Actividad 02, Sesión Práctica 02

1.
MÉTODO DE HOMOGENEIZACIÓN
La homogeneización de la leche se logra mezclando cantidades masivas de leche cosechada

para crear una constante, entonces forzar la leche a alta presión a través de pequeños
agujeros. Sin embargo, utiliza otro método de homogeneización extrusoras de, Trituradoras
de martillo, o molinos coloidales Para molino (molido) sólidos.
 Homogeneizador de esferas.
 Homogenizador rotor/stator.
 Homogeneizador de embudo y tubo.
 Blenders (licuado).
Homogeneización de factores. La responsabilidad de asignar factores de calificación para las

diferentes variables que se consideran explicativas del valor del activo recae en la
apreciación del valuador, en su experiencia, conocimiento y creencia.
Factores mediante pendientes. La utilización de la pendiente de cada recta que representa

la relación entre una variable explicativa del activo a evaluar con la variable dependiente.
2. MÉTODO DE FRACCIONAMIENTO SUBCELULAR Y OBTENCIÓN DE ORGANELOS
La separación de los compartimentos celulares entre sí es un paso importante para estudiar

una estructura intracelular específica u orgánulo o proteína, o para evaluar posibles
asociaciones entre estas estructuras macromoleculares. Las variaciones en las condiciones
de los protocolos disponibles dependen del orgánulo, el tipo de tejido o célula y el equipo
utilizado.
Al final, la pureza y el rendimiento del fraccionamiento deben evaluarse mediante la

detección de marcadores distintos en cada fracción recolectada durante todo el
procedimiento.
El proceso de fraccionamiento consta principalmente de las siguientes etapas:

HOMOGENIZACIÓN. Se trata de romper las células con la ayuda de un émbolo rotatorio que
se ajusta perfectamente a las gruesas paredes de un tubo de cristal especial, el
homogenizador.
o Homogenizador de Esferas
o Homogenizador de émbolo y tubo
o Blenders (Licuadora)
o Homogenizador Rotor/Stator
SHOCK OSMÓTICO. Las células se hacen estallar al someterlas a un medio hipotónico, lo

cual hace que la membrana no resista la presión osmótica.
MORTERO Y MANO. Es un método convencional de rompimiento por fricción.
SONICACIÓN. Consiste en la aplicación de ultrasonidos a una suspensión celular. La intensa

agitación producida destruye las membranas celulares.
o Ultrasonicación.
COMPRESIÓN - DESCOMPRESIÓN
o Picador / prensa de sólidos

o Compresión / Expansión
CONGELAMIENTO - DESCONGELAMIENTO. Requiere de períodos prolongados de tiempo

(hasta 36 horas) para el congelamiento y descongelamiento.
Obtención de organelos
La separación puede ser llevada a cabo empleando la centrifugación. Manejando las

variables fuerza centrífuga y tiempo podemos separar primero los organelos de mayor
tamaño como el núcleo. En centrifugaciones sucesivas de mayor fuerza gravitacional y
mayor tiempo obtendremos las diferentes fracciones de nuestro interés. La etapa final es la
obtención del citosol que es un líquido complejo el cual contiene los elementos del
citoesqueleto y entre el 25 - 50% de las enzimas celulares.
De acuerdo a la ley de Stokes, también podemos separar las organelas de acuerdo a sus
densidades relativas con respecto a un gradiente de densidades.
3. MÉTODOS PARA LA EXTRACCIÓN DE BIOMOLÉCULAS EN SANGRE Y TEJIDO

HEPÁTICO.
Los principales métodos empleados para la determinación de proteínas totales son los
siguientes:
o Método del Biuret

o Método de Lowry
o Extracción de proteínas por ultrasonidos
o Electroforesis de proteínas en suero
oMétodos físicos :
 Mecánicos: Homogeneización con tubo y pistón con abrasivos,
homogeneización a alta presión o extrusión por presión
 No mecánicos: choque osmótico, ciclos de congelación –
descongelación, sonicación
o Métodos químicos: tratamiento con álcali, solventes orgánicos, detergentes,
sustancias caotropicas.
o Métodos biológicos: enzimático: lisosomas (bacterias gram positivas)
glucanasas, quintanas (levaduras y mohos)
4. SOLUCIONES EMPLEADOS EN LOS PROCESOS DE HOMOGENEIZACIÓN Y
PERFUNCIÓN DE ÓRGANOS.
Homogenización: Aislamiento de proteínas, ácidos nucleicos y partículas subcelulares. Con

esta técnica se consigue, por ejemplo, separar todos los tipos celulares sanguíneos, purificar,
separar las células viables y no viables de tejidos desagregado y muestras con células en
suspensión.
Esto es utilizado para la purificación biológica de materiales como proteínas, ácidos

nucleicos, organelos y tipos de célula.
5. EL PROCEDIMIENTO DE CENTRIFUGACIÓN DIFERENCIAL PARA OBTENER

RIBOSOMAS, MITOCONDRIAS, RETÍCULO ENDOPLASMÁTICO Y CITOSOL.
6. CUÁLES SON LAS TINCIONES UTILIZADAS PARA IDENTIFICAR ORGANELOS
CELULARES Y COMO VISUALIZAMOS ESTOS ORGANELOS.
Tinción Tipo Características Uso

Hematoxilina Básica / Tiñe núcleos, ácidos nucleicos y Tinción histológica
Acidofílica estructuras basofílicas general
(mitocondrias y ribosomas) en
azul.
Eosina Ácida / Tiñe proteínas y estructuras con Tinción histológica
Basofílica afinidad por los ácidos en general
diferentes tonos de rojo
Tinción Bicomponente Los núcleos aparecen en azul Tinción histológica
hematoxilina- Anfifílica (hematoxilina). general
eosina
Los ácidos nucleicos asociados a
proteína (ej. ribosomas) en
violeta
Tinción Similar a la tinción H&E con Tinción histológica
hemalumbre- colores más marcados y general
eosina definidos
Tinción Tipo Características
Tinción HOPS Policromática Los núcleos aparecen en azul (hematoxilina).
Tinción de Permite ver la cromatina con mucha claridad.

Papanicolau
Los núcleos aparecen de color entre azul y negro.
Tinción con azul Supravital Tiñe de azul oscuro restos de ácidos nucleicos, y
de metileno los proteoglicanos ácidos en varios tonos de
metacromática violeta.
Tinción Tricrómica Los núcleos aparecen en marrón o negro.
tricrómica de
Masson
Tinción de Van Los núcleos celulares aparecen en colores de
Gieson marrón a negro.
Tinción de Movat Negro = núcleos, fibras elásticas
Tinción argéntica En función del fijado, tiñe proteínas y ácidos
nucleicos en tonos de negro y marrón.

Actividad 02, Sesión Práctica 02

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

Actividad 02, Sesión Práctica 02

Cargado por

Información del documento

Título original

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

Actividad 02, Sesión Práctica 02

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

1.

La homogeneización de la leche se logra mezclando cantidades masivas de leche cosechada

Homogeneización de factores. La responsabilidad de asignar factores de calificación para las

Factores mediante pendientes. La utilización de la pendiente de cada recta que representa

2. MÉTODO DE FRACCIONAMIENTO SUBCELULAR Y OBTENCIÓN DE ORGANELOS

La separación de los compartimentos celulares entre sí es un paso importante para estudiar

Al final, la pureza y el rendimiento del fraccionamiento deben evaluarse mediante la

El proceso de fraccionamiento consta principalmente de las siguientes etapas:

SHOCK OSMÓTICO. Las células se hacen estallar al someterlas a un medio hipotónico, lo

MORTERO Y MANO. Es un método convencional de rompimiento por fricción.

SONICACIÓN. Consiste en la aplicación de ultrasonidos a una suspensión celular. La intensa

o Picador / prensa de sólidos

CONGELAMIENTO - DESCONGELAMIENTO. Requiere de períodos prolongados de tiempo

La separación puede ser llevada a cabo empleando la centrifugación. Manejando las

3. MÉTODOS PARA LA EXTRACCIÓN DE BIOMOLÉCULAS EN SANGRE Y TEJIDO

o Método del Biuret

Homogenización: Aislamiento de proteínas, ácidos nucleicos y partículas subcelulares. Con

Esto es utilizado para la purificación biológica de materiales como proteínas, ácidos

5. EL PROCEDIMIENTO DE CENTRIFUGACIÓN DIFERENCIAL PARA OBTENER

Tinción Tipo Características Uso

Tinción HOPS Policromática Los núcleos aparecen en azul (hematoxilina).

Tinción de Permite ver la cromatina con mucha claridad.

También podría gustarte