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Espectroscopia de Ressonncia Magntica
Nuclear RMN
Parte1: Introduo e Componentes Bsicos
Introduo
RMN um mtodo espectroscpio ainda mais importante para os
qumicos orgnicos do que a espectroscopia no IV.
Vrios ncleos podem ser estudados pelas tcnicas de RMN,
sendo os mais comuns dos de hidrognio e carbono.
Enquanto a espectroscopia no IV revela os tipos de grupos
funcionais presentes na molcula a RMN oferece informaes sobre o
nmero de tomos magneticamente distintos do istopo estudado.
A combinao de dados de IV com os de RMN , muitas vezes,
suficiente para determinar completamente a estrutura de uma molcula
desconhecida.
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A espectroscopia de RMN no apenas constitui o melhor e mais
eficiente mtodo de anlise de compostos orgnicos (no sentido de que o
mtodo capaz de fornecer sozinho o maior nmero de informaes sobre a
estrutura molecular, alm de permitir recuperao integral da amostra),
como tambm logo se tornou um mtodo extremamente conveniente para
observar o interior do corpo humano (as inofensivas ondas de rdio so
muito penetrantes e atravessam facilmente grande parte de nosso corpo)
num processo frequentemente designado pela sigla inglesa MRI (Magnetic
Resonance Imaging).
O ncleo de certos elementos e istopos comportam-se como se
fossem ms girando em torno de um eixo. Alguns ncleos como o do
hidrognio e o do carbono 13 tm esta propriedade. Quando se coloca um
composto contendo tomos de H
1
ou de C
13
num campo magntico muito
forte e simultaneamente se irradia o composto com energia
eletromagntica, os ncleos podem absorver energia num processo
denominado ressonncia magntica.
A radiao utilizada no espectrmetro de RMN a
radiofrequncia (rf), de comprimento de onda altssimo (da ordem de
metros) e baixa energia (da ordem de 10
-6
kcal/mol).
Introduo
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A absoro desta radiao pelos ncleos desses elementos
quantizada e produz um espectro caracterstico.
Esta absoro no ocorre a menos que a frequncia da radiao
e a intensidade do campo magntico tenham valores bem definidos.
Os espectrmetros permitem aos qumicos medir a absoro de
energia pelos ncleos de H
1
e de C
13
, alm do ncleo de outros
elementos.
Estes instrumentos trabalham com um campo magntico muito
forte, capaz de provocar at a morte de uma pessoa que tenha uma
ponte de safena e trabalhe muito perto do aparelho de RMN.
Radiao
Comprimento
de onda
Energia
(kcal/mol)
Efeito causado
nas partculas
UV no vcuo 100 - 200 nm 286 - 83
Transio
eletrnica
UV prximo 200 - 380 nm 83 - 36
Transio
eletrnica
Luz visvel 380 - 800 nm 83 - 36
Transio
eletrnica
Infravermelho 8 - 300 mm 36 - 01
Vibrao e
deformao
Microondas 1 cm 10
-4
Rotao
Radiofrequncia metros 10
-6
Acoplamentos
de spins
A absoro de energia
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Os aparelhos de RMN H
1
em geral utilizam ms supercondutores
com campos magnticos muito intensos e pulsos curtos de radiao de
radiofrequncia, que provocam a absoro de energia pelos ncleos de H
1
,
todos ao mesmo tempo, e ocorre ressonncia.
A excitao dos ncleos provoca um fluxo de pequena corrente
eltrica numa bobina receptora que envolve a amostra. O instrumento
ento amplifica a corrente exibe o sinal (um pico ou uma srie de picos)
no computador, que ento efetua a promediao dos sinais e depois um
clculo matemtico (transformada de Fourier), exibindo um espectro
legvel.
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A principal diferena no processo de absoro da espectroscopia
de RMN que, a absoro de ondas de rdio pela matria s ocorre em
extenso aprecivel quando o corpo material est imerso no interior de
um campo magntico relativamente forte.
Um hidrocarboneto, por exemplo, essencialmente transparente
s ondas de rdio; quando colocado no interior de um campo magntico
forte, porm, ele passa a absorver certas frequncias dessas ondas.
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Estados de Spin
Muitos ncleos atmicos tm uma propriedade chamada Spin: os
ncleos comportam-se como se estivessem girando.
Qualquer ncleo que tenha massa mpar ou nmero atmico mpar,
ou ambos, tem um momento angular de spin e um momento magntico. Os
ncleos mais comuns que possuem spin so: C
13
, F
19
e P
31
.
Elementos como C
12
, O
16
e S
32
no tm spin (S = 0) e por isso no
do espectros de RMN.
A origem do sinal:
Assim como os eltrons possuem o nmero quntico spin (S), os
ncleos de H
1
e de alguns istopos tambm possuem spin. O ncleo do
hidrognio comum como o eltron:seu spin 1/2 e pode assumir dois
estados: +1/2 e -1/2. Isto significa que o ncleo do hidrognio possui
dois momentos magnticos.
Outros ncleos com nmero quntico spin igual a 1/2 so os dos
istopos C
13
, F
19
e P
31
.
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Momentos magnticos nucleares
Estados de spin no tem a mesma energia em um campo
magntico aplicado, pois o ncleo uma partcula carregada, e qualquer
carga que se desloca gera um campo magntico prprio.
Assim, o ncleo tem um momento magntico gerado por sua
carga e por spin.
Como o prton tem carga eltrica, a rotao do prton gera um
pequeno momento magntico - momento cuja direo coincide com a do
eixo do spin.
Este pequeno momento magntico confere ao prton em
rotao as propriedades de uma pequena barra magnetizada.
Na ausncia de campo magntico externo, os momentos
magnticos dos prtons de uma amostra esto orientados ao acaso.
Quando um composto contendo hidrognios (portanto, prtons)
colocado num campo magntico externo, os prtons s podem assumir
uma de duas orientaes possveis em relao ao campo magntico
externo. O momento magntico do prton pode estar alinhado
"paralelamente" ao campo externo, ou "antiparalelamente" ao campo.
Estes dois alinhamentos correspondem aos dois estados de spin 1/2.
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Os dois alinhamentos do prton num campo magntico no tm a
mesma energia. Quando o prton est alinhado a favor do campo
(paralelamente) sua energia mais baixa que a energia quando est
alinhado contra o campo magntico (antiparalelamente).
Sem campo magntico no h diferena de energia entre os
prtons, e a diferena de energia gerada pelo campo externo aplicado
depende da intensidade desse campo. necessria certa quantidade de
energia para fazer o spin passar do estado de energia mais baixa para o
estado de maior energia.
No espectrmetro de RMN esta energia proporcionada pela
radiao eletromagntica utilizada (radiofrequncia). Quando ocorre
esta absoro dizemos que os ncleos esto em ressonncia com a
radiao.
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Absoro de energia
O fenmeno de ressonncia magntica nuclear ocorre quando
ncleos alinhados com um campo aplicado so induzidos a absorver
energia e a mudar a orientao de spin em relao ao campo aplicado.
A absoro de energia um processo quantizado, e a energia
absorvida deve ser igual diferena de energia entre os dois estados
envolvidos.
Na prtica essa diferena de energia uma funo da
intensidade do campo magntico aplicado B
0
.
Quanto mais forte for o campo magntico aplicado, maior ser
a diferena de energia entre os estados de spins possveis. A
magnitude desta separao depende tambm do ncleo envolvido.
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Mecanismo de Absoro de energia
Quando um campo magntico aplicado o ncleo comea a
mudar de direo sobre seu prprio eixo de rotao com frequncia
angular , que as vezes, chamada de frequncia de Larmor.
A frequncia com que o ncleo muda de direo diretamente
proporcional intensidade do campo magntico aplicado: quanto mais
intenso for o campo magntico, maior ser a velocidade (frequncia
angular da onda, ) da precesso.
Para o ncleo do prton se o campo aplicado for de 1,41 Tesla, a
frequncia de precesso ser de aproximadamente 60MHz.
Como o ncleo tem uma carga, a precesso gera um campo
eltrico oscilatrio de mesma frequncia. Se as ondas incidentes da
radiofrequncia tiverem a mesma frequncia, pode haver absoro.
O que significa dizer que a frequncia da onda incidente
equivale a frequncia da onda gerada pelo novo campo eltrico do
ncleo, os dois campos podem se acoplar e transferir energia da
radiao para o ncleo causando assim uma mudana de spin. a
ressonncia.
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Para o ncleo do prton se o campo aplicado for de 1,41 Tesla, a
frequncia de precesso ser de aproximadamente 60MHz, e,
usandoE =hv, pode-se calcular a diferena de energia entre os dois
estados de spin do prton, que em torno de 2,39 x 10
-5
Kj/mol.
A equao de Boltzmann gera a razo de spin nuclear nos nveis
alto e mais baixo.
Densidades populacionais dos estados
de Spin nuclear
Uma das principais diferenas que existe entre a absoro de
energia na RMN e no infravermelho (ou ultravioleta) o pequeno valor
da diferena de energia entre os estados possveis para um ncleo.
O fton da radiao eletromagntica de 100 MHz (onda de 3 m)
tem uma energia de:
E = h = 6,626 10
34
J s 100 10
6
s
1
= 6,626 10
26
J
EM = 6,626 10
26
6,02 10
23
= 4,0 10
2
J/mol.
O valor da energia do fton de radiao infravermelha ( 20 kJ/mol) ou
ultravioleta ( 600 kJ/mol).
Mesmo em campos magnticos bem fortes, a diferena de
energia entre os estados possveis para os ncleos muito pequena.
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A consequncia principal disto que o nmero de ncleos no
estado de menor energia, em situao de equilbrio, apenas ligeiramente
maior do que o nmero de ncleos no estado de maior energia. A relao
entre esses nmeros pode ser dada pela distribuio de Boltzmann:
Aplicando para nosso valor de EM (correspondente a 100 MHz),
teremos, temperatura ambiente de 25 C (298 K):
Isto significa que para cada 100.000 ncleos no estado de menor
energia, teremos 99.998 ncleos no estado de maior energia, a diferena
entre os dois sendo de apenas 2 ncleos!!!
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Usando a equao de Boltzmann, pode-se calcular que a
temperatura ambiente, para um instrumento operando em 60 MHz, h
1.000.009 ncleos do estado de spin mais baixo (favorecido) para cada
1.000.000 que ocupam o estado de spin mais alto.
O que significa dizer que em aproximadamente 2 milhes de
ncleos h apenas 9 ncleos a mais no estado de spin mais baixo. Estes
nmeros (2 e 9) chamado de excesso populacional.
So os ncleos excedentes que permitem que a ressonncia seja
observada.
Se aumentarmos a frequncia de operao do instrumento, a
diferena de energia entre os dois estados aumentar, o que causa um
aumento nesse excedente populacional.
por este ganho de excedentes que os aparelhos modernos so
cada vez mais potentes (frequncias de operao maiores).
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A sensibilidade do aparelho aumenta, e os sinais de ressonncia
sero mais intensos, por que mais ncleos podem sofrer transies em
frequncias mais altas.
Antes da inveno de aparelhos mais potentes, era muito difcil
observar ncleos menos sensveis, como o carbono-13, que no muito
abundante (1,1%) e tem uma frequncia de deteco muito mais baixa do
que o hidrognio.
Deslocamento qumico e blindagem
A ressonncia magntica nuclear de grande importncia por que
nem todos os prtons de uma molcula tm ressonncia exatamente na
mesma frequncia.
Nas molculas, alguns ncleos de hidrognio esto em regies de
densidade eletrnica maior do que em outros; por isso, os ncleos
(prtons) absorvem energia em campos magnticos de intensidades
ligeiramente diferentes. Os sinais destes prtons, assim, aparecem em
diferentes posies no espectro de RMN. Tm-se, como se diz,
deslocamento qumico diferente.
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A intensidade do campo em que a absoro ocorre depende
sensivelmente das vizinhanas magnticas de cada prton.
Estas vizinhanas magnticas, por sua vez, dependem de dois
fatores: dos campos magnticos gerados pelos eltrons em movimento e
dos campos magnticos que provm de outros prtons vizinhos
(acoplamentos de spins entre os ncleos de
1
H).
A circulao dos eltrons de uma ligao sob a influncia de um
campo magntico externo gera diminuto campo magntico (campo
induzido) que blinda o prton em relao ao campo externo. No prton, o
campo induzido se ope ao campo externo. Isto quer dizer que o campo
magntico real que atua sobre o prton menor do que o campo
externo.
Um prton que est fortemente blindado pelos eltrons no pode
absorver a mesma energia que um prton de baixa blindagem, num mesmo
campo magntico externo.
Um prton blindado absorver energia num campo externo de
maior intensidade (ou em frequncias mais elevadas). O campo externo
deve ser mais intenso para compensar o efeito do pequeno campo
induzido. O grau de blindagem do prton pelos eltrons circulantes
depende da densidade eletrnica relativa em torno desse prton.
A densidade eletrnica em torno do prton, por sua vez, depende,
em grande parte, da presena de grupos eletronegativos. Quanto mais
prximo destes grupos "retiradores de eltrons", menos blindado estar
o prton.
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A deslocalizao de eltrons (ressonncia) tambm contribui
para a desblindagem do prton. Assim, prtons aromticos de anis
benznicos no so blindados, e absorvem energia num campo magntico
de baixa intensidade.
Em contrapartida, prtons ligados a carbonos de duplas e
triplas ligaes possuem blindagem relativamente alta, devido alta
densidade eletrnica das ligaes , e absorvem energia num campo
magntico mais alto.
Os deslocamentos qumicos so medidos na escala horizontal do
espectro, em Hertz (Hz), e normalmente expressos em partes por
milho (ppm), devido a estes deslocamentos serem muito pequenos em
comparao com a intensidade do campo magntico externo.
menor o campo
magntico sobre o ncleo
maior o campo
magntico sobre o ncleo
12 11 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 -1 -2
TMS
Menor proteo
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Para
1
H RMN, um padro interno mais comumente utilizado o
tetrameilsilano (TMS), Si(CH
3
)
3
. Este composto tem uma constante de
blindagem muito elevada; a maioria dos compostos, tm constante de
blindagem menor que o TMS.
A diferena entre a constante de blindagem do
TMS e a dos outros compostos chamada de
deslocamento qumico .
amostra cujo espectro esteja sendo levantado adiciona-se
pequena quantidade de TMS e toma-se o sinal dos 12 prtons
equivalentes do TMS como o ponto zero da escala.
Composto de referncia tetrametilsilano (TMS).
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H vrias razes para a escolha do TMS como composto de referncia:
Tem 12 tomos de hidrognio pequena quantidade provoca um
sinal relativamente forte.
tomos de hidrognio so equivalentes h um nico sinal, bem ntido.
Silcio menos eletronegativo que o carbono os prtons do TMS
esto em regies de grande densidade eletrnica esto muito
blindados sinal ocorre numa regio do espectro onde poucos tomos de
hidrognio absorvem energia.
TMS raramente interfere nos sinais de outros prtons.
Pode-se eliminar o TMS facilmente por evaporao.
Valores dependem
do solvente, da T e
da Concentrao
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Os valores de deslocamento qumico so sempre os mesmos, no
importando se a medio foi feita em 60 MHz ou 100 MHz, ou outro.
Assim, como os espectros de IV para movimentos vibracionais, os
deslocamentos qumicos observados nos espectros de RMN so,
geralmente, caractersticos dos diferentes tipos de grupos em uma
molcula.
Isto , grupos metil normalmente aparecem no espectro de RMN
deslocados em aproximadamente 1 ppm em relao ao TMS, hidrognios
em anis aromticos geralmente aparecem distantes em
aproximadamente 7-8 ppm do TMS, e assim por diante.
Faixas gerais de posies devidas a grupos especficos so
reunidas em mapas de correlao.
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Instrumentao
Espectrmetros de ressonncia magntica nuclear (RMN)
permitem medir a absoro de energia pelos ncleos de H
1
e C
13
, e
pelos ncleos de outros elementos quando conveniente.
Estes instrumentos utilizam magnetos muito poderosos e
irradiam a amostra com radiao eletromagntica na regio de
radiofrequncia (rf).
Dois tipos de espectrmetros de RMN, baseados em
diferentes projetos, so usados atualmente:
- espectrmetro de varredura (ou de onda contnua);
- espectrmetro de transformada de Fourier (FT)
Os espectrmetros de RMN podem ser projetados de modo a
irradiarem o composto com energia eletromagntica em uma
frequncia constante, variando (ou varrendo) ao mesmo tempo a fora
do campo magntico.
- campo magntico com intensidade adequada ncleos
absorvem a energia ressonncia uma pequena corrente eltrica
que flui ao longo de uma bobina receptora que envolve a amostra.
O instrumento ento amplifica esta corrente e exibe como um
sinal (um pico ou uma srie de picos) em um grfico, calibrado em
unidades de frequncia (Hz), o espectro de RMN.
Espectrmettro de RMN por varredura
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Esquema de um espectrmetro de RMN. Tubo da amostra (A), Bobina transmissora (B),
Bobinas de varredura (C), Bobina Receptora (D), Im (E)
Atualmente, o estada da arte dos instrumentos de RMN usa
magnetos supercondutores que possuem uma fora de campo magntico
muito maior que a de seus antecessores. Tambm empregam
computadores que permitem o ganho do sinal e depois um clculo
matemtico conhecido como transformada de Fourier.
Na prtica o instrumento acumula diversas varreduras dos
dados e os incorpora de modo a cancelar o rudo eletrnico randmico,
o que ressalta os sinais reais de RMN.
Possuem resoluo muito boa e sensibilidade muito maior que
os espectrmetros de varredura.
Espectrmettro de RMN de FT
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Ao invs de varrer o campo magntico ao mesmo tempo que a
amostra irradiada pela energia eletromagntica na regio de rf,
como no espectrmetro de varredura, o instrumento de FT irradia a
amostra com um pulso curto de radiao de rf (por aprox, 10
-5
s).
Esse pulso de rf excita todos os ncleos de uma s vez,
diferentemente da excitao individual de cada ncleo. Os dados
obtidos pelo mtodo da excitao por pulso, so diferentes daqueles
obtidos pelo mtodo de varredura.
Uma diferena que o mtodo da varredura leva de 2-5 minutos
para dar um espectro completo, enquanto que o mtodo de excitao por
pulso pode produzir um espectro num intervalo to curto quanto 5 s.
Outra diferena que o mtodo de varredura fornece
diretamente um espectro em funo da frequncia (Hz). Com o mtodo de
pulso, os dados so coletados em funo do tempo.
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Em um experimento de RMN pulsado, aps a excitao por um
pulso de rf o sinal detectado como uma voltagem na prova sensora do
RMN.
Aps a amplificao, o sinal convertido em uma srie de
pontos de dados e armazenado na memria do computador. Este
processo se repete at que se tenha dados suficientes para gerar um
sinal forte.
Os dados adquiridos so ento transformados pelo mtodo de
Fourier para o domnio da frequncia.
1. Equipamento de RMN comercial. A limitao na poca era a
intensidade do campo magntico, gerado por eletroim.
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Com o aparecimento do 1. Instrumento na dcada de 50, a
tcnica de RMN encontrou aplicao analtica.
Os primeiros instrumentos usavam eletroims ou ims
permanentes, com campos correspondendo a frequncias que variavam de
60 a 100 MHz.
A necessidade de maior resoluo e sensibilidade levou ao
desenvolvimento de instrumentos de 200 500 MHz, hoje muito
disseminados e produo de aparelhos com frequncia superior a 600
MHz apresenta tambm uma certa demanda, porm mais especfica.
Todos os instrumentos acima de 100 MHz baseiam-se em
magnetos supercondutores (solenides) resfriados com hlio e operam no
modo pulsado com transformada de Fourier.
Alm da necessidade de campo alto, procura-se uma boa
estabilidade e homogeneidade do campo de radiofrequncia.
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Um instrumento RMN de 900MHz
com um magneto de 21.2 T.
Manuseio da amostra
A amostra (normalmente numa soluo em solvente deuterado
contida em um tudo de vidro de 5mm) colocada no campartimento da
amostra (probe), onde esto as bobinas transmissora e receptora e um
orifcio de onde sai ar comprimido sobre o tubo, causando rotao em
torno de seu eixo vertical, de modo a compensar a falta de
homogeneidade do campo magntico.
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* As amostras a serem analisadas, sejam de fraes complexas
(misturas) ou de substncias puras, devem ser completamente solveis
nos solventes deuterados a serem empregados.
Caso este quesito no seja observado, a anlise obtida
apresentar um espectro de baixa qualidade, muitas vezes com sinais
alargados, devido presena de material insolvel na amostra. Desta
forma, a seleo do solvente deuterado mais adequado imprescindvel,
no somente para se obter anlises por RMN de boa qualidade, mas
tambm para se evitar manipulaes excessivas com a mesma amostra.
Logo, testar a solubilidade da amostra em diferentes solventes no-
deuterados antes de se preparar a amostra no tubo de RMN
importante. Os solventes deuterados mais utilizados so: CDCl
3
, DMSO-
d
6
, MeOH-d
4
, MeCN-d
3
, acetona-d
6
, benzeno-d
6
, D
2
O.
* O solvente ideal no deve conter hidrognio e deve ser inerte, apolar,
de baixo ponto de ebulio e barato.
O CCl
4
um bom exemplo de solvente e pode ser usado em
instrumentos de varredura contnua.
Os instrumentos de frequncia pulsada requerem deutrio para
efetuar e manter a calibrao da frequncia do campo. CDCl
3
usado
sempre que possvel.
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* A presena de traos de impurezas ferromagnticas causam o
alargamento dos picos de absoro.
So fontes comuns destas impurezas a gua de torneira, esponjas
de ao usadas em limpeza, vestgios de catalisador de Ni-Raney e
partculas oriundas de esptulas ou outros instrumentos metlicos.
Essas impurezas podem ser removidas mergulhando-se um
pequeno im no tubo de RMN, por filtrao ou por centrifugao.
1) A quantidade ideal de amostra 5-10mg para anlise de
1
H, ou acima
de 40mg para
13
C, dissolvidas em 600-700mL de solvente deuterado. As
amostras demasiadamente concentradas alargam as linhas do espectro de
1
H, enquanto que a amostras excessivamente diludas demandam um
tempo de anlise muito grande, principalmente para
13
C.
2) Partculas insolveis devem ser removidas da soluo atravs de
filtragem, pois elas prejudicam de sobremaneira o ajuste de
homogeneidade do campo magntico, produzindo linhas espectrais largas
e/ou distorcidas. Dica: essa filtragem pode ser feita no prprio frasco
da amostra aspirando a soluo com uma pipeta Pasteur atravs de um
pequeno pedao de algodo.
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3) Transferir a soluo o para um tudo de RMN de 5mm limpo, seco e
isento de trincas.
* Aps a obteno de todas as anlises de RMN que se deseja de uma
determinada amostra, esta deve ser imediatamente removida do tubo
de RMN. Se a amostra for deixada dentro do tubo, ela poder ficar
parcialmente impregnada em sua parede. Com o tempo, tal tubo de
RMN se tornar inadequado para anlises.
Se os tubos de amostra, estiverem muito sujos aps as amostras
terem sido removidas, podem ser limpos com soluo de sulfontrica
(HNO
3
/H
2
SO
4
1:1).
O tubo com sulfontrica deve ser deixado em um bquer contendo
gua dentro de um banho de ultrassom durante cerca de 15 a 30 minutos.
Deve-se remover a sulfontrica com uma pipeta Pasteur, lav-lo com gua
vrias vezes ao tubo (pelo menos 10 vezes), enxaguar o tubo com MeOH
ou EtOH e por fim com CH
2
Cl
2
.
Os tubos devem ser guardados abertos, ao abrigo de poeira,
sujeira, umidade e outros possveis contaminantes.