin del gen no se
detect. Se considera que stos resultados originaoles relacionados con el
anlisis de la expresin del gn sqs y la deteccin de bufadienlidos en cultivos
in vitro de cllas no diferenciadas de esta planta. Finalmente las evidencias
expderimentales sugieren que la expresin del gen sqs esta estrechamente
relacionada con la biosntesis de bufadienlidos.
2.2.2. Especies
Hay que remarcar que los nombres populares a veces se aplican a una o
ms especies y que varan segn los pases.
2.2.3. Caractersticas Qumicas
El extracto de kalanchoe contiene tanto enzimas como vitaminas
importantes para el metabolismo en el ser humano, estas son.
Vitamina A (Caroteno y Betacaroteno), Vitaminas B1,B2, B6, B12,
C Y E. Las enzimas contenidas en el extracto de kalanchoe
intervienen de gran manera en la regulacin y mejoramiento de la
digestin as como de los procesos biolgicos y fisiolgicos del
organismo, entre ellas la lipasa, catalasa, calulasa y proteolitiasa
JARAMILLO, 2007)
IV. METODOLOGIA