Chapitre II La Réplication de LADN

Chapitre II
La réplication de
l’ADN
I- Généralités
• Synthèse de plusieurs molécules d’ADN à partir d’une
molécule parentale initiale afin de transmettre à la
descendance une information génétique conforme.
• Règles d’appariement:
•A=T
•C=G
• Réplication est semi-conservative

RÉPLICATION DE L’ADN
 La réplication est le processus de reproduction

d’ADN qui conduit à la formation des copies d’ADN
identiques entre elles et à la molécule initiale. Il s’agit
d’un processus commun chez les eucaryotes et les
procaryotes, qui se déroule dans les cellules
somatiques avant leur division, pendant la phase S de
l’interphase. Ce phénomène est catalysé par un
groupe d’enzyme et de protéine hautement spécifique.
 Lois fondamentales de la réplication d’ADN
 La réplication d’ADN est gouvernée par trois lois
fondamentales : elle est semi conservative,
bidirectionnelle et discontinue.
 Réplication de l’ADN est semi-conservative :
c’est une réplication où un brin de l’ADN
parental sert de matrice (modèle) à la synthèse
d’un nouveau brin fils complémentaire.
 Dont chaque molécule d’ADN fille obtenue
dans ce cas contient un brin parental intact et
un brin néo synthétisé. La mise en évidence
expérimentale de la réplication semi-
conservative d’ADN est réalisée par Meselson
et Stahl (1957).
 Réplication de l’ADN est bidirectionnel :
 La réplication débute en un point bien précis, qui est nommé origine de réplication
(ORI C), elle progresse à partir de ce point dans les deux directions, impliquant
deux fourches de réplication qui avancent dans des directions opposées . Chez les
procaryotes, il existe une seule origine de réplication contrairement aux eucaryotes
qui possèdent des origines multiples de réplication.
 Réplication d’ADN est discontinue (pour le brin retardé):
 La synthèse d’ADN s’effectue toujours dans le sens 5’ 3’ pour les deux brins. Bien
qu’elle est d’une manière continue pour un brin et discontinue pour l’autre brin,
qui s’effectue par étape ou par morceaux. Les fragments d’Okazaki sont des
segments d'acide nucléique qui sont produits lors de la réplication des
chromosomes. Leur existence fut mise en évidence pour la première fois en 1968
par Reiji et Tsuneko Okazaki ainsi que leurs collègues en étudiant la réplication de
la bactérie Escherichia coli. Lors de la réplication, le brin « retardé » est
synthétisé de manière discontinue, par petits fragments qui sont ensuite suturés les
uns aux autres. Le brin d’ADN synthétisé en continu est appelé le brin « avancé ».
Pour démarrer la synthèse de l’ADN, l'ADN polymérase nécessite une amorce
d'ARN, qui est petit fragment de 4 à 12 ribonucléotides synthétisé par une ARN
polymérase appelée primase. En effet l’ADN polymérase ne sait qu’allonger une
chaine nucléotidique préexistante. Les amorces d’ARN seront ensuite détruites,
hydrolysées et remplacées par de l’ADN. C’est l’ADN polymérase I qui catalyse
cette opération et resynthétise de l’ADN.
 Meselson et Stahl cultivent des bactéries (E. coli) dans
un milieu dans lequel les substances organiques
utilisées comme source d'azote contiennent de l'azote
lourd (N15). Au cours de la culture, toutes les molécules
azotées et en particulier l'ADN contiennent une forte
proportion d'azote N15. L'ADN "lourd" a une densité
qui peut être distinguée de l'ADN "léger". Les
bactéries cultivées en présence de molécules azotées
N15 sont repiquées sur un milieu contenant des
molécules azotées N14. L'ADN est extrait, placé dans la
solution de chlorure de Césium qui permet de créer un
gradient de densité et centrifugé. Après centrifugation,
deux bandes sont formées, l’une pour l’ADN ayant le
N15 et une autre pour l’ADN ayant le N14 (Fig. 11).
• Première réplication
les molécules "lourdes" distribuées de
façon égale entre les deux molécules filles
• Deuxième réplication
l'apparition de molécules de
deux poids différents
Réplication semi-conservative
la molécule mère donne un de
ses brins à chaque molécule Expérience de Meselson-Stahl
fille, qui est complétée par une avec E. Coli
chaîne nouvellement
synthétisée.
A. Réplication de l’ADN chez les procaryotes
B. Réplication de l’ADN chez les eucaryotes

Vitesse de réplication de l’ADN
• Réplication est une réaction rapide:
- Bactéries: 1000 pb/sec/fourche,
Chromosome E. Coli fait 4,4*106pb et réplique
en 40 min d’où nécessité de 2 fourches
- Cellules humaines: 100 pb/sec,
Le génome humain fait 3x109 pb , réplique en 8
heures, il faut au moins 1000 fourches de
réplication
Mécanisme de la réplication
• Réaction asymétrique uniquement dans le sens 5’P--->3’OH

Asymétrie est liée à l’activité de l’ADN polymérase:
• nécessité d’avoir une amorce
• dernier résidus de l’amorce doit être apparié et avoir un
groupement 3’OH libre
• Présence de nucléotides et du magnésium Mg2+ dans le milieu
• ADNpolyIII utilise comme amorce un petit ARN de 500

nucléotides synthétisé par une primase.
* In vivo, l’amorce est dégradée plus tard et remplacée par l’ADN
grâce à l’enzyme appelée ADNpoIy.
II- Réplication continue et discontinue
Mécanisme de réplication chez les procaryotes
 L'origine de réplication chez E. coli est appelée OriC, qui est le seul point de
réplication. Les deux brins sont séparés à ce niveau et sont maintenus à l’état
monocaténaire grâce aux protéines se liant à l’ADN simple brin SSB (Single
Stand Binding). Ces facteurs protéiques donc jouent un role important dans la
stabilisation de l’ADN simple brin. Le déroulement de la double hélice génère
un ADN circulaire super-enroulé. Ce super-enroulement est diminué ou réduit
par une topoisomérase I appelée : ADN gyrase, elle agit au niveau de l’origine
de réplication. Dans chacune des fourches de réplication, la primase synthétise
un ARN amorce pour le brin avancé et un autre pour le brin retardé. Une ADN
polymérase dimérique (ADN polymérase III) catalyse l’élongation de l’ADN
à partir de l’extrémité 3’ de l’amorce de l’ARN.
 La matrice du brin retardé doit former une boucle autour du complexe
(Fig. 14), les fragments obtenus sont appelés fragments d’Okazaki. Dès
que le fragment d’Okazaki atteint une longueur donnée, l’ADN
polymérase I retire l’amorce d’ARN et synthétise de l’ADN
complémentaire pour remplir la brèche formée par l’élimination de
l’ARN. Finalement, les fragments sont reliés par l’ADN ligase qui
catalyse la formation des liaisons phosphodiester entre l’extrémité 3’OH
du brin en croissance et l’extrémité 5’ phosphate du fragment d’Okazaki.
Lorsque la réplication d’un chromosome bactérien est achevée, deux
molécules filles intercalées sont obtenues. Elles sont séparées par l’action
de la topoisomérase II qui agit en coupant transitoirement les deux brins
de l’une des deux molécules filles, permettant à l’autre molécule de se
libérer séparant les deux molécules d’ADN produits.
Mécanisme de réplication chez les eucaryotes
 Le mécanisme de réplication d’ADN chez les

eucaryotes est comparable à celui des procaryotes. En
effet, elle se fait de manière bidirectionnelle,
antiparallèle, complémentaire, dans le sens 5’ 3’,
continue pour le brin précoce et discontinue pour le
brin retardée et nécessite des amorces d’ARN.
Cependant et contrairement aux procaryotes, la
réplication chez les eucaryotes débute simultanément
en plusieurs points d’un même chromosome, où il
existe plusieurs milliers de points de réplication.

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Chapitre II

• Réplication est semi-conservative

 La réplication est le processus de reproduction

B. Réplication de l’ADN chez les eucaryotes

• Réaction asymétrique uniquement dans le sens 5’P--->3’OH

• ADNpolyIII utilise comme amorce un petit ARN de 500

 Le mécanisme de réplication d’ADN chez les

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