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BIOLISA RUBÉOLA IgG

K125
INSTRUÇÕES DE USO
FINALIDADE APRESENTAÇÃO 7- Toda matéria-prima do produto é testada e deve ser não reagente para HBsAg, 7- Retirar o selador das cavidades.
Teste para determinação quantitativo e qualitativa de Anticorpos IgG para o vírus Anti-HIV 1&2 e Anti HCV. Entretanto, esses testes não oferecem total segurança 8- Descartar o conteúdo das cavidades por aspiração (Lavadora) ou por
da Rubéola em amostras humanas de soro, plasma e sangue total em papel 1 2 3 da ausência de agentes infecciosos. A manipulação manual de todo produto que decantação (Manual). Usar 300 µL aproximadamente de Solução de Lavagem,
REAGENTES
de filtro por enzimaimunoensaio em microplaca. Somente para uso diagnóstico 96 CAVIDADES 192 CAVIDADES 480 CAVIDADES contém soro é potencialmente capaz de transmitir doenças. Portanto, é preciso previamente preparada, e efetuar um total de cinco (5) ciclos de lavagem. Para
in vitro. tomar os devidos cuidados de biossegurança na manipulação desses produtos. a garantia da secagem da placa, ao final da lavagem, bater a placa por alguns
1- Padrões 1 Frasco 2 Frascos 5 Frascos
8- Pipetar os reagentes sempre na mesma ordem para minimizar a diferença de segundos em papel absorvente.
Referência (A - E) (A - E) x 300 mL (A - E) x 300 mL (A - E) x 300 mL
PRINCÍPIO DE AÇÃO tempo de reação entre as microcavidades. Nota: Lavagem/secagem deficiente pode causar resultados inadequados.
Metodologia: Enzimaimunoensaio ou imunoenzimático 2- Conjugado 1 Frasco x 12 mL 2 Frascos x 12 mL 5 Frascos x 12 mL 9- Por medida de proteção, deve-se cobrir a placa durante a reação. 9- Pipetar 100 µL de Conjugado em todas as cavidades, inclusive na cavidade
O kit BIOLISA Rubéola IgG é um ensaio imunoenzimático em fase sólida 10- Deve-se assegurar que o fundo da cavidade esteja limpo e seco e que não do Branco.
3- Placa 1 Unidade 2 Unidades 5 Unidades
baseada no princípio de detecção qualitativa e quantitativa indireta de Anticorpos haja bolhas na superfície do líquido antes de ler a placa. Não permitir que as 10- Homogeneizar gentilmente durante ± 30 segundos. Cobrir as cavidades
Sensibilizada (96 Cavidades) (96 Cavidades) (96 Cavidades)
IgG para o vírus da Rubéola no soro, plasma e sangue total em papel de filtro. cavidades sequem durante o ensaio. com o selador de placa.
Anticorpos IgG Anti - Rubéola vírus presentes na amostra ligam-se aos 4- Lavagem
1 Frasco x 50 mL 2 Frascos x 50 mL 5 Frascos x 50 mL 11- Não exponha os reagentes, especialmente o Substrato, à luz forte ou 11- Incubar por 30 minutos ± 2 minutos em uma incubadora a 37ºC ± 2ºC.
Antígenos revestidos na microplaca formando complexos Antígeno-Anticorpos Concentrada vapores de Hipoclorito durante o armazenamento ou etapas de incubação. 12- Retirar o selador de placa das cavidades.
IgG. Após a incubação inicial, a microplaca é lavada para remover os 5- Diluente de 12- Recomendamos aplicar as normas locais, estaduais e federais de proteção 13- Repetir o item 8.
materiais não ligados. Anticorpos Anti-IgG humano conjugados à Peroxidase Amostra
1 Frasco x 42 mL 2 Frascos x 42 mL 5 Frascos x 42 mL ambiental para que o descarte dos reagentes e do material biológico seja feito 14- Pipetar 100 µL de Substrato em todas as cavidades, inclusive na cavidade
são adicionados à microplaca e então incubados. Os Anticorpos Enzima - de acordo com a legislação vigente. do Branco.
Conjugado Anti-IgG humano se ligam aos Anticorpos IgG imobilizados pelos 6- Substrato 1 Frasco x 12 mL 2 Frascos x 12 mL 5 Frascos x 12 mL 13- Para obtenção de informações relacionadas à biossegurança ou em caso 15- Homogeneizar gentilmente durante ± 30 segundos. Cobrir as cavidades
Antígenos presentes. É realizada nova Lavagem para remover os excedentes. 7- Controle de acidentes com o produto, consultar as FISPQ (Ficha de Informações de com o selador de placa.
Após esta etapa, o Substrato é adicionado e incubado produzindo uma cor azul 1 Frasco x 300 mL 2 Frascos x 300 mL 5 Frascos x 300 mL Segurança de Produtos Químicos) disponibilizadas no site www.bioclin.com. 16- Incubar por 10 minutos ± 2 minutos em uma incubadora a 37°C ± 2°C.
Negativo
que indica a quantidade de Anticorpos IgG presentes nas amostras. A Solução br ou através de solicitação pelo SAC (Serviço de Assessoria ao Cliente) da 17- Retirar o selador de placa das cavidades.
de Parada é adicionada para interromper a reação havendo uma mudança de 8- Controle Quibasa. 18- Pipetar 100 µL de Solução de Parada em todas as cavidades, inclusive na
1 Frasco x 300 mL 2 Frascos x 300 mL 5 Frascos x 300 mL
Positivo
cor para amarelo, medida em um leitor de microplacas. 14- Não utilizar o produto em caso de danos na embalagem. cavidade do Branco.
9- Solução de 15- É imprescindível que os instrumentos e equipamentos utilizados estejam 19- Homogeneizar gentilmente durante ± 30 segundos.
1 Frasco x 12 mL 2 Frascos x 12 mL 5 Frascos x 12 mL
REAGENTES Parada devidamente calibrados e submetidos às manutenções periódicas. 20- Ler utilizando filtro duplo: 450 nm / 630 nm em até 15 minutos (no máximo).
1- Padrões Referência (A - E) - Conservar entre 2 e 8ºC. Contém: Cinco 10- Seladores de
(5) frascos (A - E) de Padrões Referência contendo Anticorpos IgG para Anti- Placa
3 Unidades 6 Unidades 15 Unidades AMOSTRAS Amostra de Sangue Total em Papel de Filtro
Rubéola em diferentes concentrações em Solução de Tampão, surfactante, Soro ou Plasma (EDTA ou Heparina). Antes de iniciar o ensaio, colocar todos os reagentes, Padrões Referência
estabilizantes, corante e conservante. Potencialmente infectante. 11- Tampão de Amostras hemolisadas ou altamente lipêmicas não devem ser usadas. (A - E), Controles e Amostras para estabilizarem em temperatura ambiente
As concentrações dos Padrões Referência (A-E) variam a cada lote. Vide Eluição de Papel 1 Frasco x 20 mL 2 Frascos x 20 mL 5 Frascos x 20 mL As amostras podem ser conservadas sob refrigeração, entre 2 e 8ºC, pelo (15 - 30ºC) por no mínimo 40 minutos.
de Filtro
rótulos dos frascos. período máximo de 5 dias. Se as amostras não puderem ser analisadas dentro 1- Separar as cavidades a serem utilizadas considerando: Padrões Referência
2- Conjugado - Conservar entre 2 e 8ºC. Contém: Solução Tampão contendo 12- Controle de 5 dias, podem ser estocadas por até 30 dias a temperatura de -20ºC. (A - E), Controles e Amostras (recomenda-se testar em duplicata). Retornar as
Anticorpo Anti-IgG humano ligado à Peroxidase, Surfactante, Estabilizantes, Negativo de 1 Unidade 2 Unidades 5 Unidades tiras não utilizadas da microplaca para a embalagem original selada.
Corante e conservante. Extração Sangue Total em Papel de Filtro 2 - Separar a primeira cavidade para o Branco (OPCIONAL).
3-Placa Sensibilizada - Conservar entre 2 e 8ºC. 13- Controle Sangue Total (Punção ou EDTA). 3- Adicionar um disco de 3 mm do Controle Positivo de Extração, Controle
4-Lavagem Concentrada - Conservar entre 2 e 8ºC. Contém: Solução Tampão, Positivo de 1 Unidade 2 Unidades 5 Unidades As amostras secas em papel de filtro podem ser armazenadas a temperatura Negativo de Extração e Amostras de Sangue Total em Papel de Filtro,
surfactante e conservante. Extração ambiente desde que, fiquem protegidas de fonte de luz solar direta e baixa previamente picotados, nas cavidades determinadas.
5-Diluente de Amostra - Conservar entre 2 e 8ºC. Contém: Solução Tampão, umidade. Para armazenamento de até 2 anos, as amostras devem permanecer 4 - Pipetar 100 µL do Tampão de Eluição de Papel de Filtro, inclusive na
estabilizantes, surfactante, quelante e conservante. EQUIPAMENTOS E INSUMOS OPERACIONAIS sob refrigeração, entre 2 a 8°C. cavidade para o Branco.
6- Substrato - Conservar entre 2 e 8ºC. Contém: Solução Tampão contendo Materiais contidos no kit: Para armazenamento superior a 2 anos, as amostras devem permanecer 5- Pipetar 5 µL de Controles e Padrões Referência (A - E) nas cavidades
Peróxido de Ureia, Tetrametilbenzidina (TMB) e conservante. - Reagentes descritos no quadro anterior. a -20ºC. previamente determinadas.
7- Controle Negativo - Conservar entre 2 e 8°C. Contém: Solução Tampão, - Instruções de uso (manual). 6- Homogeneizar gentilmente durante ± 30 segundos, cobrir as cavidades com
estabilizante, surfactante e conservante. Potencialmente infectante. DESCRIÇÃO DO PROCESSO selador de placas.
8- Controle Positivo - Conservar entre 2 e 8°C. Contém: Solução Tampão, Materiais necessários não contidos no kit: 7- Incubar por 30 minutos ± 2 minutos em uma incubadora a 37ºC ± 2ºC.
Anticorpos IgG Anti-Rubéola, corante, estabilizantes, surfactante e 1- Pipetas capazes de dispensar volumes de 5 a 300 mL com coeficiente de PREPARO DOS REAGENTES DE TRABALHO 8- Retirar o selador das cavidades.
conservante. Potencialmente infectante. variação menor que 1,5%. Solução de Lavagem 9- Descartar o conteúdo das cavidades por aspiração (Lavadora) ou por
9- Solução de Parada - Conservar entre 2 e 8ºC. Contém: Ácido Clorídrico 1 M. 2- Repipetador para pipetagens repetitivas de volumes de 300 mL com Diluir o conteúdo do frasco Nº4 (Lavagem Concentrada) em 1000 mL de água decantação (Manual). Retirar os discos de papel, caso necessário, com auxílio
10- Seladores de Placa coeficiente de variação menor que 1,5% ou pipeta multicanal (opcional). destilada ou deionizada. Após o preparo a solução pode ser estocada entre 2 a de uma agulha ou ponteira. Usar 300 µL aproximadamente de Solução de
11- Tampão de Eluição de Papel de Filtro - Conservar entre 2 e 8ºC. Contém: 3- Lavadora de microplaca (opcional). 30ºC até a data de validade impressa no frasco original. Pode ser armazenada Lavagem, previamente preparada, e efetuar um total de cinco (5) ciclos de
Solução Tampão, surfactante, estabilizante e conservante. 4- Leitora de ELISA com capacidade de absorbância em 450 e 630 nm de em temperatura ambiente. Caso ocorra cristalização, aquecer a 37°C até lavagem. Para a garantia da secagem da placa, ao final da lavagem, bater a
12- Controle Negativo de Extração - Conservar entre 2 e 8°C. Contém: comprimento de onda. dissolução. placa por alguns segundos em papel absorvente.
Amostra não reativa para anticorpos IgG Anti-Rubéola impregnada em Papel de 5- Papel absorvente para secar as microcavidades. Nota: Lavagem/secagem deficiente pode causar resultados inadequados.
Filtro. Potencialmente infectante. 6- Cronômetro ou relógio. Substrato 10- Pipetar 100 µL de Conjugado em todas as cavidades, inclusive na cavidade
13- Controle Positivo de Extração - Conservar entre 2 e 8°C. Contém: 7- Frasco para estocar a Solução de Lavagem após diluída. O Substrato é pronto para o uso. do Branco.
Amostra reativa para anticorpos IgG Anti-Rubéola impregnada em Papel de 8- Água destilada ou deionizada. 11- Homogeneizar gentilmente durante ± 30 segundos. Cobrir as cavidades
Filtro. Potencialmente infectante. 9- Ferramentas de Controle de Qualidade. ESTABILIDADE APÓS ABERTO com o selador de placa.
10- Incubadora de 37°C ± 2°C. Os resultados do teste de estabilidade comprovam que o kit Biolisa Rubéola 12- Incubar por 30 minutos ± 2 minutos em uma incubadora a 37ºC ± 2ºC.
11- Picotador de papel (diâmetro de 3 mm) para técnica de papel de filtro. IgG é estável após aberto durante, pelo menos, 30 dias. Esta estabilidade pode 13- Retirar o selador de placa das cavidades.
variar de acordo com as condições do teste e do ambiente. Portanto, sugere-se 14- Repetir o item 9.
CONDIÇÕES DE ARMAZENAMENTO E TRANSPORTE acompanhar o desempenho do produto utilizando controles internos do kit e os 15- Pipetar 100 µL de Substrato em todas as cavidades, inclusive na cavidade
A temperatura de armazenamento deverá ser de 2 a 8°C. O transporte em critérios de validação da técnica. do Branco.
temperaturas até 30°C não deverá exceder 5 dias. Manter ao abrigo da luz e 16- Homogeneizar gentilmente durante ± 30 segundos. Cobrir as cavidades
evitar umidade. Não congelar. TÉCNICA com o selador de placa.
Amostra de Soro e Plasma 17- Incubar por 10 minutos ± 2 minutos em uma incubadora a 37°C ± 2°C.
CUIDADOS ESPECIAIS Antes de iniciar o ensaio, colocar todos os reagentes, Padrões Referência 18- Retirar o selador de placa das cavidades.
1- Somente para uso diagnóstico in vitro profissional. (A - E), Controles e Amostras para estabilizarem em temperatura ambiente 19- Pipetar 100 µL de Solução de Parada em todas as cavidades, inclusive na
2- Seguir com rigor a metodologia proposta para a obtenção de resultados (15 - 30ºC) por no mínimo 40 minutos. cavidade do Branco.
exatos. 1- Separar as cavidades a serem utilizadas considerando: Padrões Referência 20- Homogeneizar gentilmente durante ± 30 segundos.
3- O sachê contendo a microplaca deve ser aberto somente após atingir a (A - E), Controles e Amostras (recomenda-se testar em duplicata). Retornar as 21- Ler utilizando filtro duplo: 450 nm / 630 nm em até 15 minutos (no máximo).
temperatura ambiente. Recolocar as tiras de microcavidades não utilizadas no tiras não utilizadas da microplaca para a embalagem original selada.
sachê, vedar e conservar entre 2 e 8ºC. 2 - Separar a primeira cavidade para o Branco (OPCIONAL).
4- A água utilizada na limpeza do material deve ser recente e isenta de 3- Pipetar 100 µL de Diluente de Amostra. Inclusive na cavidade para o Branco.
contaminantes. 4 - Pipetar 5 µL de Padrões Referência (A - E), Amostra e Controles nas
5- Colunas deionizadoras saturadas liberam água alcalina, íons diversos, cavidades previamente determinadas. Observar a mudança de cor do diluente
e agentes oxidantes e redutores que podem alterar de forma significativa os no momento da adição da amostra. A mudança de cor indica que a amostra foi
resultados. adicionada ao poço corretamente.
6- A Solução de Parada contém Ácido Clorídrico que é um ácido forte. Portanto, 5- Homogeneizar gentilmente durante ± 30 segundos, cobrir as cavidades com
manuseá-lo com devido cuidado. selador de placas.
6- Incubar por 30 minutos ± 2 minutos em uma incubadora a 37ºC ± 2ºC.
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VERIFICAÇÃO DA TÉCNICA Exemplo 1 REPRODUTIBILIDADE 3. Chernesky, MA, Mahony JB. Rubella Virus. In: Manual of Clinical Microbiology.
Para amostras de Soro, Plasma e Sangue Total em Papel de Filtro A reprodutibilidade foi calculada a partir de 10 determinações sucessivas 6th Edition (1995) 968-973.
CONCENTRAÇÃO
Verifique se os resultados obtidos para leitura do Branco, Padrões Referência ABSORBÂNCIA
CONCENTRAÇÃO
PARA TÉCNICA DE
durante 3 dias consecutivos, utilizando 3 amostras com valores diferentes, 4. Voller, A, Bidwell, DE, A simple Method for Detecting Antibodies to Rubella.
(A-E) e Controles estão compatíveis com os valores apresentados abaixo: PADRÕES ABSORBÂNCIA
MÉDIA
PARA TÉCNICA DE
SORO OU PLASMA
SANGUE TOTAL EM obtendo-se os seguintes resultados de absorbância: Brit. J. Exp. Pathol. (1975) 56:338-339.
PAPEL DE FILTRO 5. Rawls WE, Chernesky MA. Rubella Virus. Manual Clinical Immunology (1976)
ITEM ABSORBÂNCIAS AMOSTRA 452-455.
0,007 REPRODUTIBILIDADE
Branco < 0,100 A 0,009 0 0 x 2,5 = 0 1 2 3 6. Millian, SJ, Wegman D. Rubella Serology: Applications, Limitations, and
0,011 Interpretations. Amer. J. Pub. Health (1972) 170-176.
Padrão Referência A < 0,100 Média 1,049 2,092 0,148
0,451 7. QUIBASA: Dados do Departamento de Pesquisa e Desenvolvimento.
Padrão Referência B > 0,250 e < 0,600 B 0,450 15 15 x 2,5 = 37,5 Desvio Padrão 0,007 0,010 0,003
0,449
Padrão Referência C >Be<D Coeficiente de Variação (%) 0,625 0,454 1,697
GARANTIA DE QUALIDADE
0,848 Antes de serem liberados para consumo, todos os reagentes Bioclin são
Padrão Referência D >Ce<E C 0,850 30 30 x 2,5 = 75 testados pelo Departamento de Controle de Qualidade. A qualidade dos
0,852 Sensibilidade Analítica
Padrão Referência E > 1,4 A sensibilidade analítica foi calculada a partir da dosagem de duas amostras reagentes é assegurada até a data de validade mencionada na embalagem
1,490 de apresentação, desde que armazenados e transportados nas condições
Controle Negativo < 0,100 D 1,491 60 60 x 2,5 = 150 diluídas sucessivamente até a última concentração detectada. A sensibilidade
1,493 analítica encontrada foi de 0,161 UI/mL. adequadas.
Controle Positivo > 1,0
2,006 QUIBASA QUÍMICA BÁSICA Ltda
Controle Negativo de Extração < 0,300 E 2,100 120 120 x 2,5 = 300 Sensibilidade e Especificidade Clínica
2,195 Amostra de Soro e Plasma Rua Teles de Menezes, 92 – Santa Branca
Controle Positivo de Extração > 1,0 O kit BIOLISA Rubéola IgG analisou amostras clínicas e em comparação com CEP 31565-130 – Belo Horizonte – MG – Brasil
As amostras que tenham absorbância acima do Padrão Referência E, outros métodos de EIA. Os resultados mostram que a sensibilidade clínica do Tel.: (31) 3439.5454
Caso os valores se encontrem fora dos valores esperados, deve-se repetir a devem ser pré-diluídas utilizando Diluente de Amostra e devem ser testadas kit BIOLISA Rubéola IgG é > 99,99% e a especificidade clínica é > 99,99%. E-mail: [email protected]
técnica. novamente. A concentração deve ser multiplicada pelo fator de diluição. Leitura CNPJ: 19.400.787/0001-07 – Indústria Brasileira
automática e cálculo podem ser realizados através da função de regressão SENSIBILIDADE E
Resultado esperado Biolisa Rubéola IgG
CÁLCULOS linear em programas adequados de computador. ESPECIFICIDADE CLÍNICA ATENDIMENTO AO CONSUMIDOR
Amostra Positiva 195 195 Serviço de Assessoria ao Cliente
QUALITATIVO Nota: Os dados apresentados nos exemplos são apenas para ilustração e não Tel.: 0800 0315454
Para Amostras de Soro, Plasma e Sangue Total em Papel de Filtro podem ser usados em substituição à curva de calibração, que deve ser Amostra Negativa 50 50 E-mail: [email protected]
Considerar como Cut Off a absorbância média obtida com o Padrão Referência construída Total de Amostras Testadas 245
B. no laboratório. Número de Registro do kit BIOLISA Rubéola IgG na ANVISA: 10269360191
Sensibilidade Clínica: > 99,99% (195/195)
Exemplo: INTERPRETAÇÃO DOS RESULTADOS Especificidade Clínica: > 99,99% (50/50) Revisão: Julho/2020
Amostra de Soro, Plasma e Sangue Total em Papel de Filtro
ITEM ABSORBÂNCIAS
Amostra de Sangue Total em Papel de Filtro
QUALITATIVO
Padrão Referência B 0,451 O kit BIOLISA Rubéola IgG analisou amostras clínicas e em comparação com
PARA AMOSTRA
(Reagente N° 8) 0,449 DE SORO,
QUANTITATIVO QUANTITATIVO PARA outros métodos de EIA. Os resultados mostram que a sensibilidade clínica do
PLASMA E
PARA AMOSTRA AMOSTRAS DE kit BIOLISA Rubéola IgG é > 99,99% e a especificidade clínica é > 99,99%.
Cut Off = Absorbância Média do Cut Off = (0,451 + 0,449) / 2 RESULTADOS DE SORO OU SANGUE TOTAL EM
SANGUE TOTAL
Padrão Referência B Cut Off = 0,450 PLASMA PAPEL DE FILTRO SENSIBILIDADE E
EM PAPAEL DE Resultado esperado Biolisa Rubéola IgG
ESPECIFICIDADE CLÍNICA
FILTRO
Calcular o Índice dividindo a absorbância da Amostra pelo valor de Cut Off. Amostra Positiva 95 95
ÍNDICE CONCENTRAÇÃO CONCENTRAÇÃO
Exemplo: Negativo < 0,80 < 12 < 30
Amostra Negativa 51 51

ITEM ABSORBÂNCIA Total de Amostras Testadas 146

Positivo > 1,20 > 18 > 45
Amostra 1,346 Indeterminado 0,81 – 1,19 12,1 – 17,9 30,1 – 44,9 Sensibilidade Clínica: >99,99% (95/95)
Valor do Cut off 0,450 Especificidade Clínica: >99,99% (51/51)
Observação: No caso de resultado indeterminado, a amostra deve
Índice = 1,346 / 0,450 ser reanalisada. As amostras que obtiverem resultados repetidamente Linearidade
Índice = Amostra / Valor de Cut Off
Índice = 2,99 indeterminados devem ser retestadas utilizando um método alternativo. Se os A reação é capaz de detectar concentrações até a concentração do ponto mais
resultados permanecerem indeterminados, deve-se coletar uma nova amostra alto da curva de calibração. Para amostras com valores superiores, diluir a
QUANTITATIVO em duas semanas. Deve prevalecer o resultado da última amostra coletada. mesma com Diluente de Amostra, repetir a dosagem e multiplicar o resultado
Uma curva de calibração é usada para determinar a concentração de Anticorpos Os resultados fornecidos por este kit devem ser interpretados pelo profissional obtido pelo fator de diluição.
Anti-Rubéola vírus em amostras desconhecidas. médico responsável, não sendo o único critério para a determinação do
diagnóstico e/ou tratamento do paciente. SIGNIFICADO DIAGNÓSTICO
Preparo da Curva de Calibração A Rubéola é um vírus de RNA, esférico, envelope pequeno, pertencente à
Técnica de Soro e Plasma LIMITAÇÕES DO PROCESSO família Togaviridae. É vulgarmente conhecido como alemão ou sarampo de 3
Registrar as absorbâncias obtidas na leitora de microplaca, como apresentado A interpretação de um teste diagnóstico não deve ser estabelecido com base dias. A infecção pelo vírus de Rubéola é transmitida através de gotículas de
no exemplo 1. Calcular as médias das duplicatas (caso sejam realizadas em um único ensaio. Deve-se incluir outros testes de confirmação antes que saliva, resultando em erupção contagiosa leve em crianças ou jovens adultos.
duplicatas). uma amostra seja considerada positiva. Um resultado negativo não exclui a Na infância, a infecção é uma doença auto-limitante, benigna, caracterizada por
Plotar as absorbâncias médias de cada Padrão Referência versus a possibilidade de exposição. Todos os resultados devem ser interpretados em febre baixa, dor de cabeça, linfadenopatia, artralgia e conjuntivite. No entanto, a
concentração conjunto com outras informações clínicas disponíveis, antes do diagnóstico infecção durante a gravidez, especialmente no primeiro trimestre, pode levar ao
correspondente em UI/mL (descrita no rótulo) em papel milimetrado (antes de descritivo da doença. aborto espontâneo, infecção intra-uterina causando a morte fetal ou anomalias
plotá-las no gráfico) traçar a curva. congênitas.
CONTROLE INTERNO DE QUALIDADE A Rubéola Congênita depende do período em que a infecção ocorre e pode
Técnica de Sangue Total em Papel de Filtro O Laboratório Clínico deve possuir um programa interno de controle da resultar em complicações graves, incluindo a surdez, problemas oculares,
Registrar as absorbâncias obtidas na leitora de microplaca, como apresentado qualidade, onde procedimentos, normas, limites e tolerância para variações incluindo cataratas e glaucoma, cardiopatia congênita e retardo mental. Os
no exemplo 1. Calcular as médias das duplicatas (caso sejam realizadas sejam claramente estabelecidos. É importante ressaltar que todos os sistemas anticorpos IgM contra a Rubéola são produzidos inicialmente, podendo atingir
duplicatas). de medição apresentam uma variabilidade analítica característica, que deve ser níveis detectáveis dentro de 2 - 3 dias e pico de 14 - 21 dias após o início dos
Definir os novos valores de concentrações para técnica de papel de filtro monitorada pelos próprios laboratórios. Para tanto, é recomendável a utilização sintomas que permanecem detectáveis durante as próximas 4 - 8 semanas.
multiplicando a concentração de cada Padrão Referência (descrita no rótulo) de controles, que permitem avaliar a precisão e a exatidão das dosagens. O diagnóstico de infecção ativa ou recente pode ser obtido pela presença de
pelo fator de 2,5. anticorpos IgM em amostra inicial. Depois de vários dias, os anticorpos IgG
Plotar as absorbâncias médias de cada Padrão Referência versus a DESEMPENHO DO PRODUTO aparecem depois da IgM, com pico de 14 - 21 dias, persistindo níveis variados
concentração correspondente em UI/mL em papel milimetrado (antes de plotá- CONTROLE DE QUALIDADE para toda a vida. A presença de anticorpos IgG anti-Rubéola é indicativo de
las no gráfico) traçar a curva. infecção prévia e/ou imunidade.
Precisão
REPETIBILIDADE NÚMERO DE TESTES
A repetibilidade foi calculada a partir de 10 determinações sucessivas, utilizando Apresentação 1 – 96 testes
3 amostras com valores diferentes, obtendo-se os seguintes resultados de Apresentação 2 – 192 testes
absorbância: Apresentação 3 – 480 testes
AMOSTRA REPRESENTANTE
REPETIBILIDADE REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS EC
EC REP
REP EUROPEU AUTORIZADO EC REP
MARCA CE
1 2 3 1. Herrmann, KL. Rubella Virus. In: Manual of Clinical Microbiology. American
Society for Microbiology 4th Edition (1985) 779-784.
Média 1,048 2,092 0,148
2. Turgeon, ML. Rubella Infection. In: Immunology and Serology in Laboratory
Desvio Padrão 0,034 0,086 0,019 Medicine. 2nd Edition (1996). 275-286. NÃO UTILIZAR SE A
PROTEGER DA
Coeficiente de Variação (%) 3,215 4,106 12,560 PANTONE
EC
LUZ 654
E CALOR PANTONE 5435
REP EC REP EMBALAGEM ESTIVER
DANIFICADA
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BIOLISA RUBÉOLA IgG

K125
INSTRUCCIONES DE USO
FINALIDAD PRESENTACIÓN 7- Toda materia prima del producto es probada y debe ser no reactiva para 7- Retirar el sellador de placa de las cavidades.
La determinación cuantitativa y cualitativa de anticuerpos IgG contra el virus de HBsAg, Anti-HIV 1&2 y Anti-HCV. Sin embargo, esos tests no ofrecen total 8- Desechar el contenido de las cavidades por aspiración (Lavadora) o por
la rubéola en muestras humanas de suero, plasma y sangre completa en papel 1 2 3 seguridad de la ausencia de agentes infecciosos. La manipulación de todo decantación (manual).
REACTIVOS
de filtro de inmunoensayo enzimático de microplacas. Solo para uso diagnóstico 96 CAVIDADES 192 CAVIDADES 480 CAVIDADES producto que contiene suero es potencialmente capaz de transmitir dolencias. Usar 300 µL aproximadamente de Solución de Lavado, previamente preparada,
in vitro. Por lo tanto, es necesario tomar los debidos cuidados de bioseguridad en la para un total de cinco (5) ciclos de lavado. Para la garantia del secado de
1- Patrones 1 Frasco 2 Frasco 5 Frasco
manipulación de esos productos. la placa, al final del lavado, batir la placa por algunos segundos en papel
Referencia (A - E) (A – E) x 300 µL (A – E) x 300 µL (A – E) x 300 µL
PRINCIPIO DE ACCIÓN 8- Pipetear los reactivos siempre en el mismo orden para minimizar la diferencia absorbente.
Metodología: Enzimainmunoensayo o inmunoenzimatico 2- Conjugado 1 Frasco x 12mL 2 Frascos x 12mL 5 Frascos x 12mL de tiempo de reacción entre las microcavidades. Nota: Lavado/secado deficiente puede causar resultados inadecuados.
El kit BIOLISA Rubella IgG es un ensayo inmunoenzimático en fase sólida 3- Placa 1 Unidad 2 Unidades 5 Unidades 9- Por medida de protección, debe cubrir la placa durante la reacción. 9- Pipetear 100 µL de Conjugado en cada cavidade, incluso en la cavidad para
basado en el principio de detección indirecta cualitativa y cuantitativa de Sensibilizada (96 cavidades) (192 cavidades) (480 cavidades) 10- Asegurar que el fondo de la cavidad este limpio y seco, y que no haya el Blanco.
anticuerpos IgG contra el virus de la rubéola en suero, plasma y sangre completa burbujas en la superfi cie del líquido antes de leer la placa. No permitir que las 10- Homogenizar gentilmente durante ± 30 segundos. Cobrir las cavidades con
en papel de filtro. Los anticuerpos anti-virus de la rubéola IgG presentes en 4- Lavado cavidades sequen durante el ensayo. el sellador de placa.
1 Frasco x 50mL 2 Frascos x 50mL 5 Frascos x 50mL
la muestra se unen a los antígenos recubiertos en la microplaca, formando Concentrado 11- No exponga los reactivos, especialmente el Sustrato, a la luz fuerte o 11- Incubar por 30 minutos ± 2 minutos en una incubadora 37°C ± 2°C.
complejos de antígeno-anticuerpo IgG. Después de la incubación inicial, la 5- Diluyente de vapores de Hipoclorito durante el almacenamiento o etapas de incubación. 12- Retirar el sellador de placa de las cavidades.
1 Frasco x 42mL 2 Frascos x 42mL 5 Frascos x 42mL
microplaca se lava para eliminar materiales no unidos. Los anticuerpos anti- Muestra 12- Se recomienda la aplicación de la ley local, estatal y federal de protección 13- Repetir el item 8.
IgG humana conjugados con peroxidasa se añaden a la microplaca y luego se 6- Sustrato 1 Frasco x 12mL 2 Frascos x 12mL 5 Frascos x 12mL
ambiental para la eliminación de reactivos y material biológico se hace de 14- Adcionar 100 µL Sustrato en todas las cavidades, incluso en la cavidad para
incuban. Anticuerpos enzimáticos: el conjugado humano anti-IgG se une a los acuerdo con la legislación vigente. el Blanco.
anticuerpos IgG inmovilizados por los antígenos presentes. Se realiza un nuevo 7- Control
1 Frasco x 300 µL 2 Frascos x 300 µL 5 Frascos x 300 µL 13- Para obtener información relacionada con la seguridad biológica o en caso 15- Homogenizar gentilmente durante ± 30 segundos. Cubrir las cavidades con
lavado para eliminar el excedente. Después de esta etapa, el sustrato se agrega Negativo de accidentes con el producto, consultar la FISPQ (Ficha de Informaciones de el sellador de placa.
y se incuba produciendo un color azul que indica la cantidad de anticuerpos IgG 8- Control la Seguridad de Productos Químicos) disponibles en el site www.bioclin.com. 16- Incubar durante 10 minutos ± 2 minutos en una incubadora a 37°C ± 2°C.
presentes en las muestras. La solución de parada se agrega para detener la 1 Frasco x 300 µL 2 Frascos x 300 µL 5 Frascos x 300 µL br o solicitando a través del SAC (Servicio de Asesoría al Cliente) de Quibasa. 17- Retirar el sellador de placa de las cavidades.
Positivo
reacción con un cambio de color a amarillo, medido en un lector de microplacas. 14- No utilice el producto en caso de daños en su embalaje. 18- Adcionar 100 µL de Solución de Parada a todos los pocillos, incluso en la
9- Solución de
1 Frasco x 12mL 2 Frascos x 12mL 5 Frascos x 12mL 15- Es esencial que los instrumentos y equipos utilizados estén adecuadamente cavidad para el Blanco.
Parada
REACTIVOS calibrados y sometidos a mantenimientos periódicos. 19- Homogenizar gentilmente durante ± 30 segundos.
1- Patrones Referencia (A - E) - Almacenar entre 2 y 8ºC. Contiene: cinco 10 - Selladores de
3 Unidades 6 Unidades 15 Unidades
20- Leer utilizando filtro doble: 450nm/630nm en hasta 15 minutos (máximo).
(5) frascos (A - E) de patrones de referencia que contienen Anticuerpos IgG Placa MUESTRAS
Anticuerpos Rubeola en diferentes concentraciones en Solución Tampón, 11- Tampón de Suero o Plasma (EDTA o Heparina). Muestras de Sangre Total en Papel de Filtro
tensioactivo, estabilizadores, colorante y conservante. Potencialmente Eluición en Papel 1 Frasco x 20 mL 2 Frascos x 20 mL 5 Frascos x 20 mL No se deben utilizar muestras hemolizadas o altamente lipémicas. Las muestras Antes de comenzar el ensayo, colocar todos los reactivos, Patrones Referencia
infeccioso. de Filtro pueden mantenerse refrigeradas, entre 2 y 8°C, durante um período máximo de (A - E), Controles y Muestras para estabilizarse a temperatura ambiente
Las concentraciones de los patrones de referencia (A - E) varían con cada 5 días. Si las muestras no se pueden analizar en 5 días, se pueden almacenar (15 - 30ºC) durante al menos 40 minutos.
12 – Control de
lote. Ver etiqueta del vial. 1 Unidade 2 Unidades 5 Unidades hasta 30 días a -20°C. 1- Separar las cavidades a ser utilizadas considerando: Patrones Referência
Extracción Negativo
2- Conjugado - Almacenar entre 2 y 8ºC. Contiene: Solución Tampón, (A – E), Controles y Muestras (recomiendo testar en duplicado). Retornar las
Anticuerpo humano Anti-IgG ligado a Peroxidasa, tensioactivo, estabilizantes, 13 – Control de
1 Unidade 2 Unidades 5 Unidades Sangre Total en Papel de Filtro tiras de la microplaca que no serán utilizadas para el embalaje original sellado.
colorante y conservante. Extracción Positivo Sangre Total (Punción o EDTA). 2- Separar la primera cavidad para el Blanco (OPCIONAL).
3- Placa Sensibilizada - Almacenar entre 2 y 8ºC. Las muestras secadas en papel de filtro se pueden almacenar a temperatura 3- Agregar un círculo de 3 mm de Control de Extracción Positiva, Control de
4- Lavado Concentrado - Almacenar entre 2 y 8ºC. Contiene: Solución EQUIPOS E INSUMOS OPERACIONALES ambiente siempre que estén protegidas de la luz solar directa y de baja Extracción Negativa y Muestras en Papel Filtro previamente pictados, en las
Tampón, tensioactivo y conservante. Materiales contenidos en el kit: humedad. Para el almacenamiento de hasta 2 años, las muestras deben cavidades determinadas.
5- Diluyente de Muestra - Almacenar de 2 a 8ºC. Contiene: Solución Tampón, - Reactivos descritos en el item anterior permanecer refrigeradas, entre 2 y 8°C. 4- Pipetear 100 µL de Tampón de Elución en papel de filtro, incluso en la cavidad
estabilizadores, tensioactivo, quelante y conservante. - Instrucciones de uso (manual) Para almacenamiento de más de 2 años, las muestras deben permanecer para el Blanco.
6- Sustrato - Almacenar entre 2 y 8ºC. Contiene: Solución Tampón que contiene a -20ºC. 5- Pipetear 5 µL de los Patrones Referência (A – E) y Controles en las cavidades
Peróxido de Urea, Tetrametilbencidina (TMB) y conservante. Materiais necesarios, mas no contenidos en el kit: previamente determinadas.
7- Control Negativo - Almacenar a una temperatura de 2 a 8°C. Contiene: 1- Pipetas capaces de dispensar volúmenes de 5 a 300 μL con menor DESCRIPCIÓN DEL PROCESO 6- Homogeneizar suavemente durante ± 30 segundos y cubrir los pozos con
Solución Tampón, estabilizador, tensioactivo y conservante. Potencialmente coeficiente de variación que 1,5%. Los resultados de la prueba de estabilidad muestran que el kit Biolisa Rubeola placas de sellador.
infeccioso. 2- Repipetador para pipetajes repetitivos de volúmenes de 300 μL com menor IgG es estable después de abrir durante al menos 30 días. Esta estabilidad 7- Incubar por 30 minutos ± 2 minutos en una incubadora a 37°C ± 2°C.
8- Control Positivo - Almacenar entre 2 y 8°C. Contiene: Solución Tampón, coeficiente de variación que 1,5% o pipeta multicanal (opcional). puede variar según las condiciones de la prueba y el medio ambiente. Por lo 8- Retirar el sellador de placa de las cavidades.
Anticuerpos IgG Anti-Rubéola, colorante, estabilizadores, tensioactivo y 3- Lavadora de microplaca (opcional). tanto, se sugiere controlar el rendimiento del producto. utilizando controles 9- Desechar el contenido de las cavidades por aspiración (Lavadora) o por
conservante. Potencialmente infeccioso. 4- Lectora de ELISA con capacidad de absorbencia en 450 y 630 nm de longitud internos del kit y criterios de validación técnica. decantación (manual).
9- Solución de Parada - Almacenar entre 2 y 8ºC. Contiene: Ácido Clorhídrico de onda. Usar 300 µL aproximadamente de Solución de Lavado, previamente preparada,
1 M. 5- Papel absorbente para secar las microcavidades. PREPARO DE LOS REACTIVOS DE TRABAJO para un total de cinco (5) ciclos de lavado. Para la garantia del secado de
10- Selladores de Placas. 6- Cronómetro o reloj. Solución de Lavado la placa, al final del lavado, batir la placa por algunos segundos en papel
11- Tampón de Elución de Papel de Filtro - Almacenar a una temperatura de 7- Frasco para almacenar la Solución de Lavado después de diluida. Diluir el contenido del Reactivo Nº4 (Solución de Lavado Concentrado) em 1000 mL absorbente.
2 y 8ºC. Contiene: Solución Tampón, tensioactivo, estabilizante y conservante. 8- Agua destilada o deionizada. de agua destilada o deionizada. Después de la preparación de la solución se Nota: Lavado/secado deficiente puede causar resultados inadecuados.
12- Control de Extracción Negativa - Almacenar a una temperatura de 2 a 8°C. 9- Herramientas de Control de Calidad. puede almacenar a 2 a 30ºC hasta la fecha de validad impresa en el frasco 10- Pipetear 100 µL de Conjugado en cada cavidade, incluso en la cavidad para
Contiene: Muestra no reactiva para Anticuerpos Anti-Rubéola IgG impregnados 10- Incubadora de 37°C ± 2°C. original. Caso ocurra cristalización, calentar a 37°C hasta su disolución. el Blanco.
en Papel de Filtro. Potencialmente infeccioso. 11- Picotador de papel (diámetro de 3 mm) para la técnica de papel de filtro. 11- Homogenizar gentilmente durante ± 30 segundos. Cobrir las cavidades con
13- Control de Extracción Positiva - Almacenar entre 2 y 8°C. Contiene: Sustrato el sellador de placa.
Muestra reactiva para Anticuerpos Anti-Rubéola IgG impregnados en Papel de CONDICIONES DE ALMACENAMIENTO Y TRANSPORTE El Sustrato está listo para su uso. 12- Incubar por 30 minutos ± 2 minutos en una incubadora 37°C ± 2°C.
Filtro. Potencialmente infeccioso. La temperatura de almacenamiento debe ser de 2 a 8°C. El transporte a 13- Retirar el sellador de placa de las cavidades.
temperaturas de hasta 30ºC no debe exceder los 5 días. Mantener alejado de la TÉCNICA 14- Repetir el item 9.
luz y evitar la humedad. No congelar. Muestras de Suero o Plasma 15- Adcionar 100 µL Sustrato en todas las cavidades, incluso en la cavidad para
Antes de comenzar el ensayo, colocar todos los reactivos, Patrones Referencia el Blanco.
CUIDADOS ESPECIALES (A - E), Controles y Muestras para estabilizarse a temperatura ambiente (15 - 16- Homogenizar gentilmente durante ± 30 segundos. Cubrir las cavidades con
1- Solamente para el uso diagnóstico in vitro profesional. 30ºC) durante al menos 40 minutos. el sellador de placa.
2- Seguir con rigor la metodología propuesta para la obtención de resultados 1- Separar las cavidades a ser utilizadas considerando: Patrones Referência 17- Incubar durante 10 minutos ± 2 minutos en una incubadora a 37°C ± 2°C.
exactos. (A – E), Controles y Muestras (recomiendo testar en duplicado). Retornar las 18- Retirar el sellador de placa de las cavidades.
3- El sobre de aluminio conteniendo las microplacas debe ser abierto tiras de la microplaca que no serán utilizadas para el embalaje original sellado. 19- Adcionar 100 µL de Solución de Parada a todos los pocillos, incluso en la
solamente después de alcanzar la temperatura ambiente. Recolocar las tiras 2- Separar la primera cavidad para el Blanco (OPCIONAL). cavidad para el Blanco.
de microcavidades no utilizadas en el sobre de aluminio, sellar y almacenar a 3- Pipetear 100 µL de Diluyente de Muestra. Incluso en la cavidad para el 20- Homogenizar gentilmente durante ± 30 segundos.
de 2 a 8°C. Blanco. 21- Leer utilizando filtro doble: 450nm/630nm en hasta 15 minutos (máximo).
4- El agua utilizada en la limpieza del material debe ser reciente e exenta de 4- Pipetear 5 µL de Patrones Referência (A – E), Muestra y Controles en las
contaminantes. cavidades previamente determinadas. Observar el cambio de color del diluyente
5- Columnas deionizadoras saturadas liberan agua alcalina, iones diversos y en el momento de la adición de la muestra. La el cambio de color indica que la
agentes oxidantes y reductores que pueden alterar de forma significativa los muestra se ha agregado al pocillo correctamente.
resultados. 5- Homogeneizar suavemente durante ± 30 segundos y cubrir los pozos con
6- La Solución de Parada contiene Ácido Clorídrico que es un ácido fuerte. Por placas de sellador.
lo tanto, manosearlo con el debido cuidado. 6- Incubar por 30 minutos ± 2 minutos en una incubadora a 37°C ± 2°C.
 Espanhol 2/2
VERIFICACIÓN DE LA TÉCNICA Ejemplo 1 REPRODUCTIBILIDAD 3. Chernesky, MA, Mahony JB. Rubella Virus. In: Manual of Clinical Microbiology.
Para muestras de Suero, Plasma y Sangre Total en Papel de Filtro La reproductibilidad fue calculada a partir de 10 determinaciones sucesivas 6th Edition (1995) 968-973.
CONCENTRACIÓN
Verifique si los resultados obtenidos para lectura do Blanco y dos Controles son CONCENTRACIÓN
PARA LA TÉCNICA
durante 3 días consecutivos, utilizando 3 muestras con valores diferentes, 4. Voller, A, Bidwell, DE, A simple Method for Detecting Antibodies to Rubella.
compatibles con los valores presentados abajo: PATRONES ABSORBANCIA
ABSORBANCIA
PROMEDIO
PARA LA TÉCNICA
DE SUERO Y
DE SANGRE TOTAL obteniéndose los siguientes resultados de absorbancia: Brit. J. Exp. Pathol. (1975) 56:338-339.
PLASMA
EN PAPEL DE 5. Rawls WE, Chernesky MA. Rubella Virus. Manual Clinical Immunology (1976)
ITEM ABSORBANCIA FILTRO MUESTRA 452-455.
REPRODUCTIBILIDAD
Blanco < 0,100 0,007 1 2 3 6. Millian, SJ, Wegman D. Rubella Serology: Applications, Limitations, and
A 0,009 0 0 x 2,5 = 0 Interpretations. Amer. J. Pub. Health (1972) 170-176.
Patrone Referencia A < 0,100 0,011 Promedio 1,049 2,092 0,148
7. QUIBASA: Dados do Departamento de Pesquisa e Desenvolvimento.
Patrone Referencia B > 0,250 e < 0,600 0,451 Desvio Patrón 0,007 0,010 0,003
B 0,450 15 15 x 2,5 = 37,5
Patrone Referencia C >Be<D 0,449 Coeficiente de Variación (%) 0,625 0,454 1,697
GARANTIA DE CALIDAD
Antes de ser liberado para el consumo, todos los reactivos Bioclin son testados
Patrone Referencia D >Ce<E 0,848 por el Departamento de Control de Calidad. La calidad de los reactivos
C 0,850 30 30 x 2,5 = 75 Sensibilidad Analítica
Patrone Referencia E > 1,400 0,852 La sensibilidad analítica se calculó a partir de la dosificación de dos muestras es asegurada hasta la fecha de validad mencionada en el embalaje de
diluidas sucesivamente hasta la última concentración detectada. La sensibilidad presentación, desde que sean almacenados y transportados en las condiciones
Control Negativo < 0,100 1,490
D 1,491 60 60 x 2,5 = 150 analítica encontrada fue de 0,161 UI/mL. adecuadas.
Control Positivo > 1,000 1,493
2,006 Sensibilidad e Especificidad Clínica QUIBASA QUÍMICA BÁSICA Ltda
Control Negativo de Extracción < 0,300
E 2,100 120 120 x 2,5 = 300 Muestras de Suero y Plasma Rua Teles de Menezes, 92 – Santa Branca
Control Positivo de Extracción > 1,000 2,195
El kit BIOLISA Rubeola IgG analizó muestras clínicas en comparación con otro CEP 31565-130 – Belo Horizonte – MG – Brasil
kit de EIA. Los resultados muestran que la sensibilidad clínica del kit BIOLISA Tel.: +55 (31) 3439-5454
Caso los valores se encuentren fuera de los valores esperados, se debe repetir Muestras que tienen una absorbancia por encima del Estándar de Referencia E, E-mail: [email protected]
debe diluirse previamente con diluyente de muestra y debe volver a analizarse. Rubeola IgG es > 99,99% y la especificidad clínica > 99,9%.
la técnica. CNPJ: 19.400.787/0001-07 - Industria Brasileña
La concentración debe multiplicarse por el factor de dilución. La lectura y el SENSIBILIDAD E
cálculo automáticos se pueden realizar utilizando la función de regresión lineal Resultado esperado Biolisa Rubéola IgG
CÁLCULOS ESPECIFICIDAD CLÍNICA ATENDIMIENTO AL CONSUMIDOR
en programas informáticos adecuados. Servicio de Asesoría al Cliente
Muestra Positiva 195 195
CUALITATIVO Tel.: 0800 0315454
Muestras de Suero, Plasma y Sangre Total en Papel de Filtro Nota: Los datos presentados en los ejemplos son solo ilustrativos y no pueden Muestra Negativa 50 50 E-mail: [email protected]
Considerar como Cut Off la absorbancia promedio obtenido con el Patrón utilizarse para reemplazar la curva de calibración, que debe construirse en el
Total de Muestras Testadas 245
Referencia B. laboratorio. Registro del kit BIOLISA Rubeola IgG en la ANVISA: 10269360191
Sensibilidad Clínica: > 99,99% (195/195)
Ejemplo: RESULTADOS Especificidad Clínica: > 99,99% (50/50) Revisión: Julio/2020
Muestras de Suero, Plasma y Sangre Total em Papel de Filtro
ITEM ABSORBANCIA
CUALITATIVO Muestras de Sangre Total en Papel de Filtro
Patrón Referencia B 0,451 PARA El kit BIOLISA Rubeola IgG analizó muestras clínicas en comparación con otro
(Reactivo N°8) CUANTITATIVO CUANTITATIVO PARA kit de EIA. Los resultados muestran que la sensibilidad clínica del kit BIOLISA
0,449 MUESTRAS DE
PARA MUESTRAS MUESTRAS DE Rubeola IgG es > 99,99% y la especificidad clínica de > 99,99%.
SUERO, PLASMA
Cut Off = (Absorbância Promédio del Cut Off = (0,451 + 0,449) / 2 RESULTADOS DE SUERO O SANGRE TOTAL EN
E SANGRE
Patrón Referencia) Cut Off = 0,450 PLASMA PAPEL DE FILTRO SENSIBILIDAD E
TOTAL EN PAPEL
DE FILTRO ESPECIFICIDAD CLÍNICA
Resultado esperado Biolisa Rubéola IgG
SIMBOLOGÍA UNIVERSAL
Calcular el Indice dividendo la absorbancia de la muestra por el valor de Cut Off. Muestra Positiva 95 95
INDICE CONCENTRACIÓN CONCENTRACIÓN
Ejemplo: Negativo < 0,80 < 12 < 30 Muestra Negativa 51 51

ITEM ABSORBANCIA Positivo > 1,20 > 18 > 45 Total de Muestras Testadas 146

Muestra 1,346 Indeterminado 0,81 – 1,19 12,1 – 17,9 30,1 – 44,9 Sensibilidad Clínica: > 99,99% (95/95)
Valor del Cut Off 0,450 Especificidad Clínica: > 99,99% (51/51)
Observación: En el caso de resultado indeterminado, la muestra debe
Indice = 1,346 / 0,450 ser reanalizada. Las muestras que obtuvieran resultados repetidamente Linearidad
Indice = Muestra / Valor de Cut Off
Indice = 2,99 indeterminados deben ser reanalizados utilizando un método alternativo. Si los La reacción es capaz de detectar concentraciones hasta la concentración del
resultados permanecieran indeterminados, se debe colectar una nueva muestra punto más alto de la curva de calibración. Para muestras con valores superiores,
QUANTITATIVE en dos semanas. Debe prevalecer el resultado de la última muestra recogida. diluir la misma con Diluyente de Muestra, repetir la dosis y multiplicar el resultado
Se utiliza una curva de calibración para determinar la concentración de Los resultados proporcionados por este kit deben ser interpretados por el obtenido por el factor de dilución.
anticuerpos contra el virus de la rubéola en muestras desconocidas. profesional médico responsable, no siendo el único criterio para determinar el
diagnóstico y/o tratamiento del paciente. SIGNIFICADO DIAGNÓSTICO
Preparación de la curva de calibración La rubéola es un virus de RNA, esférico, de sobre pequeño, perteneciente a
Técnica de Suero y Plasma LIMITACIONES DEL PROCESO la familia Togaviridae. Se conoce comúnmente como sarampión alemán o de
Registre las absorbancias obtenidas en el lector de microplacas, como se La interpretación de un test diagnóstico no debe ser establecida con base a un 3 días. La infección por el virus de la rubéola se transmite a través de gotitas
muestra en el ejemplo 1. Calcule los promedios de los duplicados (si se realizan sólo ensayo. Se deben incluir otros tests de confirmación antes que una muestra de saliva, lo que resulta en una erupción cutánea contagiosa leve en niños o
duplicados). sea considerada positiva. Un resultado negativo no excluye la posibilidad de adultos jóvenes.
Grafique las absorbancias promedio de cada Estándar de referencia versus exposición. Todos los resultados deben ser interpretados em conjunto con En la infancia, la infección es una enfermedad benigna autolimitada,
la concentración correspondiente en UI/mL (descrita en la etiqueta) en papel otras informaciones clínicas disponibles antes del diagnóstico descriptivo de la caracterizada por fiebre baja, dolor de cabeza, linfadenopatía, artralgia y
cuadriculado (antes de graficarlos en el gráfico) grafique la curva. enfermedad. conjuntivitis. Sin embargo, la infección durante el embarazo, especialmente en
el primer trimestre, puede conducir a aborto espontáneo, infección intrauterina
Técnica de Sangre Total en Papel de Filtro CONTROL INTERNO DE CALIDAD que causa muerte fetal o anomalías congénitas.
Registre las absorbancias obtenidas en el lector de microplacas, como se El Laboratorio Clínico debe poseer un programa interno de control de calidad, La rubéola congénita depende del período en que se produce la infección y
muestra en el ejemplo 1. Calcule los promedios de los duplicados (si se realizan donde procedimientos, normas, límites y tolerancia para variaciones sean puede dar lugar a complicaciones graves, como sordera, problemas oculares,
duplicados). claramente establecidos. Es importante resaltar que todos los sistemas de como cataratas y glaucoma, cardiopatía congénita y retraso mental. Los
Defina los nuevos valores de concentración para la técnica de papel de filtro medición presentan una variabilidad analítica característica, que debe ser anticuerpos IgM contra la rubéola se producen inicialmente, alcanzando niveles
multiplicando la concentración de cada Estándar de referencia (descrito en la vigilada por los propios laboratorios. Por lo tanto, es recomendable la utilización detectables dentro de 2 a 3 días y alcanzando un máximo en 14 a 21 días
etiqueta) por un factor de 2,5. de controles, que permiten la evaluación, la precisión y la exactitud de las después del inicio de los síntomas que permanecen detectables durante las
Grafique las absorbancias promedio de cada Estándar de referencia versus dosificaciones. próximas 4 a 8 semanas.
la concentración correspondiente en UI/mL en papel cuadriculado (antes de El diagnóstico de infección activa o reciente se puede obtener mediante la
graficarlos en el gráfico) grafique la curva. DESEMPEÑO DEL PRODUCTO presencia de anticuerpos IgM en una muestra inicial. Después de varios días,
CONTROL DE CALIDAD los anticuerpos IgG aparecen después de IgM, alcanzando un máximo a los 14-
21 días, con niveles variables que persisten durante toda la vida. La presencia
Precisión de anticuerpos IgG anti-rubéola es indicativa de infección previa y/o inmunidad.
REPETIBILIDAD
La repetibilidad fue calculada a partir de 10 determinaciones sucesivas, NÚMERO DE PRUEBAS
utilizando 3 muestras con valores diferentes, obteniéndose los siguientes Presentación 1 – 96 pruebas
resultados de absorbancia: Presentación 2 – 192 pruebas EUROPEA REPRESENTANTE
Presentación 3 – 480 pruebas EC
EC REP
REP AUTORIZADO EC REP MARCADO CE
MUESTRA
REPETIBILIDAD
1 2 3 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Promedio 1,048 2,092 0,148 1. Herrmann, KL. Rubella Virus. In: Manual of Clinical Microbiology. American NO UTILICE SI EL
Society for Microbiology 4th Edition (1985) 779-784. PROTEGER DEL
Desvio Patrón 0,034 0,086 0,019 2. Turgeon, ML. Rubella Infection. In: Immunology and Serology in Laboratory PANTONE
EC
LUZ 654
Y CALOR PANTONE 5435
REP EC REP EMBALAJE ESTA
DAÑADA
Coeficiente de Variación (%) 3,215 4,106 12,560 Medicine. 2nd Edition (1996). 275-286.
 Inglês 1/2

BIOLISA RUBELLA IgG

K125
USAGE INSTRUCTIONS
FUNCTION PRESENTATION 7- All the raw material of product is tested and should be nonreactive for HBsAg, 7- Remove the sealing of wells.
Test for quantitative and qualitative determination of IgG antibodies to rubella Anti-HIV 1&2 and Anti-HCV. However, these tests do not provide total assurance 8- Discard the contents of the wells by aspiration (Washer) or by decanting
virus in human samples of serum, plasma and whole blood on microplate 1 2 3 of the absence of infectious agents. The manipulation of any product containing (manual).
enzyme immunoassay filter paper. Only for in vitro diagnostic use. REAGENTS human serum is potentially capable of transmitting diseases. Therefore, we must Use approximately 300 µL of Washing Solution, previously prepared to perform
96 CAVITIES 192 CAVITIES 480 CAVITIES take due care in handling the bio safety of these products. a total of five (5) washing cycles. To ensure drying of the plate, at the end of the
Methodology: Enzyme immunoassay or immunoenzyme 1 Flask 2 Flasks 5 Flasks
8- Always add reagents in the same order to minimize the diff erence in reaction wash, hit the board for a few seconds on absorbent paper.
1 - Reference
The BIOLISA Rubella IgG kit is an immunoenzymatic assay in solid phase time between the cavities. Note: Poor washing and drying can cause inadequate results.
Standards (A - E) (A - E) x 300 mL (A - E) x 300 mL (A - E) x 300 mL
based on the principle of indirect qualitative and quantitative detection of IgG 9- As a safety measure, you should cover the plate during the reaction. 9- Pipette 100 µL of Conjugate into each well except in the Blank cavity (if you
antibodies to Rubella virus in serum, plasma and whole blood on filter paper. 2 - Conjugate 1 Flask x 12 mL 2 Flasks x 12 mL 5 Flasks x 12 mL 10- You must ensure that the bottom of the cavity is clean and dry, and there are made this option).
IgG Anti - Rubella virus antibodies present in the sample bind to the coated no bubbles on the surface fluid before reading the plate. Do not let the cavities 10- Mix gently for ± 30 seconds. Cover cavities with plate sealer.
antigens on the microplate, forming IgG Antigen - Antibody complexes. After 1 Unit 2 units 5 units run dry during the test. 11- Incubate for 30 minutes ± 2 minutes in an incubator at 37°C ± 2°C.
3 - Sensitized Plate 12- Remove the sealer from plate cavities.
the initial incubation, the microplate is washed to remove unbound materials. (96 cavities) (192 cavities) (480 cavities) 11- Do not expose reagents, especially the Substrate, to strong light or
Peroxidase-conjugated anti-human IgG antibodies are added to the microplate Hypochlorite fumes during storage or incubation steps. 13- Repeat item 8.
and then incubated. Enzyme Antibodies - Human Anti-IgG Conjugate bind to 4 - Concentrated
1 Flask x 50 mL 2 Flasks x 50 mL 5 Flasks x 50 mL 12- We recommend applying the local, state and federal rules for environmental 14- Pipette 100 µL of Substrate into all wells, even in the cavity for Blank.
IgG Antibodies immobilized by Antigens present. A new Wash is performed Washing protection, so that disposal of reagents and biological material can be made in 15- Shake gently for ± 30 seconds. Cover wells with plate sealer.
to remove the surplus. After this stage, the Substrate is added and incubated accordance with current legislation. 16- Incubate for 10 minutes ± 2 minutes in an incubator at 37°C ± 2°C.
5 - Sample Diluent 1 Flask x 42 mL 2 Flasks x 42 mL 5 Flasks x 42 mL
producing a blue color that indicates the amount of IgG Antibodies present in the 13- To obtain information related to biosafety or in case of accidents with the 17- Remove the sealer from plate cavities.
samples. The Stop Solution is added to stop the reaction with a color change to 6 - Substrate 1 Flask x 12 mL 2 Flasks x 12 mL 5 Flasks x 12 mL product, consult the MSDS (Material Safety Data Sheet) available on the website 18- Pipette 100 μL of Stop Solution into all wells, even in the cavity for Blank.
yellow, measured in a microplate reader. www.bioclin.com.br or upon request by the SAC (Customer 19- Mix gently for ± 30 seconds.
7 - Negative Control 1 Flask x 300 mL 2 Flasks x 300 mL 5 Flasks x 300 mL Advisory Service) of Quibasa. 20- Read using double filter: 450nm/630nm within up to 15 minutes (maximum).
REAGENTS 14- Do not use the product in case of damaged packaging.
1- Reference Standards (A - E) - Store between 2 and 8ºC. Contains: Five 8 - Positive Control 1 Flask x 300 mL 2 Flasks x 300 mL 5 Flasks x 300 mL 15- It is essential that the instruments and equipments used are properly Whole Blood Sample on Filter Paper
(5) bottles (A - E) of Reference Standards containing IgG Antibodies for anti- calibrated and subjected to periodic maintenance. Before starting the assay, place all reagents, Reference Standards (A - E),
Rubella in different concentrations in Buffer Solution, surfactant, stabilizers, dye 9 - Stop Solution 1 Flask x 12 mL 2 Flasks x 12 mL 5 Flasks x 12 mL Controls and Samples to stabilize at room temperature (15 – 30°C) for at least
and preservative. SAMPLES 40 minutes.
10 - Plate Sealers 3 Units 6 Units 15 Units
Potentially infective. Serum or Plasma (EDTA or Heparin). 1- Select the wells to be used considering: Reference Standards (A – E),
The concentrations of the Reference Standards (A - E) vary with each 11- Elution Buffer in Hemolysed or highly lipemic samples should not be used. The samples can be Controls and Samples (it is recommended to test in duplicate). Return the strips
batch. See vial label. Filter Paper
1 Flask x 20 mL 2 Flasks x 20 mL 5 Flasks x 20 mL kept refrigerated, between 2 and 8°C, for a maximum period of 5 days. of the microplate will not be used for the original sealed packaging.
2- Conjugate - Store between 2 and 8ºC. Contains: Buffer Solution, Human Anti- If samples cannot be analyzed within 5 days, they can be stored for up to 30 2- Select the first cavity for Blank (OPTIONAL).
IgG Antibody linked to Peroxidase, surfactant, stabilizers, dye and preservative. 12- Negative days at -20°C. 3- Add a 3 mm disk of Positive Extraction Control, Negative Extraction Control
1 Unit 2 Units 5 Units
3- Sensitized Plate - Store at 2 and 8ºC. Extration Control and Whole Blood Samples Filter Paper, previously perforated, in the determined
4- Concentrated Washing - Store at 2 and 8ºC. Contains: Buffer Solution, Whole Blood on Filter Paper wells.
surfactant and preservative. 13- Positive Whole Blood (Puncture or EDTA). 4- Pipette 100 μL of Elution Buffer in filter paper. Even in the cavity for Blank.
1 Unit 2 Units 5 Units
5- Sample Diluent - Store at 2 and 8ºC. Contains: Buffer Solution, stabilizers, Extration Control Samples dried on filter paper can be stored at room temperature as long as they 5- Pipette 5 μL of Reference Standards (A – E) and Controls into previously
surfactant, chelator and preservative. are protected from direct sunlight and low humidity. For storage of up to 2 years, determined wells.
6- Substrate - Store at 2 and 8ºC. Contains: Buffer Solution containing Urea EQUIPMENTS AND OPERATIONAL INPUTS the samples must remain refrigerated, between 2 and 8°C. 6- Homogenize gently for ± 30 seconds, cover the wells with plate sealer.
Peroxide, Tetramethylbenzidine (TMB) and preservative. Materials in the kit: Storage for more than 2 years must be carried out the temperature of -20°C. 7- Incubate for 30 minutes ± 2 minutes in an incubator at 37°C ± 2°C.
7- Negative Control - Store at 2 and 8°C. Contains: Buffer Solution, stabilizer, - Reagents described in the above table. 8- Remove the sealing of wells.
surfactant and preservative. Potentially infective. - Operating instructions (manual). PREPARATION OF WORKING REAGENTS 9- Discard the contents of the wells by aspiration (Washer) or by decanting
8- Positive Control - Store between 2 and 8°C. Contains: Buffer Solution, Washing Solution (manual).
IgG Anti-Rubella Antibodies, dye, stabilizers, surfactant and preservative. Required materials not contained in the kit: Dilute the contents of the Reagent No4 (Concentrated Washing) in 1000 mL of Use approximately 300 µL of Washing Solution, previously prepared to perform
Potentially infective. 1- Pipette capable of dispensing volumes of 5 to 300 μL with lower coefficient of distilled or deionized water. After preparation the solution may be stored at 2 to a total of five (5) washing cycles. To ensure drying of the plate, at the end of the
9- Stop Solution - Store at 2 to 8ºC. Contains: Hydrochloric Acid 1 M. variation than 1.5%. 30ºC until expiration date printed on the original bottle. In case of crystallization, wash, hit the board for a few seconds on absorbent paper.
10- Plate Sealers. 2- Re-pipettor for repetitive pipetting volumes of 300 μL, with lower coefficient of heat it at 37°C until dissolution. Note: Poor washing and drying can cause inadequate results.
11- Filter Paper Elution Buffer - Store at 2 and 8ºC. Contains: Buffer Solution, variation than 1.5% or multichannel pipette (optional). 10- Pipette 100 µL of Conjugate into each well, included in the Blank cavity (if
surfactant, stabilizer and preservative. 3- Microplate washer (optional). Substrate you made this option).
12- Negative Extraction Control - Store at 2 and 8°C. Contains: Non-reactive 4- ELISA reader capable of absorbance at 450 and 630 nm wavelength. The Substrate is ready for use. 11- Mix gently for ± 30 seconds. Cover cavities with plate sealer.
sample for Anti-Rubella IgG antibodies impregnated on Filter Paper. Potentially 5- Paper towel to dry cavities 12- Incubate for 30 minutes ± 2 minutes in an incubator at 37°C ± 2°C.
infective. 6- Stopwatch or watch. PROCESS DESCRIPTION 13- Remove the sealer from plate cavities.
13- Positive Extraction Control - Store at 2 and 8°C. Contains: Reactive 7- Flask to store the washing solution after diluted. The results of the stability test show that the kit Biolisa Toxplasmose IgG is 14- Repeat item 9.
sample for Anti-Rubella IgG antibodies impregnated in Filter Paper. Potentially 8- Distilled water. stable after opening for at least 30 days. This stability may vary according to the 15- Pipette 100 µL of Substrate into all wells, even in the cavity for Blank.
infective. 9- Tools of Quality Control. conditions of the test and the environment. Therefore, it is suggested to monitor 16- Shake gently for ± 30 seconds. Cover wells with plate sealer.
10- Incubator 37°C ± 2°C. the product’s performance using internal kit controls and technique validation 17- Incubate for 10 minutes ± 2 minutes in an incubator at 37°C ± 2°C.
11- Paper shredder (3 mm diameter) for filter paper technique. criteria. 18- Remove the sealer from plate cavities.
19- Pipette 100 μL of Stop Solution into all wells, even in the cavity for Blank.
TRANSPORTATION AND STORAGE CONDITIONS TECHNIQUE 20- Mix gently for ± 30 seconds.
The storage temperature should be 2 to 8°C. Transport at temperatures up to Sample of Serum or Plasma 21- Read using double filter: 450nm / 630nm within up to 15 minutes (maximum).
30ºC should not exceed 5 days. Keep away from light and avoid humidity. Do Before starting the assay, place all reagents, Reference Standards (A - E),
not freeze. Controls and Samples to stabilize at room temperature (15 – 30°C) for at least
40 minutes.
SPECIAL CARE 1- Select the wells to be used considering: Controls and Samples (it is
1- For professional in vitro diagnostic use only. recommended to test in duplicate). Return the strips of the microplate will not be
2- Strictly follow the methodology proposed to obtain accurate results. used Reference Standards (A – E), for the original sealed packaging.
3- The sachet containing the microplate should be opened only after it reaches 2- Select the first cavity for Blank (OPTIONAL).
room temperature. Place the strip with unused cavities in the sachet, seal and 3- Pipette 100 μL of Sample Diluent. Even in the cavity for Blank.
store be 2 to 8°C. 4- Pipette 5 μL of Reference Standards (A – E), Sample and Controls into
4- The water used in material cleaning must to be recent and free of contaminants. previously determined wells. Observe the color change of the diluent at the time
5- Deionized and saturated columns release alkaline water, several ions and of sample addition. The color change indicates that the sample was added to
oxidizing and reducing agents that can signifi cantly alter the results. the well correctly.
6- Stop Solution contains Hydrochloric Acid which is a strong acid. Handle it 5- Homogenize gently for ± 30 seconds, cover the wells with plate sealer.
with care. 6- Incubate for 30 minutes ± 2 minutes in an incubator at 37°C ± 2°C.
 Inglês 2/2
TECHNIQUE VERIFICATION Example 1 REPRODUCIBILITY 3. Chernesky, MA, Mahony JB. Rubella Virus. In: Manual of Clinical Microbiology.
Samples of Serum, Plasma and Whole Blood Sample on Filter Paper The reproducibility was calculated from 10 successive determinations for 3 6th Edition (1995) 968-973.
Verify if the results obtained by the reading of the Blank and Controls are CONCENTRACIÓN
CONCENTRACIÓN consecutive days, using 3 samples with different values, obtaining the following 4. Voller, A, Bidwell, DE, A simple Method for Detecting Antibodies to Rubella.
FOR TOTAL
compatible to the values below: STANDARDS ABSORBANCE
AVERAGE FOR SERUM
BLOOD absorbance results: Brit. J. Exp. Pathol. (1975) 56:338-339.
ABSORBANCE AND PLASMA
TECHNIQUE
TECHNIQUE 5. Rawls WE, Chernesky MA. Rubella Virus. Manual Clinical Immunology (1976)
ITEM ABSORBANCE ONFILTER PAPER SAMPLE 452-455.
REPRODUCIBILITY
1 2 3 6. Millian, SJ, Wegman D. Rubella Serology: Applications, Limitations, and
Blank < 0.100 0.007
A 0.009 0 0 x 2.5 = 0
Interpretations. Amer. J. Pub. Health (1972) 170-176.
Average 1.049 2.092 0.148
Reference Standard A < 0.100 0.011 7. QUIBASA: Dados do Departamento de Pesquisa e Desenvolvimento.
Standard Deviation 0.007 0.010 0.003
Reference Standard B > 0.250 e < 0.600 0.451 Coefficient of Variation (%) 0.625 0.454 1.697
QUALITY ASSURANCE
B 0.450 15 15 x 2.5 = 37.5 Before being released for consumption, all Bioclin reagents are tested by the
Reference Standard C >Be<D 0.449
Analytical Sensitivity Department of Quality Control. The quality of reagents is assured until expiration
The analytical sensitivity was calculated from the dosage of two samples diluted date stated on the presentation packaging, when stored and transported
Reference Standard D >Ce<E 0.848 under appropriate conditions.
C 0.850 30 30 x 2.5 = 75 successively until the last concentration detected. The analytical sensitivity found
Reference Standard E > 1.400 0.852 was 0.161 IU/mL.
QUIBASA QUÍMICA BÁSICA Ltda
Negative Control < 0.100 1.490 Clinical sensitivity and specificity Rua Teles de Menezes, 92 - Santa Branca
D 1.491 60 60 x 2.5 = 150 Serum and Plasma Sample CEP 31565-130 - Belo Horizonte - MG - Brasil
Positive Control > 1.000 1.493 BIOLISA Rubella IgG Kit analyzed clinical samples in comparison with other Phone: +55 (31) 3439.5454
methods of EIA. The results show that the clinical sensitivity of the BIOLISA E-mail: [email protected]
Negative Extraction Control < 0.300 2.006
Rubella IgG kit is > 99.99%and clinical specificity is > 99.99%. CNPJ: 19.400.787/0001-07 - Made in Brazil
E 2.100 120 120 x 2.5 = 300
Positive Extraction Control > 1.000 2.195 CUSTOMER SERVICE
CLINICAL SENSITIVITY Customer Advisory Service
Samples that have an absorbance above the Reference Standard E, must be Resultado esperado BIOLISA CMV IgG
If the values are out of the expected values. you must repeat the technique. AND SPECIFICITY Phone.: 0800 0315454
pre-diluted using Sample Diluent and must be retested. The concentration must E-mail: [email protected]
Positive Sample 195 195
CALCULATIONS be multiplied by the dilution factor. Automatic reading and calculation can be
performed using the linear regression function in suitable computer programs. Negative Sample 50 50 ANVISA registration for BIOLISA Rubella IgG kit: 10269360191
QUALITATIVE Total Tested Sample 245
Serum, Plasma and Whole Blood Samples on Filter Paper Note: The data presented in the examples are for illustration only and cannot Review: July/2020
Cut Off regarded as the mean absorbance obtained with the Reference be used to replace the calibration curve, which must be constructed in the Clinical Sensitivity: > 99.99% (195/195)
Standard B. laboratory. Clinical Specificity: > 99.99% (50/50)
Example: INTERPRETATION OF RESULTS Whole Blood Samples on Filter Paper
Serum, Plasma and Whole Blood Samples on Filter Paper BIOLISA Rubella IgG Kit analyzed clinical samples in comparison with other
ITEM ABSORBANCE
methods of EIA. The results show that the clinical sensitivity of the BIOLISA
QUALITATIVE
0.451 RESULTS
Rubella IgG kit is > 99.99% and clinical specificity is > 99.99%.
Reference Standard B QUANTITATIVE QUANTITATIVE FOR
(Reagent N°8)
0.449
FOR SERUM,
PLASMA AND
FOR SAMPLES
OF SERUM OR
SAMPLES OF WHOLE
BLOOD ON FILTER CLINICAL SENSITIVITY
UNIVERSAL SYMBOLOGY
RESULTS WHOLE BLOOD Resultado esperado BIOLISA CMV IgG
Cut Off = Average Absorbance from Cut Off = (0.451 + 0.449) / 2 PLASMA PAPER AND SPECIFICITY
SAMPLES ON
Reference Standard B Cut Off = 0.450 FILTER PAPER Positive Sample 95 95
Negative Sample 51 51
Calculate the index by dividing the Sample absorbance by the value of the Cut INDEX CONCENTRATION CONCENTRATION
Off. Total Tested Sample 146
Negative < 0.80 < 12 < 30
Example: Clinical Sensitivity: > 99.99% (95/95)
Positive > 1.20 > 18 > 45
Clinical Specificity: >99.99% (51/51)
ITEM ABSORBANCE Indeterminate 0.91 – 0.99 1.09 – 1.31 2.71 – 3.29
Linearity
Sample 1.346 The reaction is able to detect concentrations up to the highest point on the
Note: In case of indeterminate results, the sample must be retested. Samples
calibration curve. For samples with higher values, dilute the same with Sample
Cut off Value 0.450 that results have been obtained repeatedly indeterminate should be retested
Diluent, repeat the dosage and multiply the results by the dilution factor.
using an alternative method. If the results remain uncertain, one must collect a
Index = 1.346 / 0.450 new sample in two weeks. Should prevail the result of the last sample collected.
Index = Sample / Cut Off Value DIAGNOSTIC SIGNIFICANCE
Index = 2.99 The results provided by this kit must be interpreted by the medical professional
Rubella is an RNA virus, spherical, small envelope, belonging to the Togaviridae
responsible, not being the only criterion for the determination of diagnosis and/
QUANTITATIVE family. It is commonly known as German or 3-day measles. Rubella virus
or treatment of the patient.
A calibration curve is used to determine the concentration of Anti-Rubella Virus infection is transmitted through droplets of saliva, resulting in a mild contagious
Antibodies in unknown samples. rash in children or young adults.
PROCEDURE LIMITATIONS
In childhood, infection is a benign, self-limiting disease, characterized by low
The interpretation of a diagnostic test there should not be based on a single run.
Preparation of Calibration Curve fever, headache, lymphadenopathy, arthralgia and conjunctivitis. However,
This should include confirmation of other tests before a sample is considered
Serum and Plasma Technique infection during pregnancy, especially in the first trimester, can lead to
positive. A negative result does not exclude the possibility of exposure. All results
Record the absorbances obtained in the microplate reader, as shown in example spontaneous abortion, intrauterine infection causing fetal death or congenital
should be interpreted in conjunction with other clinical information available
1. Calculate the averages of duplicates (if duplicates are performed). anomalies.
before the descriptive diagnosis of the disease.
Plot the average absorbances of each Reference Standard versus the Congenital rubella depends on the period in which the infection occurs and can
corresponding concentration in IU/mL (described on the label) on graph paper result in serious complications, including deafness, eye problems, including
INTERNAL QUALITY CONTROL
(before plotting them on the graph) plot the curve. cataracts and glaucoma, congenital heart disease and mental retardation. IgM
The Clinical Laboratory must have an internal quality control, where all
antibodies against rubella are initially produced, reaching detectable levels within
procedures, rules, limits and tolerance to variations be clearly established.
Whole Blood Technique on Filter Paper 2 - 3 days and peaking in 14 – 21 days after the onset of symptoms that remain
It is important to mention that all measurement systems present a analytical
Record the absorbances obtained in the microplate reader, as shown in example detectable for the next 4 - 8 weeks.
variety, and it must be monitor by the laboratory. Therefore, it is recommendable
1. Calculate the averages of duplicates (if duplicates are performed). The diagnosis of active or recent infection can be obtained by the presence of
the use of controls, allowing the precision and accuracy of the dosages.
Define the new concentration values for the filter paper technique by multiplying IgM antibodies in an initial sample. After several days, IgG antibodies appear
the concentration of each Reference Standard (described on the label) by a after IgM, peaking at 14 - 21 days, with varying levels persisting throughout life.
PRODUCT PERFORMANCE
factor of 2.5. The presence of anti-rubella IgG antibodies is indicative of previous infection
QUALITY CONTROL
Plot the average absorbances of each Reference Standard versus the and / or immunity.
corresponding concentration in IU/mL on graph paper (before plotting them on Accuracy
the graph) plot the curve. NUMBER OF TESTS
REPEATABILITY
Presentation 1 - 96 tests
The repeatability was calculated from 10 successive determinations, using 3
Presentation 2 - 192 tests
samples with different values, obtaining the following absorbance results:
Presentation 3 - 480 tests
EUROPEAN AUTHORIZED
SAMPLE EC REP CE MARK
REPETIBILITY BIBLIOGRAPHIC REFERENCES
EC REP REPRESENTATIVE EC REP

1 2 3
1. Herrmann, KL. Rubella Virus. In: Manual of Clinical Microbiology. American
Average 1.048 2.092 0.148 Society for Microbiology 4th Edition (1985) 779-784.
2. Turgeon, ML. Rubella Infection. In: Immunology and Serology in Laboratory DO NOT USE IF
Standard Deviation 0.034 0.086 0.019 KEEP AWAY
Coefficient of Variation (%) 3.215 4.106 12.560
Medicine. 2nd Edition (1996). 275-286. PANTONE
EC 654
FROMREP PANTONE 5435
SUNLIGHT EC REP PACKAGE IS
DAMAGED