Academia.eduAcademia.edu

CUANTIFICACIÓN DE ÁCIDO ASCÓRBICO

Comprender y realizar la cuantificación de ácido ascórbico de una fruta usando el método colorimétrico. Conocer el funcionamiento del espectrofotómetro en los análisis colorimétricos y la realización de una curva de calibración. Reconocer la utilidad de cada uno de los reactivos dentro del método de cuantificación de ácido ascórbico y comprender las reacciones que se generan.

CUANTIFICACIÓN DE ÁCIDO ASCÓRBICO Naren Mauricio Téllez Carretero1, Viviana Sanchez Castellanos1. 1 Estudiantes de Biología, Facultad de Ciencias, Universidad Nacional de Colombia, Bogotá. 29 de agosto del 2016. [email protected], [email protected]. OBJETIVOS Comprender y realizar la cuantificación de ácido ascórbico de una fruta usando el método colorimétrico. Conocer el funcionamiento del espectrofotómetro en los análisis colorimétricos y la realización de una curva de calibración. Reconocer la utilidad de cada uno de los reactivos dentro del método de cuantificación de ácido ascórbico y comprender las reacciones que se generan. RESUMEN El ácido ascórbico es una vitamina liposoluble utilizado como antioxidante natural. El propósito de esta práctica consistió en determinar la concentración de ácido ascórbico (vitamina C) por métodos colorimétricos, se inició con la preparación de la muestra problema. Inicialmente se extrajo el zumo de limón al que se le agregó ácido oxálico 0,15%. Para realizar la curva de calibración se dispusieron de 6 soluciones patrón en 6 tubos de ensayo, cada uno con 2-Nitroanilina, Nitrito de sodio, etanol absoluto, Hidróxido de sodio y agua destilada en iguales concentraciones a diferencia de la Vitamina C que se dispensó en 0.1mL, 0.2mL, 0.3mL, 0.4mL, 0.5mL y 0.6mL en los 6 tubos de ensayo. También se realizó una solución “blanco” sin ninguna concentración de vitamina C. La solución problema se separó en tres tubos diferentes con volúmenes de 0.3mL (M1), 0.6mL (M2) y 0.9mL (M3) respectivamente a los que se le añadieron los mismos reactivos. A la solución de 0.6ml de muestra problema no se le agregó ácido oxálico. Las soluciones resultantes fueron llevadas al espectrofotómetro para la medición de su absorbancia a 540nm, una vez realizada la curva de calibración se extrapolaron los resultados de absorbancia de la solución problema; M1 tuvo una concentración de0,00795, tuvo una concentración de 0,0135 y M3 de 0,0199. DATOS, CÁLCULOS Y RESULTADOS Determinar la concentración de ácido ascórbico con la ecuación de la recta. Este cálculo se realizó para cada una de las muestras, las cuales tenían entre 0,3, 0,6 y 0,9 mL de zumo de limón con ácido oxálico. TABLA 1. Concentraciones de las muestras de ácido ascórbico. MUESTRA ABSORBANCIA CONCENTRACIÓN mg/mL (CURVA DE CALIBRACIÓN) CONCENTRACIÓN mg/mL (ECUACIÓN DE LA RECTA) M1 0,598 0,00795 0,00796 M2 1,018 0,0135 0,0133 M3 1,530 0,0199 0,0198 Extrapolación de las absorbancias para determinar la concentración (mg/mL) en la curva de calibración. Cálculo de la cantidad de mg de ácido ascórbico en 100 mL de zumo de limón. Se determinó considerando los 5mL de la solución de zumo-ácido oxálico como el 100% de la muestra, de acuerdo a esto 1 mL de zumo presente en esta solución corresponde al 20%, de la solución se dispensaron 0,3mL de los cuales el 20% corresponde a 0,06 mL con esto se realizaron los siguientes cálculos. esta misma operación se realizó con 0,6 mL y 0,9 mL para posteriormente sacar un promedio de la cantidad de ácido ascórbico en 100 mL, el cual fue de 11,78 mg. ANEXOS Las siguientes son las fotografías de las muestras a las cuales se les determino la absorbancia las tres últimas corresponden a las muestras problema. Se puede observar con claridad la diferencia de coloración que presenta cada una. DISCUSIÓN En la preparación de la solución se utilizaron diferentes reactivos para obtener una solución color violeta que tuviera una máxima absorbancia a 540 nm. Se inició con la preparación de la solución problema, para ello se extrajo el zumo de una muestra de limón de la cual se sacó 1mL y se le agregaron 4 mL de ácido oxálico 0,15%, esto se hace con el fin de hidrolizar el ascorbígeno que resulta de la condensación del triptófano con el ácido ascórbico y está presente en coles y otras crucíferas (1). A pesar de que el limón tiene la vitamina C libre, el procedimiento fue estándar para frutas y verduras. En las muestras patrón y problema se agregó inicialmente 2 nitro anilina 0,16% que al agregarle nitrito de sodio NaNO2 reacciona con una amina aromática que rompe su cadena cíclica para formar una sal de diazonio,la 2- nitroanilina diazotada (2 nitrobencenodiazonio), en este paso debe ocurrir una decoloración. Posteriormente en las muestras patrón se agregó vitamina C a diferentes concentraciones, esto produce 2-nitrofenil hidrazida del ácido oxálico (2) este en un exceso de NaOH forma una sal sódica de color rojo violeta que tiene un máximo de absorción de 540 nm. La curva de calibración tuvo un R2 de 0.996 indicando una relación lineal de la absorbancia respecto a la concentración, la absorbancia de M1 fue de 0,00796 mg/mL, la de M2 fue de 0,0133 mg/mL y de M3 fue 0,0198 mg/mL, con estos resultados se determinó que hay 11.78 mg en 100 mL de jugo, según la literatura cada 100 mL debería contener 152 mg de ácido ascórbico (3) la poca cantidad obtenida puede deberse a errores de extracción y ya que se trabajó solo con el zumo, el cual corresponde al 49% del peso del limón dejando un 51% de la fruta fuera de la extracción, otro factor que pudo afectar a esto es que el ácido ascórbico en el zumo se degrada muy rápido por la luz una vez es exprimido, para mejorar los resultados de la práctica se propone usar la totalidad de la fruta para realizar la extracción, ya que es posible obtener una cantidad mayor de esta vitamina si el limón es macerado o licuado y posteriormente filtrado, esto se haría porque los otros componentes de la fruta también contiene vitamina C. El resultado para la cantidad de ácido ascórbico en 100 gramos de fruta fue de 5.5 mg, sin embargo, en la literatura, en 100 gramos de limón se deberían tener 38,7 mg de vitamina C esta diferencia puede darse ya que en los datos de la literatura se tiene en cuenta la totalidad del limón no solo el zumo. También el bajo rendimiento puede deberse al tiempo transcurrido desde que se terminó la adición de los reactivos y el tiempo en el que se pasó al espectrofotómetro para medir la absorbancia, este tiempo permite que algunas partículas se sedimenten en el tubo de ensayo por ello lo más recomendable sería pasarlos por el vortex momentos antes de la medición de la absorbancia. CONCLUSIONES Gracias a las experiencias logradas en la práctica fue posible comprobar la presencia de ácido ascórbico en una muestra de zumo de limón, además el método permite con la aparición del complejo de color violeta medir la absorbancia de las muestras. El ácido ascórbico presenta cierta dificultad para ser medido debido a su rápida oxidación al contacto con la luz. Sin embargo, conocer la cantidad en la que aparece en los alimentos es de vital importancia ya que apoya al sistema inmunológico. Para obtener un dato más acertado de la concentración en frutas y verduras sería adecuado un método que se incluya toda la fruta. Se comprendió el fundamento de detección de compuestos por métodos colorimétricos.