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    Staclot La

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    Ce document décrit la méthode STACLOT pour la détection des lupus anticoagulants dans le plasma. Le test consiste à mesurer le temps de coagulation avec et sans ajout de phosphatidyléthanolamine purifiée qui neutralise spécifiquement les anticorps antiphospholipides de type lupique. Un allongement du temps de coagulation après ajout du réactif confirme la présence de lupus anticoagulants.

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    STACLOT LA

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    STACLOT LA

    Détection des lupus anticoagulants


    1. Intérêt :
    La neutralisation par des phospholipides purifiés en phase hexagonale pour la détection des
    anticoagulants de type lupique (1, 2) dans le plasma.

    Les lupus anticoagulants (LA) présentent la capacité d’allonger les temps de coagulation des tests
    dépendant des phospholipides et sont cliniquement associer à : lupus, thromboses et
    avortements spontanés. Leur présence peut être persistante ou transitoire.

    La nécessiter de différencier les LA des anticorps anti facteurs et/ou de l’héparine.

    2. Principe :
    À 37°C les phosphatidyléthanolamine purifié en phase hexagonale sont reconnues par les
    anticorps anti-phospholipides de type lupique.
    L’allongement du temps de céphaline + activateur (TCA) est corrigé par cet apport de
    phosphatidyléthanolamine HII,ce qui prouve la présence d’anticoagulants de type lupique.

    3. Etape pré-analytique :
    Prélèvement sur tube citraté.
    Centrifugations pour bien déplaquetter le plasma, une 1ere fois 15min à 2000-2500g prélever le
    surnageant et le centrifuger une 2e fois 15min à 2000-2500g (plaquettes résiduelles ‹10G/L).
    Si conservation du plasma :
    4h à 20 +/- 5°C.
    1mois à -20°C (décongélation à 37°C).

    4. Réactifs et matériels :
    Réactif 1 (R1) : Buffer = 1ml tampon
    Réactif 2 (R2) : Phosphatidyléthanolamine HII lyophilisé
    Réactif 3 (R3) : plasma normal lyophilisé + inhibiteur Héparine
    Réactif 4 (R4) : PTT-LS céphaline + activateur particulaire (Silice) lyophilisé
    Réactif 5 (R5) : 1,5 ml de diluant pour le R4.
    STA CaCl2 0,025M
    STA control LA 1 et 2 : control négatif et positif en LA
    Bain-marie à 37+/- 5°C
    Et équipements habituel aux laboratoires (centrifugeuse, chronomètre, pipette, eau distillé..).

    5. Préparation et conservation des réactifs :


    Conservation sous l’état d’origine des réactifs, intact à 2-8°C jusqu’à date de péremption.
    R1 R2 R3 R4 R5 Control 1 et 2
    reconstitution Prêt à 0,25 ml d’eau 0,5 ml d’eau 1 ml du R5 Prêt à 1 ml d’eau distillée
    l’emploi distillée distillée Agitation l’emploi
    intermittente
    Stabiliser 3Omin à température ambiante avant l’emploi
    Stabilité après 8h à 20 +/-5°C 8h à 20 +/-5°C 8h à 20 +/-5°C 8h à 20 +/-5°C
    reconstitution 24h à 2-8°C Ne pas congeler 24h à 2-8°C
    Ne pas congeler Ne pas congeler

    6. Mode opératoire :

    Tube 1 Tube 2 :
    50 𝜇𝑙 plasma pur (patient ou
    contrôle)
    +

    50 𝝁𝒍 R1 50 𝝁𝒍 R2

    Mélanger incuber 9 min

    50 𝝁𝒍 R3

    Mélanger incuber 1 min

    100 𝝁𝒍 R4

    Mélanger incuber 5 min

    Déclencher le chronomètre en ajoutant 100 μl STA-CaCl2 0,025M pré-


    incubé à 37°C
    7. Résultats :
    La diminution du temps de coagulation (TC) du plasma du tube 2 ≥ à 8 sec par apport à celui du
    tube 1 est significative d’une neutralisation des anticorps anti-phospholipides.

    TC Tube 1 – TC Tube 2 Résultats


    ‹ 8 secondes -
    ≥ 8 secondes +

    Avec control LA 1 et 2 respectivement négatif et positif.

    8. Limites de la méthode :
     Insensibilité aux taux d’héparine ‹1 UI/ml de plasma.
     Certain anticorps anti-facteur peuvent interférer dans le test vu l’hétérogénéité de ces
    anticorps, si doute effectuer un test spécifique pour leur mise en évidence.
     Donne un résultat faussement positif en cas de prise d’inhibiteurs de la thrombine (ex
    hirudine, argatroban..).

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