Mac Conkey Agar.

Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fcil desarrollo,
aerobios y anaerobios facultativos. Permite diferenciar bacterias que utilizan o no,
lactosa en muestras clnicas, de agua y alimentos. Todas las especies de la familia
Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo.

Fundamento
En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo
bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y la mezcla de sales biliares
y el cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la
flora Gram positiva.
Por fermentacin de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia. Esto produce
un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro), la absorcin en las colonias, y la
precipitacin de las sales biliares.
Los microorganismos no fermentadores de lactosa producen colonias incoloras.

Frmula (en gramos por litro) Instrucciones

Peptona 17.0

Pluripeptona 3.0

Lactosa 10.0

Suspender 50 g del polvo por litro de

Mezcla de sales biliares 1.5 agua destilada. Reposar 5 minutos y
mezclar hasta uniformar. Calentar
suavemente y hervir 1 a 2 minutos
Cloruro de sodio 5.0 hasta disolver. Esterilizar en autoclave
a 121C durante 15 minutos.

Agar 13.5

Rojo neutro 0.03

Cristal violeta 0.001

pH final: 7.1 0.2

Siembra
- Sembrar en superficie.
- Utilizando la tcnica de Pour Plate: sembrar 1 ml de muestra y agregar
aproximadamente 15 ml de medio de cultivo fundido y enfriado a 45-50 C.

Incubacin
Durante 18-48 horas, a 35-37 C, en atmsfera aerbica

Resultados

Microorganismos Colonias

Escherichia coli ATCC 25922 Rojas con halo turbio

Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Rosadas mucosas

Salmonella typhimurium ATCC 14028 Incoloras, transparentes

Shigella flexneri ATCC 12022 Incoloras, transparentes

Proteus mirabilis ATCC 43071 Incoloras, transparentes

Diminutas, incoloras,
Enterococcus faecalis ATCC 29212
opacas

Caractersticas del medio

Medio preparado: rojo prpura

Almacenamiento:
Medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C.

Presentacin
x 100g :Cdigo: B02-114-05 x 500g :Cdigo: B02-114-06

BIBLIOGRAFA:

http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/maconkeyagar.htm

Los medios de cultivo en microbiologa

Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de microorganismos es

observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el
laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio
de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el
Cultivo. Se han preparado ms de 10.000 medios de cultivo
diferentes.

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de

cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones como
son: temperatura, grado de humedad y presin de oxgeno
adecuadas, as como un grado correcto de acidez o alcalinidad.
Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de
crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante.

La mayora de las bacterias patgenas requieren nutrientes complejos similares en

composicin a los lquidos orgnicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos
medios de cultivo es una infusin de extractos de carne y Peptona a la que se aadirn
otros ingredientes.

El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparacin de medios de

cultivo. Se lica completamente a la temperatura del agua hirviendo y se solidifica al
enfriarse a 40 grados. Con mnimas excepciones no tiene efecto sobre
el crecimiento de las bacterias y no es atacado por aquellas que crecen
en l.

La Gelatina es otro agente solidificante pero se emplea mucho menos

ya que bastantes bacterias provocan su licuacin.

En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos

materiales de enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre
completa, bilis, etc. Los hidratos de Carbono se adicionan por dos
motivos fundamentales: para incrementar el valor nutritivo del medio y
para detectar reacciones de fermentacin de los microorganismos que ayuden a
identificarlos. El suero y la sangre completa se aaden para promover el crecimiento de
los microorganismos menos resistentes.

Tambin se aaden colorantes que actan como indicadores para detectar, por ejemplo,
la formacin de cido o como inhibidores del crecimiento de unas bacterias y no de
otras (el Rojo Fenol se usa como indicador ya que es rojo en pH bsico y amarillo en
pH cido. La Violeta de Genciana se usa como inhibidor ya que impide el crecimiento
de la mayoria de las bacterias Gram-positivas).

Condiciones generales para el cultivo de microorganismos

El desarrollo adecuado de los microorganismos en un medio de cultivo se ve afectado

por una serie de factores de gran importancia y que, en algunos casos, son ajenos por
completo al propio medio.

1- disponibilidad de nutrientes adecuados

Un medio de cultivo adecuado para la investigacin microbiolgica ha de contener,

como mnimo, carbono, nitrgeno, azufre, fsforo y sales inorgnicas. En muchos casos
sern necesarias ciertas vitaminas y otras sustancia inductoras del crecimiento. Siempre
han de estar presentes las sustancias adecuadas para ejercer de donantes o captadores de
electrones para las reacciones qumicas que tengan lugar.

Todas estas sustancias se suministraban originalmente en forma de infusiones de carne,

extractos de carne o extractos de levadura. Sin embargo, la preparacin de estas
sustancias para su aplicacin a los medios de cultivo provocaban la prdida de los
factores nutritivos lbiles.

Actualmente, la forma ms extendida de aportar estas sustancias a los medios es utilizar

peptona que, adems, representa una fuente fcilmente asequible de nitrgeno y carbn
ya que la mayora de los microorganismos, que no suelen utilizar directamente las
protenas naturales, tienen capacidad de atacar los aminocidos y otros compuestos ms
simples de nitrgeno presentes en la peptona.

Ciertas bacterias tienen necesidades nutritivas especficas por lo que se aade a muchos
medios sustancias como suero, sangre, lquido asctico, etc. Igualmente pueden ser
necesarios ciertos carbohidratos y sales minerales como las de calcio, magnesio,
manganeso, sodio o potasio y sustancias promotoras del crecimiento, generalmente de
naturaleza vitamnica.

Muy a menudo se aaden al medio de cultivo ciertos colorantes, bien como indicadores
de ciertas actividades metablicas o bien por sus capacidades de ejercer de inhibidores
selectivos de ciertos microorganismos.
2- consistencia adecuada del medio

Partiendo de un medio lquido podemos modificar su consistencia aadiendo productos

como albmina, gelatina o agar, con lo que obtendramos medios en estado semislido o
slido.

Los medios solidificados con gelatina tienen el gran inconveniente de que muchos
microorganismos no se desarrollan adecuadamente a temperaturas inferiores al punto de
fusin de este solidificante y de que otros tienen la capacidad de licuarla.

Actualmente los medios slidos son de uso universal, por su versatilidad y comodidad,
pero hay tambin gran cantidad de medios lquidos cuyo uso est ampliamente
extendido en el laboratorio.

3- presencia (o ausencia) de oxgeno y otros gases

Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmsfera con tensin de oxgeno
normal. Algunas pueden obtener el oxgeno directamente de variados sustratos. Pero los
microorganismos anaerobios estrictos slo se desarrollarn adecuadamente en una
atmsfera sin oxgeno ambiental. En un punto intermedio, los microorganismos
microaerfilos crecen mejor en condiciones atmosfricas parcialmente anaerobias
(tensin de oxgeno muy reducida), mientras los anaerobios facultativos tienen un
metabolismo capaz de adaptarse a cualquiera de las citadas condiciones.

4- condiciones adecuadas de humedad

Un nivel mnimo de humedad, tanto en el medio como en la atmsfera, es

imprescindible para un buen desarrollo de las clulas vegetativas microbianas en los
cultivos. Hay que prever el mantenimiento de estas condiciones mnimas en las estufas
de cultivo a 35-37C proporcionando una fuente adecuada de agua que mantenga la
humedad necesaria para el crecimiento de los cultivos y evitar as que se deseque el
medio.

5- Luz ambiental

La mayora de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en

presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes como sera el caso de los
microorganismos fotosintticos.

6- pH

La concentracin de iones hidrgeno es muy importante para el crecimiento de los

microorganismos. La mayora de ellos se desarrollan mejor en medios con un pH
neutro, aunque los hay que requieren medios ms o menos cidos. No se debe olvidar
que la presencia de cidos o bases en cantidades que no impiden el crecimiento
bacteriano pueden sin embargo inhibirlo o incluso alterar sus procesos metablicos
normales.

7- Temperatura

Los microorganismos mesfilos crecen de forma ptima a temperaturas entre 15 y 43C.

Otros como los psicrfilos crecen a 0C y los temfilos a 80C o incluso a temperaturas
superiores (hipertemfilos). En lneas generales, los patgenos humanos crecen en
rangos de temperatura mucho ms cortos, alrededor de 37C, y los saproftos tienen
rangos ms amplios.

8- Esterilidad del medio

Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estriles para evitar la aparicin
de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el crecimiento
microbiano normal del o de los especimenes inoculados en dichos medios. El sistema
clsico para esterilizar los medios de cultivo es el autoclave (que utiliza vapor de agua a
presin como agente esterilizante)

La evolucin de los medios de cultivo

Podemos decir que la microbiologa empieza su verdadero desarrollo como ciencia en el

momento en que se descubre el microscopio y comienza la observacin de los primeros
microorganismos, pero es indudable que la puesta a punto de los medios de cultivo y la
utilizacin del agar como solidificante, marcan dos importantes puntos de inflexin en
su evolucin.

La primera noticia de la utilizacin de medios de cultivo nos llega del miclogo Brefeld,
que consigui aislar y cultivar esporas de hongos en medios slidos realizados a base de
gelatina.

Sin embargo este sistema no era adecuado para las bacterias (por su menor tamao) y no
fue hasta el ao 1878 cuando Lister populariz un mtodo enfocado al cultivo puro
basado en diluciones seriadas en un medio lquido.

Koch realiz sus investigaciones utilizando en un primer momento rodajas de patata

como soporte nutritivo slido, pero no tard en recurrir al caldo de carne lquido,
diseado por Loeffler, al que, en 1881, aadi gelatina, logrando un medio slido
transparente ideal para la observacin de la morfologa macroscpica de las colonias
microbianas.

En el ao 1882 tiene lugar uno de los grandes avances de la microbiologa en relacin

con los medios de cultivo: el mdico alemn Walter Hesse introduce el agar-agar
(polisacrido extrado de algas rojas) como solidificante.
En 1887 un ayudante de Koch llamado Petri, comienza a utilizar placas de cristal
planas, que se llaman desde entonces placas de Petri, para sustituir a las clsicas
bandejas de vidrio cubiertas con campanas que se usaban hasta entonces.

Beijerinck y Winogradsky, que desde de 1888 realizaron sus investigaciones sobre las
bacterias quimioauttrofas (utilizacin de nitrgeno y azufre sobre todo) tuvieron gran
importancia en el desarrollo de los medios selectivos y de enriquecimiento. Disearon
este tipo de medios de tal forma que su especial composicin qumica favoreca el
crecimiento de ciertos tipos de microorganismos que, en funcin de sus procesos
metablicos, eran los nicos capaces de utilizar para su desarrollo ciertos nutrientes del
medio.

En 1892 Wrtz impuls el uso de los medios diferenciales, incorporando indicadores de

pH a la composicin de ciertos medios con lo cual se poda observar la produccin de
cidos en la fermentacin en ciertos microorganismos.

Tipos bsicos de medios de cultivo

atendiendo a su estado fsico:

lquidos

semislidos

slidos

atendiendo a su utilidad prctica:

Medios para aislamientos primarios:

Para usos generales: no selectivos, para cultivo de una amplia

variedad de organismos difciles de hacer crecer. A menudo estn
enriquecidos con materiales como: sangre, suero, Hemoglobina, FX, FV,
glutamina, u otros factores accesorios para el crecimiento de las bacterias
(Agar Sangre, Schaeadler, etc)

selectivos: (pueden ser de moderada o de alta selectividad) se

aaden sustancias que inhiban el crecimiento de ciertos grupos de
bacterias, permitiendo a la vez el crecimiento de otras. Variando las
sustancia aadidas, se vara el tipo y grado de selectividad (Mac Conkey,
Kanamicina-Vancomicina)
 enriquecidos: ralentizan/suprimen el crecimiento de la flora
competitiva normal potenciando el cultivo y crecimiento deseado
(Selenito, medio con Vitamina K).

Para aislamientos especializados: formulaciones nutritivas

especiales que satisfacen requerimientos de grupos especficos de
bacterias, ayudando a su identificacin (Lowenstein).

Medios para identificacin:

diferenciales: formulaciones especiales en las que se estudian las

peculiaridades fisiolgicas (nutricin y respiracin sobre todo)
especficas de las bacterias. Seleccionando los medios adecuados se
puede llegar a la identificacin de casi cualquier bacteria (Oxidacin-
Fermentacin)

Bibliografa

http://www.danival.org/notasmicro/medioscult/_madr
e_medios.html

Medio de cultivo
Se ha sugerido que este artculo o seccin sea fusionado en
Cultivo (microbiologa) (discusin).
Una vez que hayas realizado la fusin de contenidos, pide la fusin de
historiales aqu.

Vanse tambin: Cultivo (microbiologa) y Placa de agar.

Una placa de agar, un ejemplo de crecimiento medio bacteriano. Las lneas
y los puntos naranjas son colonias bacterianas.

Un medio de cultivo es una tcnica de laboratorio (vase microbiologa) que consta de

un gel o una solucin que contiene los nutrientes necesarios para permitir, en
condiciones favorables de pH y temperatura, el crecimiento de virus, microorganismos,
clulas, tejidos vegetales o incluso pequeas plantas. Segn lo que se quiera hacer
crecer, el medio requerir unas u otras condiciones. Generalmente se presentan
desecados en forma de polvo fino o granular antes de ser preparados; ya preparados
pueden encontrarse en estado slido, semislido o lquido. El objetivo ltimo del cultivo
es variado: antibiograma, identificacin, multiplicacin.

Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de microorganismos es

observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el
laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio
de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han preparado ms
de 10.000 medios de cultivo diferentes.

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe
reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presin de
oxgeno adecuadas, as como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de
cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar
exento de todo microorganismo contaminante.

Los virus, por ejemplo, son obligados parsitos intracelulares, por lo que necesitan un
medio que contenga clulas vivas.

ndice

1 Clasificacin

o 1.1 Segn sus cualidades fsicas

o 1.2 Segn su origen

o 1.3 Segn su formulacin

 o 1.4 Segn su uso

2 Conteo bacteriano

3 Vase tambin

4 Referencias

Clasificacin

Segn sus cualidades fsicas

lquidos

semislidos

slidos

Segn su origen

naturales: son los preparados a partir de sustancias naturales de

origen animal o vegetal como ser extractos de tejidos o infusiones y
cuya composicin qumica no se conoce exactamente.

sintticos: son los medios que contienen una composicin qumica

definida cualitativamente y cuantitativamente. Se utilizan para
obtener resultados reproducibles.

semisintticos: son los sintticos a los que se les aaden factores de

crecimiento bajo una forma de un extracto orgnico complejo, como
por ejemplo extracto de levadura.

Segn su formulacin

qumicamente definidos: se conoce la cantidad exacta de cada uno de

los compuestos que hay en el medio.

complejos: se realizan a partir de extractos naturales (extracto de

levadura, sangre, etc.); no se conoce exactamente cul es la
composicin del medio; sin embargo, presenta la ventaja de que ya
estn presentes todos o casi todos los elementos que una clula
puede requerir.

Segn su uso

medio general: medio en donde crecen todo tipo de microorganismos,

excepto los que necesitan condiciones especiales (por ejemplo, agar
CLED).

medio selectivo: permite seleccionar el crecimiento de una especie o

grupo determinado (hongos, bacterias entricas, protozoos...).
 medio diferencial: permite identificar una especie con otra, ambas en
el mismo medio. Puede ser por su crecimiento, su metabolismo,su
respiracin, etc. (por ejemplo, medio de McConkey).

medio de enriquecimiento: contiene los nutrientes necesarios para

apoyar el crecimiento de una amplia variedad de microorganismos, se
utiliza para la cosecha de diferentes tipos de microorganismos en un
mismo medio.

medio mnimo: contiene la mnima cantidad de nutrientes posible que

permite el crecimiento de una especie;

medio de transporte: preparado para servir como almacenamiento

temporal a especmenes transportados o en transferencia; mantienen
su viabilidad y su concentracin;

simple

Conteo bacteriano

Generalmente, tras analizar un cultivo, se realiza un conteo bacteriano, con el fin de

saber cul es la densidad de poblacin microbiana que se encuentra en el medio.1

Vase tambin

medio de crecimiento para cultivo celular

Referencias

1.

1. Medidas de crecimiento. Consultado el 8 de septiembre de

2011.

Categoras:

Tcnicas microbiolgicas

Medios de cultivo

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