Informe 10 - Lab Bioqui

UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA LA MOLINA MESA
FACULTAD DE CIENCIAS
N° 4
DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE QUÍMICA
LABORATORIO DE BIOQUÍMICA
PRÁCTICA N° 10
PROPIEDADES CATALÍTICAS DE LA
CATALASA
Integrantes:
 Blaz Villafuerte, Fiorella Romina 20141013

 Fuentes Guevara, Dennisse Yeriot 20161438
 Mendizábal Huaman, Camila 20161448
 Morales Robladillo, Sammy Anthony 20161449
Grupo: Lunes 2:00 – 4:00 PM (F*)
Fecha de la práctica: 13/11/17
Fecha de entrega del informe: 20/11/17
2017-I
I. INTRODUCCIÓN
Existen organelos llamados peroxisomas parecidos a los lisosomas en estructura, pero de menor
tamaño, estas abundan en las células hepáticas y contienen diversas enzimas relacionadas con el
metabolismo del peróxido de hidrógeno, sustancia tóxica para el organismo.
Los peroxisomas son organoides presentes en todos los tipos celulares, de forma ovoide y limitados
por solo una membrana. Estos contienen enzimas oxidativas, y se les dio ese nombre porque
intervienen en la formación y descomposición de Peróxido de hidrógeno (H 2O2). Entre las más
comunes se encuentran la catalasa, la D-aminoácido oxidasa y la urato oxidasa (Eduardo De
Robertis, 1997).
La oxidación de sustratos en los peroxisomas tiene como consecuencia la producción de H 2O2, una
molécula sumamente tóxica para la célula y es neutralizada por la catalasa (se activa en presencia de
luz), mediante la reacción:
2H2O2 2H2O + O2
Esta reacción se lleva a cabo en dos pasos:
1. Catalasa FeOH + HOOH Catalasa FeOOH + H2O
2. Catalasa FeOH + HOOH Catalasa FeOH + H2O + H2O + O2
Su poder catalítico es extraordinario, una catalasa, que contiene Hierro, obtenida de hígado de res,
logra el desdoblamiento de unos millones de moléculas de peróxido de hidrógeno (H2O2) por
minuto a 0°C (Aliaga et al., 2017).
II. RESULTADOS
Cuadro N°1: Volumen de agua desplazado por la descomposición del H2O2
CON CATALIZADOR CON CATALIZADOR

SIN CATALIZADOR
INORGÁNICO (FeSO4) ORGÁNICO (Catalasa)
Volumen
0.1 0.4 37.9
desplazado (ml)
(Fuente: Manual de Prácticas de Bioquímica)
Cuadro N°2: Moles de oxígeno desprendidos por la descomposición del H2O2
P .V =R .T .n
Presión atmosférica (La Molina): 744 mmHg
P.V
n= Temperatura: 26°C = 299 K
R.T
744 mmHg x 10−4 L
SIN CATALIZADOR n= 3.99 x 10-6 moles
62.4 L. mmHg/ K .mol x 299 K
CON CATALIZADOR 744 mmHg x 4 x 10−4 L
n= 1.60 x 10-5 moles
INORGÁNICO (FeSO4) 62.4 L. mmHg/ K .mol x 299 K
CON CATALIZADOR 744 mmHg x 0.0379 L
n= 1.51 x 10-3 moles
ORGÁNICO (Catalasa) 62.4 L. mmHg/ K .mol x 299 K
(Fuente: Elaboración propia)
Cuadro N°3: Actividad catalítica de los catalizadores
CATALIZADOR 1.60 x 10−5 x 106 μmol

INORGÁNICO (FeSO4)
= 16 μmol/min 2.67 x 10−7 Katal
1 min
CATALIZADOR 1.51 x 10−3 x 106 μmol
ORGÁNICO (Catalasa)
= 1510 μmol/min 2.52 x 10−5 Katal
1 min
Cuadro N°4: Eficiencia de la actividad catalítica de la Catalasa
µmol (Sol )/min(Catalasa)

µmol( Sol)/min( FeSO 4 )
Eficiencia = 94.38
1510 µmol( Sol)/min(Catalasa)
16 µmol ( Sol)/min(FeSO 4 )
III. DISCUSIONES
DESCOMPOSICIÓN DE H₂O₂ SIN CATALIZADOR
Según Trabal (2009), el peróxido de hidrógeno puro a cualquier concentración en ausencia de

catalizadores que lo contaminen y en contenedores muy limpios de materiales no catalíticos, es una
sustancia muy estable.
En este caso nuestra muestra de 10 volúmenes de peróxido de hidrógeno, en ausencia de

catalizadores, emitió 0.1 ml de O₂, equivalentes a 3.99 x 10-6 moles de oxígeno en un minuto. Esto
se debe a que numerosas sustancias actúan como catalizadores de su descomposición (metales de
transición, álcalis, y óxidos metálicos). La luz del día también favorece la descomposición del
peróxido de hidrógeno, por lo que debe conservarse en envases opacos (Vivo, 2003). Al entrar en
contacto con la luz en el matraz la solución empezó a descomponerse, pero esta fue aun así una
reacción muy lenta, ya que como se dijo, el compuesto es estable, dando en experimentos anteriores
de Trabal hasta un porcentaje de descomposición no superior a 0,001 % por hora.
DESCOMPOSICIÓN DEL H₂O₂ EN PRESENCIA DE UN CATALIZADOR

INORGÁNICO (Sulfato Ferroso)
El sulfato ferroso actúa como catalizador por su alta capacidad de Oxidarse en contacto con el
peróxido de hidrógeno que resulta ser un potente oxidante, pasando el hierro de Fe +2 a Fe+3
obteniéndose una solución de color rojizo. De esta manera ocurre una reacción similar con el
Sulfato de cobre que también se oxida de la misma manera en contacto con el peróxido de
hidrogeno (Fieser, 2004). Estos iones metálicos teniendo la capacidad de oxidarse aceleran el
proceso de descomposición, formándose una mayor cantidad de oxigeno liberado, en esta caso 0.3
ml de O₂ mas que sin un catalizador. Siendo un proceso Redox y de descomposición a la vez.
DESCOMPOSICIÓN DEL H₂O₂ EN PRESENCIA DE UN CATALIZADOR

ORGÁNICO (Catalasa)
El metabolismo celular de los tejidos animales y vegetales genera peróxido de hidrógeno (H 2O2),
molécula que resulta tóxica para la célula. Muchos organismos son capaces de destruir el H 2O2
mediante la acción de enzimas antes de que pueda realizar mucho daño. El H 2O2 se convierte en
oxígeno y agua, y aunque esta reacción ocurre espontáneamente, las enzimas incrementan la
velocidad de reacción de forma considerable. Se conoce que al menos dos enzimas diferentes
catalizan esta reacción: a) catalasa, que se encuentra en animales y protistas; b) peroxidasa, que se
encuentra en las plantas (Vernier).
La catalasa es una cromoproteína porfirínica cuya masa molecular es de 225.000 kDa, contiene
cuatro grupos hemo por molécula y su contenido de hierro es 0.9%. Esta proteína presenta actividad
enzimática de tipo oxido-reductasa sobre el peróxido de hidrógeno (H 2O2) el cual constituye el
sustrato para esta enzima y lo descompone en oxígeno y dos moléculas de agua (Facultad de
Ciencias Veterinarias). Su nombre sistemático de acuerdo a la Unión Internacional de Bioquímica
es H2O2 oxidorreductasa y cataliza la siguiente reacción:
En los mamíferos esta enzima se encuentra en todo tipo de células, siendo su actividad mayor en el
hígado, riñón y eritrocitos. Un mol de catalasa puede descomponer 5.000.000 moléculas de H 2O2
por minuto a 37°C, esto se conoce como número de recambio y representa uno de los más altos de
toda la enzimología (Facultad de Ciencias Veterinarias).
IV. CONCLUSIONES
 La actividad catalítica de la catalasa hallada experimentalmente es 2.52x10-5 Katal, mientras

que la actividad del sulfato ferroso es 2.67x10-7 Katal.
 Para este tipo de reacción, el catalizador orgánico es más eficaz que el catalizador inorgánico.
V. REFERENCIA BIBLIOGRÁFICA
 Aliaga, P.; Jorge, P.; Kitazono, A.; Nieto, C. & Ríos, E. (2017). Manual de Prácticas de
Bioquímica. Universidad Nacional Agraria La Molina: Departamento Académico de Química.
 Arias, E.B. (2013). Compendio de Enzimología. España: Ediciones Universidad de Salamanca.
 Bruce Alberts, D.B. (2006). Introducción a la biología celular. Buenos Aires: Médica
panamericana.
 David Randall, W.B. (2002). Fisiología animal. Mecanismos y adaptaciones. Aravaca, Madrid:
Mc Graw Hill Interamericana de España.
 Eduardo De Robertis, J.H. (1997). BIOLOGÍA CELULAR Y MOLECULAR de De Robertis.
Buenos Aires: El Ateneo.
 Facultad de Ciencias Veterinarias. Prácticas de Bioquímica. Actividad Enzimática de la
Catalasa Sanguínea. Universidad de Zulia, Venezuela. Recuperado de:
http://www.fcv.luz.edu.ve/images/stories/catedras/bioquimica/03_actividad_enzimatica_de_la_
catalasa_sanguinea.pdf
 Fieser, L.F. (2004). Experimentos de Química Orgánica. Recuperado de:
https://books.google.com.pe/books?id=-
BIGcAaYJCwC&printsec=frontcover&hl=es#v=onepage&q&f=false
 Trabal, E. (2009). Estabilidad y descomposición de las disoluciones de peróxido de hidrógeno.
Cursillos y conferencias Forest. S. A. Recuperado en:
https://upcommons.upc.edu/bitstream/handle/2099/6041/Article03.pdf
 Vernier Software & Technology. Ciencias con lo mejor de Vernier. Actividad enzimática:
Acción de la catalasa. Oregon, USA. Recuperado de:
http://www2.vernier.com/sample_labs/CMV-03-enigma.pdf
 Vivo, P. (2003). Peróxido de Hidrogeno. Archivo Selección. Quark Revista ISSN. Recuperado
de: http://www.pvivov.net/eso/experiencias/pdf/peroxidohidrogeno_01.pdf
PROBLEMAS ENCARGADOS
1. ¿Cuál de las tres reacciones es más efectivo y por qué?
La reacción más efectiva fue la tercera en la que se utilizó un catalizador para degradar el
peróxido de hidrógeno. Este catalizador es una enzima llamada catalasa. Toda enzima tiene un
poder catalítico enorme, tanto por la notable capacidad de aumentar la velocidad de una
reacción específica como por la increíble habilidad para escoger entre sustratos alternativos.
Las enzimas son catalizadores biológicos es decir, aceleran las reacciones químicas sin
modificarse, porque puede ser utilizado una y otra vez. Estas disminuyen la energía de
activación de una reacción.
Figura 1: Energía de activación (Bruce Alberts, 2006).

2. Exprese los resultados obtenidos con sangre en términos de unidades de catalasa.
(1.464 x 10-3) x10-6 = 1.464 x 103 μmoles
3. ¿Sería importante el uso de algún buffer adicional en esta práctica?

Las propiedades de las enzimas derivan del hecho de ser proteínas de actuar como
catalizadores. Como proteínas, poseen una conformación natural más estable que las demás
conformaciones posibles. Así, cambios en la conformación suelen ir asociados en cambios en la
actividad catalítica. Los factores que influyen de manera más directa sobre la actividad de una
enzima. La actividad enzimática de la catalasa se ve afectada por el cambio de pH en la
sustancia. Sabemos que los buffer ayudan a mantener constante el pH, entonces en esta práctica
no sería necesaria adicionar un buffer; ya que no se ha agregado ningún ácido o base a la
reacción, para que cambiara el pH.
4. ¿Por qué o con qué objetivo mediría la actividad enzimática de catalasa?

Por ejemplo en el tercer experimento se usó sangre, en este fluido tenemos a los glóbulos rojos,
en estas células se encuentran las catalasas. La actividad enzimática nos ayuda a conocer que
tanta rápida ha sido la reacción con un catalizador biológico. La catalasa en la sangre sirve
también como enzima protectora contra determinados microrganismos patógenos (David
Randall, 2002). Este caso la actividad enzimática de la catalasa se estudiaría con el objetivo de
conocer la eficiencia de esta en enzima para proteger contra patógenos en la sangre.
5. ¿Qué unidades de expresión de actividad enzimática conoce?

Una unidad de actividad enzimática (símbolo U) se define como la actividad catalítica
responsable de la transformación de un µmol de sustrato por minuto en condiciones óptimas de
la enzima. Se utiliza también en combinación con otras unidades (U/mg de proteína o U/mL)
para señalar, respectivamente, la actividad enzimática específica o la concentración de actividad
enzimática.
60x106 U equivalen a un katal, la unidad del Sistema Internacional de Unidades para actividad
catalítica.
6. ¿Cuál es la clasificación de la catalasa y de la peroxidasa?

Según la Comisión de Enzimas (E.C) de la Unión Internacional de Bioquímica, se reconoce seis
grupos principales de enzimas:
1. Oxidorreductasas
2. Transferasas
3. Hidrolasas
4. Liasas
5. Isomerasas
6. Ligasas
En la clase oxidorreductasa tenemos 5 subclases: deshidrogenasas, oxidasas, dioxigenasas,
monooxigenasas, peroxidasas.
Los peroxisomas son esenciales en el metabolismo lipídico, en especial en el acortamiento de
los ácidos grasos de cadena muy larga, para su completa oxidación en las mitocondrias, y en la
oxidación de la cadena lateral del colesterol, necesaria para la síntesis de ácidos biliares;
también interviene en la síntesis de ésteres lipídicos del glicerol (fosfolípidos y triglicéridos) e
isoprenoides; también contienen enzimas que oxidan aminoácidos, ácido úrico y otros sustratos
utilizando oxígeno molecular con formación de agua oxigenada, por esa reacción molecular
tomó el nombre de peroxisoma.
RH2 + O2 → R + H2O2
El agua oxigenada es un producto tóxico, que se degrada rápidamente dentro del propio
peroxisoma por la enzima oxidativa catalasa en agua y oxígeno usando como intermediarios de
ciertas sustancias orgánicas (en la ecuación la variable R') lo cual ayuda al buen funcionamiento
de la célula.
H2O2 + R'H2 → R' + 2H2O
La catalasa es también capaz de utilizar el peróxido de hidrógeno para reacciones de oxidación,
como por ejemplo, la oxidación de sustancias tóxicas como los fenoles, etanol, formaldehído,
entre otros, las cuales son posteriormente eliminadas. Tal es el mecanismo de detoxificación
realizada por el hígado y los riñones, por ejemplo. En las plantas son el asiento de una serie de
reacciones conocidas como fotorrespiración (Arias, 2013).

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 Blaz Villafuerte, Fiorella Romina 20141013

 Mendizábal Huaman, Camila 20161448

 Morales Robladillo, Sammy Anthony 20161449

Grupo: Lunes 2:00 – 4:00 PM (F*)

Fecha de la práctica: 13/11/17

Fecha de entrega del informe: 20/11/17

Esta reacción se lleva a cabo en dos pasos:

1. Catalasa FeOH + HOOH Catalasa FeOOH + H2O

2. Catalasa FeOH + HOOH Catalasa FeOH + H2O + H2O + O2

CON CATALIZADOR CON CATALIZADOR

Cuadro N°2: Moles de oxígeno desprendidos por la descomposición del H2O2

Cuadro N°3: Actividad catalítica de los catalizadores

CATALIZADOR 1.60 x 10−5 x 106 μmol

Cuadro N°4: Eficiencia de la actividad catalítica de la Catalasa

µmol (Sol )/min(Catalasa)

Según Trabal (2009), el peróxido de hidrógeno puro a cualquier concentración en ausencia de

En este caso nuestra muestra de 10 volúmenes de peróxido de hidrógeno, en ausencia de

DESCOMPOSICIÓN DEL H₂O₂ EN PRESENCIA DE UN CATALIZADOR

DESCOMPOSICIÓN DEL H₂O₂ EN PRESENCIA DE UN CATALIZADOR

 La actividad catalítica de la catalasa hallada experimentalmente es 2.52x10-5 Katal, mientras

Figura 1: Energía de activación (Bruce Alberts, 2006).

3. ¿Sería importante el uso de algún buffer adicional en esta práctica?

4. ¿Por qué o con qué objetivo mediría la actividad enzimática de catalasa?

5. ¿Qué unidades de expresión de actividad enzimática conoce?

6. ¿Cuál es la clasificación de la catalasa y de la peroxidasa?

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