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    Dosage de La Paracétamolémie

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    Ikram Hamache
    Ce document décrit une méthode de dosage de la paracétamolémie par réaction de diazocopulation. La méthode implique le prélèvement d'échantillons sanguins, la préparation d'une gamme d'étalonnage et le dosage par colorimétrie pour déterminer la concentration de paracétamol.

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    Dosage de La Paracétamolémie

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    Dosage de la paracétamolémie (1)

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    Dosage de La Paracétamolémie

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    sur 24

    Faculté de Médecine

    d’Alger
    Département de Pharmacie

    EHS ALI AIT IDIR


    Laboratoire de biologie et de Toxicologie

    Méthode de glynn et kendall


    Dosage de la paracétamolémie

    Réaction de diazocopulation
    Dr LEKKAT Amira
    INTRODUCTION

    Le paracétamol appelé aussi acétaminophène est la substance active de nombreuses


    spécialités médicamenteuses de la classe des antalgiques et des antipyrétiques non salicylés
    La toxicité au paracétamol présente 6,8% des intoxications ( 66% des médicaments )
    Indications

     Les syndromes douloureux aigues ( migraines ,douleurs dentaires )


     Les affections chroniques et douleureuses
     Les syndromes febriles
    Toxicité

    • Au doses usuelles ses inconvénients sont réduits :


     Intoxication aigue: resulte de surdosage involontaire
    (automédication), accidentelle (enfant) ou volontaires
    hepatite fulminante
     Intoxication chronique : a long terme 
    atteinte rénal
    Mécanisme d’action toxique

    NAPQI se lie au glutathion  dépassement des reserves  il se trouve


    libre  se lie au cysteine ,lipide , prt des hepatocytes
    Dosage de la paracétamolemie

    C’est le dosage de la concentration du paracétamol dans le sang utilisé


    pour :
    Estimer le risque d’une atteinte hépatique chez le sujet
    ECHANTILLONAGE

    • 05 ml du sang veineux sur tube sec ou hépariné


    • Conservation : - à +4° C si analyse dans les 24h suivant
    le prélèvement
    - congelé a – 20° C si analyse différée
    RÉACTIFS

    1. Solution aqueuse d'acide trichloracétique à 10%.


    2. HCl pur « d=1,19 ».
    3. Solution aqueuse de NaNO2 (préparée
    extemporanément) (100g/L d'eau).
    4. Solution aqueuse de sulfamate d'NH4 à 150g/L
    5. Solution de NaOH à 0.6N
    6. Solution étalon de paracétamol à 1mg/ml dans l'eau
    distillée.
    PRINCIPE

    Après défécation des protéines par l'acide


    trichloracétique et sous l'action de l'acide nitreux
    naissant, le paracétamol est transformé en un dérivé
    nitreux qui se colore en jaune orangé en milieu
    alcalin.
    MODE OPÉRATOIRE

    A partir d’une solution de paracétamol a 1mg/ml, préparer une gamme d’étalonnage dans des tubes a
    centrifuger de 10ml
    Concentration 0 50 100 200 300 400 échantillon
    (µg/ml)

    Sérum témoin (ml) 1 0.9 0.8 0.6 0.4 0.2 0.5

    Solution - 100 200 400 600 800 -


    Paracétamol
    (µl)

    Ac 2 2 2 2 2 2 2
    trichloracétique
    (ml)
    MODE OPÉRATOIRE
    1. Agiter au vortex pendant 1minute
    2. récupérer 2 ml du liquide de défécation et le mettre dans
    dans un autre tube.
    3. Ajouter 1 ml d'HCI pur à 2 ml NaNO2.
    4. Agiter à la main et attendre 2 minutes
    5. Ajouter très doucement 2 ml de sulfamate d'NH4 et 2ml
    de NAOH 0.6N
    6. Agiter au vortex 15 secondes
    7. Lire l'absorbance à 430nm
    8. Tracer la courbe d'étalonnage et en déduire la
    concentration du paracétamol dans votre échantillon X
    CALCUL

    Calculer la paracétamolémie par extrapolation en se


    référant à la courbe d’étalonnage, la courbe d’étalonnage
    est établie de façon hebdomadaire, en traitant comme
    Limite de détection :
    sus-décrit, des
    Environ 50 mg/l solutions étalons de paracétamol dans le
    plasma
    Dose normal
    toxique (blanc)
    chez a 0,50,100,200,300,400
    l'enfant mg/l.
    : à partir de 200 mg/kg
    Les solutions
    Chez l'adulte :étalons de la courbe sont instables même à
    150 mg/kg
    +4°c et doivent être préparées chaque semaine ou
    conservées à -20 °c.
    R : la méthode n’est utilisable qu’après 4-24 h après
    ingestion du toxique
    INTERPRÉTATION
    Le nomogramme de prescott a 2 intérêts :
    1. Corréler les taux plasmatiques de paracétamol avec le degre de toxicité hépatique *
    2. Corréler l’efficacité du trt (NAC) en f° de la paracétamolemie en prenant en considération du délai de
    réalisation du prélèvement
    RISQUE [mg/l] a la 4éme h [mg/l] a la 15éme h

    Hepatite mortelle > ou = á 300 Mais plusieurs limites ! > ou = á 45

    Hepatite grave A
    -n’est exploitable qu’après 4h d’ingestion
    > ou = á 200 > ou = á 30
    B
    - Interférences avec l’ac salicylique et levodopa
    Absent <C
    ou = á 150
    - Intoxication a dose répété< ou = á 25
    1 2

    A: paracétamolemie > 300 mg/l a 4h  hepatite mortelle


    B : paracétamolemie a 4h > 150mg/l  mettre sous trt antidotal
    C: tous les malades a paracétamolemie <100mg/l ne présentent pas un risque d’hépatotoxicité
    BIBLIOGRAPHIE

    1-Heard KJ. Acetylcysteine for Acetaminophen Poisoning. N Engl J Med


    2008. 359:285-292.
    2-B. Mégarbane
    et al. Intoxications graves par médicaments et substances illicites en réa
    nimation, Recommandations d’expert, SRLF, 2006

    Fiche N-acétylcystéine
    3- Prescott LF, Roscoe P, Wright N, Brown SS. Plasma-paracetamol half-
    life and hepatic necrosis in patients with paracetamol overdosage.
    Lancet 1971 ;1:519-522.
    4-PARACETAMOL [archive], fiche de sécurité du Programme
    International sur la Sécurité des Substances Chimiques.
    Réaction de diazocopulation
    Introduction

    Les benzodiazépines sont une classe de molécules


    chimiques hétérocycliques formées d’un
    cycle diazépine attaché à un benzène. Ces molécules
    forment ensemble une classe thérapeutique de
    médicaments psychotropes utilisés dans
    le traitement des convulsions
    Recherche par colorimétrie

    Principe : Coloration spécifique après hydrolyse acide et


    réaction avec un réactif spécifique à partir des urines.
    Réactifs :
    • Acide chlorhydrique 6N.
    • Nitrite de sodium.
    • Sulfamates d’ammonium.
    • Réactif de Tréfouël (Solution aqueuse de chlorhydrate
    de N-alpha-Naphtyl N, N diethylpropylène à 0,1%
    Technique : Mettre dans trois tubes à essai 1ml d’urine et
    1 ml d’acide chlorhydrique 6N. Introduire les deux
    derniers au bain marie bouillant pendant 10 minutes,
    refroidir ces derniers sous un courant d’eau froid puis
    ajouter dans chaque tube 0,5 ml de sulfamates
    d’ammonium et 0,5 ml du réactif de Tréfouël.
    La présence des benzodiazépines se traduit par
    l’apparition d’un spot violet.
    Dosage par spectrophotométrie

    Principe : Hydrolyse acide à chaud des dérivés de la


    benzodiazépine- 1,4 et de leurs métabolites dans les
    liquides biologique, les produits obtenus peuvent être
    caractérisés par spectrophotométrie après
    diazocopulation
    Réactifs :
    • Solution de Cholrazépate dipotassique à 100µg/ml
    Solution d’HCl 6N
    • Solution aqueuse de nitrite de Na à 0.1%
    • Solution aqueuse de sulfamate d’ammonium à 0.5%
    • Solution aqueuse de dichlorhydrate de nahtyl-
    éthylène-diamine à 0.1%
    Matériel :
    1.Spectrophotomètre
    2.Bain-marie thermostaté (60°C)
    3.Bain-marie bouillant
    Mode opératoire: Dosage Etalon
    Dans deux Erlenmeyers : Urines ou Plasma 5ml –
    Solution étalon à
    – 5ml
    100 µg/ml
    • Faire bouillir 45 mn. HCl 6N 1ml 1ml

    • Après refroidissement, alcaliser à pH = 10 et extraire par 20 ml


    d’éther. Laver l’extrait éthéré par 5 ml de la solution saturée de
    sulfate de sodium. Sécher la phase organique par un peu de
    sulfate de sodium sec.
    • Evaporer l’éther
    • Reprendre par l’HCl 6N : 2,5ml (plasma) 5ml (urines) 5ml
    (étalon)
    Coloration :
    50 µg 100 µg 150 µg Plasma Urines Blanc

    Etalon 0.5 1 1.5

    Plasma 1.5

    Urines 1

    HCl 6N 1 0.5 0.5 0.5

    Eaud 1 1 1 1 1 1

    NaNO2 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5

    Agiter, attendre 3 mn

    SulfNH4 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5

    Agiter vigoureusement. Attendre 10 mn en agitant de temps en temps

    NED 1 1 1 1 1 1
    Agiter, porter à 60°C pendant 5 minutes

    Lire les D.O à 550 nm  Etablir la courbe d’étalonnage, et lire le taux de benzodiazépines.
    Limites de la diazocopulation

     BZD non diazocopulable : diazepam , tetrazépam


     Réaction croisée avec autre molécule diazocopulable
     Seuil de quantification elevé 50 ug/ml

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