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Rapport de stage

Présenté par : Mamadou Lamine Diatta, étudiant en troisième année de

licence à l'Université Cheikh Anta Diop de Dakar, à la Faculté des Sciences et
Techniques, au Département de Biologie, Chimie et Géosciences (option Sciences
de la Vie et de la Terre)

Adresse mail : [email protected]

Contact : +221783010446/764134466
Durée de stage : Du Lundi 18 Septembre 2023 au 18 Novembre
Lieu de stage : Laboratoire national de santé publique
Type de stage : Stage volontaire
Adresse du laboratoire : 10ème, Thiès Sénégal
Responsable du laboratoire : Professeure Rokhaya DIAGNE, agrégée en
bactériologie et virologie

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 Table des matières
Remerciement
Introduction
I) Description de la structure
II) Description des laboratoires, exemples des procédures de tests
effectués et expériences acquises
A) Laboratoire de biologie moléculaire
1) Description du laboratoire de biologie moléculaire
2) Exemple d'une procédure de test effectuée : COVID-19
3) Expériences acquises au niveau du laboratoire de biologie moléculaire
B) Laboratoire de Microbiologie (Bactériologie - Parasitologie)
4) Description du laboratoire de microbiologie
5) Exemple d'une procédure de test effectuée : ECBU (Examen
Cytobactériologique des Urines)
6) Expériences acquises au niveau du laboratoire de microbiologie
C) Laboratoire d'Hématologie
7) Description du laboratoire d'hématologie -Sérologie
8) Exemples des procédures de tests effectuées : Groupage, HBS ,NFS,VS CRP
9) Expériences acquises au niveau du laboratoire d'hématologie
D) Laboratoire de biochimie
10) Description du laboratoire de biochimie
11) Automate A 15
12) Expériences acquises au niveau du laboratoire de biochimie
III) Formations effectuées au cours du stage
E) résumé sur la Biosécurité et la Biosûreté
IV) Conclusion

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 Remerciement
Chers collègues, familles et amis,
Je tiens à exprimer ma profonde gratitude envers chaque personne qui a
contribué à la réalisation de mon rapport de stage. Mon aventure au sein du
laboratoire a été exceptionnelle, et je tiens à remercier chaleureusement tout le
personnel, de la directrice au gardien, pour leur soutien et leur précieuse
contribution.
Je souhaite également adresser un remerciement particulier à mes camarades
de stage, qui m'ont accueilli avec bienveillance dès mon arrivée et ont pris le
temps de m'expliquer des notions cruciales, sachant que je débutais dans ce
domaine. Votre générosité et votre expertise m'ont été d'une aide inestimable.
Enfin, je souhaite rendre hommage à mon regretté père, Feu Famara Diatta, ainsi
qu'à mon oncle défunt, le Docteur Bacary Aya Diatta, ancien directeur du
laboratoire national d'analyses et de contrôle. Leurs enseignements et leur
influence ont été une boussole tout au long de mon parcours, et je suis honoré
de perpétuer leur héritage.
Ce rapport de stage n'aurait pas été possible sans le soutien indéfectible de
chacun d'entre vous. Merci du fond du cœur pour votre précieuse contribution à
cette étape importante de ma vie.
Avec toute ma reconnaissance, Mamadou Lamine Diatta

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 Introduction
Plongé au cœur du monde professionnel en tant qu'étudiant passionné en
dernière année de mon cursus de licence, j'ai saisi avec empressement
l'opportunité d'un stage de deux mois au sein du prestigieux Laboratoire National
de Santé Publique, reconnu pour son expertise inégalée. Ce rapport de stage
s'attache à détailler mes observations et découvertes au sein des départements
de Bactériologie-Virologie, Immuno-Hématologie, Parasitologie-Mycologie,
Biologie Moléculaire et Biochimie, en mettant en lumière les procédures et tests
les plus fréquemment utilisés, ainsi que les compétences et les équipements
essentiels qui ont enrichi mon expérience.

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 I) Description de la structure
❖ Historique et localisation :
Créé en 2015 au sein du Ministère de la Santé et de l'Action Sociale, le
Laboratoire National de Santé Publique est rattaché à la Direction des
Laboratoires. Son siège est à l'UFR des sciences de la santé de l'université de
Thiès. Adresse Dixième, ex RIAOM en face Croix Rouge, Thiès, Sénégal.

❖ L’accueil :
L'accueil est organisé en trois postes : l'orientation, la facturation et la caisse. À
l'arrivée du patient, des infirmiers ou des techniciens biologistes sont
responsables de l'orienter et de l'informer sur la disponibilité des tests prescrits
par le médecin, ainsi que sur leur coût (qui doit être clairement affiché à la vitrine
de la caisse).
Une fois que les tests sont disponibles, le technicien biologiste collecte certaines
informations du patient, telles que son nom, prénom, adresse, âge, numéro de
téléphone et carte d'identité ou de passeport. Après la facturation, le patient se
rend à la caisse pour effectuer le paiement. Une fois le paiement effectué, on
passe à l'étape du prélèvement.

❖ Le prélèvement :
La salle de prélèvement se trouve juste derrière l'accueil et est divisée en quatre
petites salles où l'on réalise différents types de prélèvements (sanguin, vaginal,
nasopharyngé, etc.). Les prélèvements d’urines et de selles se font au niveau des
toilettes. Pour chaque type de prélèvement, un tube approprié est utilisé.

Tableau récapitulatif :

Type de tube Analyse réalisé Exemple d’analyse

Heparinate de sodium Biochimie Acide urique, C-réactive
protéine, Ça, Mg, P…
Fluorure de sodium Biochimie Glycémie et épreuve
dynamique
EDTA Hématologie TE, NFS, VS, Groupe
sanguin, …, ect
Tube citraté Hémostase TCA, Fibrinogène, ect..
Tube sec Sérologie, Biochimie FSH, LH, protéine
Totale,..ect.

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En plus de la salle de prélèvement, on trouve, entre autres, les toilettes, la salle
d'autoclavage, les magasins, la salle froide, les laboratoires (Microbiologie,
Hématologie, Biochimie et Biologie moléculaire). L'administration se compose du
bureau de la directrice, du secrétariat, du bureau des biologistes, du bureau du
responsable QHSE, du bureau du comptable, de la salle de réunion, de la salle
serveur et de la salle réseau du laboratoire.

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 II) Description des laboratoires, exemples des
procédures de tests effectués et expériences
acquises
A) Laboratoire de biologie moléculaire
1) Description
Le laboratoire de biologie moléculaire est composé de trois salles : la salle
d'extraction, la salle propre et la salle d'amplification, équipées de matériels de
haute qualité et de dernière génération.

2) Exemple d’une procédure de test effectuée :

COVID 19
❖ Salle d'extraction
L'extraction se déroule en trois étapes : la lyse cellulaire, le lavage des acides
nucléiques (ARN dans le cas du COVID-19) et enfin, l'élution.
a) La lyse cellulaire : Cette étape vise à libérer les acides nucléiques (ARN ou
ADN). Pour ce faire, nous utilisons 300 µl de tampon de lyse (nom du tampon),
auxquels nous ajoutons 150 µl d'échantillon (150 µl de DNase/RNase free pour
le contrôle d’extraction (CE)). Après passage au vortex, nous transférons le
mélange dans un tube colonne, puis nous centrifugeons à 10 000 tours pendant
2 minutes.
b) Le lavage des acides nucléiques (ARN dans le cas du COVID-19) : Pour réaliser
cette étape, nous utilisons 500 µl de tampon de lavage viral (nom du tampon) et
centrifugeons à 16 000 tours pendant 2 minutes.
c) L'élution : Cette dernière étape de l'extraction permet de détacher les acides
nucléiques de la membrane de silice. Pour ce faire, nous pipetons 15 µl d'eau
dépourvue d’acides nucléiques (eau RNase/DNase free), puis nous centrifugeons
à 16 000 tours pendant 2 minutes.

❖ Salle propre
C'est dans cette salle que nous préparons le mélange pour l'amplification (Master
Mix). Pour ce faire, nous prélevons 5 µl d'EM8, 5 µl de SCM et 5 µl d'eau
DNase/RNase free pour chaque échantillon. Le volume du mix préparé est
fonction du nombre d’échantillons et de contrôles. Ensuite, nous répartissons 15
µl dans chaque tube MIC et ajoutons 5 µl d'eau DNase/RNase free dans le

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contrôle d'amplification (NTC). L’ajout des 5 µl d'échantillons, de Contrôle Positif
(PC) et de CE se font dans la salle d’extraction.

❖ Salle d'amplification
C'est dans cette salle que se trouve la machine équipée du logiciel Mic PCR. Nous
paramétrons le logiciel en fonction de la disposition des tubes dans le Mic PCR.

❖ Interprétation des résultats

Selon la visibilité des courbes, nous pouvons évaluer la qualité de la
manipulation. Par exemple, si la courbe IC (comprenant NTC, PC et échantillon)
est visible, nous pouvons conclure que la manipulation (l'extraction et
l'amplification) est réussie.
Trois gènes sont ciblés pour déterminer si le test est positif ou négatif : Ngène,
Egène et RDRP.
▪ Si le CT ≤ 35, pour les trois gènes, le test est positif.
▪ Si le CT > 35, le test est négatif, même si les courbes des gènes cibles sont
en croissance.
Dans le second cas, nous pouvons en déduire que la personne présente soit une
charge virale de faible importance soit en phase de convalescence ou a été
contaminée par un virus voisin du COVID-19 (grippe, etc.).
Matériel de laboratoire
Hôte

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 3) Expérience Acquise
▪ Faire un prélèvement nasopharyngé
▪ Réaliser une RT-PCR
▪ Commenter un résultat.

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 B) Laboratoire de microbiologie (Parasitologie –
Bactériologie)
4) Description du laboratoire de microbiologie
C'est un laboratoire composé de sous-laboratoires : le laboratoire de
bactériologie, équipé de matériels de dernière génération (Vitek compact et
Vitek MS), et le laboratoire de parasitologie.

5) Exemple d'une procédure de test effectuée : ECBU

(Examen Cytobactériologique des Urines)
Procédure en 4 étapes
▪ Etude macroscopique
▪ Etude microscopique ou cytologique
▪ Ensemencement ou mise en culture
▪ Identification

❖ 1er jour (J0)

Étude macroscopique + étude microscopique + ensemencement sur CLED
(cystine lactose électrolyte déficient)
d) Etude macroscopique : Voir à l’œil nu l’aspect de l’urine, voir si l’urine est
claire, trouble, hématique….
e)Etude microscopique : Se fait en trois étapes :
▪ Etat frais qui se fait entre lame et lamelle avec l’urine total
▪ Cytologie quantitative : Utilisation de la cellule de KOVA pour permettre
la numération des cellules (des leucocytes, des hématies, des levures, des
cristaux, des cellules épithéliales, des parasites)
▪ Coloration de GRAM avec le culot urinaire ou avec l’urine diluée en
suspension
f) Ensemencement ou mise en culture sur gélose CLED avec de l’urine diluée par
la méthode des 3 cadrans et incuber la gélose à 37°C pendant 18 à 24h dans une
étuve.

❖ 2ème jour (J1)

Lecture de la gélose CLED et suite d’analyse

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 Méthodes de Culture et d'Identification Bactérienne
Au cours de notre stage, nous avons utilisé différents milieux de culture pour
favoriser la croissance des agents pathogènes. Par exemple CLED qui est un
milieu non inhibiteur qui favorise la croissance des agents pathogènes à
l'exception de Proteus. Ainsi que le milieu EMB pour les bactéries à Gram
négatives. Le seuil de 105 colonies a été établi comme critère pour déterminer la
présence d'une infection urinaire, et au-delà de ce seuil, nous allons procéder à
l'ensemencement.

Méthodologie
Gram : Tout d'abord, nous avons réalisé une coloration de Gram pour déterminer
• le type de bactéries (Gram+ ou Gram-) grâce à la coloration
• la nature des bactéries (Coccis ou Bacilles) grâce à la morphologie

❖ 3éme jour (J2)

➢ Identification des Bactéries Gram-négatives :
Pour les bactéries Gram-négatives, nous avons effectué des tests d'identification
en utilisant des galeries d'identification et les milieux (KH, CS, EP, MMN). Les
caractéristiques que nous avons examinées dans le milieu KH incluent la réaction
au glucose, au lactose, et la production de gaz H2S. Le mode opératoire a consisté
en un ensemencement en strie serrée sur la pente, suivi d'une piqûre centrale
sur le culot. Le milieu MMN a permis d'étudier la fermentation bactérienne (M+
pour jaune et M- pour rouge), la mobilité et la recherche de vitamines
réductases. Le milieu CS a été utilisé pour déterminer l'utilisation du citrate
comme source de carbone.
➢ Identification des Cocci Gram-positifs :
Pour les Cocci Gram-positifs, nous avons effectué un test de catalase en premier
lieu. Si le test de catalase était positif, nous avons identifié des staphylocoques et
utilisé les milieux MH et Chapman. La pousse dans le milieu Chapman nous a
conduit à des tests supplémentaires tels que Latex, Coagulase et DNAse pour
identifier S. aureus. Si le catalase était négatif, nous avons identifié des
streptocoques et utilisé les milieux GSO ou GSN. Nous avons distingué les
streptocoques alpha-hémolytiques (capsulés, hémolyse partiel) et viridans, les
streptocoques bêta-hémolytiques (sensibles à la pyrose, hémolyse totale) et le
genre Enterococcus (gamma-hémolytique, absence d'hémolyse).
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 ❖ Antibiogramme :
Nous avons déterminé la dose de l'inoculum, utilisant 1 MCF pour les Cocci et
0,5 MFC pour les bacilles. Ensemencement de toute la surface de MH avec des
écouvillons, suivis du placement de disques (maximum 6 par boîte) en respectant
des distances spécifiques.

➢ Interprétation
Nous avons interprété les résultats selon le tableau de référence du CASFM, en
classant les bactéries comme sensibles, résistantes ou intermédiaires à différents
antibiotiques.

➢ Conclusion
Les méthodes de culture et d'identification bactérienne décrites dans ce rapport
sont essentielles pour la détection et la caractérisation des agents pathogènes,
contribuant ainsi à une gestion efficace des infections.

6) Expérience acquise :
▪ Ensemencer
▪ Identifier
▪ Commenter un résultat (dire la bactérie est résistant ou sensible a tel ou
tel antibiotiques) .
▪ Préparer un milieu de culture
▪ Galerie API

Matériels de laboratoire

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Vitek compact : Identification et Antibiogramme Vitek MS : Identification

Milieu de Culture

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 C) Laboratoire d’hématologie
7) Description du laboratoire d’hématologie -serologie
C’est un laboratoire composé d’équipements très sophistiqué ou l’on réalisé des
tests Hématologiques et sérologiques .

8) Exemples des procédures de tests effectuées

8-1) Groupage( Réalisation et interprétation d'un groupage ABO)
Le groupage sanguin ABO est la seule recherche des antigènes à la surface des
globules rouges qui comporte deux épreuves : l'épreuve globulaire (Beth-
Vincent) et l'épreuve plasmatique (Simonin-Michon). Ce groupage comporte
cette spécificité du fait que chaque individu d'un groupe comporte les anticorps
dirigés contre les antigènes du système ABO.
A la naissance, le groupe ABO est défini génétiquement dans le noyau de
l'érythroblaste (précurseur du globule rouge), il n'existe pas d'anticorps dirigés
contre les autres antigènes du système ABO. Cette immunisation se réalise au
cours des 3 premiers mois de la vie, lorsque le corps du nouveau-né est exposé
aux différents germes de l'environnement. Cette exposition conduit à la création
d'anticorps notamment les anticorps des groupes sanguins, le système ABO
n'étant pas exclusivement d'origine érythrocytaire. Ces anticorps sont dits
"naturels".

▪ Epreuve globulaire (Beth-Vincent) :

Cette épreuve consiste à mettre en évidence les antigènes du système ABO à la
surface des globules rouges du patient à l'aide d'anticorps (antisérum)
spécifiques afin de déterminer le groupe ABO du patient. Lors de cette épreuve,
il doit être utilisé un anti-A, un anti-B et un anti-A,B (l'anti-B ne doit pas
reconnaitre le B acquis, l'anti-A ou/et l'anti-AB doivent reconnaitre les Ax). L'anti-
A permettra de reconnaitre les individus possédant les antigènes A; l'anti-B les
individus possédant l'antigène B et l'anti-A,B les individus possédant l'antigène A
et/ou l'antigène B.

▪ Epreuve plasmatique (Simonin-Michon) :

Cette épreuve consiste à mettre en évidence les anticorps du système ABO
contenus dans le plasma du patient à l'aide de globules rouges de groupe ABO
connu. Lors de cette épreuve, il est utilisé des globules rouges de groupe A1 et
des globules rouges B (hors difficulté de groupe). Un individu de groupe A

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possède les anti-B, le plasma conduira à une agglutination avec les globules
rouges de groupe B ou de groupe AB. Un individu de groupe B possède des anti-
A et des anti-A1, le plasma conduira à une agglutination avec les hématies de
groupe A. Les individus O possèdent des anti-A, des anti-B, des anti-A,B et des
anti-A1, le plasma conduira à une agglutination avec les hématies A, B et AB,
alors que les individus de groupe AB ne possèdent pas d'anticorps, il n'y aura
donc aucune réaction avec les différentes hématies.

▪ Interprétation des groupes possibles :

Le groupage ABO pour être valide doit être déterminé sur deux prélèvements
sanguins distincts (réalisés à deux moments différents ou par deux techniciens
biologiste). Cette nécessité s'explique par le fait que les groupages sanguins sont
essentiellement utilisés pour la réalisation des transfusions sanguines et qu'une
erreur de groupe sur une réalisation pourrait conduire au décès possible du
patient dès la première transfusion.
Matériels

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 8-2) Vitesse de sédimentation :
La vitesse de sédimentation (VS) est un test qui peut être demandé dans le cadre
d'un bilan sanguin. Une petite quantité de sang sera, au laboratoire, déposé dans
un tube très fin (tube capillaire) qu’on laisse ensuite en position verticale pendant
1heures. Les globules rouges descendent lentement dans le tube de sorte que
les globules rouges se trouvent en-dessous et le sérum au-dessus. On mesure la
vitesse à laquelle ce processus se passe et on l’exprime en mm par heure. Il arrive
que les globules rouges descendent plus vite que la normale : nous parlons alors
d'une vitesse de sédimentation élevée ou accrue. C’est le cas lorsque la quantité
de protéines dans le sang augmente à cause d’une maladie.
La mesure de la vitesse de sédimentation est un test dit « non spécifique », c.-à-
d. qu’il ne permet pas d'indiquer la présence d’une maladie bien particulière. Le
test permet de déceler des infections, des inflammations (par exemple un
rhumatisme), un cancer et d’autres affections entraînant des changements au
niveau de la concentration en protéines dans le sang. Une vitesse de
sédimentation élevée indique donc la présence d'une maladie, mais des examens
complémentaires sont nécessaires pour savoir de quelle maladie il s’agit
précisément. À l’inverse, en cas de guérison, la vitesse de sédimentation revient
à la normale. Le test peut donc également servir à suivre l’évolution de la
maladie.

▪ Interprétation
La vitesse de sédimentation normale dépend de l’âge. Elle augmente
progressivement au fil des ans, passant de 1 mm à la naissance à maximum 35
mm chez les personnes âgées.
Si on découvre une légère augmentation de la vitesse de sédimentation mais qu’il
n’y a aucun symptôme et que la vitesse de sédimentation n’a pas augmenté
significativement par rapport aux précédentes mesures, on attend souvent
encore un moment avant d’effectuer des examens complémentaires, en
particulier à un âge plus avancé.

▪ Conclusion
Il est parfois très difficile de trouver la cause d’une vitesse de sédimentation
élevée, car les causes sont nombreuses.

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17
 8-3) Numérotation de Formule sanguin ou Hémogramme :
La numération formule sanguine (N.F.S.) est l'un des examens biologiques les
plus prescrits. En effet, les différentes cellules du sang peuvent être modifiées
dans des circonstances très variées. Une anomalie de l’hémogramme est donc
un bon moyen de dépister des maladies très diverses. La numération formule
sanguine se pratique sur un prélèvement de 5 millilitres de sang dans une veine,
au pli du coude. Les résultats sont obtenus en quelques heures.
Les appareils actuels, dont la précision est grande, ne se cantonnent pas au
comptage des éléments du sang ; ils sont également capables de mesurer le
volume et le contenu en hémoglobine des globules rouges, le volume des
plaquettes et de signaler les formes cellulaires anormales. C'est pourquoi la
notion d'hémogramme devrait progressivement supplanter celle de numération
formule sanguine.

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 8-4) Test d’Emmel
❖ Quel est le but du test d’Emmel ?
Le test d'Emmel, plus abordable et techniquement plus accessible est souvent
demandé dans le bilan prénatal des gestantes en Afrique, pour réserver le
dépistage aux nouveau-nés issus de mères chez qui le test positif atteste de la
présence d'hémoglobine S

❖ Matériel et réactif:
Solution de métabisulfite de sodium (Na2S2O5).
Nous allons mélanger une solution dans un tube a centrifugeuse , 0.2gr de
métabisulfite de sodium dissoute dans 10 ml de H2O juste avant l'emploi.

❖ Technique
▪ sur une lame, déposer une goutte de sang veineux ou capillaire
▪ Ajouter 1 ou 2 gouttes de la solution de métabisulfite de sodium
▪ Mélanger, couvrir d'une lamelle et laisser reposer de 15 à 30 mn
▪ Examiner la préparation au microscope, à l'objectif sec fort.
❖ Résultats
▪ Cette technique provoque la falciformation de tous les érythrocytes
contenant un taux d'Hémoglobine S supérieur à 7% et ne permet donc pas
de distinguer les formes homozygotes des formes hétérozygotes.
▪ la distinction repose sur l'électrophorèse de l'Hémoglobine. L
▪ La concentration de métabisulfite de sodium doit être respectée: car une
concentration de 4% peut provoquer de fausses falciformations avec du
sang normal.

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 8-5) Antigène HBS(AgHBS)
Un test rapide destiné à la détection qualitative de l'antigène de surface de
l'hépatite B (AgHBS) dans le sang total, le sérum ou le plasma humain.
❖ RÉSUMÉ
La cassette de test rapide agHBS est un test rapide permettant de détecter
qualitativement la présence de l'AgHBs dans un échantillon de sang total, de
sérum ou de plasma. Le test utilise une combinaison d'anticorps monoclonaux
et monoclonaux pour une détection sélective des niveaux élevés de l'AgHBs
dans le sang total, le sérum ou le plasma.

❖ PRINCIPE
La cassette de test rapide AgHBS est un immunodosage qualitatif en sandwich, à
deux sites, en phase solide destiné à la détection de l'AgHBs dans le sang total,
le sérum ou le plasma. La membrane est pré-enduite d'anticorps Anti-Ag HBS sur
la zone de la ligne de test. Pendant le test, l'échantillon de sang total, de sérum
ou de plasma réagit avec les particules enduites d'anticorps Anti-AgHBs pour
former un complexe. Le complexe migre de manière chromatographique par
capillarité vers le haut de la membrane pour réagir avec les anticorps anti-AgHBs
présents sur la membrane, générant ainsi une ligne colorée. La présence de cette
ligne colorée dans la zone de test indique un résultat positif, tandis que son
absence indique un résultat négatif. Pour servir de contrôle de la procédure, une
ligne colorée apparaît toujours dans la zone de
la ligne de contrôle, indiquant qu'un volume correct d'échantillon a été ajouté et
que la membrane a bien été imbibée par capillarité.

❖ Procédure
Pour les échantillons de Sérum ou Plasma :
▪ Tenir le compte-gouttes à la verticale et transférer 3 gouttes de sérum ou
de plasma dans le puits d'échantillon (S) de la cassette de test, puis
démarrer le minuteur.
Pour un échantillon de Sang Total Veineux :
▪ Tenir le compte-gouttes à la verticale et transférer 3 gouttes de sang total
dans le puits d'échantillon (S) de la cassette de test, puis ajouter 1 goutte
de tampon et démarrer le minuteur.

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Attendre que la ou les lignes colorées apparaissent. Lire les résultats au bout de
15 à 30 minutes. Ne pas interpréter le résultat au-delà de 30 minutes.

❖ INTERPRÉTATION DES RÉSULTATS

POSITIF : deux lignes colorées apparaissent. Une ligne colorée doit se situer dans
la zone de contrôle (C) et une autre ligne colorée doit se situer dans la zone de
test (T).
REMARQUE : l'intensité de la couleur dans la zone de la ligne de test (T) varie en
fonction de la concentration en AgHBs de l'échantillon. Ainsi, toute nuance de
couleur dans la zone de la ligne de test (T) doit être considérée comme positive.
NÉGATIF : une ligne colorée apparaît dans la zone de contrôle (C). Aucune ligne
colorée n'apparaît dans la zone de test (T).
NON VALIDE : la ligne de contrôle n'apparaît pas. Un volume d'échantillon
insuffisant ou des erreurs de procédure sont les raisons les plus probables de
l’absence de ligne de contrôle.

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8-5) protéine C-Réactive
❖ Pourquoi fait-on ce test?
La protéine C-réactive est un marqueur de l'inflammation. Le test
standard permet d'évaluer l'état inflammatoire d'un individu.
Une version du test nommée CRP-hs (protéine C-réactive haute
sensibilité) est quant à elle utilisée uniquement pour évaluer le risque
de souffrir de maladies cardiovasculaires.
❖ Tests associés
S'il est utilisé pour déterminer le risque de souffrir d'un problème
cardiovasculaire, un bilan lipidique complet cholestérol total, HDL, LDL
et triglycérides, aura probablement été fait préalablement.
S'il est utilisé comme marqueur d'infection ou d'inflammation, la
vitesse de sédimentation (VS) des érythrocytes peut également être
évaluée.
❖ Information générale
Test CRP standard : Il s'agit d'un test général et non spécifique.
L'augmentation du taux de CRP ne renseigne pas sur la nature de la
maladie, mais son dosage permet de confirmer la présence d'une
inflammation. Le test standard peut être demandé chez une personne
venant de subir une intervention chirurgicale chez qui l'on suspecte
des complications. De plus, il peut aussi servir à suivre l'état d'une
maladie inflammatoire (ex. arthrite, colite ulcéreuse).
Test CRP-HS : La présence de maladies cardiovasculaires génère une
réponse inflammatoire qui peut être associée à une faible quantité de
CRP dans le sang, d'où le dosage de la protéine C-réactive sanguine
pour en évaluer le risque. Le taux de CRP dans la maladie
cardiovasculaire est beaucoup plus faible que dans les maladies
inflammatoires. Le test de CRP haute sensibilité (CRP-HS) doit donc

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être utilisé, car il détecte des valeurs de CRP plus faibles que le test
standard
❖ Que peut vouloir dire un résultat anormal ?
Si le résultat est élevé Test CRP standard :Un résultat élevé signifie la
présence d'inflammation dans l'organisme. Cette inflammation peut
être causée par une infection (bactérienne ou fongique), une maladie
inflammatoire (arthrite rhumatoïde, lupus, vasculite, etc.), un cancer,
etc. Les femmes enceintes et les personnes obèses ont tendance à
avoir un taux de CRP plus élevé.
Test CRP-HS : Un résultat supérieur à 1 mg/L pourra être associé à la
présence de maladies cardiovasculaires. Si, après plusieurs
évaluations, le CRP-HS est toujours élevé pour des raisons inexpliquées
(> 10 mg/L), le patient devrait être évalué pour exclure les causes
autres que cardiovasculaires.

9) Expériences acquises au niveau du laboratoire d'hématologie

▪ Prélèvement sanguin
▪ Faire les test VS, AgHBS, Groupage sanguin (les deux méthodes), TE (Test
d’Emmel) ,NFS(Avec l’automate Xs-1000) et CRP.
▪ Faire des Hématies Test

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 D) Laboratoire de biochimie
10) Description du laboratoire de biochimie
C’est un laboratoire équipé de matériels de dernière génération : L’Automate A15
,semi-Automate et hemoGlue(HbA1c 501).

11) Description de l’Automate A 15

▪ Réactifs dédiés à la chimie clinique Débit de 150 tests/heure
▪ 4 positions indépendantes pour les supports d'échantillons et de réactifs
▪ 24 échantillons par casier (capacité maximale de 72 échantillons dans les
casiers) 10 réactifs pour rack (capacité maximale de 30
▪ flacons de réactifs en rack) Flacons de réactifs de 20 et 50 mL Tubes
primaires ou gobelets pédiatriques comme récipients d'échantillon
▪ Capacités STAT illimitées. Exécuter à tout moment Programmation de 5
types d'échantillons (sérum, plasma, urine, LCR et sang total) Jusqu'à 15
minutes de lecture
▪ Rotor réutilisable en méthacrylate
▪ Volume de lecture minimum de 200 uL
▪ Plage de mesure de -0,05 A à 2,5 A
▪ Plage spectrale de 340 nm à 900 nm Configuration du filtre 340, 405, 505,
535, 560, 600, 635, 670 nm.

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❖ Guide rapide d'utilisation du A15
▪ 1-Vérifier que:
➢ le conteneur de déchets est vide
➢ le raccord rapide de celui-ci est dûment connecté.
➢ le niveau de remplissage du conteneur de liquide de système.
▪ 2- Allumer l'automate; puis l'ordinateur et accéder au logiciel d'usage
▪ 3- Vérifier à priori l'état du rotor de réactions.
➢ Changer le rotor si seulement si toutes les cuves sont utilisées
➢ cliquer sur l'item << N rotor » pour le réchauffer.
▪ 4- Cliquer sur le bouton W- Up pour allumer et démarrer l'analyseur
▪ 5-Placer les conteneurs (solution de lavage puis liquide système) lorsque
l'analyseur le demande
▪ 6-Cliquer sur Redémarrer Séance (Initialisation).
▪ 7-Sélectionner sur l'écran Introduction de Nouveaux Echantillons le type
a analyser (Blanc, calibrateur, contrôle ou Normal)
▪ 8-Passer des contrôles (normal et pathalogique ) pour chaque pauimètre
à analyser.
▪ 9- Choisir l'icône << Normal » pour l'introduction d'échantillons patients
et Saisir si besoin le code du patient.
▪ 10-Sélectionner les techniques et profils souhaités et cliquer sur le
bouton Ajouter (Flèche >).
▪ 11- Cliquer sur les boutons Positionner Réactifs Automatiquement et
Positionner Échantillons automatiquement.
▪ 12- Placer les racks (réactifs et tubes d'échantillons) sur le plateau de
l'analyseur, en suivant la configuration affichée par l'ordinateur
▪ 13- Cliquer sur le bouton Start pour démarrer le travail de l'analyseur et
visualiser le Moniteur
▪ 14-Pour introduire de nouveaux échantillons à analyser, cliquer sur le
bouton Nouvel Echantillon du Moniteur et répéter les étapes 7 à 12
❖ 12Exemple des tests réalisés :
▪ Bilan lipidique (triglycérides , Cholestérol HDL , )
▪ Calcémie, Glycémie, magnésium ,creatinimie, Phosphore, Urée, protéine
Totale ,……ect.
▪ Protéines urinaire 24 h
▪ Also

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 ❖ Hémoglobine Glyquée
L’hémoglobine glyquée (ou HbA1c) est le reflet de la glycémie. Tandis
que la glycémie capillaire et la glycémie à jeun sont des instantanés de
l’état glycémique, l’HbA1c permet, par un dosage sanguin, d'évaluer
l’équilibre glycémique sur une plus longue période (environ deux à trois
mois).

12) Expériences acquises au niveau du laboratoire de biochimie

▪ Faire un test HbA1c
▪ Manipuler l’automate A 15

26
III) Formations effectuées au cours du stage
E) résumé sur la Biosécurité et la Biosûreté :
❖ Définition de la Biosécurité :
La biosécurité englobe l'ensemble des mesures visant à prévenir, contrôler et
gérer les risques liés à la manipulation de micro-organismes pathogènes. Cela
inclut la protection des travailleurs de la santé, la sécurité des laboratoires et la
prévention de la propagation des maladies infectieuses.
▪ Objectif :
Assurer la sécurité des personnes, des laboratoires et de l'environnement lors de
la manipulation d'agents biologiques potentiellement dangereux.
❖ Définition de la Biosûreté :
La biosûreté se concentre sur la prévention de la perte, du vol, ou de l'utilisation
abusive délibérée d'agents biologiques dangereux. Cela inclut la protection
contre le bioterrorisme et la sécurisation des installations de recherche ou de
production manipulant des agents pathogènes.
▪ Objectif :
Prévenir l'accès non autorisé et la mauvaise utilisation intentionnelle d'agents
biologiques, réduisant ainsi le risque d'utilisation malveillante.
❖ Distinctions clés :
La biosécurité se concentre sur la protection contre les risques accidentels
associés à la manipulation d'agents pathogènes, tandis que la biosûreté vise à
prévenir les risques intentionnels liés à des actes malveillants.
La biosécurité implique des pratiques et des protocoles de sécurité dans les
laboratoires de recherche, les établissements de santé, etc., tandis que la
biosûreté englobe des mesures de sécurité plus larges pour empêcher
l'utilisation malveillante des agents biologiques.
❖ Normes et Protocoles :
Les normes de biosécurité définissent les précautions à prendre lors de la
manipulation de micro-organismes pathogènes. Cela comprend l'utilisation de
salles propres, la stérilisation d'équipements et l'application rigoureuse d'EPI. Les

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protocoles spécifiques détaillent comment chaque étape doit être réalisée pour
minimiser les risques.
❖ La Gestion des déchets :
La gestion des déchets de santé publique est cruciale pour prévenir la
propagation des infections. Il est essentiel de séparer les déchets infectieux des
déchets non infectieux. Les déchets infectieux, tels que les objets tranchants
contaminés, doivent être éliminés de manière sécurisée, souvent par
incinération ou stérilisation. Les déchets non infectieux peuvent suivre des voies
d'élimination plus standard. Les installations de gestion des déchets médicaux
doivent respecter des normes strictes pour assurer la sécurité publique
❖ Surveillance Épidémiologique :
Les systèmes de surveillance utilisent des données épidémiologiques pour
détecter les tendances et identifier les foyers potentiels. Cela implique la collecte
et l'analyse rapides des données provenant des établissements de santé, des
laboratoires et d'autres sources pour anticiper les menaces émergentes.
❖ Formation du Personnel :
Les professionnels de la santé suivent une formation approfondie sur la
biosécurité, comprenant l'utilisation correcte des EPI, les procédures de
désinfection et la manipulation sûre des échantillons biologiques. Des sessions
de formation régulières sont organisées pour maintenir la conformité aux
normes en constante évolution.
Gestion des Situations d'Urgence : Les plans d'urgence définissent les actions
immédiates à entreprendre en cas d'épidémie soudaine ou d'accident de
laboratoire. Cela comprend des protocoles de communication clairs, des équipes
d'intervention rapide et des mesures de confinement pour éviter la propagation

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En résumé, la biosécurité concerne la gestion sûre des agents pathogènes dans
des contextes de recherche ou de santé publique, tandis que la Biosûreté vise à
empêcher toute utilisation malveillante ou non autorisée de ces agents. Ces deux
concepts sont essentiels pour assurer une approche complète et équilibrée de la
sécurité biologique.

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 Conclusion
En conclusion, mon immersion au sein du Laboratoire National de Santé Publique
a été une expérience enrichissante qui a renforcé mes compétences en tant que
technicien biologiste. Je tiens à exprimer ma gratitude envers l'ensemble du
personnel pour leur soutien et leur partage de connaissances, contribuant ainsi
à ma croissance professionnelle. Cette expérience a consolidé ma
compréhension du monde professionnel et a constitué une étape cruciale dans
ma formation, me préparant de manière optimale pour les défis futurs dans le
domaine de la santé publique.

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