DIVERSIDAD CELULAR.

CELULAS PROCARIOTAS: TINCION Y SU OBSERVACION

CELLULAR DIVERSITY.
(PROKARYOTIC: STAINING AND OBSERVATION)
1

CADENA, D; LINERO, L; MONTERO, F; RODRIGUEZ, A.

Universidad del Magdalena, Estudiantes del programa Biologa 2016 II, Facultad de ciencias
bsicas. Carrera 32 No 22 08. Santa Marta, Colombia.
[email protected]

Resumen
En 1676, Antonio Van Leewuenhoeck, pulidor de lentes holands, mezcl algunos granos
de pimienta con agua. Despus de 1 o 2 semanas, observ una gota de esta infusin con
ayuda de un microscopio simple. As fueron descubiertas las bacterias.
Las clulas procariotas se caracterizan por no tener ncleo, son muchsimo ms
pequeas que una clula eucariota, no presentan cito esqueleto ni orgnulos. Se
clasifican de acuerdo a su morfologa.
En el laboratorio se revis un cultivo de microorganismos para identificar las bacterias con
ayuda del microscopio, y dos procesos de tincin diferentes; en los cuales haba que
sumergir la muestra en solucin de azul de metileno, esto ti todas las bacterias. Se
observaron las bacterias presentes como: cocos, diplococos y vibrin. El otro proceso fue
la tincin de GRAM, con este se pudo diferenciar las clulas GRAM positivas (azul-violeta)
y GRAM negativas (rosadas)
Se obtuvo que la pared celular que las bacterias GRAM (-) es ms delgada que la pared
de las clulas (+). Y otras diferentes formas de bacterias.
Palabras claves:
microorganismos.

Observacin,

clulas,

coloracin

de

GRAM,

bacterias,

Abstract
In 1676, Antonio Van Leewuenhoeck, Dutch lens polisher, some peppercorns adj mixed
with water. After 1 or 2 weeks, he noted a drop of This infusion UN aid simple microscope.
Were discovered and bacteria.
Prokaryotic cells are characterized by having no core, Son much smaller than a eukaryotic
cell, organelle without Present quote NI skeleton. They are classified according OD
morphology.
UN in the laboratory culture of microorganisms was conducted to identify the bacteria
under a microscope, and staining Two Different Processes; In which he had to dip the
sample in methylene blue solution, THIS Tino All bacteria. cocci, diplococci And Vibrion: As
these bacteria were observed. The other process was the Gram stain, With This itself
might differ gram-positive cells (blue-violet) and gram negative (Pink)
It was found that cell wall Gram (-) is thinner than Wall Cells (+). And various other forms
of bacteria.
Key words: Observation, cells, Gram stain, bacteria, microorganisms.

Introduccin.
La clula es la unidad fundamental de la vida. Es un cuerpo con volumen que transforma
energa que es capaz de transferir informacin. Este concepto surge en el siglo XVIII, pero
se revoluciona con el descubrimiento del microscopio electrnico que tiene una gran
resolucin, puede separar dos puntos muy cercanos y as ver con mayor profundidad
(Vergara, 2009).
La clula es una unidad mnima de un organismo capaz de actuar de manera autnoma.
Todos los organismos vivo esta formados por clulas, y en general se acepta que ningn
organismos es un ser vivo si no consta al menos de una clula. Algunos organismos
microscpicos, como bacterias y protozoos, son clulas nicas, mientras que los animales
y plantas estn formados por millones de clulas organizadas por tejidos y rganos
(Garca, 2009).
Las clulas procariotas son pequeas, en torno a 1 um. Pueden estar recubiertas
externamente por una capsula gelatinosa protectora, constituido por polisacridos; no
todas las clulas procariotas las tienen. Por debajo de la capsula aparece una estructura
denominada pared celular constituidas por lpidos, polisacridos y protenas, que si estn
presentes en todas las clulas procariotas. Al grupo de las clulas procariotas pertenecen
organismos como bacterias, algas verdeazuladas y cianobacterias (Gutirrez, 2009).
Las clulas procariotas no tienen ncleo definido, es decir, su material gentico se
encuentra disperso en el citoplasma reunido en una zona llamada nucleoide. El termino
procariota hace referencia a los organismos referentes al imperio prokaryota, cuyo
concepto coincide con el reino monera de las clasificaciones de Harbert Copeland o
Robert Whittaker (www.monografias.com/celulas-procariotas-y-ecucariota).
La forma de las bacterias al microscopio est determinada por la rigidez de su pared
celular. Bsicamente, se diferencian segn su forma en cocos (esfrica u ovalada),
bacilos (cilndrica o de bastones; rectos o curvos) y espirilos (espiral); dentro de estas
ltimas se encuentran: Treponema, Borrelia y Leptospira. Las diferentes estructuras
bacterianas que observamos las podemos dividir, segn sean constantes en las clulas o
no, en estructuras permanentes o variables. Dentro de las primeras se destaca: la pared
celular, la membrana celular, los ribosomas y el material gentico. Las estructuras
variables son: los flagelos, las fimbrias o pilis, la cpsula y los esporos. (Prez, 2000).
El objetivo de esta prctica de laboratorio fue identificar los diferentes tipos de clulas
procariotas (bacterias) por medio de mtodos de tincin simple y tincin de Gram.

MATERIALES Y MTODOS
Cultivo de microorganismos realizados con anterioridad, un vaso de kumis o yogurt, azul
de metileno, solucin colorante de cristal violeta, colorante de GRAM (bacterias), violeta
de Genciana, toallas de papel secante o servilletas; microscopio, aceite de inmersin, asa
de inoculacin punta redonda, porta objeto y cubre objeto, beaker, pipeta, mechero, agua
destilada, gotero, papel filtro, etanol a 95%.

Parte A. Observacin de clulas procariotas con el mtodo de tincin simple

Para realizar el primer montaje se utiliz yogurt el cual se coloc una muestra de yogurt
en la caja petri mezclado con agua, luego se esterilizo el asa y se tom una muestra del
yogurt para despus colocarla en un porta objeto en forma de zigzag, al tener la muestra
del porta objetos se procedi a secar en el mechero en la llama intermedia.
Luego de tener fija la muestra se pas a una coloracin simple con azul de metileno por
un tiempo de 60 segundos. Para retirar el exceso del colorante se sumergi en un
recipiente con agua durante 30 segundos en un movimiento de abajo hacia arriba y luego
hacia los lados, despus se tom la muestra y se dej en papel absorbente, para retirar el
exceso de agua, finalmente se coloc la muestra en la platina del microscopio para
ubicarla en el objetivo de 40X (figura 1), se enfoc la muestra y se procedi a colocar una
gota de aceite de inmersin, para poder enfocar el objetivo de 100X (figura 2).
Parte B Frotis vaginal por tincin simple y coloracin de GRAM.
Para la observacin de bacterias obtenidas del frotis vaginal se obtuvieron dos muestras,
una para utilizar el procedimiento de tincin simple ya descrita anteriormente, y otra para
el procedimiento de coloracin de GRAM.
Con la tincin simple se observaron diferentes bacterias clasificada por su morfologa
como: cocos, diplococo, bacilos, vibrin y estreptococos.
En el procedimiento de tincin de GRAM, se procedi de la siguiente manera:
1) Se le agrego cristal violeta y se dej actuar por un minuto, luego se procedi a lavar
con agua.
2) Procedemos a agregar lugol de GRAM a la muestra y dejar durante un minuto se lav
con agua.
3) Se aadi decolorante o alcohol durante 30 segundos, se lav con agua.
4) Se agreg safranina de GRAM durante un minuto, se lav con agua; despus se puso
la muestra del lado contrario sobre el papel absorbente, luego se deja secar
completamente en temperatura ambiente y procedemos a observar.

Resultados.
Procedimiento A.
100

40x

Figura 1

Figura 2

Procedimiento B.

Figura 3. Foto tomada por

Linero, L

Figura 4. Foto tomada por

Montero, F

Descripciones
Figura 1- 2.
Figura 3.
Figura 4.

Se encontraron bacterias como coccus, diplococcus,

streptococcus.
Se observan diferentes tipos de bacterias (Cocus, diplo
cocus).
Se nota con ms detalle la estructura de los micros
organismos, se ve su ncleo y su citoplasma.

DISCUSIN
Las bacterias que retienen el cristal violeta despus de la decoloracin se observan de
color morado y son Gram positiva, las bacterias Gram negativas por el contrario, pierden
el colorante primario por el tratamiento diferencial y toman el colorante de contraste, se
observan entonces de color rojo. (Universidad autnoma de guerrero; 2008).
En la prctica realizada en el laboratorio de biologa de la universidad del magdalena se
realiz el proceso de tincin por el mtodo de GRAM, obteniendo que las bacterias Gram
positivas se tieron de color Azul violeta, mientras que las bacterias Gram negativas
tomaron un coloracin rosada (figura 3 - 4).

Preguntas complementarias
1. Por qu deben usarse coloraciones para observar a los microorganismos?
Porque son transparentes y si se le aplica color podremos diferenciarlas, es decir
lo hace ms fcil, para poder detectarlos, de esa manera podes determinar que
microorganismos tienes, si son GRAM+ o GRAM- y dems.
2. Para qu se usa la coloracin de azul de metileno?
La coloracin con azul de metileno tie a todas las bacterias por igual. Se utiliza el
colorante para teir las estructuras presentes en el citoplasma de la bacteria. No
es diferencial porque cuando se tien microorganismos con ste colorante tie a
todos por igual, se comporta de la misma forma con una bacteria u otra.
En cambio la coloracin de GRAM es una tcnica especial que se utiliza para
diferenciar a las especies que son sometidas a la coloracin por el tipo de pared
celular que poseen, as, segn el comportamiento de una especie bacteriana
frente a la coloracin de GRAM, se las divide en GRAM positivas y GRAM
negativas.
3.

Segn GRAM como se dividen las bacterias?

GRAM negativas y GRAM positivas

4. Por qu se debe enfriar el asa antes de usarla?

Para la esterilizacin del asa, con el fin de prevenir que la muestra no se

contamine.
5. Cmo se clasifican las bacterias segn su forma? Describa.

Las bacterias se clasifican segn su morfologa:

Cocos: son bacterias con forma redonda.
Bacilos: Son bacterias con forma alargada, curvas o rectas.
Espirilos: Son bacterias con forma de helicoidalmente (Resorte).
Vibrin: Son bacterias con forma de coma.
Estreptococos: Conjunto de cocos (redondos) en forma de cadena.
Diplococos: Parejas de cocos.
Estafilococos: Tiene forma semejante a racimos de uva, unin de 3 o ms cocos.

6. Por qu se dice que la coloracin con azul de metileno es una coloracin simple
y directa y con GRAM es una coloracin diferencial?
La tincin con azul de metileno tie toda la muestra de un solo color todas las
bacterias, y la tincin con GRAM nos permite diferencias las bacterias GRAM
positivas (Pared celular gruesa, color azul-violeta) y GRAM negativas (Pared
celular delgada, color rosada).
7. Cul es la diferencia entre cpsula y capa mucosa en las bacterias?
La cpsula es una capa rgida organizada en matriz impermeable que excluye
colorantes. En cambio, la capa de mucosa se deforma con facilidad, es capaz de
excluir partculas y no tiene lmite definido.
8. Cul es la composicin qumica de la cpsula bacteriana?
Agua
Iones inorgnicos
Azucares y precursores
Aminocidos y precursores
Nucleotidos y precursores
cidos grasos y precursores
Otras pequeas molculas
Macromolculas
(Protenas, ac nucleicos y
polisacridos)

% del peso total celular

70
1
1
0.4
0.4
1
0.2
26

Tipos de cada molcula

1
20
250
100
100
50

300

3000

9. Qu tipo de antibiticos se conoce para bacterias GRAM positivas y GRAM

negativas?
ANTIBIOTICOS PARA BACTERIAS GRAM POSITIVAS:
1. Penicilina.

2.
3.
4.
5.

Eritromicina.
Glicopeptidos: Vancomicina y teiclopanina.
Lincomicina y Clindamicina.
Penicilina G.

ANTIBIOTICOS PARA BACTERIAS GRAM NEGATIVAS:

1. Aminoglucosidos.
2. Aminopencilina.
3. Gentamicina, tobramicina, amikacina y netilmicina.
4. Quinolomas.
5. Ampicilina y amoxicilina.
6. Aminoglucosidos.

AGRADECIMIENTOS.
Principalmente le damos gracias a la universidad del magdalena por la posibilidad que
nos dio de adquirir nuevos conocimientos, a la biblioteca German Bula Meyer por
brindarnos el espacio para la investigacin de material relevante que nos aporta en la
realizacin de este informe. Por ultimo al profesor Willinton Barranco, como docente de la
materia de biologa general, siendo quien nos dio las bases y las diferentes
recomendaciones para la buena realizacin de este informe.

Bibliografa.
Prez, M., & Mota, M. (2000). Morfologa y estructura bacteriana. Revista en internet], 3(2),
23-42.
Garca, V. R. (2009). La clula. Crdoba, AR: El Cid Editor | apuntes. Retrieved from
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Vergara, H. (2009). La clula. Crdoba, AR: El Cid Editor | apuntes. Retrieved from
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Gutirrez, F., & Albnchez, I. (2001). Biologa: la clula. Washington D. C., US: Firmas
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http://www.monografias.com/trabajos101/celulas-ecucariotas-y-procariostas/celulasecucariotas-y-procariostas.shtml
29.08.2016. 4:03 pm
Manual de prcticas de laboratorio de microbiologa I y II: diversidad y estructura de los
microorganismos. (2008). Mxico, D.F., MX: Universidad Autnoma de Guerrero.
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