Chapitre 2.

REPLICATION DE L’ADN

• Les acides nucléiques sont des acteurs majeurs de différents processus cellulaires et
principalement de la transmission et du décodage de l’information génétique par des
mécanismes centraux et universels que sont:
- la réplication de l’ADN,
- la transcription de l’ARN
- et la traduction du message génétique en protéines

• La duplication intégrale de l'ADN afin de générer deux copies exactes au

niveau moléculaire est appelé réplication.

ADN parental

2 ADN identiques

1
Chapitre 2.

REPLICATION DE L’ADN

1. La réplication de l’ADN doit être absolument parfaite et il ne peut pas se

permettre de faire même une seule erreur.
Même si de telles erreurs sont faites, elles doivent être réparées
immédiatement. Ceci est exactement ce qui se passe lors de la réplication.

2. La réplication permet de transmettre l’information contenue dans l’ADN de

générations en générations par la division cellulaire.
Les cellules filles ont le même patrimoine génétique : celui de la cellule mère.
C’est une reproduction à l’identique de l’ADN .

3. Pour la cellule procaryote, la réplication de l’ADN se fait simultanément a la

division cellulaire.

4. Pour la cellule eucaryote, la cellule obéit a un cycle cellulaire : la réplication de

l’ADN et la division de la cellule sont séparées dans le temps :
- Phase S = synthèse d’ADN.
- Phase M = Mitose : Ségrégation des chromosomes et division cellulaire.

Les principes de la réplication

Quel est le mode de réplication de l’ADN ?
3 hypothèses:

1. Dans le modèle semi-conservatif, les deux

brins parentaux sont séparés et chacun fait
une copie de lui-même.

2. Après un tour de la réplication, les deux

molécules filles comprennent chacune un
ancien et un nouveau brin.

3. Notez que, après deux tours, deux des

molécules d'ADN se composent uniquement
d'un nouveau matériau, tandis que les deux
autres contiennent un ancien et un nouveau
brin.

2
Chapitre 2.

Dans le modèle conservatif:

1. La molécule parentale dirige la

synthèse d'une toute nouvelle
molécule double brin, de sorte
qu'après un tour de réplication,
une molécule fille a conservé les
deux brins anciens.

2. Ceci est répété dans la

deuxième réplication.

Dans le modèle dispersif:

L’ADN dans les deux brins

parentaux est répartie plus ou
moins aléatoirement entre deux
molécules filles.

3
Chapitre 2.

Croisssance des bactéries ds N15

Transférer les cell. dans N14,

1. Culture des bactéries
Croissance pour plusieurs générations dans un milieu
pour 1 génération
contenant des ions ammonium (NH4+) constitués d'azote 15 (N15)
(isotope lourd), comme source d’azote:
Les bactéries fabriquent leurs nucléotides à partir de ces ions ammonium
et les utilisent pour synthétiser leur ADN.
Au début de l'expérience, la quasi-totalité L'ADN a été marqué
uniformément avec N15
Croissance pour La 2ème
génération dans N14,
2. Centrifugation de l’ADN par ultra-centrifugation sur gradient du ClCs
pour séparer les molécules d’ADN selon leur densité :

ADN (N14) : léger (haut du tube du gradient) +Densité

ADN (N15) : Dense (bas du tube du gradient)

Croisssance des bactéries ds N15 0 0 1 2

Transférer les cell. dans N14, La densité de N15 est

Croissance pour 1 génération supérieure à la densité de
1 N14

ADN lourd (N15/N15)

ADN hybride (N15/N14)

Croissance pour La 2ème
génération dans N14,
2
ADN léger (N14/N14)

ADN hybride (N15/N14)

4
Chapitre 2.

Croisssance des bactéries ds N15

ADN parental
Transférer les cell. dans N14,
Croissance pour 1 génération

Croissance pour La 2ème

génération dans N14,

5
Chapitre 2.

La réplication est semi-conservative

Modèle semi-conservatif Modèle conservatif Modèle dispersif

Après
1ère
réplication

Après
XX Après
1ère
réplication

Après
Après
1ère
réplication

Après
2ème 2ème 2ème
répli. répli. répli.

Exercice 1.

6
Chapitre 2.

Exercice 2.

Les principes de la réplication

7
Chapitre 2.

1. La polymérisation s’effectue dans le sens 5’ → 3’.

3’ L’ADN polymérase transfère le
5’-phosphate du dNTP au 3’-OH de la chaîne qui s’allonge. Cette réaction est
couplée à l’hydrolyse du dNTP avec libération de pyrophosphate (PPi).

5’
Nouveau brin Brin matrice 5’ 3’

Liaison
Phosphodiester

Polymérisation :
sens 5’ → 3’.
3’

Les principes de la réplication

2. La réplication est semi-conservative
3. La réplication est bidirectionnelle (de façon antiparallèle):
un sens pour un brin et l’autre sens pour l’autre brin.

4. La polymérisation se fait de façon complémentaire A-T et G-C.

5. L’ADN est répliqué par des enzymes appelées ADN polymérases,

polymérases des enzymes
qui utilisent un brin d’ADN comme matrice pour synthétiser le brin
complémentaire.

6. La polymérisation s’effectue en utilisant des désoxyribonucléotides triphosphate

(dNTP) comme substrats : dATP, dCTP, dGTP et dTTP.

8
Chapitre 2.

Les principes de la réplication

7. La réplication, commence ou initie à un site prédéterminé appelé Origine (ORI) de
la réplication formé de deux fourches de réplication. Elle se propage simultanément
de part et d’autre de l’origine de réplication.

Fourche de
Procaryotes réplication

Origine de réplication (ORI)

Eucaryotes

8. La réplication se termine au niveau d’un site prédéterminé appelé TER. Un

ADN ayant une origine et un site TER est appelé un réplicon.

Les principes de la réplication

9. Les ADN polymérases ont besoin d’une amorce d’ARN.
Elles ne peuvent pas initier une chaîne d’ADN à zéro, elles ne peuvent qu’allonger
une chaîne polynucléotidique existante à partir d’une fonction 3’-OH libre.

(Ceci est une différence importante entre les ADN et ARN polymérases, ces dernières
initiant la transcription sans amorce).

Amorce

Réplication

9
Chapitre 2.

1. Les hélicases :
Enzymes spécialisées dans la séparation des deux brins d’ADN grâce a l’énérgie
fournie par l’hydrolyse de l’ATP.

2. Les SSB (Single-Strand Binding proteins):

Protéines de liaison de l’ADN monobrin, elles maintiennent les deux brins d’ADN
séparés et les empêchent de se réassocier. Elles agissent suite aux hélicases.

3. Les Primases :
• Les ADN polymérases ne peuvent fonctionner qu'a partir d'une amorce.
• La primase est une enzyme (appartenant à un complexe protéique = primosome) qui
synthétise ces amorces.
• C'est une ARN polymérase, qui est capable de synthétiser un brin d'ARN.
• Elle synthétise des amorces de 2 à 5 bases pour les procaryotes et de 4 a 10 bases
pour les eucaryotes.
• Les substrats utilisés sont des NTP.
Les amorces étant constituées d'ARN, elles seront ensuite éliminées.

10
Chapitre 2.

4. Les Topo-isomérases
la séparation de l’ADN par les hélicases entraine la formation de super-tours aux deux
extrémités de l’ADN, car celui-ci est ≪ fixe ≫ à ses extrémités. Le rôle des topo-isomérases
est de supprimer ces super-tours. Pour ce faire, elle va couper l’un des deux brins au niveau
d’une liaison phosphodiester, puis resynthétiser cette liaison.

5. Les ADN polymérases (voir plus loin)

6. L’ADN Ligase :
• C'est l'enzyme qui va unir deux d’ADN synthétisés (fragments d'Okazaki).
• L’ADN polymérase I supprime la matrice d'ARN (après élongation avec l’ADN polymérase
III) grâce a son activité5'-exonucléase puis re-synthétise la suite du brin.
• Lorsque l’ADN polymérase I arrive au niveau du fragment suivant, il manque une liaison
phosphodiester entre les deux fragments, qui sera synthetisée par la ligase.

Enzyme Gène Fonction

Protéine dnaA Initie la réplication en se fixant sur les
initiatrice boîtes de 9 bp de la région Ori
Hélicase dnaB Protéine qui sépare le double brin d'ADN

DnaC dnaC Se lie à l’hélicase pour l’amener à Ori.

SSB ssb Protéine qui fixe les simples brins d'ADN

pour les empêcher de se réassocier
Primase DnaG Synthèse des amorces d’ARN
Ligase lig Lie entre eux les différents fragments
d'ADN du brin suivant
Gyrases gyrA, gyrB Réduit les torsades formées par la
progression de la fourche et catalyse le
Super-enroulement de l’ADN répliqué
TBP (ter binding tus Bloque les fourches de réplication
protein) (Terminaison de la réplication)
DNA polymérases Synthèse d’ADN, réparation

11
Chapitre 2.

1. Initiation de la réplication
- L’ origine de réplication :
• Elle est nécessaire pour initier le processus de réplication de l’ADN et maintenir le
nombre de copies chromosomiques. Ces origines de réplication sont appelées ARS :
Autonomously Replication Sequence, caractérisées initialement chez la levure.
• La réplication commence à l’origine de réplication (OriC) puis elle progresse autour.

Origine de Brin matrice

réplication ADN noeuf

Fourches de
réplication

ADN

• Quand on réplique la moitié du chromosome on obtient une structure

intermédiaire sous forme de la lettre grec téta θ. Le site de l’origine de la
réplication qui est unique a été identifié par après. Il s’agit d’ séquence de 245
nucléotides riche en AT (oriC) reconnue par les protéines spécifiques de la
réplication.
• La réplication du chromosome bactérien commence donc au niveau de l’origine
oriC et progresse jusqu’à la réplication compète de tout le chromosome ce qui
constitue une seule unité de réplication.
2 ADN filles
Fourches de Forme téta θ
Bulle de réplication
réplication

Origine de réplication chez E. coli

• Une unité d’ADN qui se réplique sous le contrôle d’une seule origine de réplication
est dite réplicon.

12
Chapitre 2.

Preuve de la polymérisation dans les deux sens des chaînes d'ADN

La microscopie électronique nous montre
que la progression de la réplication est
bidirectionnelle ce qui est confirmé par
une expérience de marquage à la
thymidine tritiée.

1. Reconnaissance de la séquence d’origine

Le chromosome circulaire de E. coli a une origine de réplication unique (oriC). La
séquence minimale requise est de 245 pb qui contient plusieurs sites critiques. Les
protéines initiatrices se lient à oriC et provoquent une courte section de l'ADN pour
se détendre.

DnaA : Les protéines

initiatrices se fixent à
oriC

Déroulement de l’ADN

13
Chapitre 2.

Origine de réplication :
4 Sites (9 pb) de fixation des protéines initiatrices
DnaA
3 Répétions en tandem de 13 pb

5’
3’

3’
5’

2. Formation de primosome, ouverture du double et stabilisation des brins simples:

Le dénouement permet à l’hélicase et d'autres protéines (SSB) de s’attacher au brin d’ADN:

(DnaB)

-Les Hélicases se lient à chaque brin à chaque fourche de réplication et se déplacent dans
le sens 5’: 3’ déplaçant ainsi également la fourche de réplication en coupant les liaisons
hydrogènes entre les bases.
- Les SSB stabilisent les brins simples.

Déroulement de Déroulement de
l’ADN l’ADN

14
Chapitre 2.

3. L’ADN gyrase (topoisomérase) réduit la tension de torsion qui se forme en avant

sur la fourche de réplication à la suite du dénouement de la double hélice en faisant
une cassure double brin.
4. La primase synthétise de courts segments d’ARN, fournissant un groupe 3'-OH
dans lequel l'ADN polymérase peut ajouter des nucléotides.
Ces amorces sont plus tard enlevés et remplacés par des nucléotides d'ADN.
Amorce

2. Elongation
Réplication continue Amorce

L’ADN polymérase allonge le brin d’ADN en catalysant la polymérisation.

Primosome = Hélicase (dnaB) + Primase (dnaG)

Les ADN polymérases

• Un pas important vers la compréhension du mécanisme de la réplication

bactérienne, fut la découverte par Arthur Kornberg d’une enzyme catalysant la
synthèse de l’ADN in vitro. Cette enzyme appelée DNA polymérase I a été isolée
d’E. coli.

• L’activité de cette enzyme nécessite une amorce (un segment de quelques

nucléotides) et un ADN matrice relativement long et des désoxyribonucléotides
(dATP, dCTP, dAGTP et dTTP). La réaction catalysée par cette enzyme est :

Matrice + ions
(DNMP) n + dNTP bivalents (dNMP) n+1 + PPi
Amorce Amorce allongée

• dNMP = desoxyribonucléotides monophosphate

• dNTP = desoxyribonucléotides triphosphate
• ppi = phosphate inorganique
• La séquence particulière des desoxyribonucléotides ajoutés dépend de
la séquence de l’ADN matrice (complémentarité).

15
Chapitre 2.

Les ADN polymérases des procaryotes

ADN polymérase I ADN polymérase II ADN polymérase III
(Gène polA) (Gène polB) (Gène polC)
Structure Monomérique > 4 sous unités > 10 sous unités
(core + clamp +
protéines associées)
Rôle Elimine et remplace les Réparation de Réplication de l’ADN
amorces lors de la réplication l’ADN génomique
+ réparation
Polymérisation 5’ 3’ Oui Oui Oui (sous-unité α)

Exonucléase 3’ 5 ’ Oui (réparation) Oui Oui (sous-unité ε)

Exonucléase 5’ 3’ Oui (élimine les amorces) Non Non

Vitesse de 250-1000 bases / sec

polymérisation
ADN POLYMERASE III = polymérase de la réplication (réplicase).
- Elle est impliquée dans la synthèse des deux brins
- Très grande vitesse de réplication (vitesse de réplication : Bactéries: 1000 pb/sec/fourche)
Chromosome E. Coli fait 4,6x106 pb et réplique en 42 min d’où nécessité de 2 fourches
- Grande processivité.
Il existe d’autres polymérases :
ADN polymérase IV = Réparation de l’ADN
ADN polymérase V = Réparation de l’ADN, réplication translésionelle.

L’ADN polymérase III :

Holoenzyme

Chez E. coli, la dissymétrie de

fonctionnement de l'ADN pol III
(réplicase) correspond à une
dissymétrie de composition en 2
complexes enzymatiques formés
d’une dizaine de sous-unités
différentes.

l'un assure la synthèse du

brin continu et l'autre la
synthèse du brin discontinu

16
Chapitre 2.

Brin matrice:
5’ 3’

Brin matrice:
3’ 5’

La réplication est bi-directionelle

L’élongation est monodirectionelle (5’  3’) ?????

- Sur le brin précoce où la synthèse d'ADN est continu, une seule amorce est
nécessaire uniquement à l’extrémité 5’ du brin nouvellement synthétisé.

- Sur le brin retardé,

retardé où la réplication est discontinue, une nouvelle amorce doit
être générée au début de chaque fragment Okazaki.

Le clamp glissant (sous-unités β de l’ADN pol III):

• Protéine dimérique (bactéries) ou trimérique (eucaryotes)
qui s’associe en anneau autour de l’ADN.
• Le clamp peut glisser le long de la double-hélice, celle-ci passant
au travers de son trou central.
• Le clamp possède également une affinité pour l’ADN polymérase. Lorsque le clamp
est fixé sur l’ADN et lié à l’ADN polymérase, il augmente fortement la processivité de
l’enzyme, c’est à dire l’efficacité de la polymérisation.
• Le clamp agit en particulier en empêchant l’ADN polymérase de se dissocier de l’ADN,
une fois la synthèse démarrée.
• Lors de la réplication du génome, elle synthétise l’ensemble du brin rapide sans
jamais se dissocier.
Sous-unité β

ADN

Sous-unité β

Chez les eucaryotes = PCNA pour Proliferating Cell Nuclear Antigen

17
Chapitre 2.

Le chargeur de clamp (complexe  de l’ADN pol III)

RFC chez les eucaryotes (Replication Factor C).

• La fixation du clamp glissant sur l’ADN au niveau d’un site de réplication pose un
problème topologique. Etant en forme d’anneau, il ne peut en principe ni entrer, ni
se détacher d’une molécule d’ADN. Pour permettre cela, il faut pouvoir ouvrir
l’anneau, afin que l’ADN puisse se glisser dans le trou central.

• Ce problème est particulièrement aigu au niveau du brin lent pour lequel il y a de

nombreux événements de démarrage et d’arrêt de polymérisation en raison de la
nature discontinue de la synthèse. En effet, à chaque fois qu’une ADN polymérase
démarre la synthèse d’un fragment d’Okazaki, il faut lui associer un clamp glissant.
A chaque fois qu’elle a terminé, il faut retirer le clamp de l’ADN pour pouvoir le
réutiliser plus loin.

Chargeur de clamp:
La sous-unité en jaune
sert de levier pour
ouvrir l’anneau.

Le chargeur de clamp (complexe  de l’ADN pol III)

• Structure en anneau incomplet, avec un côté ouvert, qui permet de se glisser

autour de l’ADN.
• Les deux protéines, clamp et chargeur de clamp s’empilent de manière
coaxiale.
• Une des sous-unités du chargeur fait alors levier pour ouvrir le clamp. Pour
cela, le chargeur de clamp possède une activité ATPasique qui fournit l’énergie
nécessaire au changement de conformation .

Chargeur de clamp

Clamp

18
Chapitre 2.

même temps
Mécanique de synthèse des deux brins d'ADN en mê

On sait depuis les années 1970 que la réplication se produit au sein d’une
structure compacte regroupant un grand nombre de protéines que l’on a appelé
le réplisome.

La composition et le mode de fonctionnement de ce réplisome sont restés flous

jusque dans les années 90, mais sont aujourd’hui relativement bien élucidés, en
particulier grâce aux données structurales.

On sait maintenant que la réplication des deux brins, rapide et lent, se font au
même endroit, par l’intermédiaire de deux ADN polymérases associées au sein
d’un même complexe.
complexe

Mécanique de synthèse des deux brins d'ADN en même temps

L’ensemble du processus est concerté et son «chef d’orchestre» en est le chargeur de
clamp qui joue à la fois le rôle d’ossature, en formant le noyau structural du complexe
sur lequel les différents autres acteurs viennent se fixer, et celui d’organisateur en
distribuant les clamps et ADN polymérases aux bons sites, au bon moment.

Brin précoce

Brin retardé

19
Chapitre 2.

Mécanique de synthèse des deux brins d'ADN en même temps

• Formation d’une boucle par le brin à synthèse discontinue, sur un tour complet
• Tour de 180° du fragment d’Okazaki en cours de synthèse le plaçant dans la même
orientation que le brin à synthèse continue.
• Synthèse d’ADN assymétrique et simultanée sur les deux brins.
• Complexe enzymatique (ADN polymérase III) avec deux sites catalytiques liés se
déplaçant à la même vitesse dans une seule et même direction.

Réplication de l’ADN procaryote : Réplisome

Réplisome =
L’hélicase + primase + Deux ADN polymérases + Deux clamps + chargeur de clamp.

20
Chapitre 2.

3. Le chargeur charge le clamp sur

1. L’hélicase recrute la primase. Le 2. La primase synthétise l’amorce. La primase est déplacée. La
chargeur de clamp fixe un clamp et l’ouvre. une amorce ARN. polymérisation continue de manière
bidirectionnelle et la fourche de
réplication avance.

4. La boucle du brin lent s’agrandit,

l’ADN simple brin démasqué est 5. La polymérase du brin lent 6. Le clamp libre est rechargé sur
protégé par la SSB. La polymérase du quitte son clamp et «saute» sur le chargeur de clamp. Retour à
brin lent termine le fragment le clamp en attente sur l’amorce. l’état initial.
d’Okazaki.

3. Finition du brin retardé

21
Chapitre 2.

5. Ligation
Brin matrice

Nouveau brin d’ADN

ARN

ADN polymérase I remplace

les nucléotides de l’ARN par
des nucléotides d’ADN

La ligase ferme la brèche par

une liaison phosphodiester
entre le 5’-P et le 3’-OH.

Vide

4. Terminaison
Présence de séquences « terminator » (TER) situées à l’opposé de l’oriC pour
chacune des deux fourches.

La protéine Tus (terminator utilisation substance) reconnaît les séquences d’arrêt

de réplication et bloque DnaB (hélicase).
Intervention d’une topoisomérase IV pour catalyser la séparation des 2 chromosomes reliés.

22
Chapitre 2.

Fidélité de la réplication de l’ADN : correction

des erreurs d’élongation : PROOFREADING
- Correction d’une absence de complémentarité entre les nucléotides des deux
brins d’ADN

Taux de mutation faible : 10-9 à 10-12 erreurs/pb insérées, grâce à :

1. Règles d’appariement des bases sur le modèle du brin matriciel
2. Activité correctrice des enzymes ADN Pol I et ADN Pol III
Activité exonucléasique 3’ >>5’ (enlever un nucléotide mal apparié et le
remplacer par le bon nucléotide).

Base L’ADN pol III

L’ADN pol III enlève la base
Base complémentaire incorrecte s’arrête
incorrecte et remet la base
insérée complémentaire

La réplication chez les eucaryotes

• Grande similarité avec la réplication chez les procaryotes.
• Présence de nombreuses origines de réplication sur les chromosomes.
• Plusieurs ADN polymérases ayant différentes fonctions : Réplisome plus complexe.
• Assemblage de l’ADN en nucléosomes immédiatement après la réplication.

1. Origines de réplication
= ARSs = Autonomously Replicating Sequences
d ’≈ 100 à 200 kpb reconnues par le complexe de reconnaissance d’origine(=DnaA)

23
Chapitre 2.

1. Origines de réplication

Chez la levure:
• Le CRO se fixe à l’ORI
• Recrutement des protéines Cdc6 et cdt1.
• CRO + Cdc6 et Cdt1 recrutent l’hélicase (=
MCM = minichromosome maintenance proteins).
• La réplication est liée au cycle cellulaire en
dépendant de la disponibilité de Cdc6 et Cdt1.
• Chez la levure, Cdc6 et Cdt1 sont synthétisées
à la fin de la mitose et pendant la phase G1 et
sont détruites après le début de la réplication.
• Donc le réplisome se forme uniquement avant
la phase S, et lorsque la réplication commence,
de nouveaux réplisomes ne peuvent plus se
former à l’origine de réplication car Cdc6 et Cdt1
sont déjà dégradées.

Cdc6 = Cell division control protein 6

Cdt1 = DNA replication factor

Réplication bi-directionnelle à partir de plusieurs origines de réplication

24
Chapitre 2.

Enzymes de la fourche de réplication

RPA = Replication Protein A

ADN polymérases eucaryotes

Nombre de sous-unités Fonction

- Synthèse de l’amorce
- Réparation (base excision)
- Réplication et réparation de l’ADN mitochondrial
- Réplication du brin retardé, réparation

- Réplication du brin précoce, réparation

- réparation
- Réplication translésionelle
- Réparation
- Hypermutation somatique
- Réplication translésionelle
- Réplication translésionelle
- Réplication translésionelle
- Réplication translésionelle

25
Chapitre 2.

ADN polymérases eucaryotes

• La réplication de l'ADN chromosomique chez les eucaryotes requiert l'activité de trois
ADN-polymérases : ADN Polα , ADN Pol δ et ADN Pol ε.
• Trois ADN polymérases sont présentes dans chaque fourche de réplication
.(réplisome), et chaque polymérase contient de multiples sous-unités.
• En outre, alors que le réplicon de E. coli contient 13 protéines connues, les réplisomes
de levures et des mammifères contiennent au moins 27 polypeptides différents.

• L’ADN Pol δ et ADN Pol ε doivent interagir avec les protéines PCNA (proliferating cell
nuclear antigen) et le Fatceur de réplication C (Rf-C) pour être active.
PCNA est le clamp qui attache la Pol δ à l'ADN pour être processive(équivalent de la
sous-unité β d’E. coli).
Rf-C est nécessaire pour charger le PCNA sur l’ADN.

δ ou ε

En raison de sa processivité relativement faible, l'ADN Polα /primase est rapidement remplacée par
l'ADN Pol δ et ADN Pol ε très processives.
Le procédé de remplacement de l'ADN Pol α / primase par l'ADN Pol δ ou Pol ε est appelé
commutation de la polymérase (polymerase Switching) et donne trois ADN polymérases différentes
fonctionnant à la fourche de réplication eucaryote.

: Séquence de 30 nucleotides

Extension par la pol δ (brin retardé : Fragments

d’Okazaki)
ou pol ε (brin précoce).

26
Chapitre 2.

La réplication chez les eucaryotes

Brin précoce

Brin retardé

• Les ADN Polymérases δ et ε possèdent une activité exonucléase 3’→ 5’

nécessaire pour la correction d’épreuves.

• Pas d’activité exonucléase 5’ → 3’ :

donc elles ne peuvent pas éliminer les amorces ARN comme l’ADN polymérase I
d’E. coli.

• Les ribonucléases H1 et FEN-1 (nucléase F1) dégradent les amorces d'ARN.

• La polymérase δ remplit les lacunes, et l'ADN ligase scelle les fragments, tout
comme dans E. coli.

27
Chapitre 2.

Réplication des extrémités des chromosomes

• Un télomère est une région hautement répétitive, donc à
priori non codante, d'ADN à l'extrémité d'un chromosome.
Il assure une protection des terminaisons chromosomiques.
• A la fin de la molécule d'ADN étant répliquée de façon discontinue, il
n'y aurait pas de brin d'ADN pour fournir un 3’-OH (amorce) libre pour
la polymérisation de désoxyribonucléotides après que l'amorce d'ARN
du fragment Okazaki terminal a été excisée.

Si c'était le cas, les brins d'ADN seraient plus courts chaque fois qu'ils se répliquent
?????

Solution:
• La télomérase, une ADN polymérase qui contient un ARN intégré qui agit comme son
propre amorce, est utilisée pour reproduire l'ADN aux extrémités des chromosomes.
• Cette enzyme unique a été découverte en 1985 par Elizabeth Blackburn et Carol
Greider.
Ils ont partagé le Prix Nobel 2009 de physiologie ou de médecine avec Jack Szostak qui,
avec Blackburn, a déterminé comment les structures uniques de télomères les
protégeaient de la dégradation.

ARN de la télomèrase Protéine télomèrase

(doigt) Structure d’une portion de la
télomérase:
• L’ARN (en bleu) contient une
Région de l’ARN séquence matrice pour la synthèse
utilisé comme
matrice de l’ADN des télomères par le
domaine « Reverse transcriptase »
(vert).
• La télomèrase possède plusieurs
domaines (non montrés dans cette
figure) nécessaires pour assembler
Site actif de la correctement l’enzyme au niveau
télomèrase des télomères.
Reste du ADN
chromosome synthétisé

28
Chapitre 2.

Les télomérases
• Les télomérases, enzymes transcriptases inverses spécialisées, assurent la synthèse et
la croissance des télomères, chez l'humain et chez la plupart des autres organismes

• Ces enzymes sont très actives surtout pour les cellules qui se divisent de nombreuses
fois (exemple : les cellules-souches).

• Ainsi, dans beaucoup de types cellulaires humains, la réplication de l'ADN et

l'expression du gène TERT, codant la télomérase inverse transcriptase, sont réprimés,
les télomères de ces cellules se raccourcissent donc progressivement à chaque
division : on dit qu'ils constituent des horloges biologiques.

• Ce manque d’activité dans les cellules somatiques induit une entrée en sénescence
des cellules.
• Au contraire, dans les tissus à multiplication cellulaire intense, comme les cellules-
souches ou les globules blancs du sang, le gène TERT est exprimé et la longueur des
télomères reste constante.
• Chez l'humain, la séquence répétitive des télomères est TTAGGG, sur une
longueur de 3 à 20 kilobases.
• Ces répétitions varient d'une espèce à l'autre mais comportent beaucoup
de bases guanine-cytosine.

Réplication des télomères de chromosomes humains

Brin parental

Brin retardé incomplet

La télomérase se fixe sur le télomère

Télomérase

la télomérase
allonge
l’extrémité 3’
du brin
parental par
complémentari ARN de
té à l’ARN la télomérase
matrice

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Chapitre 2.

Réplication des télomères de chromosomes humains

Translocation

Extension répétée et
translocation plusieurs
fois Puis libération de
la télomérase.

Réplication des télomères de chromosomes humains

Achèvement de la synthèse du brin

complémentaire par l’ADN polymérase:
1. Synthèse de l’amorce.
2. Polymérisation .

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