Nusindra Dwi Putra Dewangga

165090201111024
Kimia B

Spektrofotometri Sinar Tampak (UV-Vis) adalah pengukuran enegergi cahaya oleh

suatu system kimia pada gelombang tertentu. Sinar ultraviolet (uv) mempunyai panjang
gelombang Antara 200-400 nm, dan sinar tampak (visible) mempunyai panjang gelombang
antara 400-750 nm. Spektrofotometri digunakan untuk mengukur besarnya energy diabsorbsi
atau diteruskan. Sinar radiasi monokromatik akan melewati larutan yang mengandung zat yang
dapat menyerap sinar radiasi tersebut.

Hukum Lambert-Beer menyatakan hubungan linearitas Antara absorban dengan

konsentrasi larutan analit dan berbanding terbalik dengan transmitan. Dalam hokum Lambert-
Beer tersebut ada beberapa pembatasan yaitu :
1. Sinar yang digunakan dianggap monokromatis
2. Penyerapan terjadi dalam suatu volume yang mempunyai penampang yang sama
3. Senyawa yang menyerap dalam larutan tersebut tidak tergantung terhadap yang lain
dalam larutan tersebut
4. Tidak terjadi fluorensensi atau fosforisensi
5. Indeks bias tidak tergantung pada konsentrasi larutan.
Hukum Lambert-Beer dinyatakan dalam persamaan
A = a . b. c

Keterangan :

A= absorban
a = absorpsivitas molar
b = tebal kuvet
c = konsentrasi

Pengukuran panjang gelombang maksimum kafein dengan menggunakan pelarut

diklorometana secara spektrofotometri UV-VIS

Bahan- Bahan
Sampel kafein diperoleh dari Evan, Inggris dan biji kopi Arab disediakan oleh kopi dan teh
berkualitas di Ethiopia yang di dapatkan pada standar ekspor pusat. Sampel kopi juga
dikumpulkan dari selatan bagian dari wilayah Ethiopia (area spesifik adalah Benchi maji, Gediyo
yirgachefe, Tepi, Godere Goma limu, dan Besema) tanpa mempertimbangkan varietas mereka.
Setiap sampel kopi adalah diukur lima kali dan nilai rata-rata dan standar deviasi.

Alat-alat
Alat laboratorium yang digunakan adalah spektrofotometer UV / vis dengan model
SPECTRONIC GENESYSTM 2PC, dan celah lebar 2 nm dengan kuarsa kuvet 1 cm.
Spektrofotometer dihubungkan dengan komputer, yang dioperasikan oleh perangkat lunak
aplikasi WinSpecTM.
Karakterisasi dari kafein
Untuk karakterisasi kafein yang terionisasi dengan air dan diklorometana yang digunakan :
Massa 5,03 104 g kafein dilarutkan dalam air yang terionisasi sebesar 23.07 cm3 (c = 109,72 103
mol m3) dan kafein massa 3,05 104 g dilarutkan dalam 15,19 cm3 diklorometana (c = = 103,37
103 mol m3) diaduk selama 1 jam menggunakan pengaduk magnet. Absorbansi larutan diukur
oleh UV / vis spektrofotometer pada suhu kamar. Dari absorbansi penyerapan serapan molar
absorbansi dan momen dipol transisional kafein dalam air dan diklorometana masing-masing
dapat diperoleh.

Preparasi sampel kopi

Kopi mentah digiling dan disaring hingga 250 µm untuk mendapatkan tekstur yang seragam.
Jumlah kopi yang disaring (sekitar 50 mg) dilarutkan dalam 25 ml air suling. Larutan diaduk
selama satu jam menggunakan magnetic stirrer dan dipanaskan untuk menghilangkan kafein
dengan mudah dari larutan tersebut. Selain itu larutan disaring oleh filter kaca untuk
menyingkirkan partikel dari larutan.

Penentuan kadar kafein

Larutan kafein dipipet masing masing sebanyak 1,2,3,4,5 dan 6 ml ke dalam labu ukur 10 ml,
kemudian ditambahkan pelarut hingga tanda batas. Disaring masing masing dengan membrane
whatman PTFE 0,2 µm. Kemudian dipindahkan ke botol vial. Disonifikasi selama 5 menit.
Diinjeksikan ke system HPCL dengan volume penyuntikan 20 µL dan dibuat kurva kalibrasi

Gaussian Fit
Selain spektrum kafein ada yang mengganggu pita dari komponen kopi lain yang diekstrak oleh
diklorometana
dan puncak puncak gelombang ini diamati padapanjang gelombang 308–310 nm. Senyawa-
senyawa dikenal sebagai asam klorogenat (asam p-coumaroquinic). Sudah jelas bahwa asam
klorogenat menyebabkan gangguan pada puncak maksimum kafein. Oleh karena itu, dalam
matriks penelitian ini dihilangkan oleh Gaussian fit. Absorbansi puncak untuk menghitung
konsentrasi kafein diperoleh setelah mengurangi fit Gaussian dari total spektra kafein.

Hasil dan Pembahasan

Spektrum penyerapan UV-vis kafein dalam air dan diklorometana. Spektrum penyerapan UV-vis
kafein dalam air ditemukan berada di wilayah 243–302 nm pada suhu kamar. Hal ini jelas
ditunjukkan pada Gambar. 1 bahwa intensitas spektrum kafein turun menjadi nol pada panjang
gelombang lebih besar dari 302 nm, di sisi lain absorbansi puncak baru adalah pada panjang
gelombang di bawah 243 nm. Spektrum baru ini diharapkan menjadi absorbansi puncak karena
pelarut. Absorbansi puncak larutan A = 1,224 pada panjang gelombang maksimum = 272 nm.
Absorpsi puncak maksimum untuk kafein diamati pada percobaan ini sangat mirip dengan yang
dilaporkan oleh Clarke dan Macrae (1985). Penyerapan desades molar koefisien mengukur
intensitas penyerapan optik pada panjang gelombang tertentu dihitung menggunakan hukum
Lambert Beer (Liptay, 1969). Penyerapan desades molar koefisien kafein dalam air dihitung dan
nilai Ɛmax = 1115 m2 mol-1 . Demikian pula, spektrum penyerapan UV / vis kafein dalam
diklorometana ditemukan berada di wilayah 243–301 nm. Puncak absorbansi A = 1,043
diperoleh pada panjang gelombang maksimum = 274,7 nm. Dekadik molar koefisien penyerapan
kafein dalam diklorometana Ɛmax =1010 m2 mol-1 .

Ekstraksi dilakukan empat kali hingga spektrum kafein menjadi datar ketika dilihat di bawah UV
/ vis spektrofotometer. Gambar 6 di bawah ini menunjukkan absorbansi puncak terhadap panjang
gelombang spektrum kafein diekstraksi menggunakan diklorometana dari larutan air pada
berbagai tahap. Ini jelas ditunjukkan dalam Gambar 6 bahwa konsentrasi kafein pada setiap
tahap berbeda, maka ukuran absorbansi puncak juga bervariasi. Dari hasil yang diperoleh
konsentrasi kafein tinggi pada tahap pertama ekstraksi. Apalagi dilihat dari grafik hampir tidak
ada puncak kafein terlihat pada empat kali ekstraksi. spektrum yang mengganggu diamati pada
panjang gelombang 308 nm seperti yang ditunjukkan pada Gambar. 8. Dari literatur melaporkan
senyawa yang diserap di wilayah ini adalah milik senyawa asam klorogenik (p-
coumaroyquinicasam) (Martin, 1970; Clarke et al., 1985). Telah melaporkan bahwa asam
klorogenat membuat kompleks dengan Kafein. Gambar 7 menunjukkan spektra kafein
dalam biji kopi yang diekstrak oleh diklorometana sebelum dengan Gaussian Fit Gambar. 8
menunjukkan spektrum kafein dengan Gaussian fit dan Gambar. 9 spektrum kafein setelah
dikurangi Gaussian fit.
Berdasarkan pengolahan data, kisaran konsentrasi yang didapatkan dari hasil percobaan adalah
43, 2736 ppm dengan kadar kafein yang didapatkan sebesar 50,2349 mg.

DAFTAR PUSTAKA
Alpdogan, G., Karbina, K., & Sungur, S. (2002). Derivative spectrophotometer determination of
caffeine in some
beverages. Turkish Journal of Chemistry, 26, 295–302.
Clarke, R. J., & Macrae, R. (1985). Coffee chemistry (Vol. 1). Amsterdam: Elsevier Applied
Science, pp. 124–125.
Clarke, R. J. (1980). In Proceedings of the 9th Coll. ASIC (pp. 467–472).
Farah, A., Monteiro, M. C. M., Calado, V., Franca, A. S., & Trugo, L. C. (2006). Correlation
between cup quality
and chemical attributes of Brazilian coffee. Journal of Food Chemistry, 98, 373–380
Liptay, W. (1969). Electrochromism and solvatochromism. Angewandte Chemie, International
Edition, 8(3), 177
187.
Martin, F. W. (1970). The ultraviolet absorption of profile of stigmatic extracts. New
Phytologist, 69, 425–430.
Rofti, J. (1971). In Proceedings of the 5th Coll. ASIC (pp. 179–200).