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    ​Trabajos Prácticos de Química Industrial II.

    ​ rofesor: Sosa María José.


    P
    Informe de laboratorio N°3

    Caracterización de algunos tipos celulares y


    microscopio.

    Comisión N°4: Conejero Rayen, Garrido Candela, Muller


    Maximiliano, Poblete Caterina, Poblete Florencia,
    Troncoso Alma.

    Marco Teórico.

    Observación Microscópica​.
    Para observar una muestra al microscopio óptico podemos recurrirá a:

    ♦Preparación del extendido: el primer paso lo constituye la preparación


    del extendido. Se recoge por medio de un ansa de platino la muestra y
    se realiza el frotis, que consiste en extender sobre una parte de un
    portaobjeto de vidrio, limpio, otro portaobjeto hasta formar una película.
    Para obtener mejor resultado la película debe ser homogénea. La
    preparación puede ser:
    •Preparación húmeda: Se realiza colocando una gota de la suspensión
    de microorganismos entre un porta y un cubreobjetos. Se observa
    directamente.
    •Preparación fijada: Se coloca una suspensión homogénea de
    microorganismos en una gota de agua sobre el portaobjetos y se fija
    (mediante calor o agentes químicos). La fijación tiene por objeto
    mantener la estructura en el estado más parecido al que poseía vivo.
    Tinciones.
    ♦Coloración o tinción: la observación directa de la muestra podrías
    desilusionar a cualquiera ya que las células son prácticamente
    incoloras. Son técnicas que permiten observar microorganismos en
    función de la capacidad de los mismos para retener o no determinadas
    sustancias colorantes, lo que depende de la carga de la célula y del
    colorante.

    •​Azul de metileno (Tinción positiva)​: Permite teñir el interior celular. Tiñe


    microorganismos procarióticos (vivos o muertos). Los eucarióticos sólo
    se tiñen si están muertos. Algunas estructuras, como los corpúsculos
    metacromáticos, se tiñen más intensamente con este colorante que el
    resto de la célula.
    •Nigrosina (Tinción negativa): Se trata de un colorante aniónico, que no
    penetra en el interior celular. Proporciona una visión de la forma y el
    tamaño celulares al observarse los microorganismos brillantes sobre un
    fondo oscuro.
    •Tinción de Gram. La más utilizada es la Tinción de Gram que divide a
    los microorganismos en Gram+ y Gram-. El colorante utilizado es el
    cristal violeta que se deja actuar sobre la muestra durante tres minutos y
    se añade el mordiente (Lugol) durante un minuto aproximadamente,
    éste facilita la unión del colorante primario con las células. A
    continuación la preparación es sometida a un lavado con alcohol: las
    Gram + resisten y las Gram - no, que pierden el colorante. Se añade un
    segundo colorante (fuxina o safrina), en consecuencia unas células
    aparecerán teñidas con el primer colorante y otras con el segundo. Así
    dependiendo del comportamiento ante la tinción de Gram las bacterias
    se separan en Gram + (color púrpura – azul) y Gram - (color rojo). El
    fundamento radica en la diferente estructura de la pared celular de
    ambos grupos: las bacterias Gram+ tienen una gruesa capa de
    peptidoglicano en su pared, mientras que las bacterias Gram- tienen
    una capa de peptidoglicano más fina y una capa lipopolisacarídica
    externa. Tras la tinción con el primer colorante (Cristal violeta) se
    efectúa un lavado con etanol que arrastrará al colorante sólo en las
    Gram (-), mientras que en las Gram (+) el colorante queda retenido y las
    células permanecerán azules o violeta. Las células Gram (-) se teñirán
    después con un colorante de contraste (safranina) para que puedan
    observarse.

    Muestras.
    Yogur: Las bacterias son seres vivos unicelulares procarióticos de vida
    autótrofa o heterótrofa. El yogur es un producto lácteo producido por la
    fermentación natural de la leche hervida, entera o desnatada. A escala
    industrial se realiza la fermentación añadiendo a la leche asociación de
    dos cepas bacterianas que degradan la lactosa y la transforman en
    ácido láctico: el Streptococcus termophilus, poco productor de ácido,
    pero muy aromático, y el Lactobacillus bulgaricus, muy acidificante. Por
    lo tanto, en esta preparación se podrán observar dos morfologías
    bacterianas distintas: cocos (de forma esférica) y bacilos (de forma
    alargada). El tamaño del lactobacilo (unos 30 µm de longitud) facilita la
    observación.
    Células epiteliales de cebolla: Una forma sencilla de obtenerlas para la
    observación microscópica es con las catáfilas de cebolla. La cebolla es
    en realidad un tallo modificado y las catáfilas (las distintas capas) son
    sus hojas. Como toda hoja posee un tejido superficial muy delgado y
    transparente: la epidermis que cuenta con una sola capa de células.
    Protozoos: Los protozoos son seres unicelulares eucarióticos de
    nutrición heterótrofa, que necesitan vivir en un medio húmedo.
    Algunos son parásitos y producen enfermedades como el paludismo. En
    la naturaleza los hay dulceacuícolas y marinos, y forman parte del
    plancton. Para desplazarse pueden emplear
    pseudópodos, cilios o flagelos.
    Los ciliados dulceacuícolas poseen una vacuola pulsátil con funciones
    excretoras y osmorreguladora.
    Hongos: Los hongos son microorganismos eucariotas de mayor tamaño
    y complejidad que las bacterias. Según su morfología los hongos se
    pueden dividir en dos grupos: mohos
    (hongos filamentosos) y levaduras.
    Levaduras: Son hongos unicelulares, cuyo nombre científico es
    Saccharomyces cerevisiae. Generalmente presentan reproducción
    asexual por gemación.
    Mohos: presentan una estructura vegetativa denominada micelio, el cual
    está formado por una serie de tubos rígidos ramificados, dentro de los
    cuales se encuentra el citoplasma multinucleado. Estos tubos reciben el
    nombre de hifas. De esta forma a partir de una espora en germinación
    se desarrolla una hifa, esta se ramifica y forma un micelio.

    Procedimiento.

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