Experiencias formativas I Blga Marisol Gamarra

PRACTICA N° 2

COLORACIÓNES PARA HONGOS

Realizar coloración Gram para hongos

CARACTERÍSTICAS DE LOS HONGOS

- Organismos eucariotas
- Heterótrofos, Los hongos son seres vivientes exentos de clorofila.
- Pluricelulares filamentosos o unicelulares
- Pared celular (quitina y glucanos)
- Primordialmente terrestres (otros son acuáticos y marinos). Abundan en
lugares
oscuros y húmedos.
- Variedad en tamaños (microscópicos hasta macroscópicos).
- Consumen materia orgánica insoluble mediante la secreción de exoenzimas
hidrolíticas.
- Glicógeno es el principal polímero de almacenamiento.
- Usualmente aerobios, en ausencia de oxígeno algunos son fermentan.

ESTRUCTURA DE LOS HONGOS

Composición de la pared celular

1. La pared celular de los hongos posee diferentes constituyentes químicos

como ser polisacáridos, proteínas, lípidos y otras sustancias. La constitución
varía entre las diferentes especies. También varia con la edad del hongo, ya
que sustancias que pueden estar presentes en las hifas jóvenes, desaparecen
en las más viejas o depositar otros materiales y enmascarar la presencia de
constituyentes iniciales, también la composición del medio, el pH y la
temperatura, influyen en la composición de las paredes de los hongos. En los
hongos es completamente rígida (no se colapsa al corte). Otra sustancia que
se encuentra en la pared celular es la quitina. Otros componentes aminados
son la quitosana. También encontramos la celulosa quien le da rigidez. Por
otro lado, existe un pigmento muy propio de los animales: la melanina, que
dan coloración y consistencia, sirven para la reproducción y estructuras de
conservación

El talo de los hongos esta constituido por filamentos más o

menos ramificados
llamados hifas. Estas pueden
ser continuas(sin septas) o
tabicadas (septadas)
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Además los hongos presentan características comunes a todas las células tales
como:
Membrana, Aparato de Golgi, Núcleo, Ribosomas, Mitocondrias, Lomasomas.
Flagelos.

2. Membrana Celular

- Mantiene la presión osmótica, dejando salir los desechos y dejando pasar los
nutrientes
- Sede de sustancias que tienen como finalidad la solubilización de las sustancias que
circundan a la célula y además estas sustancias ablandan la pared celular.

3. Lomasomas

- Son estructuras propias de los hongos, están ubicados debajo de la pared celular y
constituyen una serie de vesículas o túbulos conectados entre sí.
- Se cree que sirven para aumentar el área de absorción.

4. Flagelos

- Son órganos de locomoción de zoosporas o de gametos de los grupos más primitivos

de los hongos.

Tipos: látigo, plumoso y mixto.

El flagelo en un inicio, se encuentra enrollado o pegado a las esporas.

El flagelo una vez que la célula germina, puede ser reabsorbido o cae.
El flagelo se cree que está constituido por material cromático del núcleo puesto que
nace de la parte exterior al núcleo e incluso está unido a él por una placa que se
llama beflaroplasto del cual sale una red que circunda el núcleo que se llama
rhizoplasto.

MORFOLOGÍA DE LOS HONGOS

Existen dos tipos de hongos:

1. Las levaduras Las levaduras son hongos unicelulares, que se reproducen por
gemación. Las levaduras son generalmente, células mayores que las
bacterias, aunque este parámetro puede variar dependiendo de la bacteria y
la levadura. Su tamaño es muy variable, este se encuentra entre 1 y 5 micras
de ancho y 5 a 30 de largo. Son ovoides, en general, aún cuando no se
descarta la posibilidad de hallarlas esféricas.
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2. Los Filamentosos.- Los mohos son hongos pluricelulares. Estos crecen

formando un filamento llamado hifa, que puede alcanzar varios cm. de largo.
Las hifas pueden ser tabicadas o continuas. Las tabicadas se dividen en una
cadena de células mediante la formación de paredes transversas o tabiques.
Las continuas carecen de dichos tabiques. Las hifas crecen por elongación de
la punta ó ápice. Durante el crecimiento las hifas se entrelazan densamente
constituyendo el micelio. Existe un micelio tabicado y uno continuo. Los
tabiques presentan orificios que permiten el libre movimiento de citoplasma y
sus núcleos. El organismo completo (micelio) es una estructura cenocítica,
esto significa que es una masa citoplasmática continua multinucleada.

Hay dos tipos de micelio, de acuerdo a su función:

• Micelio vegetativo: formado por hifas que penetran en el medio de cultivo o

difunden en la superficie absorbiendo nutrientes.

Las principales partes externas de un hongo son: el sombrerillo o cuerpo

fructífero, las láminas, anillo, pie y el micelio.

• Micelio aéreo: formado por hifas que se proyectan por encima de la superficie
del medio hacia el aire y que presenta la estructura reproductora del hongo,
que son las esporas, es el micelio de reproducción.
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TINCIONES DE HONGOS
La tinción es un proceso por el cual las moléculas de un colorante se absorben a una
superficie. Dado que las bacterias son casi incoloras, no presentan contraste con el
medio en el cual se encuentran suspendidas y no pueden observarse claramente sin
algún tratamiento previo.
TINCIONES
1. Tinción Azul de Lactofenol o azul algodón
La tinción de Azul de lactofenol se emplea para observar hongos.
Es una tinción simple (un sólo colorante) y como tal está basada en la afinidad del
colorante por componentes de las células, en este caso por las estructuras fúngicas.
El azul de lactofenol tiene tres características que lo hacen especial para observar
dichas estructuras en los hongos del tipo moho obtenidos en los cultivos por
aislamiento.
• El fenol destruye la flora acompañante (algunas veces en los cultivos, juntos
a los hongos pueden crecer colonias de bacterias)
• El ácido láctico conserva las estructuras fúngicas al crear, por decirlo de algún
modo, una película que las protege provocado por un cambio de gradiente
osmótico entre el interior y el exterior de dicha estructura.
• El azul de algodón tiene la capacidad de adherirse a las hifas y conidios de
los hongos microscópicos
Procedimiento:
• Sobre un porta limpio y seco depositaremos 2 gotas de azul de lactofenol .
• Cortaremos un trozo de cinta celo y la pegaremos en el extremos del asa estéril.
• Con cuidado pasaremos el extremo del celo por el borde exterior de la colonia.
• Pegaremos la cinta celo en el portaobjetos que tiene el colorante retirando con
cuidado el asa.
• Añadiremos una gota de colorante sobre el celo.
• cubriremos la preparación con un cubreobjetos.
• Observaremos al microscopio.
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Fundamento:
Las endosporas poseen unas cubiertas exclusivas que las hacen resistentes a los
factores ambientales adversos. Además, estas cubiertas hacen que las esporas
aparezcan en el microscopio óptico como estructuras refringentes y de difícil tinción.
La tinción específica de esporas requiere dos colorantes:
• Verde malaquita:
capaz de teñir las esporas en caliente. Safranina: colorante de contraste que tiñe las
formas vegetativas.
Las endosporas, tras la primera tinción, no perderán el colorante en el lavado con agua,
y sí lo harán las formas vegetativas, que quedarán teñidas con el segundo colorante.
Tincion:
Se emplearán cultivos en fase estacionaria para dar lugar a que las bacterias produzcan
las esporas. Esta tinción es delicada en su realización y para poder obtener unos
resultados satisfactorios hay que seguir cuidadosamente las instrucciones.
1. Preparar los frotis bacterianos indicados.
2. Teñir con verde malaquita. Con unas pinzas de madera colocar la muestra encima
de la llama del mechero de forma que el colorante humee durante 5 min.
Nota: evitar que la muestra hierva. Añadir más colorante si éste se evapora; es
importante que la muestra no se seque.
3. Lavar con abundante agua el exceso de colorante.
4. Teñir con safranina 1 min.
5. Lavar con abundante agua el exceso de colorante.
6. Secar la preparación.
7. Observar la preparación al microscopio.

Tinción Con Naranja De Acridina

• Transferir una gota del cultivo a un portaobjetos limpio y desengrasado, dejar secar
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al aire.
• Fijar con etanol al 100%, cubriendo el frotis durante 5 min.
• Eliminar el etanol y colocar 100 ml de naranja de acridina durante 3min.
Eliminar el exceso del colorante con etanol al 70%.
• Observar en un microscopio de epifluorescencia con un filtro azul, emisión a 490
nm.

Tinción Diferencial

Tinción De Ziehl-Neelsen (Aar)

• Se utiliza para diferenciar las bacterias denominadas ácido alcohol resistente del
No ácido alcohol resistente
• Algunas bacterias poseen, en su pared celular, ciertos ácidos grasos de cadena
larga que les confiere la propiedad de resistir la decoloración con alcohol ácido, tras
haber sido teñidas con colorantes básicos.

• Esta tinción requiere un calentamiento para que el colorante atraviese la pared

bacteriana que contiene la capa cerosa formada por ácido micólico.

Tinción de Gram

• Colocar una gotita de cristal violeta sobre el frotis, dejar interactuar 1 min.
Enjuagar con agua

• Colocar una gotita de lugol durante 1 min. enjuagar con agua

• Colocar dos gotitas de etanol-acetona y enjuagar con agua

• Colocar una gotita de safranina, 30 seg., y enjuagar con agua

• dejar secar y observar a 10X, 40X y 100X a inmersión. Dibujar y colorear.

BIBLIOGRAFIA

https://es.slideshare.net/memociciliano/hongos-y-levaduras-31747502
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https://www.slideshare.net/iltaitDes/tinciones-de-micobiologia?next_slideshow=4
https://es.slideshare.net/athzirycervantess/tincin-de-bacterias
https://es.slideshare.net/Tiiinoo/tinciones-de-los-hongos
https://www.slideshare.net/iltaitDes/tincin-de-gram-70519581?next_slideshow=3

MATERIALES
• Guia de aprendizaje

• Plataforma Moodle

• Biblioteca Virtual

• Google Meet

RESULTADOS
MARCA LA RESPUESTA CORRECTA

1 Las esporas son las células reproductoras de los hongos y se

forman en...

En la parte basal conocida como volva

En cualquier parte del micelio
Ninguna de las opciones es correcta
Las laminillas del sombrerillo

2 Los hongos que realizan simbiosis se caracterizan porque...

Obtienen la energía y el alimento, de determinadas plantas

y animales pero también le dan algún beneficio.
Obtienen la energía y el alimento, viviendo sobre vegetales
o animales muertos o de sus excrementos.
Obtienen la energía y el alimento de otros seres vivos a los
que a su vez causan daño.
Ninguna de las opciones es correcta

3 Los hongos carecen de clorofila y realizan la nutrición heterótrofa

como los animales...

Verdadero
Falso
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4 El extraño reino de los hongos posee características tanto del

reino de las plantas como del reino de los animales...

Verdadero
Falso

5 Los hongos que se nutren por parasitismo se caracterizan

porque...

Ninguna de las opciones es correcta

Obtienen la energía y el alimento, de determinadas plantas
y animales pero también le dan algún beneficio.
Obtienen la energía y el alimento, viviendo sobre vegetales
o animales muertos o de sus excrementos.
Obtienen la energía y el alimento de otros seres vivos a los
que a su vez causan daño.

6 El cuerpo de los hongos está formado por una serie de filamentos

cuyo conjunto constituye...

La seta
El esporangio
El micelio
El soro

7 Existen un grupo de hongos saprofitos responsables de la

síntesis de antibióticos...

Verdadero
Falso

8 Los hongos que se nutren por saprofitismo se caracterizan

porque...

Obtienen la energía y el alimento, viviendo sobre vegetales

o animales muertos o de sus excrementos.
Obtienen la energía y el alimento, de determinadas plantas
y animales pero también le dan algún beneficio.
Obtienen la energía y el alimento de otros seres vivos a los
que a su vez causan daño.
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Ninguna de las opciones es correcta

9 Los hongos son un grupo de organismos que se caracterizan por

tener...

Nutrición heterótrofa
Ninguna de las opciones es correcta
Nutrición quimiosintética
Nutrición autótrofa

10 El cuerpo fructífero de los hongos se denomina...

Sombrerillo
Volva
Esporangio
Seta

2 MENCIONA LAS PARTES DEL HONGO VERDADERO

2.LLENA EL SIGUIENTE CUADRO

NOMBRE DEL composición PROCEDIMIENTO UTILIDAD

COLORANTE
GRAM
ZIELH NEELSEN
WIRTZ
CORTITLIN
LEIFSON
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Azul de
Lactofenol
Anaranjado de
acridina
Safranina

TINCION DE HONGOS, REALIZA Y EXPLICA, TUS PROCEDIMIENTOS Y OBSERVACIONES CON

FOTOS
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RESULTADOS
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CONCLUSIONES
QUE APRENDÍ
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QUE ME FALTO APRENDER
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