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    Aula - Enzimas de Restrição

    Enviado por

    Adriana Menezes Salgueiro
    O documento descreve os diferentes tipos de enzimas de restrição (I, II, III, IV) que reconhecem e cortam o DNA em sequências específicas. As enzimas do Tipo II são as mais comuns usadas em análises genéticas e clonagem por cortarem o DNA dentro ou próximo ao sítio de reconhecimento. O documento também explica conceitos como palíndromos, isozimases e como as enzimas de restrição são usadas na tecnologia do DNA recombinante.

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    Aula - Enzimas de Restrição

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    Adriana Menezes Salgueiro
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    O documento descreve os diferentes tipos de enzimas de restrição (I, II, III, IV) que reconhecem e cortam o DNA em sequências específicas. As enzimas do Tipo II são as mais comuns usadas em análises genéticas e clonagem por cortarem o DNA dentro ou próximo ao sítio de reconhecimento. O documento também explica conceitos como palíndromos, isozimases e como as enzimas de restrição são usadas na tecnologia do DNA recombinante.

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    Adriana Menezes Salgueiro
    O documento descreve os diferentes tipos de enzimas de restrição (I, II, III, IV) que reconhecem e cortam o DNA em sequências específicas. As enzimas do Tipo II são as mais comuns usadas em análises genéticas e clonagem por cortarem o DNA dentro ou próximo ao sítio de reconhecimento. O documento também explica conceitos como palíndromos, isozimases e como as enzimas de restrição são usadas na tecnologia do DNA recombinante.

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    de 10

    O fenmeno de restrio-modificao

    Infeces com bacterifagos em


    diferentes cepas bacterianas
    produziam o fenmeno de restrio-
    modificao.
    ENZIMAS DE RESTRIO ENZIMAS DE RESTRIO
    Tipo I
    Atividades de restrio e modificao na mesma subunidade protica.
    Tipo I
    Atividades de restrio e modificao na mesma subunidade protica.
    Cortam o DNA de maneira randmica distante do stio de reconhecimento.
    Tipo II
    Atividades de restrio e modificao em subunidades protecas diferentes.
    Cortam o DNA dentro do stio de reconhecimento ou em posies prximas;
    So as endonucleases mais comuns e mais comercializadas para uso em anlise gentica e clonagem.
    Ligam-se ao DNA como monmeros, mas clivam o DNA de modo cooperativo, atravs da dimerizao
    com uma subunidade contendo um domnio de clivagem.
    Tipo IIs
    Apresentam atividades de restrio e modificao em subunidades protecas diferentes (sistemas
    de modificao/clivagem);
    Cortam o DNA prximo ao stio de reconhecimento reconhecendo seqncias simtricas ou
    assimtricas;
    Ligam-se ao DNA como monmeros, mas clivam o DNA de modo cooperativo, atravs da dimerizao
    com uma subunidade contendo um domnio de clivagem.
    Tipo III
    Atividades de restrio e modificao na mesma subunidade proteca.
    Clivam fora do stio de reconhecimento e requerem duas seqncias em orientaes opostas dentro
    da molcula de DNA.
    Tipo IV
    Atividades de restrio e modificao na mesma subunidade protica.
    Quando reconhecem um stio simtrico (AcuI: CTTAAG) cortam o DNA fora do stio, mas quando
    reconhecem um stio assimtrico (BcgI: CGANNNNNNTGC) cortam o DNA fora do stio e em ambos os
    lados, liberando um pequeno fragmento.
    Enzimas de Restrio (endonucleases): tesouras do DNA
    enzimas produzidas por bactrias para restringir a proliferao de vrus invasores;
    diferentes tipos de enzimas clivam diferentes sequncias de bases de DNA;
    reconhecem e clivam o DNA em pontos especficos, geralmente em sequncias
    de 4, 6 e 8 bases palndromas.
    Nomenclatura: as enzimas de restrio so chamadas de acordo com a bactria que a produziu:
    Izosquizomeros Izosquizomeros: diferentes enzimas de restrio que possuem a mesma sequncia de reconhecimento
    Conceito Conceito de Palndromo de Palndromo
    Sequncia simtrica de letras
    Exemplos usando o alfabeto:
    Exemplos usando o alfabeto do DNA:
    a) Clivagem no eixo de simetria b) Clivagem simetricamente situada ao
    redor do eixo de simetria
    Tipos de corte Tipos de corte
    Molculas com extremidades
    abruptas ou cegas
    Molculas com extremidades coesivas
    Extremidades: coesivas X cegas
    coesiva = EcoRI =
    cega = SmaI =
    5-CCCGGG-3
    3-GGGCCC-5
    5-CCC GGG-3
    3-GGG CCC-5
    -3
    Corte de um palndromo no cromossomo do vrus SV40
    Cortando e Juntando o DNA....
    Tecnologia do DNA recombinante
    Amplificao do DNA recombinante....
    Tecnologia do DNA recombinante
    Escolha de um vetor de clonagem:
    molcula pequena fcil manipulao
    capaz de se replicar em uma clula viva
    presena de stios de restrio para insero do DNA a ser clonado
    possuir um mtodo de identificaoe recuperao das molculas recombinantes
    Ex: pUC18
    ampR - bactrias transformadas sero
    resistntes a ampicilina
    popiligador stio de clonagem mltipla
    lacZ - codifica para galactosidade que
    converte X-Gal em um corante azul
    Tecnologia do DNA recombinante
    converte X-Gal em um corante azul

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