TESIS

PEMBERIAN EKSTRAK BUAH MAHKOTA DEWA

(Phaleria macrocarpa) MENURUNKAN KADAR
MALONDIALDEHID DARAH TIKUS PUTIH (Rattus
norvegicus) YANG DIINDUKSI AKTIVITAS FISIK
BERLEBIH

I GUSTI AYU DIAH SAWITRI

PROGRAM PASCASARJANA
UNIVERSITAS UDAYANA
DENPASAR
2011

TESIS

PEMBERIAN EKSTRAK BUAH MAHKOTA DEWA

(Phaleria macrocarpa) MENURUNKAN KADAR
MALONDIALDEHID DARAH TIKUS PUTIH (Rattus
norvegicus) YANG DIINDUKSI AKTIVITAS FISIK
BERLEBIH

I GUSTI AYU DIAH SAWITRI

NIM : 0890761004

PROGRAM MAGISTER
PROGRAM STUDI ILMU BIOMEDIK
PROGRAM PASCASARJANA
UNIVERSITAS UDAYANA
DENPASAR
2011

Lembar Pengesahan

USULAN PENELITIAN INI TELAH DISETUJUI

TANGGAL

Pembimbing I,

Pembimbing II,

Prof. dr. I Gusti Made Aman, Sp.FK

Prof. dr. N Agus Bagiada, Sp.Biok

NIP. 19460619 197602 1001

NIP. 19410320 196801 1001

Mengetahui,
Ketua Program Studi Magister

Direktur

Program Pascasarjana

ProgramPascasarjana

Universitas Udayana,

Universitas Udayana,

Prof.Dr.dr.Wimpie I. Pangkahila,Sp.And,FAACS

Prof.Dr.dr.A.A.Raka
Sudewi .SpS(K)

NIP: 19461213 197107 1001

NIP:195902151985102001

Usulan Penelitian Ini Telah Diuji pada

Tanggal : 2011........
........................

Panitia Penguji Tesis Berdasarkan SK Rektor Univeristas Udayana,

No :
Tanggal :

2011

Ketua : Prof. dr. I Gusti Made Aman, Sp.FK of. dr. I Gst. Md. Aman, Sp.FK
Anggota :
1. Prof. dr. N Agus Bagiada, Sp.Biok
2. Prof. Dr. dr.J.Alex Pangkahila, M.Sc,Sp. And
3. Prof. Dr. dr. Wimpie I.Pangkahila ,SpAnd,FAACS
4. Dr .dr Ida Sri Iswari , Sp.MK,M,Kes

ABSTRAK
PEMBERIAN EKSTRAK BUAH MAHKOTA DEWA ( Phaleria
macrocarpa) MENURUNKAN KADAR MALONDEALDEHID
DARAH TIKUS PUTIH (Rattus norvegicus) YANG DIINDUKSI
AKTIVITAS FISIK BERLEBIH
Sel-sel tubuh dan jaringan secara terus menerus dipapar oleh senyawa
oksigen reaktif yang menyebabkan kerusakan oksidatif. Aktivitas fisik berlebih
memicu pembentukan radikal bebas, yang erat kaitannya dengan terjadinya
penyakit dan proses penuaan. Aktivitas fisik berlebih menyebabkan stres oksidatif
yang dapat meningkatkan malondialdehid. Stres oksidatif adalah keadaan
terjadinya ketidakseimbangan antioksidan dengan oksidan tubuh. Antosianin
adalah antioksidan kuat yang banyak terdapat dalam buah, sayuran ,
red wine dan buah mahkota dewa . Buah mahkota dewa mengandung antioksidan
yang dapat meredam efek buruk dari radikal bebas. Tujuan dari penelitian ini
adalah untuk mengetahui pengaruh buah mahkota dewa sebagai sumber
antioksidan dalam menurunkan malondialdehid pada darah tikus putih yang
diinduksi aktivitas fisik berlebih
Penelitian ini merupakan studi eksperimental dengan rancangan pretestpostest control group. Ada 30 ekor tikus putih yang dibagi menjadi 2 kelompok,
kelompok kontrol, kelompok perlakuan. Kelompok perlakuan diberikan ekstrak
buah mahkota dewa dosis 300mg/ 200gram BB tikus. Selama perlakuan semua
kelompok direnangkan 1 jam setiap hari selama 14 hari. Semua kelompok
dilakukan pemeriksaan laboratorium malondialdehid diawal dan diakhir
perlakuan.
Analisis dengan uji normalitas (Shapiro-Wilk ) dan homogenitas (Levene
test) diperoleh data berdistribusi normal dan homogen, (p>0,05). Analisis
komparatif dari pre-post test menggunakan uji t-independent, terdapat penurunan
yang bermakna kadar malondialdehid (p< 0,05). Kelompok yang menkonsumsi
ekstrak buah mahkota dewa memiliki penurunan kadar malondialdehid secara
bermakna sebesar 45,17 %
Dari hasil penelitian ini, dapat disimpulkan bahwa ekstrak buah mahkota
dewa, dapat menurunkan kadar malondialdehid , sehingga menurunkan risiko
timbulnya penyakit serta memperlambat proses penuaan. Sebagai saran dalam
penelitian ini adalah perlu dilakukan penelitian manfaat buah mahkota dewa lebih
lanjut pada manusia

Kata kunci : ekstrak buah mahkota dewa, aktivitas fisik berlebih ,tikus, MDA.

ABSTRACT
ADMINISTRATION OF MAHKOTA DEWA FRUIT EXTRACT (Phaleria
macrocarpa) DECREASE MALONDIALDEHYDE CONCENTRATION IN
WHITE RAT (Rattus norvegicus) INDUCED BY OVER TRAINING
Body cells and tissues are continuously exposed by reactive oxygen
species. Over training is triggering the formation of free radical which is related
with the occurrence of diseases and the aging process. Over training caused
oxidative stress and increase malondialdehid level. The oxidative stress is an
imbalance condition between antioxidants and oxidants in the body. Anthocyanins
are potent antioxidants that are widely distributed in fruit, vegetables, red wine
and mahkota dewa. The aim of this study was to determine the effect of mahkota
dewa fruit extract as a source of antioxsidants in decreasing the level of
malondialdehyde in white rat induced by over training.
This study was conducted at the Department of Pharmacology and
Clinical Pathology Faculty of Medicine Udayana University
using an
experimental study with pretest-posttest control group design. There are 30 white
rat, divided into two groups, control group and treatment group.Treatment group
was given dose of mahkota dewa fruit extract about 300mg/ 200 gram bodyweight
white rat. all group had been swum 1 hour for 14 days. The laboratory
examinations of malondialdehyde level were performed all group before and after
s treatment.
Analysis by Shapiro Wilk and Levene test that there were not significantly
difference (p> 0,005) between control group and treatment group. Comparative
analysis of pre- post test with t-independent test, there was a significant (p<0,05)
decrease in malodialdehyde, in the amount of 45,17%.
This study concluded that mahkota dewa fruit extract can inhibit oxidative
stress, may play reducing malondialdyde and thus reducing risk of disease and
slowing the aging process. As a suggestion in this study is the need to conduct
further research to determine effect of fruit extract of mahkota dewa for human.
Keywords : fruit extract mahkota dewa , over exercise, white rat , MDA

DAFTAR ISI

Sampul Dalam ............................................................................................. i

Prasyarat Gelar........................................................................................... ii
Lembar Pengesahan.................................................................................... ii
Penetapan Panitia Penguji.......................................................................... iii
Abstrak

.................................................................................................. iv

Abstract

................................................................................................... v

Daftar Isi ................................................................................................... vi

Daftar Singkatan dan Lambang ................................................................. x

BAB I

PENDAHULUAN

1.1

Latar Belakang .................................................................................

1.2

Rumusan Masalah .............................................................................

1.3

Tujuan Penelitian.... ...........................................................................

1.3.1 Tujuan Umum ...................................................................................

1.3.2 Tujuan Khusus ..................................................................................

1.4

Manfaat Penelitian .............................................................................

1.4.1 Manfaat Ilmiah ..................................................................................

1.4.2 Manfaat Klinis...................................................................................

1.4.3 Manfaat Sosial...................................................................................

BAB II
2.1

KAJIAN PUSTAKA

Teori Proses Penuaan ........................................................................

2.1.1 Teori Radikal Bebas ..........................................................................

2.1.2 Teori Wear and Tear ..........................................................................

10

2.1.3 Teori Neuroendokrin .........................................................................

11

2.1.4 Teori Kontrol Genetika ......................................................................

11

2.2

Radikal Bebas....................................................................................

12

2.2.1 Definisi Radikal Bebas ......................................................................

12

2.2.2 Sifat-sifat Radikal Bebas ...................................................................

13

2.2.3 Tahapan Terbentuknya Radikal Bebas ...............................................

15

2.2.4 Peranan Radikal Bebas Dalam Proses Penuaan ..................................

16

2.3

Stres Oksidatif ...................................................................................

18

2.3.1 Keadaan Yang Menimbulkan Stress Oksidatif ...................................

18

2.3.2 Malondialdehid (MDA) Sebagai Biomaker Stres Oksidatif ................

19

2.4

Peroksidasi Lipid ...............................................................................

20

2.5.

Aktifitas fisik berlebih .......................................................................

22

2.6

Antioksidan .......................................................................................

24

2.6.1 Definisi Anti Oksidan ........................................................................

24

2.6.2 Jenis-Jenis Anti Oksidan....................................................................

24

2.6.3 Pengukuran Anti Oksidan ..................................................................

26

2.7

Mahkota Dewa ..................................................................................

27

2.7.1 Deskripsi Mahkota Dewa...................................................................

27

2.7.2 Senyawa Bioaktif dan Manfaatnya.....................................................

28

2.8

Hewan Coba Tikus ...........................................................................

32

BAB III KERANGKA BERPIKIR, KONSEP DAN HIPOTESIS

PENELITIAN
3.1

Kerangka Berpikir .............................................................................

34

3.2

Konsep Penelitian .............................................................................

35

3.2

Hipotesis Penelitian ...........................................................................

35

BAB IV METODE PENELITIAN

4.1

Rancangan Penelitian ........................................................................

36

4.2

Tempat dan Waktu Penelitian ............................................................

37

4.3

Sampel ..............................................................................................

37

4.3.1 Besar Sampel ....................................................................................

37

4.3.2 Kriteria Sampel .................................................................................

38

4.4

Variabel Penelitian ............................................................................

38

4.4.1 Identifikasi variabel dan klasifikasi variabel ......................................

38

4.4.2 Definisi operasional variabel .............................................................

39

4.5

Prosedur Penelitian ............................................................................

40

4.5.1 Prosedur Pembuatan Ekstrak Buah Mahkota Dewa ...........................

40

4.5.2 Pemilihan dan Pemeliharaan Hewan Uji ............................................

40

4.5.3 Prosedur Perlakuan ............................................................................

41

4.5.4 Pengujian Ekstrak Buah Mahkota Dewa PadaTikus Wistar ..............

41

4.5.5 Alur Penelitian ..................................................................................

42

4.6

Alat dan Bahan Penelitian..................................................................

43

4.6.1 Alat-alat ............................................................................................

43

4.6.2 Bahan-bahan......................................................................................

43

4.7

Prosedur Pengumpulan Data ..............................................................

44

4.7.1 Pengukuran Kadar MDA ...................................................................

44

4.8

44

Analisis Data .....................................................................................

BAB V HASIL PENELITIAN

5.1

Uji Normalitas Data...........................................................................

45

5.2

Uji Homogenitas Data Antar Kelompok ............................................

46

5.3

Kadar MDA ......................................................................................

47

5.3.1 Uji Komparabilitas ............................................................................

47

5.3.2 Analisis Efek Perlakuan.....................................................................

47

BAB VI PEMBAHASAN HASIL PENELITIAN

6.1

Subjek Penelitian ...............................................................................

51

6.2

Pengaruh Ekstrak Buah Mahkota Dewa Terhadap Kadar MDA .........

52

BAB VII Simpulan dan Saran

7.1

Simpulan ...........................................................................................

57

7.2

Saran .................................................................................................

57

DAFTAR PUSTAKA ..................................................................................

58

LAMPIRAN
Lampiran 1 Konversi Perhitungan Dosis Untuk Beberapa Jenis Hewan
dan Manusia
lampiran 2 Ethical Clearance
Lampiran 3 Uji normalitas Data MDA
Lampiran 4 Uji komparasi
Lampiran 5 Tabel
Lampiran 6 Grafik

DAFTAR SINGKATAN DAN LAMBANG

SINGKATAN
AAM

: Anti Aging Medicine

cm

: centimeter

DNA

: Deoxyribonucleic acid

kg

: kilogram

MDA

: Malondialdehide

mg

: miligram

ml

: mililiter

: miliMolar

mmol

: milimol

nm

: nanometer

NO

: Nitric Oxide

PUFA

: Polyunsaturated Fatty Acids

ROS

: Reactive Oxygen Species

SNR

: Senyawa Nitrogen Reaktif

SOD

: Superoxide Dismutase

SOR

: Senyawa Oksigen Reaktif

TBA

: Thiobarbituric Acid

TBARSC

: Thiobarbituric Acid Reactive Substances

UV

: Ultraviolet

: mikroliter

LAMBANG
: mikron
: alpha
: beta

BAB I
PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Dalam kehidupan, manusia amat tergantung kepada alam sekeliling. Yang
paling mendasar manusia memerlukan oksigen, air serta sumber bahan makanan
yang disediakan alam. Untuk menjalankan metabolisme
memerlukan oksigen. Oksigen

tubuhnya manusia

merupakan elemen yang sangat diperlukan

untuk kehidupan, tetapi juga memiliki efek destruksif terhadap tubuh manusia.
Proses metabolisme normal pun akan menimbulkan reaksi negatif untuk tubuh.
Gaya hidup yang tidak sehat akan mempercepat proses penuaan bahkan
menimbulkan penyakit yang mempercepat kematian.
Menjadi impian setiap manusia agar memiliki usia panjang dan tetap sehat.
Menua adalah proses alami yang pasti terjadi pada setiap mahluk hidup. Seiring
dengan bertambahnya usia, terjadi perubahan pada seluruh komponen tubuh
secara alamiah. Proses yang terjadi di seluler, fungsi organ maupun di jaringan
secara fisiologis juga mulai mengalami penurunan, menua, sampai timbul
berbagai penyakit yang berhubungan dengan proses penuaan tersebut.
Ilmu Kedokteran Anti Penuaan memberikan paradigma baru mengenai proses
penanganan penuaan. Penuaan dapat diperlakukan atau dianggap sebagai suatu
penyakit yang dapat dicegah, diobati dan bahkan di kembalikan ke keadaan
semula ( Pangkahila, 2007).

Banyak faktor yang menyebabkan orang menjadi tua, tetapi secara garis
besar faktor tersebut dapat dikelompokkan menjadi dua yaitu faktor internal dan
faktor eksternal (Pangkahila, 2007). Terdapat banyak teori penuaan tetapi belum
terbukti sepenuhnya, masing masing teori saling melengkapi. Teori yang paling
banyak dibahas adalah teori Radikal Bebas.
Teori ini menekankan bahwa radikal bebas dapat merusak sel tubuh
manusia (Goldman dan Klatz, 2003). Oksigen merupakan molekul reaktif tinggi
yang merusak organisme hidup dengan memproduksi Senyawa Oksigen Reaktif
(SOR) Efek destruktif radikal bebas serta potensinya dalam menimbulkan
berbagai kelainan maupun penyakit dibicarakan secara luas. Radikal bebas
adalah senyawa atau atom yang memiliki elektron tidak berpasangan pada orbit
luarnya sehingga bersifat amat reaktif terhadap sel atau komponen sel
sekitarnya. Pembentukan radikal bebas berlangsung terus menerus di dalam sel
sebagai konsekuensi dari reaksi enzimatik dan non enzimatik ( Droge, 2002)
Radikal bebas berasal dari dalam (endogen) dan luar (eksogen) tubuh.
Radikal bebas endogen yaitu inflamasi, iskemia/reperfusi, xantine oxidase, jalur
arrachidonate, peroxisomes, mitokondria dan fagositosis. Sumber radikal bebas
eksogen antara lain radiasi, sinar ultraviolet, pestisida, aktifitas fisik berlebih,
polusi lingkungan dan ozon. Radikal bebas diyakini dapat menimbulkan
kerusakan sel dan komponen sel seperti lipid, protein, DNA, serta dapat
menyebabkan mutasi dan bersifat karsinogenik (Thannical dan Fanburg, 2000;
Droge, 2002; Clarkson dan Thomson, 2000) .

Efek merugikan yang ditimbulkan oksigen sebagian besar mengarah

terhadap pembentukan dan aktivitas sejumlah komponen kimia, yang dikenal
sebagai Senyawa Oksigen Reaktif (SOR). Banyak diantara senyawa reaktif
tersebut adalah radikal bebas yang memiliki kelebihan satu atau lebih elektron
yang tidak berpasangan, sehingga menjadi tidak stabil dan reaktif.
Salah satu faktor eksternal yang mempercepat proses penuaan adalah
aktivitas fisik berlebih, dengan meningkatkan konsumsi oksigen sampai 100 200 kali lipat. Karena terjadi peningkatan metabolisme tubuh, peningkatan
inflamasi dan penggunaan oksigen terutama oleh otot-otot yang berkontraksi,
sehingga terjadi peningkatan kebocoran elektron bebas oleh mitokondria, yang
akan menjadi SOR (Sauza, 2005). Umumnya 2-5 % dari oksigen yang dipakai
dalam proses akan menjadi ion superoksid, sehingga saat aktivitas fisik berat
terjadi peningkatan produksi radikal bebas
SOR sebagian berbentuk radikal seperti radikal hidroksil ( OH), radikal
peroksil ( OOH) dan ion superoksida (O2-). Diantara senyawa radikal yang
paling reaktif adalah senyawa hidroksil, sehingga paling berbahaya. Bila produk
radikal bebas melebihi kemampuan adaptasi dari enzim antioksidan, maka
terjadi suatu keadaan yang dikenal dengan stres oksidatif (oxidative stress).
Peristiwa ini mengakibatkan kerusakan fungsi selular melalui terjadinya mutasi
DNA, cleavage of DNA dan agregasi biomolekul melalui cross-linking reaction.
Tubuh manusia secara terus menerus dipapar oleh berbagai zat toksin, baik
dari lingkungan ataupun dari komponen hasil metabolisme tubuh. Target utama
radikal bebas adalah protein, asam lemak tak jenuh dan lipoprotein, serta unsur

DNA termasuk karbohidrat. Dari ketiga target tersebut, yang paling rentan
terhadap serangan radikal bebas adalah asam lemak tak jenuh. Sebuah radikal
bebas mengambil elektron dari membran lipid sel, memulai serangan radikal
bebas pada sel yang dikenal sebagai peroksidasi lipid. Peroksidasi lipid
merupakan

reaksi rantai yang diinisiasi oleh serangan radikal bebas pada

fosfolipid dan polyunsaturated fatty acid pada membran selular atau organel
subsellular menghasilkan pembentukan suatu kompleks aldehid, keton dan hasil
polimerasi yang bereaksi dan merusak biomolekul, enzim dan asam nukleat
yang dapat menyebabkan penuaan (aging). Salah satu konversi oksidatif dari
polyunsaturated fatty acid menjadi produk yang disebut malondialdehid (MDA)
atau lipid peroksida. Lipid peroksida ditemukan juga pada manusia sehat, yang
mengindikasikan bahwa radikal bebas oksigen juga diproduksi dalam
metabolisme tubuh normal (Pasupathi,2009). MDA merupakan salah satu
maker yang baik dan banyak digunakan untuk peroksidasi lipid (Saxena &Lal,
2006)
Aktivitas fisik berat dan pengaruh lingkungan yang menyebabkan radikal
bebas sulit dihindari, sehingga perlu usaha untuk meningkatkan antioksidan di
dalam tubuh. Antioksidan dapat melindungi tubuh dari sejumlah penyakit
dengan menghindarkan dari efek destruksif yang ditimbulkan radikal bebas.
Konsumsi antoksidan dalam diet sehari hari dapat menunda proses penuaan.
Antioksidan dapat melindungi biomolekul terhadap stress oksidatif sehingga
dapat menurunkan risiko penyakit kardiovaskuler, kanker dan menghambat
proses penuaan (Cooper, 2001)

Antioksidan adalah suatu senyawa yang dapat menghambat atau mencegah

kerusakan karena oksidasi pada suatu molekul target. Antioksidan dapat dibagi
menjadi dua golongan, yaitu antioksidan pencegah (preventive antioxidant) atau
enzimatik antioksidan dan oksidan pemutus rantai (chain breaking antioxidan)
atau non enzimatik antioksidan. Antioksidan pencegah terdiri dari Superoxide
Dismutase (SOD), Glutation Peroksidase (GPx), dan Katalase. Antioksidan
pemutus rantai termasuk vitamin C, Vitamin E,

karoten, gluthation dan

flavonoid.
Salah satu antioksidan golongan flavonoid adalah antosianin. Antosianain
termasuk golongan flavonoid yang merupakan antioksidan non enzimatik atau
antioksidan pemutus rantai (Winarsi, 2007). Penelitian sebelumnya menyatakan
bahwa flavonoid dan sumber polifenol lainnya secara signifikan berkontribusi
terhadap aktivitas antioksidan total tubuh.
Penggunaan antioksidan alami saat ini dipilih karena dianggap lebih aman
dibandingkan dengan antioksidan sintesis, karena antioksidan alami berasal dari
ekstrak tanaman. Buah Makota Dewa (Phaleria macrocarpa) merupakan salah
satu sumber antioksidan yang mudah dibudidayakan di Indonesia serta memiliki
harga yang relatif murah. Selama ini ekstrak tanaman makota dewa baik daun,
kulit buah maupun daging buah digunakan sebagai obat-obat (terapi) alternatif
di berbagai daerah di Indonesia. Masyarakat belum memanfatkan tanaman
mahkota dewa sebagai pencegah (preventif) penyakit. Terbatas sekali
penelitiaan yang meneliti khasiat antioksidan dari ekstrak tanaman makota dewa
ini. Penelitian yang meneliti hubungan pemberian antioksidan ekstrak buah

mahkota dewa dengan penurunan kadar MDA dalam darah sampai saat ini
belum ada.
Menurut

Rohyami (2008), didapatkan senyawa flavonoid terbanyak

didapat pada daging buah tua dari mahkota dewa. Semakin tinggi flavonoid
semakin tinggi kadar anti oksidannya. Flavonoid adalah suatu antioksidan alam
dan mempunyai aktivitas biologis, antara lain sebagai antioksidan yang dapat
menghambat berbagai reaksi oksidasi serta mampu bertindak sebagai pereduksi
radikal hidroxil, superoksida dan radikal peroxil. Diperlukan penelitian lebih
lanjut untuk mengetahui fungsi ekstrak buah mahkota dewa sebagai antioksidan
dalam menurunkan kadar Malondialdehyde (MDA) pada darah tikus Wistar
(Rattus norvegicus).

1.2

Rumusan Masalah
Berdasarkan latar belakang di atas, maka dapat ditetapkan perumusan

masalah sebagai berikut:

1.

Apakah pemberian ekstrak buah Mahkota Dewa (Phaleria macrocarpa)

dapat menurunkan kadar MDA darah tikus putih (Rattus norvegicus)
pada kondisi stres oksidatif yang diinduksi aktivitas fisik berlebih?

1.3

Tujuan Penelitian

1.3.1 Tujuan Umum

Untuk mengetahui peran ekstrak buah Mahkota Dewa (Phaleria
macrocarpa) sebagai antioksidan dalam mengurangi stress oksidatif oleh

radikal bebas pada tikus wistar (Rattus novergicus) yang diinduksi aktivitas
fisik berlebih.

1.3.2 Tujuan khusus

Untuk mengetahui pemberian ekstrak buah Makota Dewa (Phaleria
macrocarpa) menurunkan kadar MDA darah tikus Wistar yang diinduksi
aktivitas fisik berlebih.

1.4

Manfaat Penelitian

Manfaat yang diperoleh dari penelitian ini adalah sebagai berikut :

1.4.1 Manfaat Ilmiah
Memberikan informasi mengenai manfaat ekstra buah Makota Dewa
(Phaleria macrocarpa) dalam upaya mencegah terjadinya stress oksidatif
sebagai salah satu penyebab proses penuaan dan penyakit metabolisme dan
kemungkinan dapat dipergunakan sebagai dasar untuk dilakukan penelitian
lebih lanjut pada manusia.
1.4.2 Manfaat Klinis
Secara klinis ekstrak buah Mahkota Dewa (Phaleria macrocarpa) yang
menurunkan kadar MDA darah, dapat digunakan sebagai sumber antioksidan
alternatif untuk mengatasi keadaan stres oksidatif.
1.4.3 Manfaat Sosial
Sebagai acuan bagi masyarakat untuk memahami manfaat daging buah
Mahkota Dewa (Phaleria macrocarpa) terhadap stres oksidatif yang
diakibatkan oleh aktivitas fisik berlebih.

BAB II
KAJIAN PUSTAKA

2.1 Teori Proses Penuaan

Proses menua tidak terjadi dengan sendirinya tanpa penyebab, banyak
faktor yang terjadi baik secara internal maupun eksternal yang berpengaruh
mempercepat proses penuaan. Sejak tahun 1950 mulai diteliti berbagai faktor
yang mempengaruhi kualitas hidup agar tetap baik di usia lanjut. Modifikasi
gaya hidup yang sehat harus dilakukan, seperti : tidak merokok, meningkatkan
aktivitas fisik, mengatur pola makan, agar memiliki kualitas hidup yang baik di
usia lanjut. Beberapa penelitian menyimpulkan diperlukan pemberdayaan diri,
membudayakan pola hidup sehat akan meningkatkan kualitas hidup (Franklin,
2009)
Ilmu Kedokteran Anti-Penuaan menciptakan paradigma baru terhadap
proses penuaan dan penanganannya. Ke depannya Ilmu Kedokteran AntiPenuaan memberikan janji untuk mengatasi ketidakmampuan, deformitas,
nyeri, penyakit dan kesedihan di masa tua (Goldman dan Klatz, 2003). Penuaan
dapat dianggap atau diperlakukan sebagai suatu penyakit yang dapat dicegah,
diobati dan bahkan dikembalikan ke keadaan semula (Pangkahila, 2007)
Terdapat empat teori utama yang menjelaskan terjadinya proses
penuaan, walaupun tidak ada yang menjelaskan secara lengkap mengapa terjadi
proses penuaan. Teori tersebut saling melengkapi satu dengan yang lainnya.

2.1.1 Teori Radikal Bebas

Radikal bebas adalah suatu molekul yang mempunyai satu atau lebih
elektron tidak berpasangan pada orbit luarnya, dapat bereaksi dengan molekul
lain, menimbulkan reaksi berantai yang sangat destruktif (Goldman dan Klatz,
2003)
Radikal bebas bersifat sangat reaktif. Radikal bebas akan merusak
membran sel, DNA, dan protein. Beribu-ribu studi mendukung ide bahwa
radikal bebas mempunyai konstribusi yang besar pada terjadinya penyakit yang
berhubungan dengan proses penuaan seperti penyakit jantung, hipertensi,
kanker .
Radikal bebas merusak struktur membran sel, menghasilkan produk sisa,
termasuk substrat yang dikenal sebagai lipofuscins. Jumlah lipofuscins yang
tinggi dalam tubuh akan memberikan warna kulit yang gelap pada daerah
tertentu, dikenal sebagai age spots; indikasi residu metabolit yang besar
bersumber dari kerusakan sel. Lipofuscins mengganggu sintesis DNA dan
RNA, mempengaruhi sintesis protein (menurunkan energi dan menghambat
pembentukan massa otot), merusak enzim seluler yang diperlukan untuk proses
kimia vital dalam tubuh (Goldman dan Klatz, 2003).
Kerusakan yang ditimbulkan akibat radikal bebas dimulai ketika lahir
dan terus berlanjut hingga meninggal. Saat muda dampak yang ditimbulkan
bersifat minimal, karena tubuh memiliki mekanisme perbaikan dan penggantian
sel yang berfungsi baik. Dengan bertambahnya usia akumulasi kerusakan akibat
radikal bebas akan mengganggu metabolisme sel, menyebabkan mutasi sel yang
dapat menimbulkan kanker dan kematian.

Radikal

bebas

akan

memepengaruhi

peroksidasi

lipid

yang

menyebabkan produksi MDA yang mengikat protein dan menyebabkan

gangguan fungsi biologik protein tersebut. Radikal bebas juga berkaitan dengan
penyakit usia lanjut seperti aterosklerosis, penyakit Parkinson, penyakit
Alzheimer, dan gangguan fungsi kekebalan tubuh (Pangkahila, 2007).
Radikal bebas terjadi akibat reaksi oksidasi yaitu proses penambahan
oksigen kedalam substrat. Oksigen berlebih merupakan sumber radikal bebas.
Substrat untuk mencegah efek buruk radikal bebas dikenal sebagai antioksidan.
Antioksidan melindungi sel dengan menetralkan radikal bebas (Bagiada, 2001).
2.1.2 Teori Wear and Tear
Ahli biologi dari Jerman, Dr.August Weisman, memperkenalkan teori
ini pada tahun 1882. Menurut teori ini, tubuh dan sel akan rusak karena
digunakan atau disalahgunakan. Organ tubuh seperti hati, ginjal, kulit, lambung
akan menurun fungsinya karena toksik dalam makanan, lingkungan, sinar
ultraviolet, stres fisik dan emosional. Kerusakan terjadi dalam sel sampai ke
organ.
Penyalahgunaan organ tubuh akan mempercepat kerusakan, oleh kerena
penggunaan secara alamipun akan merusak organ. Pada masa muda sistem
pemeliharaan dan perbaikan mampu melakukan kompensasi terhadap kerusakan
berlebih. Dengan bertambahnya umur, tubuh mulai kehilangan kemampuan
memperbaiki kerusakan. Teori ini meyakini pemberian suplement dan
pengobatan yang lebih awal akan membantu mengendalikan proses penuaan.
Mekanismenya dengan merangsang kemampuan tubuh untuk melakukan
perbaikan dan mempertahankan organ tubuh dan sel .

2.1.3 Teori Neuroendokrin

Pada usia muda berbagai hormon bekerja dengan baik mengendalikan
berbagai fungsi organ tubuh, sehingga berfungsi optimal (Goldman and Klatz,
2003).
Hormon bersifat vital dalam mengatur dan memperbaiki fungsi tubuh.
Ketika manusia menjadi tua, produksi hormon juga menurun, akibatnya
berbagai fungsi

tubuh terganggu.

Growth

hormone

yang membantu

pembentukan massa otot, testosteron, hormon tiroid akan menurun tajam pada
usia tua. Ditandai dengan rasio lemak dan otot yang meningkat. Penurunan
fungsi hormon yang tajam dapat diatasi dengan therapi sulih hormon yang
membantu mengembalikan fungsi hormon tubuh sehingga memperlambat
proses penuaan
2.1.4 Teori Kontrol Genetika
Individu

terlahir

dengan

kode

genetika

yang

spesifik,

yang

mempengaruhi tipe fisik serta fungsi mental individu tersebut. Faktor genetik
yang berperan menentukan umur harapan hidup dan proses penuaan masing
masing individu. Di analogikan individu lahir dengan mesin yang terprogram
untuk merusak diri sendiri. Tiap individu memiliki jam biologi yang telah diatur
waktunya untuk hidup dalam waktu tertentu. Berhentinya jam biologi
merupakan tanda individu mengalami proses penuaan kemudian meninggal
(Goldman and Klatz, 2003). Teori ini terfokus pada pada kode genetik yang ada
dalam DNA, meskipun seluruh aspek diwariskan dalam gen tiap individu,
waktu jam biologis tergantung pula pada peristiwa dan pola hidup individu
tersebut.

Ilmu kedokteran anti penuaan melakukan upaya mencegah kerusakan

gen serta memperbaiki kerusakan yang terjadi. Melalui terapi gen diharapkan
dapat membantu membebaskan diri dari takdir genetika terhadap beberapa
penyakit keturunan

2.2 Radikal Bebas

2.2.1 Definisi Radikal Bebas
Secara biokimia, proses pelepasan elektron dari suatu senyawa disebut
oksidasi. Sementara proses penangkapan elektron disebut reduksi. Senyawa
yang dapat menerima atau menarik elektron disebut oksidan. Oksidan dapat
mengganggu integritas sel karena dapat bereaksi dengan komponen-komponen
sel yang penting untuk mempertahankan kehidupan sel, maupun komponen
struktural
Sering kali pengertian oksidan dan radikal bebas dianggap sama karena
keduanya memiliki kemiripan sifat. Kedua jenis senyawa ini memiliki aktivitas
yang sama dan memberikan akibat yang hampir sama tetapi dengan proses yang
berbeda (Winarsi, 2007). Walaupun ada kemiripan dalam sifatnya namun dari
sudut kimia keduanya harus dibedakan. Oksidan dalam pengertian ilmu kimia
adalah senyawa penerima elektron (electron acceptor), yaitu senyawa yang
dapat menarik elektron. Sebaliknya radikal bebas adalah atom molekul
(kumpulan atom) yang memiliki elektron yang tidak berpasangan atau unpaired
electron.

Sifat

radikal

bebas

yang

mirip

dengan

oksidan

adalah

kecenderungannya untuk menarik elektron. Itulah sebabnya, radikal bebas

digolongkan dalam oksidan. Namun tidak setiap oksidan adalah radikal bebas (
Suryohudoyo,2000)
Oksidan yang dapat merusak sel berasal dari berbagai sumber yaitu :
1. Yang berasal dari tubuh sendiri, yaitu senyawa yang berasal dari proses
fisiologis, namun oleh karena suatu sebab terdapat dalam jumlah banyak
2. Yang berasal dari proses peradangan.
3. Yang berasal dari luar tubuh seperti polutan, obat-obatan
Yang dimaksud dengan radikal bebas adalah

suatu senyawa atau

molekul yang mengandung satu atau lebih elektron yang tidak berpasangan
pada orbital luarnya. Radikal bebas lebih berbahaya dibandingkan dengan
senyawa oksidan non radikal .
2.2.2 Sifat-sifat Radikal Bebas
Radikal bebas memiliki dua sifat, yaitu :
1.

Reaktivitas tinggi, karena kecenderungannya menarik elektron.

2.

Dapat mengubah suatu melokul menjadi suatu radikal.

Berkaitan dengan tingginya reaktivitas senyawa radikal bebas tersebut

mengakibatkan terbentuknya senyawa radikal baru. Bila radikal baru bertemu

molekul lain akan terbentuk radikal baru lagi, dan seterusnya sehingga akan
terjadi reaksi berantai (chain reaction). Bila elektron yang berikatan dengan
radikal bebas berasal dari senyawa yang berikatan kovalen akan sangat
berbahaya karena ikatan digunakan bersamasama pada orbital luarnya.
Umumnya senyawa yang memiliki ikatan kovalen adalah molekul-molekul
besar seperti lipid, protein dan DNA. Diantara senyawa oksigen reaktif, radikal

hidroksil merupakan senyawa yang paling berbahaya karena reaktivitasnya

sangat tinggi.
Radikal hidroksil dapat merusak tiga jenis senyawa yang penting untuk
memepertahankan integritas sel yaitu :
1.

Asam lemak, khususnya asam lemak tak jenuh yang merupakan komponen
penting fosfolipid penyusun membran.

2.

DNA, yang merupakan pembawa genetik sel

3.

Protein, yang memegang berbagai peran penting seperti enzim, reseptor,

antibodi, sitoskeleton.
Dari ketiga molekul target tersebut yang paling rentan terhadap serangan

radikal bebas adalah asam lemak tak jenuh. Senyawa radikal bebas di dalam tubuh
dapat merusak asam lemak tak jenuh ganda pada membran sel. Akibatnya dinding
sel menjadi rapuh.senyawa oksigen reaktif ini juga mampu merusak bagian dalam
pembuluh

darah

sehingga

meningkatkan

pengendapan

kolesterol

dan

menimbulkan aterosklerosis. Senyawa radikal bebas ini berpotensi merusak basa

DNA sehingga mengacaukan sistem info genetika, dan berlanjut pada
pembentukan sel kanker. Jaringan lipid juga akan dirusak oleh senyawa radikal
bebas sehingga terbentuk peroksida yang memicu munculnya penyakit
degeneratif.
Komponen terpenting membran sel adalah fosfolipid, glikolipid dan
kolesterol. Dua komponen pertama mengandung asam lemak tak jenuh (asam
linoleat, linolenat arakidonat) sangat rawan terhadap serangan radikal terutama
radikal hidroksil, yang dapat menimbulkan reaksi rantai yang dikenal dengan
Lipid peroxidation

Peroksidase lipid
LH

+ OH ------

H + H2O

Asam lemak
L

Radikal lipid
O2 ------

LOO
Radikal peroksilipid

LOO + LH --------

L + L OOH dan seterusnya

Akibat akhir dari rantai ini adalah terputusnya rantai asam lemak menjadi
berbagai senyawa yang bersifat toksik terhadap sel, antara lain berbagai macam
aldehide, seperti Malondialdehida (MDA).
2.2.3 Tahapan terbentuknya Radikal Bebas
Secara umum, tahapan reaksi pembentukan radikal bebas melalui 3
tahapan reaksi (Winarsi, 2007) yaitu:
1.

Tahap inisiasi, yaitu awal pembentukan radikal bebas.

Misal:
Fe ++ + H2O2 ----- . Fe +++ + OH - + OH

2.

Tahap propagasi, yaitu pemanjangan rantai radikal.

3.

Tahap terminasi, yaitu bereaksinya senyawa radikal dengan radikal lain

atau penangkap radikal, sehingga potensi propagasi rendah.
Reduksi oksigen memerlukan pengalihan empat elektron (elektron

transfer). Pengalihan ini tidak dapat sekaligus tetapi dalam empat tahapan, yang
setiap tahapan hanya melibatkan pengalihan satu elektron. Kendala yang
mengharuskan oksigen hanya dapat menerima satu elektron setiap tahap
menyebabkan terjadinya dua hal yaitu :
1.

Kurangnya reaktif oksigen

2.

Terjadinya senyawa senyawa oksigen

reaktif

seperti

O2 ( ion

peroksida), H2O2 ( hydrogen peroksida ) , OOH ( radikal peroksil)

Reaksireaksi di bawah ini merupakan pengalihan satu elektron senyawasenyawa oksigen. Pembentukan senyawa oksigen reaktif tersebut secara singkat
dapat sebagai berikut :
O2 + e- --------

O2 -

O2

+ e- + H+ ------

O2

+ 2e- + 2 H + -------

O2

+ 3 e- + 3H + --------

OH + H2O

O2

+ 4 e- + 4H+ --------

2 H2O

OOH
H2O2

Dari reaksireaksi diatas terlihat bahwa ion superoksida, radikal peroksil,

hidrogen peroksida, dan radikal hidroksil terjadi karena pengalihan elektron yang
kurang sempurna pada saat terjadi reduksi oksigen.
2.2.4 Peranan radikal bebas dalam proses penuaan
Saat usia muda terdapat keseimbangan antara radikal bebas dan pertahanan
antioksidan, seiring dengan pertambahan usia keseimbangan terganggu, oleh
karena berkurangnya cadangan antioksidan dan produksi berlebih dari radikal
bebas (Saxena dan Lal, 2006). Senyawa oksigen reaktif diproduksi terus menerus
di dalam organisme aerobik sebagai hasil dari metabolisme energi normal. Target
utama radikal bebas adalah protein, asam lemak tak jenuh dan lipoprotein, serta
unsur DNA termasuk karbohidrat. Dari ketiga hal diatas yang paling rentan adalah
asam lemak tak jenuh. Senyawa radikal bebas dalam tubuh dapat merusak asam
tak jenuh ganda pada membran sel. Akibatnya sel menjadi rapuh (Pasupathi,
2009).

Berbagai kemungkinan bisa diakibatkan oleh kerja radikal bebas.radikal

bebas memiliki reaktivitas tinggi, sangat tidak stabil dan berumur singkat,
sehingga keberadaannya sulit dideteksi. Dengan reaktivitasnya yang tinggi,
radikal bebas akan segera menyerang komponen seluler yang berada di
sekelilingnya, baik berupa senyawa lipid, lipoprotein, (protein, karbohidrat, RNA
maupun DNA). Senyawa radikal bebas dapat merusak asam lemak tak jenuh
ganda pada membran sel, sehingga mengakibatkan dinding sel menjadi rapuh.
Senyawa ini juga berpotensi merusak basa DNA sehingga mengacaukan sistem
informasi genetika dan berlanjut pada pembentukan sel kanker, yang berkibat
lebih jauh adalah terjadinya kerusakan struktur dan fungsi sel.
Akibat ketidakseimbangan antara jumlah antioksidan dan senyawa radikal
bebas akan mengakibatkan kerusakan stres oksidatif (Arief, 2010). Pada keadaan
inilah perusakan tubuh terjadi oleh radikal bebas. Senyawa radikal mengoksidasi
dan menyerang komponen lipid membran, senyawa ini merusak tiga jenis
senyawa yang penting untuk mempertahankan integritas sel seperti asam lemak
tak jenuh yang menyusun membran sel (fosfolipid), DNA (perangkat genetik) dan
protein (enzim, reseptor, antibodi) (Fouad, 2007).
Radikal bebas yang bereaksi dengan komponen biologis dalam tubuh akan
menghasilkan senyawa teroksidasi. Banyaknya senyawa teroksidasi dapat
digunakan sebagai indeks karakteristik stress oksidatif. Belleville-Nabet
melaporkan molekul DNA yang teroksidasi akan menyebabkan penuaan (aging)
dan kanker. Jika yang teroksidasi protein baik berupa enzim yang terinaktivasi
atau protein yang terpolarisasi, akan terjadi inflamasi (Winarsi, 2007)

Radikal bebas menyebabkan kerusakan oksidatif pada lipid, protein, dan

asam nukleat. Ketidakseimbangan antara antioksidan dan senyawa oksigen reaktif
menghasilkan stress oksidatif, penyebab kanker, penuaan, artherosclerosis, cedera
iskemik, peradangan dan penyakit degeneratif ( Parkinson dan Alzheimer)
(Pangkahila,2007) .

2.3. Stres Oksidatif

2.3.1 Keadaan yang menimbulkan stres oksidatif
Stres oksidatif adalah suatu keadaan ketika jumlah antioksidan tubuh kurang
dari yang diperlukan untuk meredam efek buruk radikal bebas yang dapat
merusak membran sel, protein dan DNA yang berakibat fatal bagi kelangsungan
hidup sel/ jaringan. Bila terjadi dalam waktu yang berkepanjangan akan terjadi
penumpukan hasil kerusakan oksidatif di dalam sel dan jaringan yang
menyebabkan sel/jaringan kehilangan fungsinya dan mati. Penumpukan hasil
kerusakan tadi akan bertambah dengan bertambahnya umur, merupakan penyebab
utama proses penuaaan (Bagiada, 2001)
Prinsip dasar teori ini adalah kehilangan fungsi pada proses penuaan
disebabkan oleh bertambah dan menumpuknya secara irreversible molekul
molekul hasil perusakan oksidatif oleh radikal bebas.
Ketidakseimbangan antara oksidan dan antioksidan, secara potensial dapat
menyebabkan kerusakan. Radikal bebas terbentuk sebagai hasil metabolisme
aerobik normal, namun dapat juga diproduksi dalam jumlah banyak pada keadaan
patofisiologis . Salah satunya adalah aktivitas fisik yang berat atau berlebih dapat
meningkatkan stress oksidatif .

Senyawa oksigen reaktif dapat diproduksi oleh sel dalam kondisi stress
maupun tidak. Pada kondisi tidak stres, terdapat keseimbangan antra proses
pembentukan dan pemusnahan senyawa oksigen reaktif. Sementara pada kondisi
stres, pembentukan senyawa reaktif lebih tinggi di bandingkan pemusnahannya.
Oksigen tereduksi akan membentuk radikal superoksida, hidrogen peroksida dan
hidroksil. Apabila kondisi keseimbangan antara jumlah antioksidan dan senyawa
radikal bebas tidak terpenuhi maka akan mengakibatkan kerusakan oksidatif
(oxidative stress). Stress oksidatif di definisikan sebagai suatu keadaan dimana
tingkat oksigen reaktif yang toksik melebihi pertahanan antioksidan endogen
(Arief, 2010). Pada keadaan inilah terjadi perusakan dalam tubuh oleh radikal
bebas.
2.3.2 Malondialdehid (MDA) sebagai biomaker stres oksidatif
Asam lemak tak jenuh (PUFA) yang memungkinkan untuk fluiditas
membran, berlimpah di

membran selular. Sebuah radikal bebas mengambil

elektron dari membran lipid di sel, memulai serangan radikal bebas pada sel yang
dikenal sebagai peroksidasi lipid. Lipid peroksida dinilai dengan pengukuran
thiobatbituric acid reactive substance (TBARS) di dalam plasma dengan metode
Yagi. Peroksidasi lipid merupakan reaksi rantai yang diinisisasi oleh serangan
radikal bebas pada fosdolipid dan polyunsaturated fatty acid pada membran
seluler atau organel subseluler, menghasilkan pembentukan suatu komplek
aldehid, keton dan hasil polimerisasi yang bereaksi dan merusak biomolekul,
enzim

dan asam

nukleat yang dapat menyebabkan

penuaan (aging).

Malondialdehid merupakan salah satu maker yang baik dan banyak digunakan
untuk peroksidasi lipid, diantara aldehid yang reaktif (Saxena & Lal, 2006). Salah

satu konversi oksidatif dari polyunsaturated fatty acid menjadi produk yang
disebut malondialdehid (MDA) atau lipid peroksida. Lipid peroksida tersebut
ditemukan juga pada manusia sehat, yang mengindikasikan bahwa radikal bebas
oksigen juga diproduksi dalam metabolisme tubuh normal (Pasupathi, 2009).
Target senyawa oksigen reaktif pada ikatan rangkap asam lemak tak jenuh ganda.
Ikatan rangkap pada karbon melemahkan ikatan hidrogen yang memungkinkan
untuk disosiasi hidrogen dengan mudah oleh radikal bebas. Sebuah radikal bebas
akan mengambil elektron tunggal dari hidrogen yang terkait dengan karbon pada
ikatan rangkap, kemudian elektron yang tidak berpasangan akan menjadi radikal
bebas.
Konsentrasi MDA yang tinggi menunjukkan adanya proses oksidasi dalam
membran sel. Radikal bebas dan peroksidasi lipid merupakan produk dengan
waktu paruh yang sangat singkat dan sulit diperiksa secara langsung. MDA
bersifat lebih stabil dan merupakan produk degradasi peroksidasi lipid yang
memiliki waktu hidup lebih lama, sehingga dapat digunakan sebagai biomaker
stres oksidatif yang terjadi.

2.4 Peroksidasi Lipid

Stres oksidatif terjadi pada sel akibat ketidakseimbangan antara prooksidan
dan antioksidan menyebabkan kerusakan pada biomolekul seperti asam nukleat,
protein, struktur karbohidrat dan lemak. Diantara target ini peroksidasi lipid pada
dasarnya bersifat sangat destruktif karena menghasilkan radikal bebas. Proses
peroksidasi lipid terdiri atas tiga fase yaitu inisiasi, propagasi, dan terminasi
(Catala, 2006).

Proses inisiasi adalah proses ketika atom hidrogen dikeluarkan dari molekul
lipid. Beberapa senyawa dapat bereaksi dengan atom hidrogen membentuk radikal
hidroksil (.OH), alkoxyl (RO), peroksil (ROO) mungkin juga H2O. Membran lipid
umumnya adalah fosfolipid tersusun atas asam lemak tak jenuh, mudah terjadi
peroksidasi karena dikeluarkannya grup methylen (-CH2) dari atom hidrogen
yang mengandung hanya satu elektron, sehingga terdapat atom karbon yang tidak
berpasangan (Catala, 2006). Adanya ikatan ganda di dalam asam lemak
melemahkan ikatan C-H pada atom karbon yang berdekatan dengan ikatan ganda,
sehingga mempermudah terjadinya perpindahan atom hidrogen.
Reaksi inisiasi radikal hidroksil (.OH) dengan asam lemak tak jenuh
menghasilkan radikal lipid yang dapat bereaksi dengan molekul oksigen (O2)
membentuk radikal lipid peroksil. Radikal lipid peroksil mengambil hidrogen dari
asam lemak yang berdekatan untuk membentuk lipid hydroperoxide (LOOH)
serta radikal lipid yang kedua. Radikal alkoxyl maupun peroxyl memicu reaksi
berantai peroksidasi lipid dengan mengeluarkan atom hidrogen.
Peroksidasi lipid mengganggu fisiologi membran, menyebabkan gangguan
pada aliran cairan dan permiabilitas, mengubah transport ion serta menghambat
reaksi metabolisme. Peroksidasi lipid merupakan penyebab utama kerusakan sel.
Proses peroksidasi asam lemak terutama terjadi pada membran fosfolipid.
Peroksidasi lipid mengubah psikokemikal lapisan membran lipid menyebabkan
disfungsi sel yang signifikan. Berbagai produk dihasilkan akibat peroksidasi lipid
seperti MDA, 4-hydroxy-2-noneal(HNE), 4-hydroxy-2-hexenal(4-HHE)
Peroksidasi lipid merupakan suatu proses yang rumit dan terjadi secara
bertingkat. Peroksidasi lipid menyebabkan hilangnya asam lemak tidak jenuh

sehingga secara sederhana prinsip pengukuran peroksidasi lipid adalah memeriksa

hilangnya lemak. Hasil akhir peroksidasi lipid (terutama cytotoxic aldehydes)
seperti MDA dan 4-hydroxynonenal dapat menyebabkan kerusakan pada protein
dan DNA (Halliwell, 2002). Banyak cara tersedia untuk mengukur peroksidasi
pada membran, lipoprotein atau asam lemak. Tiap teknik mengukur sesuatu yang
berbeda dan tidak ada metode tunggal sebagai standar baku untuk mengukur
peroksidasi lipid.

2.5 Aktivitas Fisik Berlebih

Olahraga yang teratur dan tepat dapat memepertahankan kebugaran fisik.
Kondisi lingkungan yang memadai dan takaran pelatihan yang tepat untuk setiap
individu meliputi frekuensi,intensitas,tipe dan waktu sangat mendukung untuk
mendapatkan hasil yang maksimal dan resiko yang minimal pada pelatihan
olahraga.Frekuensi pelatihan yang dianjurkan 3-4 kali seminggu dengan intensitas
72%-87% dari denyut jantung maksimal (220-umur) dengan variasi 10 denyut
permenit.Dengan waktu maximum 300 jam dalam seminggu
Aktivitas fisik berlebih dapat meningkatkan stres oksidatif,karena terjadi
peningkatan konsumsi O2 oleh aktivitas otot skletal. Meskipun O2 sangat
dibutuhkan ternyata juga bersifat toksik yang dapat memicu peningkatan Senyawa
Oksigen Reaktif (SOR). Pada organ yang tidak mendapat O2 dan nutrisi yang
cukup akan menimbulkan keadaan iskemik dan kerusakan mikrovaskular.
Keadaan ini disebut dengan Reperfusion Injury ,yang memicu terjadinya
kerusakan jaringan dan peningkatan Radikal Bebas

Aktivitas fisik berlebih

merangsang terjadinya leukositosis, peningkatan

isoprostan dalam urine, protein carbonil (73%), catalase (96), glutation peroxidase
serta glutathione teroksidasi (25%). Dapat disimpulkan aktivitas fisik berlebih
merangsang respon terhadap biomaker stres oksidatif (Margonis,et al 2007).
Proses penuaan mengakibatkan penurunan sistem imun, meningkatkan resiko
infeksi. Secara teori, aktivitas fisik sedang dapat menangkal efek proses penuaan
akibat penurunan sistem imun. Hasil study yang dilakukan yang dilakukan
Shepard dan Shek menunjukan aktivitas fisik sedang dapat ditoleransi dengan
baik oleh individu lanjut usia. Pada individu berusia lanjut aktivitas fisik sedang
menunjukan penurunan stimulasi proliferasi limfosit.Aktivitas fisik yang teratur
dan tepat dapat mempertahankan kebugaran fisik.Takaran pelatihan yang tepat u
setiap individu meliputi frequensi,intensitas,tipe dan waktu, sangat mendukung
untuk mendapatkan hasil yang maximal dan resiko yang minimal pada pelatihan
olahraga (Pangkahila,2009).
Peningkatan konsumsi oksigen oleh tubuh selama berolahraga berat dapat meningkat
sepuluh sampai duapuluh kali atau lebih. Dibawah stres yang tinggi,dalam serat otot
terjadi peningkatan penggunaan oksigen diatas kebutuhan normal. Peningkatan oksigen
yang luar biasa ini dapat memicu pelepasan radikal bebas, yang akan terlibat dalam
proses oksidasi lemak membran sel otot. Proses tersebut disebut peroksidasi lipid, dan
menyebabkan sel menjadi lebih mudah mengalami proses penuaan (Cooper, 2001)
Pelatihan fisik yang berlebih diakibatkan oleh 1) volume pelatihan yang terlalu
banyak ; 2) intensitas pelatihan yang terlalu banyak ; 3) durasi pelatihan yang terlalu
panjang ; 4) frekwensi pelatihan yang terlalu sering (Hatfield, 2001).
Pelatihan fisik yang berlebih menyebabkan terjadi penumpukan asam laktat dalam
otot sehingga dapat menyebabkan stres fisik . Untuk itu diperlukan masa pemulihan yaitu

waktu yang dibutuhkan tubuh untuk kembali kekeadaan semula dari keadaan aktivitas
pelatihan .

2.6 Antioksidan
2.6.1 Definisi Antioksidan
Antioksidan adalah suatu senyawa yang dalam jumlah kecilpun dapat
menghambat atau pencegah reaksi oksidasi dari suatu senyawa lainnya (Packer
dan Cadenas; 2002). Dalam pengertian kimia senyawa antioksidan adalah
senyawa pemberi elektron (elektron donor). Namun dalam arti biologis,
pengertian antioksidan lebih luas, yaitu merupakan senyawasenyawa yang dapat
meredam dampak negatif oksidan (radikal bebas), termasuk enzim dan protein
pengikat logam (Pangkahila, 2007)
2.6.2 Jenis-jenis Antioksidan
Secara umum, antioksidan dikelompokkan menjadi 2 kelompok yaitu :
1.

Antioksidan enzymatis / antioksidan primer / antioksidan endogenus / chainbreaking-antioxidant misalnya : enzim superoksida dismutase (SOD),
katalase, dan glutation peroksidase.

2.

Antioksidan non enzimatis dibagi 2 kelompok lagi yaitu

a.

Antioksidan larut lemak, seperti tokoferol, karotenoid, flavonoid,

qinon, dan bilirubin.

b.

Antioksidan larut air, seperti asam askorbat, asam urat, protein

pengikat logam, protein pengikat heme.

Antioksidan enzimatis dan non enzimatis tersebut bekerja sama memerangi

aktivitas senyawa oksidan dalam tubuh. Terjadinya stres oksidatif dapat dihambat
oleh kerja antioksidan dalam tubuh.

Berdasarkan

dua

mekanisme

pencegahan

dampak

negatif

oksidan,

antioksidan dapat dibagi menjadi 2 golongan (Kaur, Kapoor. 2001) yaitu:

1. Antioksidan pencegah (preventive antioksidan)
Pada dasarnya tujuan antioksidan jenis ini mencegah terjadinya radikal
hidroksil, yaitu radikal yang paling berbahaya. Untuk membentuk radikal
hidroksil diperlukan tiga komponen, yaitu logam transisi Fe atau Cu, H2O2 dan
O2, agar reaksi Fenton ((Fe ++ (Cu+) ) + H2O2

Fe +++ ( Cu ++ ) + OH - + OH

tidak terjadi, maka harus dicegah keberadaan

ion Fe2+ atau Cu+ bebas .

Diperlukan peran beberapa protein penting, yaitu :

a. Untuk Fe : transferin atau feritin
b. Untuk Cu : seruplasmin atau albumin
Penimbunan O2- dicegah oleh enzim superoksida dismutase (SOD) yaitu
dengan mengkatalisa reaksi dismutasi O2 - :
2O2 -

+ 2H

--------

H2O2 + O2

Penimbunan H2O2 dicegah melalui aktivitas dua enzim yaitu :

a. Katalase, yang mengkatalisis reaksi dismutase H2O2
2H2O2 ----------

2 H2O2 + O 2

b. Peroksidase, yang mengkatalisis reaksi sebagai berikut:

R + H2O2 --------

RO + H2O

2. Antioksidan pemutus rantai (chain breaking antioksidan)

Dalam kelompok antioksidan ini termasuk vitamin E, caroten, flavonoid,
quinon bersifat lipofilik, sehingga dapat berperan pada membran sel untuk
mencegah peroksidasi lipid. Sebaliknya vitamin C, glatation dan sistein bersifat
hidrofilik dan berperan dalam sitosol.

Tabel 2.1
Spesies oksigen reaktif dan antioksidannya
Spesies reaktif
O2

Oksigen singlet

O2 -

Radikal bebas superoksida

Antioksidan
Vitamin A, karoten, vitamin E
Superoksida Dismutase, -karoten,
Vitamin E, Flavonoid

OH

Radikal bebas hidroksil

Flavonoid, Albumin.

ROO

Radikal bebas peroksil

Vitamin E, Vitamin C, Flavonoid

H2 O2

Hidrogen Peroksida

Katalase,

Glutation

Peroksidase,

Flavonoid
LOOH

Lipid peroksida

Glutation peroksidase, Flavonoid.

2.6.3 Pengukuran antioksidan

Pemeriksaan status antioksidan tubuh sekarang telah menjadi suatu piranti
diagnostik yang amat penting. Pemeriksaan ini dapat dilakukan melalui
pengukuran:
1. Status Antioksidan Total :
a. Total Antioxidant Activity
b. Kerusakan akibat oksigen reaktif dengan : F2 isoprostan, MDA
2. Enzim-enzim Antioksidan :
a. Superoxide Dismutase
b. Glutation Peroksidase (GPx) dan status selenium

2.7 Mahkota Dewa

2.7.1 Deskripsi Tanaman Mahkota (Phaleria macrocarpa)
Pohon Mahkota Dewa (Phaleria macrocarpa) dikenal sebagai salah satu
tanaman obat di Indonesia. Mahkota dewa merupakan tanaman jenis pohon yang
berkembang dan tumbuh sepanjang tahun, dan mampu mencapai ketinggian 3-4
m. Batang bergetah terdiri dari kulit yang berwarna coklat kehijauan dan batang
kayu berwarna putih, dan berakar tunjang. Mahkota dewa sudah lama digunakan
sebagai tanaman obat oleh para bangsawan Jawa. Di Jawa Tengah dikenal dengan
nama Makuto Dewo.
Klasifikasi Buah Mahkota Dewa :
Kingdom

: Plantae (Tumbuhan)

Subkingdom : Tracheobionta (Tumbuhan berpembuluh)

Super Divisi : Spermatophyta (Menghasilkan biji)
Divisi

: Magnoliophyta (Tumbuhan berbunga)

Kelas

: Magnoliopsida (Berkeping dua / dikotil)

Sub Kelas

: Rosidae

Ordo

: Myrtales

Famili

: Thymelaeaceae

Genus

: Phaleria

Spesies

: Phaleria macrocarpa (Scheff Boerl).

Gambar 2.1 Buah Mahkota Dewa (Rostinawati,2004)

2.7.2 Senyawa Bioaktif dan Manfaat

Hampir seluruh bagian pohon mahkota dewa memiliki kandungan kimia
yang dapat bermanfaat untuk dijadikan obat. Pada daun, misalnya, mengandung
antihistamin, alkaloid, saponin dan polifenol (lignan), pada kulit buat terdapat
kandungan alkaloid, saponin dan flavonoid, sedangkan buahnya mengandung
alkanoid, tanin, flavonoid, fenol, saponin, lignan, minyak asiri dan sterol.
Flavonoid sebagai senyawa yang terbanyak didapat pada daging buah mahkota
dewa. Flavonoid merupakan suatu antoksidan golongan phenol yang banyak
ditemukan di sayuran, buah-buahan, kulit pohon, akar, bunga, teh dan wine. Ada
empat golongan utama flavonoid yaitu Flavon, Flavanones, Catechins,
Anthocyanin. Flavonoid dapat membantu memberikan perlindungan terhadap
beberapa penyakit bersama dengan vitamin, antioksidan dan enzim, untuk
pertahanan antioksidan total dalam tubuh. Sebuah penelitian oleh Dr Van Acker di
Belanda menunjukan bahwa flavonoid dapat menggantikan vitamin E sebagai

pemecah rantai anti-oksidan didalam membran hati. Konstribusi flavonoid untuk

sistem pertahanan antioksidan sangat besar mengingat total asupan harian
flavonoid dapat berkisar 50-800 mg, konsumsi ini lebih tinggi dibandingkan
dengan rata-rata asupan harian diet antioksidan lain seperti vitamin C (70 mg),
vitamin E (7-10) atau keratenoid (2-3 mg). Asupan Flavonoid tergantung pada
asupan buahbuahan, sayuran dan miuman tertentu seperti red wine, teh, bir
(Buhler & Miranda, 2000). Efek penting flavonoid adalah sebagai pemusnah
oksigen yang membawa radikal bebas. Salah satu kelompok flavonoid adalah
antosianin. Antosianin banyak ditemukan di buah beri, anggur, dan buah lainnya
yang berwarna merah keunguan (Nijveldt, 2001; Spormann et al., 2010).
Kandungan terpenting yang dimiliki oleh hampir setiap kelompok flavonoid
adalah kapasitas mereka sebagai antioksidan untuk membantu tubuh melawan
oksigen reaktif (Spormann, 2008). Flavonoid memiliki kemampuan menambah
efek dari susunan pemusnah endogen tersebut. Flavonoid bisa mengganggu sistem
produksi radikal bebas atau bisa juga dengan meningkatkan fungsi antioksidan
endogen.
Flavonoid bisa mencegah kerusakan yang disebabkan oleh radikal bebas
dengan beberapa cara. Salah satunya adalah memakan radikal bebas secara
langsung. Flavonoid dioksidasi oleh radikal, menghasilkan radikal yang lebih
stabil dan kurang reaktif. Flavonoid menstabilkan senyawa oksigen reaktif dengan
bereaksi dengan susunan reaktif dari radikal tersebut (Nijveidt et al., 2001)
Beberapa flavonoid tertentu dapat mengurangi aktivasi komplemen, sehingga
menurunkan adesi sel inflamasi ke endothelium, menyebabkan berkurangnya
respon inflamasi. Hal penting lain dari flavonoid adalah mengurangi pelepasan

dari peroksidase, yang menghambat produksi reactive oxygen species oleh

neutrofil dengan interfering dengan aktivasi 1-antitripsin. Efek lain yang juga
menarik dari flavonoid adalah menghambat metabolisme araccnoid acid. Hal
tersebut memberikan efek antiinflamasi dan antitrombotik pada flavonoid.
Pelepasan aracnoid acid merupakan awal penting untuk terjadi untuk terjadinya
respon inflamasi secara umum.
Beberapa penelitian klinis menyebutkan bahwa terdapat hubungan terbalik
antara asupan flavonoid dan total konsentrasi kolesterol plasma. Stres oksidatif
dan kerusakan vaskular diperkirakan memegang peranan pada dimensia, dan
asupan flavonoid dilaporkan memiliki hubungan terbalik dengan resiko insiden
demensia. Flavonoid banyak tersedia secara luas dibuah-buahan maupun sayuran.
Kandungan flavonoid dalam ektrak buah mahkota dewa didapatkan 1,7647 mg/L
atau 2,2334 mg/kg pada buah yang masak (Rohyami, 2008). Penelitian Lisdawati,
mendapatkan dosis ekstrak buah mahkota dewa berfungsi sebagai hepatoprotektor
pada tikus yang mendapat perlakuan pemberian parasetamol selama 2 minggu.
Antosianin merupakan salah satu antioksidan kuat yang mampu mencegah
berbagai kerusakan akibat stress oksidatif sehingga dapat melindungi sel dari
radikal bebas (Cao, 2001). Pigmen antosianin bertanggung jawab untuk warna
merah, ungu dan biru dari buah, sayuran dan bunga. Antosianin merupakan salah
satu kelas flavonoid, yang secara luas terdistribusi sebagai polifenol pada tanaman
(Mervat and Hanan, 2009). Bahan kimia yang terkandung dalam flavonoid ini
dipercaya berhubungan dengan kapasitas antioksidan dan kemampuan mereka
dalam menangkap dan memakan radikal bebas yang merusak biomolekul
(Wreistad, 2001)

Di antara kelas flavonoid, antosianin adalah sekelompok pigmen yang larut

air, yang banyak terdapat pada buah-buahan dan sayuran (Toufektsian., et al
2008). Antosianin merupakan pigmen alami yang bertanggungjawab jawab
terhadap warna biru, ungu, merah dan orange pada buah dan sayuran. Lebih dari
500 antosianin berbeda telah ditemukan. Antosianin tersedia utamanya dialam
dalam bentuk heteroside. Bentuk aglycone dari antosianin, yang disebut
antosianidine, secara struktural berdasar pada favillium atau kation 2-phenylbenzopyrilium, dengan group hidroksil dan metoksil yang berada pada posisi
berbeda pada struktur dasar. Bermacam antosianin didefinisikan berdasarkan
jumlah dan posisi dari group hydroxyl dan methoxyl.
Antosianin merupakan antioksidan kuat. Antosianin memakan O2-, OH.,
Roo., dan asam nitrat oksida serta menghambat peroksidasi lipid yang diinduksi
oleh Cu, asam askorbat yang ditambahkan dengan Fe2+, doxorubicin dan radiasi
cahaya ultraviolet. Antosianin melindungi LDL terhadap tembaga dan oksidasi
radikal yang menginduksi peroksil (Cao, et al., 2001). Kadar antosianin total
plasma maksimum dalam kisaran 1-120 nmol/L, dengan dosis 0,7-10,9 mg/kg
(Prior, 2003).
Pengujian aktivitas antioksidan ekstrak daging buah mahkota dewa dengan
metode DPPH didapatkan 76,81% dengan kadar antosianin sebesar 33,78
mg/100gram. Uji toksisitas didapatkan LD 50 > 150.000 mg/kg BB
(Lisdawati,2002).
Klasifikasi LD 50( mg/Kg BB) berdasarkan cara masuk kedalam tubuh (oral)
(Widikarsana, 2010)
Supertoxic

<5

Extremely Toxic

5- 50

Very Toxic

50- 500

Moderately Toxic

500-5000

Slightly Toxic

> 5.000

2.8 Hewan Coba Tikus

Penggunaan tikus (Rattus novergicus) telah diketahui sifat sifatnya dengan
sempurna, mudah dipelihara, merupakan hewan relatif sehat dan cocok untuk
berbagai penelitian. Terdapat beberapa galur atau varietas tikus yang memiliki
kekhususan tertentu antara lain galur Sprague-dawley yang berwarna albino putih
berkepala kecil dan ekornya lebih panjang daripada badannya. Galur Wistar
ditandai dengan kepala besar dan ekor lebih pendek. Tikus laboratorium jarang
berkelahi dan dapat tinggal sendirian dalam kandang asal dapat melihat dan
mendengar tikus lainnya. Jika dipegang dengan cara yang benar, tikus ini lebih
tenang dan mudah ditangani dilaboratorium. Karena hewan ini lebih besar dari
mencit, maka untuk beberapa macam percobaan, tikus lebih menguntungkan .
Klasifikasi tikus Wistar :
Kingdom

Animalia

Filum

Chordata

Kelas

Mamalia

Ordo

Rodentia

Family

Muridae

Genus

Rattus

Spesies

Rattus norvegicus

Dibandingkan dengan tikus liar, tikus laboratorium lebih cepat dewasa, tidak
memperlihatkan perkawinan musiman, dan umumnya lebih mudah berkembang
biak. Jika tikus liar dapat hidup selama 4-5 tahun, tikus laboratorium jarang hidup
lebih dari 3 tahun
Umumnya berat tikus laboratorium lebih ringan dari tikus liar. Biasanya umur
empat minggu beratnya 35-40 gram, dan berat dewasa rata-rata 180-200 gram,
bervariasi tergantung galur. Tikus jantan tua dapat mencapai 500 gram tetapi tikus
betina jarang lebih dari 350 gram.
Ada dua sifat yang membedakan tikus dari hewan percobaan lain yaitu tikus
tidak gampang muntah karena struktur anatomi yang tidak lazim di tempat
esophagus bermuara ke dalam lambung dan tikus tidak mempunyai kandung
empedu.

BAB III
KERANGKA BERPIKIR, KONSEP DAN HIPOTESIS PENELITIAN

3.1 Kerangka Berpikir

Banyak faktor yang menyebabkan penuaan antara lain faktor internal dan
eksternal. Faktor internal meliputi radikal bebas, hormon yang berkurang,
glikosilasi, metilsi, apoptosis, sistem kekebalan yang menurun, genetik.
Sedangkan faktor eksternal antara lain gaya hidup tidak sehat, kebiasaan salah,
polusi lingkungan, stres dan kemiskinan
Kerangka konsep penelitian ini didasarkan pada teori bahwa proses penuaan
terjadi salah satunya karena radikal bebas.Pembentukan radikal bebas salah
satunya dipicu oleh aktivitas fisik berlebih.
Aktivitas fisik berlebih mengakibatkan peningkatan konsumsi O2, yang
memicu peningkatan Senyawa Oksigen Reaktif , mengakibatkan Stres Oksidatif.
Stres Oksidatif menyebabkan peroksidasi membran lipid yang mengandung
PUFA , mengakibatkan kerusakan membran sel. MDA adalah senyawa dialdehid
yang merupakan produk akhir peroksidasi lipid.
Konsentrasi MDA yang tinggi menunjukkan adanya proses oksidasi dalam
membran sel. Radikal bebas dan peroksidasi lipid merupakan produk dengan
waktu paruh (half life) sangat singkat dan sulit diperiksa secara langsung
Sedangkan MDA lebih stabil dan merupakan produk degradasi peroksidasi lipid
yg memiliki waktu hidup yang lebih lama.
Stres oksidatif dapat diredam dengan pemberian antioksidan, Mahkota dewa
mengandung flavonoid, antosianin sebesar 33,78 mg/100gram .

Flavonoid bekerja memaksimalkan aktivitas melahap radikal bebas dengan cara

menurunkan aktivitas radikal hidroksil (.OH) sehingga tidak reaktif lagi..

3.2. Konsep Penelitian

Ekstrak Buah
Mahkota Dewa
Faktor Internal
Umur
Radikal bebas
endogen meningkat
Hormon yang
berkurang
Penurunan Sistem
Kekebalan Tubuh

Faktor Eksternal
Aktivitas
berlebih

Stres lingkungan
TIKUS WISTAR

Polusi lingkungan

STRES OKSIDATIF

Bahan kimia

MDA Plasma

Pola makan

Gambar 3.1 Kerangka Konsep Penelitian

3.3 Hipotesis penelitian

Hiptesis yang akan diuji pada penelitian ini adalah :
1. Pemberian ekstrak

buah mahkota dewa (Phaleria macrocarpa) dapat

menurunkan kadar MDA darah tikus wistar (Rattus norvegicus) yang diinduksi
aktivitas fisik berlebih.

fisik

BAB IV
METODE PENELITIAN

4.1 Rancangan Penelitian

Penelitian

ini

merupakan

penelitian

eksperimental

murni,

dengan

menggunakan rancangan penelitian pre test and post test control group design
(Petrie dan Sabin, 2003). Untuk lebih jelasnya dapat digambarkan dengan skema
berikut :

P0
O1
P

S
R

O2

P1
O3

O4

Gambar 4.1 Rancangan Penelitian

Keterangan :
P

= populasi

= sampel

= randomisasi

O1 : Kelompok kontrol pre test (pengukuran MDA sebelum perlakuan)

O2 : Kelompok kontrol post (pengukuran kadar MDA setelah perlakuan)
O3 : Kelompok perlakuan pre test (pengukuran MDA sebelum perlakuan)
O4 : Kelompok perlakuan post test (pengukuran kadar MDA setelah perlakuan)
P0 = perlakuan dengan plasebo berupa aquabides volume 1,5 ml selama 14 hari

45

46
P1 = perlakuan berupa ekstrak buah mahkota dewa dosis 300 mg/200 gram berat
badan tikus, dilarutkan dengan aquabides sampai volume 1,5 ml selama 14
hari

4.2 Tempat dan Waktu Penelitian

Penelitian dilakukan di Animal Laboratory Unit (ALU) Bagian
Farmakologi Fakultas Kedokteran Universitas Udayana, yang berlangsung selama
4 minggu.

4.3 Sampel
4.3.1 Besar Sampel
Besar sampel yang digunakan dalam penelitian ini dihitung menggunakan rumus
Pocock, 2008 yaitu:
n=

x f( . )

( 1 2)
n

= jumlah sampel
1

= rerata hasil variabel kelompok perlakuan

= rerata hasil variabel kelompok kontrol

= simpang baku kelompok kontrol
= tingkat kesalahan I (ditetapkan 0,05)
= tingkat kesalahan II (ditetapkan 0,1)

f ( . ) = besarnya diperoleh dari tabel (Pocock, 2008, tabel 9.1, pp.125)

Untuk memperoleh jumlah sampel melalui penelitian pendahuluan.

47
Untuk menghindari terjadinya drop out maka sampel ditambahkan 10 %

4.3.2 Kriteria Sampel

Sampel yang digunakan pada penelitian berikut berdasarkan kriteria sebagai
berikut :
a. Kriteria inklusi
1. Tikus putih (Rattus norvegicus) jantan
2. Umur tikus 4 bulan
3. Berat badan 180-200 gram
4. Tikus dengan MDA plasma minimal 5,5 mmol/L setelah diinduksi aktivitas
fisik berlebih
b. Kriteria sampel dropout
1. Tikus yang sakit
2. Tikus yang tidak mau makan
3. Tikus yang mati selama penelitian.

4.4 Variabel Penelitian

4.4.1 Identifikasi Variabel dan Klasifikasi Variabel
Variabel penelitian yang diukur adalah :
a.

Variabel bebas : ekstrak buah mahkota dewa

b.

Variabel tergantung : kadar MDA darah

c.

Variabel kendali : jenis tikus, jenis kelamin tikus, umur tikus, berat
tikus dan kesehatan tikus.

badan

48
4.4.2 Definisi operasional variabel
a.

Ekstrak buah mahkota dewa adalah ekstrak kering buah mahkota dewa segar
yang berwarna ungu yang diperoleh dari perkebunan mahkota dewa di
Yogyakarta, dengan nilai antosianin dianalisis di Fakultas Tekhnologi
Pertanian UPT Laboratorium

Analitik di Universitas Udayana. Hasilnya

menunjukan dalam 100 gram ekstrak daging buah mahkota dewa terkandung
33,78 mg antosianin, dengan kadar DPPH 76,81. Ekstrak kering diberikan
peroral menggunakan sonde lambung dan diberikan setiap pagi antara pukul
08.00-09.00 Wita selama 14 hari. Dosis yang diberikan berdasarkan dosis
penelitian sebelumnya (Lisdawati, 2002), sebanyak 300mg/200gram berat
badan tikus yang dilarutkan dengan aquabidest sehingga volume menjadi 1,5
ml.
b.

Aktivitas fisik berlebih adalah dengan merenangkan tikus selama kurang lebih
60 menit atau hampir tenggelam sebelum dan selama pemberian ekstrak buah
mahkota dewa ( lebih dari 300 menit /minggu )

c.

Kadar MDA adalah kadar malondialdehid plasma yang merupakan produk

akhir dari peroksidasi lipid, yang diukur dengan metode Thiobarbituraic Acid
Reactive Substances (TBARSC) dan pembacaan hasil menggunakan
spektrofotometer. Satuan MDA dalam mmol/L minimal 5,5 mmol/L

d.

Jenis tikus yang digunakan adalah tikus galur Wistar, jenis kelamin jantan,
usia dalam hitungan 4 bulan sejak dilahirkandengan berat badan 180-200
gram dan dalam keadaan sehat yaitu tikus mau makan, minum dan aktif.

49
e.

Berat badan adalah berat badan tikus jantan dewasa yang ditimbang dengan
timbangan elektronik setiap minggu selama perlakuan.

4.5 Prosedur Penelitian

4.5.1 Prosedur Pembuatan Ekstrak Buah Mahkota Dewa
Buah mahkota dewa matang berwarna merah diperoleh dari perkebunan
didaerah Yogyakarta diekstrak di fakultas Tehnologi Pertanian Universitas
Udayana. Cara pembuatan ekstrak buah mahkot dewa sebagai berikut : Daging
buah mahkota dewa dipisahkan dari bijinya, kemudian dicuci bersih, diblender
sampai menjadi serat berserabut, selanjutnya direndam dalam larutan etanol 96%
selama 2x 24 jam , cairan endapan disaring , endapan yang didapat dicuci dalam
aquabidest ,kemudian disaring, hasil saringan di evaporasi dengan vacuum
evaporator , bubuk yang dihasilkan yang berupa ekstrak kering.
4.5.2 Pemilihan dan Pemeliharaan Hewan Uji
Tikus yang masuk kriteria inklusi dimasukkan ke dalam percobaan. Dalam
penelilikan tikus sebanyak 30 ekor, diambil secara acak sederhana dengan kadar
MDA diatas 5,5 mmol/L. Tikus dibagi menjadi 2 kelompok, tiap kelompok
berjumlah 15 ekor tikus. Kandang harus cukup kuat tidak mudah rusak, dan tahan
disteril ulang dengan suhu hingga mencapai 120 o C dan tahan disterilkan dengan
bahan kimia. Kandang ini harus dibuat dari bahan yang baik dan mudah
dibersihkan serta di bongkar pasang. Kandang harus tahan gigitan, hewan tak
mudah lepas, dan hewan tampak jelas dari luar.

50
4.5.3 Prosedur Perlakuan
a. Dari populasi tikus putih (Rattus novergicus) dilakukan pemilihan sampel
berdasarkan kriteria inklusi ( jantan, umur 4 bulan, berat 180-200 gram, sehat
). Dari jumlah yang memenuhi syarat diambil secara acak sederhana untuk
mendapatkan jumlah sampel yang sesuai dengan yang diperoleh berdasarkan
penelitian pendahuluan.
b. Tikus diadaptasi selama 7 hari.
c. Hari ke 8 tikus direnangkan selama 60 menit atau hampir tenggelam, sejam
kemudian diambil darah untuk pemeriksaan kadar MDA pre test. Secara acak
tikus dibagi menjadi 2 kelompok.
d. Hari ke 9, perlakuan dimulai sebagai berikut: Kelompok pertama Po diberi
perlakuan aquabidest setiap jam 8 pagi dan setiap jam 14 15 sore
direnangkan, kemudian dikeringkan 15 menit,perlakuan selama 14 hari.
Kelompok P1 diberi perlakuan ekstrak buah mahkota dewa dengan dosis
300mg/ 200 gram berat badan tikus setiap jam 8 pagi, kemudian setiap jam 14
15 sore direnangkan selama 1 jam atau hampir tenggelam. Setelah
direnangkan, tikus tersebut dikeringkan 15 menit,perlakuan selama 14 hari.
Cara pemberian ekstrak buah mahkota dewa pada tikus Wistar : tikus
dikekang dengan cara dicomot kulit kuduknya dengan tangan kiri

dan

sedemikian rupa sehingga kulit terjepit diantara ibujari dan telunjuk .Ini
dperkuat dengan jepitan pangkal ibujari dengan jari lainnya pada kulit
punggung dan ekor dikait dengan kelingking tangan kiri (Ngatidjan, 2006).
Bahan uji diberikan peroral dengan sonde. Masukkan sonde dengan hati-hati

51
kira-kira sampai kelambung. Setelah yakin jarum masuk kelambung, barulah
bahan uji dipompakan keluar.
e. Hari ke 22 semua tikus diambil darah sebanyak 2 ml ,melalui medial canthus
sinus orbitalis , untuk diperiksa kadar MDA post test.

4.5.5 Alur Penelitian

Periksa
30 ekor tikus
WistarMDA
jantanPost-test
usia 4 bln

Aktifitas fisik berlebih

7 hari

Hari 8

Pemeriksaan kadar MDA (pre test)

Randomisasi

P0

Diet standar + SP
Aquabides
Aktivitas fisik
berlebih

P1

Diet standar
EBMD 300mg
Aktivitas fisik
berlebih

Pemeriksaan kadar MDA (post test)

14 hari

Hari 22

52
4.6 Alat dan Bahan
Alat dan bahan yang dipergunakan dalam penelitian ini antara lain :
4.6.1 Alat- Alat
a. Kandang tikus yang berukuran 50x40x15 cm, didalamnya terdapat sekam,
tempat makanan dan botol minuman.
b. Sonde lambung untuk memberikan ekstrak buah mahkota dewa dan aquabides.
c. Timbangan elektronik, merek Shunle dengan kapasitas 5000 gram.
d. Spektrofotometer merek Genesys
e. Sentrifugasi
f. Tabung Polypropilene
g. Waterbath
h. Kapas dan alkohol 70 %
i. Tabung evendorf
j. Mikropipet ukuran 10- 1000 l
k. Pipet kapiler
4.6.2 Bahan-Bahan
a. Tikus jantan galur Wistar usia 4 bulan dengan berat antara 180-200 gram
b. Ekstrak kering buah mahkota dewa
c. Aquabides
d. Makanan stndar untuk tikus jantan (Galur Wistar)
e. EDTA ( Ethylenediamine tetraacetic acid)
f. Reagensia untuk pengukuran kadar MDA

53
4.7 Prosedur Pengumpulan Data
4.7.1 Pengukuran kadar MDA
Sampel darah diambil dari tikus pada hari ke 8 dan hari ke 22. Darah diambil
dari medial canthus sinus orbitus kurang lebih sebanyak 2 ml, dimasukkan
ketabung yang mengandung EDTA 1mg/ml darah, kemudian disentrifuse 4000
rpm selama 15 menit untuk mendapatkan plasma
Pengukuran kadar MDA menggunakan metode TBARSC yaitu mengukur
konsentrasi Thiobarbituric Acid Reactive Substances. Selisih rata-rata kadar MDA
antara kelompok kontrol dengan perlakuan dibandingkan dan dilakukan uji
statistik.

4.8 Analisis Data

Data yang diperoleh pada penelitian ini dianalisis sebagai berikut :
1. Uji deskriptif
2. Uji normalitas dengan Shapiro-Wilk
3. Uji homogenitas data dengan Levene test
4. Uji komparasi
a.

Data berdistribusi normal dan homogen digunakan uji t-independent ( yang

tdk berpasangan) t-paired ( yang berpasangan)

5. Taraf kemaknaan yang digunakan adalah

= 0,05

54
BAB V
HASIL PENELITIAN

Dalam penelitian ini digunakan sebanyak 30 ekor tikus putih (Rattus

norvegicus) galur Wistar, jenis kelamin jantan, berumur 4 bulan dengan berat
badan 180-200 gram dan dalam keadaan sehat sebagai sampel, yang terbagi
menjadi 2 (dua) kelompok, yaitu kelompk kontrol (aquades) dan kelompok
perlakuan (ekstrak buah mahkota dewa dosis 300 mg/200 gram berat badan tikus).
Masing-masing berjumlah 15 ekor. Dalam pembahasan ini akan diuraikan uji
normalitas data, uji homogenitas data, uji komparabilitas, uji efek perlakuan.
5.1 Uji Normalitas Data
Data kadar MDA baik sebelum perlakuan maupun sesudah perlakuan pada
masing-masing kelompok diuji normalitasnya dengan menggunakan uji ShapiroWilk. Hasilnya menunjukkan data berdistribusi normal (p>0,05), disajikan pada
Tabel 5.1.

55
Tabel 5.1
Hasil Uji Normalitas Data Kadar MDA masing-masing Kelompok Baik Sebelum
maupun Sesudah Perlakuan
Kelompok Perlakuan

Keterangan

0,241
Kadar MDA Kontrol Pre
Kadar MDA Perlakuan Pre
Kadar MDA Kontrol Post
Kadar MDA Perlakuan Post

15
15
15
15

0,282
0,488
0,652

Normal
Normal
Normal
Normal

5.2 Uji Homogenitas Data antar Kelompok

Data Kadar MDA antar kelompok baik sebelum perlakuan maupun sesudah
perlakuan diuji homogenitasnya dengan menggunakan uji Levene test. Hasilnya
menunjukkan data homogen (p>0,05), disajikan pada Tabel 5.2..
Tabel 5.2
Hasil Uji Homogenitas antar Kelompok Data Kadar MDA Sebelum dan Sesudah
Perlakuan
Kelompok Subjek

Keterangan

MDA Pre
MDA Post

1,29
0,98

0,129
0,332

Homogen
Homogen

56
5.3 Kadar MDA
5.3.1 Uji Komparabilitas
Uji Komparabilitas bertujuan untuk membandingkan rerata MDA antar
kelompok sebelum diberikan perlakuan. Hasil analisis kemaknaan dengan uji tindependent disajikan pada Tabel 5.3 berikut.
Tabel 5.3
Rerata Kadar MDA antar kelompok sebelum diberikan perlakuan
Kelompok Subjek

Rerata
Kadar MDA
(mmol/l)

SB

Kontrol
E. Buah Mahkota Dewa

15
15

6,02
5,80

0,38
0,61

1,17

0,252

Tabel 5.3 di atas, menunjukkan bahwa rerata kadar MDA kelompok

Kontrol adalah 6,020,38, rerata kelompok ekstrak buah mahkota dewa adalah
5,800,61. Analisis kemaknaan dengan uji t-independent menunjukkan bahwa nilai
t = 1,17

nilai p =0,252. Hal ini berarti bahwa rerata kadar MDA pada kedua

kelompok adalah tidak berbeda secara bermakna (p > 0,05).

5.3.2 Analisis efek perlakuan
Analisis efek perlakuan diuji berdasarkan rerata kadar MDA antar
kelompok sesudah diberikan perlakuan. Hasil analisis kemaknaan dengan uji tindependent disajikan pada Tabel 5.4 berikut.

57
Tabel 5.4
Rerata Kadar MDA sesudah diberikan perlakuan
Kelompok Subjek

Rerata
Kadar
MDA(mmol/L)

SB

Kontrol
E. Buah mahkota dewa

15
15

6,34
3,18

0,44
0,36

21,66

0,001

Tabel 5.4 di atas, menunjukkan bahwa rerata kadar MDA kelompok kontrol
adalah 6,340,44,
0,44, rerata kelompok ekstrak buah mahkota dewa adalah 3,18
3,180,36.
Analisis kemaknaan dengan uji t-independent menunjukkan bahwa nilai t = 21,66
nilai p = 0,001. Hal ini berarti bahwa rerata kadar MDA pada kedua kelompok
berbeda secara bermakna (p < 0,05).

Gambar 5.1
Gambar 5.1 Grafik Kadar MDA Sebelum dan Sesudah
Sesu
Pemberian Perlakuan

58
Gambar 5.1 di atas menggambarkan bahwa pemberian ekstrak buah
mahkota dewa menurunkan kadar MDA dibandingkan dengan kontrol.
5.3.3 Analisis efek perlakuan antara Sebelum dengan Sesudah Perlakuan
Analisis efek perlakuan sebelum dengan sesudah perlakuan diuji
berdasarkan rerata kadar MDA antara sebelum dengan sesudah diberikan
perlakuan pada masing-masing kelompok. Hasil analisis kemaknaan dengan uji tpaired disajikan pada Tabel 5.5 berikut.
Tabel 5.5
Rerata Kadar MDA antar Sebelum dengan Sesudah Diberikan Perlakuan

Rerata
Kadar
MDA post
(pg/ml)

Kelompok Subjek

Rerata
Kadar MDA
pre
(pg/ml)

Kontrol

15

6,020,38

6,340,44

2,07

0,057

E. Buah mahkota dewa

15

5,800,61

3,180,36

12,71

0,001

Tabel 5.5 di atas, menunjukkan bahwa beda rerata Kadar MDA kelompok
kontrol adalah 0,320,60, rerata kelompok ekstrak buah mahkota dewa adalah
2,620,80. Analisis kemaknaan dengan uji t-paired menunjukkan bahwa pada
kelompok kontrol nilai t = 2,07 nilai p = 0,057. Hal ini berarti bahwa beda rerata
Kadar MDA pada kelompok kontrol tidak berbeda (p > 0,05). Sedangkan pada
kelompok ekstrak buah mahkota dewa nilai t = 12,71 dan nilai p = 0,001. Hal ini

59
berarti bahwa beda rerata Kadar MDA pada kelompok perlakuann berbeda secara
bermakna (p < 0,05).

Gambar 5.2
Gambar 5.2 Grafik Kadar MDA Sebelum dan Sesudah Pemberian Perlakuan
pada Masing
Masing-masing Kelompok

BAB VI
PEMBAHASAN HASIL PENELITIAN

6.1. Subyek Penelitian

Untuk mengetahui efek pemberian ekstrak buah mahkota dewa terhadap
penurunan kadar MDA maka dilakukan penelitian pada tikus putih selama 4
minggu.
Dalam penelitian ini tikus yang digunakan adalah tikus putih (Rattus
norvegicus) galur Wistar, jenis kelamin jantan, berumur 4 bulan dengan berat
badan 180-200 gram dan dalam keadaan sehat. Tikus dipilih oleh karena sifatnya
yang mempunyai banyak kemiripan sifat organ dengan manusia, tenang , gampang
dipelihara , serta tidak gampang muntah. Tikus yang terbagi menjadi 2 kelompok,
yaitu kelompok kontrol (aquades) dan kelompok perlakuan (ekstrak buah mahkota
dewa dosis 300 mg/200 gram berat badan tikus). Masing-masing berjumlah 15
ekor.
Pengambilan waktu 4 minggu didasarkan atas bahwa dalam waktu 4
minggu telah terjadi penurunan kadar MDA dalam darah yang signifikan
berdasarkan hasil penelitian (Sawitri, 2011).

60

61
6.2. Pengaruh Ekstrak Buah Mahkota Dewa terhadap Kadar MDA
Hasil penelitian dan analisis data Kadar MDA darah pada kelompok
kontrol dan perlakuan menunjukkan bahwa uji normalitas (Uji Shapiro Wilk) dan
homogenitas (Levene test) untuk kelompok pre dan post-test masing-masing
kelompok berdistribusi normal dan homogen (p > 0,05).
Uji perbandingan sebelum diberikan perlakuan berupa ekstrak buah
mahkota dewa antara kedua kelompok menggunakan uji t-independent. Uji
perbandingan pre test antara kedua kelompok menunjukkan bahwa tidak terdapat
perbedaan bermakna kadar MDA dalam darah antara kelompok kontrol dengan
kelompok perlakuan ( p > 0,05). Hal ini berarti bahwa kadar MDA dalam darah
pada kedua kelompok adalah sama atau dengan kata lain kedua kelompok sebelum
diberikan perlakuan kadar MDAnya tidak berbeda (p > 0,05).
Uji perbandingan sesudah diberikan perlakuan berupa ekstrak buah mahkota
dewa antara kedua kelompok menggunakan t-independent. Uji perbandingan post
test antara kedua kelompok menunjukkan bahwa terdapat perbedaan bermakna
kadar MDA dalam darah antara kontrol dengan kelompok perlakuan (p<0,05).
Lebih lanjut didapatkan bahwa terjadi penurunan kadar MDA sebesar 45,17%
dibandingkan sebelum diberikan ekstrak buah mahkota dewa. Hal ini disebabkan
karena buah mahkota dewa merupakan salah satu antioksidan yang banyak
mengandung antosianin. Antosianain termasuk golongan flavonoid yang
merupakan antioksidan non enzimatik atau antioksidan pemutus rantai (Winarsi,
2007). Penelitian sebelumnya menyatakan bahwa flavonoid dan sumber polifenol

62
lainnya secara signifikan berkontribusi terhadap aktivitas antioksidan total tubuh.
Penggunaan antioksidan alami saat ini dipilih oleh karena dianggap lebih aman
dibandingkan dengan antioksidan sintesis, karena antioksidan alami berasal dari
ekstrak tanaman. Buah Makota Dewa (Phaleria macrocarpa) merupakan salah
satu sumber antioksidan yang memiliki khasiat untuk mengobati kanker. Menurut
Rohyami (2008), didapatkan senyawa flavonoid terbanyak didapat pada daging
buah tua dari mahkota dewa. Semakin tinggi flavonoid semakin tinggi kadar anti
oksidannya. Flavonoid adalah suatu antioksidan alam dan mempunyai aktivitas
biologis, antara lain sebagai antioksidan yang dapat menghambat berbagai reaksi
oksidasi serta mampu bertindak sebagai pereduksi radikal hidroxil, superoksida
dan radikal peroxil. Lebih lanjut didapatkan bahwa daun mahkota dewa
mengandung antihistamin, alkaloid, saponin dan polifenol (lignan), sedangkan
kulit buah terdapat kandungan alkaloid, saponin dan flavonoid. Buah mahkota
dewa mengandung alkanoid, tanin, flavonoid, fenol, saponin, lignan, minyak asiri
dan sterol. Flavonoid sebagai senyawa yang terbanyak didapat pada daging buah
mahkota dewa. Flavonoid merupakan suatu antoksidan golongan phenol yang
banyak ditemukan di sayuran, buah-buahan, kulit pohon, akar, bunga, teh dan
wine. Ada empat golongan utama flavonoid yaitu Flavon, Flavanones, Catechins,
Anthocyanin. Flavonoid dapat membantu memberikan perlindungan terhadap
beberapa penyakit bersama dengan vitamin, antioksidan dan enzim, untuk
pertahanan antioksidan total dalam tubuh. Hal ini diperkuat oleh hasil penelitian
Dr Van Acker di Belanda yang menyatakan bahwa flavonoid dapat menggantikan
vitamin E sebagai pemecah rantai anti-oksidan didalam membran hati. Konstribusi

63
flavonoid untuk sistem pertahanan antioksidan sangat besar mengingat total asupan
harian flavonoid dapat berkisar 50-800 mg, konsumsi ini lebih tinggi dibandingkan
dengan rata-rata asupan harian diet antioksidan lain seperti vitamin C (70 mg),
vitamin E (7-10) atau keratenoid (2-3 mg). Asupan Flavonoid tergantung pada
asupan buahbuahan, sayuran dan miuman tertentu seperti red wine, teh, bir
(Buhler & Miranda, 2000).

Efek penting flavonoid adalah sebagai pemusnah

senyawa oksigen reaktif. Salah satu kelompok flavonoid adalah antosianin.

Antosianin banyak ditemukan di buah beri, anggur, dan buah lainnya yang
berwarna merah keunguan (Nijveldt, 2001; Spormann et al., 2010). Kandungan
terpenting yang dimiliki oleh hampir setiap kelompok flavonoid adalah kapasitas
mereka sebagai antioksidan untuk membantu tubuh melawan oksigen reaktif
(Spormann, et al 2008). Flavonoid memiliki kemampuan menambah efek dari
susunan pemusnah endogen tersebut. Flavonoid bisa mengganggu sistem produksi
radikal bebas atau bisa juga dengan meningkatkan fungsi antioksidan endogen.
Flavonoid bisa mencegah kerusakan yang disebabkan oleh radikal bebas dengan
beberapa cara : 1. Dengan memakan radikal bebas secara langsung. Flavonoid
dioksidasi oleh radikal, menghasilkan radikal yang lebih stabil dan kurang reaktif.
2. Flavonoid menstabilkan senyawa oksigen reaktif dengan bereaksi dengan
susunan reaktif dari radikal tersebut (Nijveidt, et al., 2001). 3. Beberapa flavonoid
tertentu dapat mengurangi aktivasi komplemen, sehingga menurunkan adesi sel
inflamasi ke endothelium, menyebabkan berkurangnya respon inflamasi.
Hal penting lain dari flavonoid adalah mengurangi pelepasan dari peroksidase,
yang menghambat produksi senyawa oksigen reaktif.

64
Hasil penelitian ini didukung oleh hasil penelitian Rohyami (2008) yang
menyatakan bahwa terdapat hubungan terbalik antara asupan flavonoid dan total
konsentrasi kolesterol plasma. Stres oksidatif dan kerusakan vaskular diperkirakan
memegang peranan pada dimensia, dan asupan flavonoid dilaporkan memiliki
hubungan terbalik dengan resiko insiden demensia. Flavonoid banyak tersedia
secara luas dibuah-buahan maupun sayuran. Kandungan flavonoid dalam ektrak
buah mahkota dewa didapatkan 1,7647 mg/L atau 2,2334 mg/kg pada buah yang
masak. Lebih lanjut Lisdawati (2002) menyatakan bahwa ekstrak buah mahkota
dewa berfungsi sebagai hepatoprotektor pada tikus yang mendapat perlakuan
pemberian parasetamol selama 2 minggu. Hal ini disebabkan karena antosianin
merupakan salah satu antioksidan

kuat yang mampu mencegah berbagai

kerusakan akibat stress oksidatif, sehingga dapat melindungi sel dari radikal bebas
(Cao, 2001). Radikal bebas memiliki reaktivitas yang tinggi, dan dapat menyerang
komponen seluler disekelilingnya. Senyawa radikal bebas dapat merusak asam
;emak tak jenuh ganda pada membran sel yang mengakibatkan kerusakan struktur
dan fungsi sel. Radikal bebas menyebabkan kerusakn oksidatif pada lipid,protein
dan asam nukleat. Ketidak seimbangan antara oksidan dan senyawa oksigen reaktif
menghasilkan stres oksidatif,dikaitkan dengan kanker,proses penuaan dan berbagai
penyakit yang terkait dengan penuaan (Prior ,2003 ).
Pigmen antosian bertanggung jawab untuk warna merah, ungu dan biru dari
buah, sayuran dan dan bunga. Antosianin merupakan salah satu kelas flavonoid,
yang secara luas terdistribusi sebagai polifenol pada tanaman (Mervat and Hanan,
2009). Bahan kimia yang terkandung dalam flavonoid ini dipercaya berhubungan

65
dengan kapasitas antioksidan dan kemampuan mereka dalam menangkap dan
memakan radikal bebas yang merusak biomolekul (Wreistad, 2001). Di antara
kelas flavonoid, antosianin adalah sekelompok pigmen yang larut air, yang banyak
terdapat pada buah-buahan dan sayuran (Toufektsian, et al. 2008). Antosianin
merupakan pigmen alami yang bertanggungjawab jawab terhadap warna biru,
ungu, merah dan orange pada buah dan sayuran. Antosianin yang terdapat pada
ubijalar ungu meningkatkan kadar Nox plasma pada perokok sedang (Intan , 2011)
Antosianin melindungi LDL terhadap tembaga dan oksidasi radikal yang
menginduksi peroksil (Cao, 2001). Kadar antosianin total plasma maksimum
dalam kisaran 1-120 nmol/L, dengan dosis 0,7-10,9 mg/kg (Prior, 2003).
Pengujian aktivitas antioksidan ekstrak daging buah mahkota dewa dengan metode
DPPH didapatkan 76,81% dengan kadar antosianin sebesar 33,78 mg/100gram. Uji
toksisitas didapatkan LD 50 > 150.000 mg/kg BB (Lisdawati, 2002), termasuk ke
slightly toxic

, > 5000 (Widikarsana, 2010). Yang berarti dengan kadar

antioksidan yang tinggi dan kadar racun yang amat rendah serta dengan harga
yang terjangkau, ekstrak daging buah mahkota dewa aman dan bermanfaat
sehingga layak untuk dipertimbangkan dikonsumsi sebagai antioksidan.

66
BAB VII
SIMPULAN DAN SARAN

7.1 Simpulan
Berdasarkan hasil penelitian pada tikus selama 4 minggu didapatkan
simpulan sebagai berikut: Pemberian ekstrak buah mahkota dewa (Phaleria
macrocarpa) dapat menurunkan kadar MDA darah tikus wistar (Rattus
norvegicus) yang diinduksi aktivitas fisik berlebih sebesar 45,17%.

7.2 Saran
Sebagai saran dalam penelitian ini adalah:
Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai manfaat ekstrak buah mahkota
dewa pada manusia.

67
DAFTAR PUSTAKA
Arief, S. 2010. Radikal Bebas. Bagian/SMF Ilmu Kesehatan Anak FK UNAIR/RSU
Dr.Soetomo.
Asikin , N . 2001. Antioksidan Endogen dan Penilaian Status Antioksidan. Dalam Kursus
Penyegaran dan Pelatihan Radikal Bebas dan : Antioksidan Dasar, Aplikasi, dan
Pemanfaatan Bahan Alam. Jakarta: Fakultas Kedokteran .UI.
Astawan, M. 2008. Sehat Dengan Buah. Cetakan Pertama. Jakarta, Penerbit Dian Rakyat.
Halaman : 40-45.
Bagiada, N.A. 2001. Proses Penuaan dan Penanggulangannya. Denpasar: Fakultas
Kedokteran Universitas Udayana. Hal: 22 .
Belleville-Nabet, F. 1996. Zat Gizi Antioksidan danPenangkal Senyawa Radikal Pangan
dalam Sistem Biologis.Dalam prosisding seminar senyawa radikal dan system
pangan:Reaksi biomolekuler, dampak terhadap kesehatan dan penagkalan. CFNSIPB dan Kedutaan Besar Prancis-Jakarta.
Cadenas, E.,dan Packer,L. 2002. Hanbook of Antioxidant Second Edition Revised and
Expanded.
Cao G., Muccitelli H.U., Moreno C.S., and Prior R.L. 2001. Anthocyanins are Absorbed in
Glycated Forms in Elderly Women. American Journal Of Clinical Nutrition, 73 (5)
: 920-926.
Catala, A. 2006. Lipid Peroxidation. Int J Biochem Cell Biol. 38 : 1482-1495.
Clarkson, P.M.,dan Thomson, H.S. 2000 (Dikutip oleh Jawi., 2008). Antioxidants: What
role do they play in physical activity and health?,Am J Clin Nutr. 729 (Suppl):
637-346.
Cooper, K. 2001. Sehat Tanpa Obat. 4 Langkah Revolusi Antioksidan Yang Mengubah
Hidup Anda. Cetakan Pertama. Bandung. Penerbit : Kaifa. Pengantar dan
Penyunting Baraas, F.
Dalle-Donne, I., Rossi, R., Colombo, R., Giustarini, D., Milzani, A. 2006. Biomarkers of
Oxidative Damage In Human Disease. Available from:
http://www.redorbit.com/news/science/473334/biomarkers_of_oxidative_damage_
in_human_disease/index.html access at 07-12-2010 at 6.03 pm.
Desmond, T.2000. Tropical Fruit of Indonesia p 84-85, 92-93. Archipelago Press.
Droge, W. 2002. Free Radicals in the Physiological Control of Cell Function. Physiol Rev.
82: 47-95.

68
Fouad, T. 2007. Free Radicals, Types, Sources and Damaging Reactions. Available from :
www://http.Singlet_Oxygen_Free_Radical_Types_in_Human_Body_TheDoctorsL
ounge.html. (Access : 2010, January 22)
Franklin , N.C., 2009 . Lifestyle and Successful Aging: An Overview. American Journal of
lifestyle medicine, vol 3, No 1,6-11.
Gleeson, M. 2000. Special Feature for the Olympics: Effect of Exercise on The Immune
System, Imunologi & Cell Biologi .78, 483-484.
Goldman, R.,dan Klatz, R. 2003. The New Anti-Aging Revolution. Theories of Aging: 1932.
Halliwell, B. 2002. Food-derived Antioxidants: How to Evaluate Their Importance in Food
and In Vivo. Handbook of Antioxidants. Second Edition. New York : Marcel
Dekker
.
Hatfield, F.C. 2001. Overreaching and Overtraining , MSS. International Sport Sciences
!!" !!# $
% & nd Overtraining.htm
Association . 1-11.
Intan, D.A.D. 2011. Pemberian Sirop Ubi Jalar Ungu ( Ipomoea batatas) Dapat
Menurunkan Kadar MDA serta meningkatkan NOx plasma pada Perokok Sedang
di Denpasar.Tesis .Program Magister Ilmu Biomedik UNUD
Kaur C & Kapoor HC. 2001. Antioxidants in fruits and vegetables- the milleniums health.
Intl J Food Sci Tech, 36, 703-25.
Lalamentik, G. 2008. Terapi Sulih Testosteron (Testosterone Replacement Therapy)
Memperbaiki Korpus kavernosum Tikus Wistar (Rattus Noevegicus) yang
dikastrasi (testis). Denpasar. Universitas Udayana.
Laranjinha, J. 2002 Handbook of Antioxidant. Second Edition Revised and Expanded.
Biochemical and Cellular Effects: 279-303.
Lisdawati, 2002. Efektivitas Ekstrak
Hepatoprotektor. FMIPA, IPB.

Daging

Buah

Mahkota

Dewa

Sebagai

Margonis, K., Fatourus, I.G., Jamurtas, A.Z., Nikolaidis, M.G., Douroudos, L.,
Chatznikolaou, A., Mitrakov, A., Mastorakos, G., papassotiriou, I., Taxildaris, K.,
Kouretas, D. 2007. Oxidative Stress Biomarker Responses to Physical
Overtraining
:
Implications
for
Diagnosis.
Available
from
:
' !!
%
& $!'
! ( ( . access on December 15 2010.
Mervat, M.M. and Hanan, A.A.T. 2009. Antioxidants Activities, Total Anthocyanins,
Phenolics and Flavonoids Contents of Some Sweetpotato Genotypes Under Stress
of Different Concentrations of Sucrose and Sorbitol. Australian Journal of Basic
and Applied Sciences, 3(4) : 3609-3616.

69
Muchtadi, D. 2009. Pangan dalam Sistem Biologis dalam Seminar Senyawa Radikal dan
Sistem Pangan, Reaksi Biomolekuler, Dampak terhadap Kesehatan. CFNS-IPB
dan Kedutaan besar-Jakarta.
Mudijitno ,S. 2007 .Jurnal Kedokteran Media Medika Indonesia FK UNDIP .volume 42 no
1.
Ngatidjan, 2006. Metode Laboratorium Dalam Toksikologi. Metode Uji Toksisitas : 86135.
Nijveldt, RJ. 2001. Flavonoid : a review of probable mechanism of action and potential
applications. Am J Clin Nutr 2001 (America Society for Clinical Nutrition) ;
74:418-25.
Pangkahila, A.J. 2009. Pelatihan Fisik Menurunkan Proses Penuaan. Naskah Lengkap
Seminar Nasional Anti Aging Medicine. Fakultas Kedokteran Universitas
Udayana. Denpasar. Februari 24th 2009.
Pangkahila, W. 2007. Anti-Aging Medicine, Memperlambat Penuaan Meningkatkan
Kualitas Hidup. Upaya Menghambat Penuaan: 106-132
Pascual-Teresa, S.D., Moreno, D.A., dan Garcia-Viguera, C. 2010. Flavanols and
Anthocyanins in Cardiovascular in Cardiovascular Health : A Review of Current
Evidence. Int.J.Mol.Sci. 11: 1679-1703.
Pasupathi, P. 2009. Glutathione, glutathione-dependent enzymes and antioxidant status in
gastric carcinoma patients. Journal of Applied Biomedicine, vol. 7, No.2, p 101109.
Petrie, A., dan Sabin, C. 2003. Medical Statistic at a Glance. Massachusetss : Blackwell
Science Inc. 26-27.
Pocock, S.J. 2008. The Size of a Clinical Trial, In: Clinical Trials, A Practical Approach.
John Wiley dan Sons. 123-141.
Prior, R. 2003. Fruit and Vegetables in the Prevention of Cellular Oxidative Damage.
American Journal of Clinical Nutrition, vol 78, No. 3, 570S-578S, September
2003.
Purnomo Suryohudoyo. 2000. Kapita Selekta Ilmu Kedokteran Molekuler. Perpustakaan
Nasional RI. Jakarta: Penerbit CV Sagung Seto. Hal: 31-47.
Rohyami, Yuli. 2008. Penentuan Kandungan Flavonoid dari Ekstrak Metanol Daging
Buah Mahkota Dewa. Jurnal Logika Volume 5-Nomor 1-Agustus 2008 .
Rostinawati.,dan Sulistiyani. 2004. Uji Toksisitas dan Mekanisme Hepatoproteksi Ekstrak
Buah Mahkota Dewa .Pusat Studi FMIPA ,IPB.S

70
Sadikin, M. 2001.Pelacakan Dampak Radikal Bebas terhadap Makromolekul dalam,
Kumpulan Makalah Penelitian Radikal bebas dan Antioksidan dalam Kesehatan.
Jakarta: FK UI.
Sauza, T.P., Oliveira, P.R., Pereira., B. 2005. Physical Exercise and Oxidative Stress, effect
on intense physical exercise on urinary chemiluminescence and plasmatic
malondialdehyde. Rev Bras Med Esporte, Vol 11, No 1 Jan/Fev.
Sawitri, I.G.A.D. 2011. Pemberian Ekstrak Buah Mahkota Dewa (Phaleria Macrocarpa )
Menurunkan Kadar MDA darah tikus putih (Rattus Norvegicus ) yang Diinduksi
Aktivitas Fisik Berlebih .Penelitian Pendahuluan.Program Magister Ilmu
Biomedik UNUD
Saxena, R. And Lal, A.M. 2006. Effect of Aging on Antioxidant Enzyme Status and Lipid
Peroxidation. Journal of The Indian Academy of Geriartrics, vol.2, No.2, June
2006.
Sporman, T., Suh, J.H., Cox, B., Rocha, AE., Morrow, JD., Shigeno, ET., dan Hagen, TM.
2008. Anthocyanin/Polyphenolic-Rich Fruit Juice Reduces Oxidative Cell Damage
in an Intervention Study with Patients on Hemodialysis.
Surya Husada, P. 2000. Kapita Selekta Ilmu kedokteran Molekuler.Jakarta: Sagung Seto.
Thannical, V.J., dan Fanburg, B.L. 2000. (Dikutip oleh Jawi, 2007). Reactive Oxygen
Species in Cell Signaling, Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol
Toufektsian M.C., Lorngeril, M., Nagy, N., Salen, P., Donati, M.B., Giordano,, L., Mocl,
H.P., Peterek, S., Matrol, A., Petroni, K., Pilu, R., Rptoliu, D., Torelliu, C., Leiris,
J., Boucher, F., dan Martin, C. 2008. Chronic Dietary Intake of Plants-Derived
Anthocyanins Protects the Rat Heart Against Ischemia. J. Nutr. 138:747-752.
Widikarsana, P. 2010. Potensi Bahaya Kimia di Tempat Kerja dan Toksikologi Industri,
Balai Hiperkes dan KK Yogyakarta.
Winarsi, Herry, M.S. 2007. Antioksidan Alam & Radikal Bebas,potensi dan Aplikasinya
dalam Kesehatan. Hal 18-19.
Wreistad, R.E. 2001. The Possible Health Benefits of Anthocyanin Pigment and
Polyphenolics.
Available
from
:
www://http.lpi.oregonstate.edu/ss01/anthocyanin.html. Accessed on 2010, May 3.

71
LAMPIRAN

Lampiran 1
Konversi perhitungan dosis untuk beberapa jenis hewan dan manusia (Gosh, 1971)

Dikutip dari Lalamentik, 2008

72
Lampiran 3
Uji Normalitas Data MDA
Tests of Normality
Kolmogorov-Smirnova
Kelompok
MDA_pr Placebo
e
ekstrak buah
mahkota dewa
MDA_po Placebo
st
ekstrak buah

Statistic

df

Shapiro-Wilk

Sig.

Statistic
*

df

Sig.

.164

15

.200

.926

15

.241

.143

15

.200*

.931

15

.282

.119

15

.200*

.948

15

.488

.131
15
mahkota dewa
a. Lilliefors Significance Correction
*. This is a lower bound of the true significance.

.200*

.958

15

.652

73
Lampiran 2
Uji t-independent
Group Statistics
Kelompok

MDA_pre Placebo
ekstrak buah mahkota
dewa
MDA_pos Placebo
t
ekstrak buah mahkota
dewa

Mean

Std.
Deviation

Std. Error
Mean

15

6.0180

.38278

.09883

15

5.8000

.61257

.15817

15

6.3360

.43631

.11266

15

3.1807

.35774

.09237

Independent Samples Test

Levene'
s Test
for Equality
of Variances

F
MD Equal
A_pr variances
e
assumed
Equal
variances
not assumed
MD Equal
A_po variances
st
assumed
Equal
variances
not assumed

Sig.

t-test for Equality of Means

1.288 .129 1.169

95%
Confidence
Std. Interval of the
Sig. Mean Error
Difference
(2- Differe Differe
df tailed) nce
nce Lower Upper
28

1.169 23.49

.976 .332 21.66

.252 .21800 .18650 -.1640 .60004

.254 .21800 .18650

.60337
.16737

28

.000 3.1553 .14568 2.8569 3.4538

21.66 26.96

.000 3.1553 .14568 2.8564 3.4543

74

75
Kelompok = ekstrak buah mahkota dewa
Paired Samples Statisticsa
Mean
Pair 1

Std. Deviation

Std. Error Mean

MDA_pre

5.8000

15

.61257

.15817

MDA_post

3.1807

15

.35774

.09237

a. Kelompok = ekstrak buah mahkota dewa

Paired Samples Correlationsa

N
Pair 1

MDA_pre & MDA_post

Correlation
15

Sig.

-.304

.270

a. Kelompok = ekstrak buah mahkota dewa

Paired Samples Testa

Paired Differences

Pair MDA_pre 1
MDA_post

95% Confidence
Interval of the
Difference

Std.
Deviatio
Mean
n

Std.
Error
Mean

2.619
33

.20602 2.17746 3.06120

.79791

a. Kelompok = ekstrak buah

mahkota dewa

Lower

Upper

t
12.71
4

df
14

Sig. (2tailed)
.000

76
Kelompok = kontrol
Paired Samples Statisticsa
Mean
Pair 1

Std. Deviation Std. Error Mean

MDA_pre

6.0180

15

.38278

.09883

MDA_post

6.3360

15

.43631

.11266

a. Kelompok = control

Paired Samples Correlationsa

N
Pair 1

MDA_pre & MDA_post

Correlation
15

Sig.

-.052

.855

a. Kelompok = control

Paired Samples Testa

Paired Differences

Std.
Std.
Deviatio Error
Mean
n
Mean
Pair MDA_pre 1
MDA_post .3180 .59505
0
a. Kelompok =
control

95% Confidence
Interval of the
Difference
Lower

.15364 -.64753

Upper
.01153

t
2.070

Df
14

Sig. (2tailed)
.057

77