Anapath Rapport F
Anapath Rapport F
Anapath Rapport F
ANATOMO-PATHOLOGIE
Promotion :
2020-2023
Année universitaire
2022-2023
Filière
Techniques de santé
Option
Laboratoire
Semestre 5
Encadré par
Dr Abdelmalek HAKMAOUI et Dr Amine
REMERCIEMENTS :
Apres avoir rendu grâce à Dieu le tout puissant et le tout miséricordieux, Nous
tenons à remercier toutes les personnes qui ont contribué au succès de notre stage.
Tout d'abord, nous adressons notre remerciements à notre coordinatrice Mme
SINE Hasna et Mme Souad El MOUAHID et nous voulons adresser toute
notre gratitude, au personnel du laboratoire de l’anatomopathologie de
CHU Mohamed VI et l’Hôpital Militaire Avicenne, en particulier Dr.
Abdelmalek HAKMAOUI, Dr. Amine et Mme BOUTIK Rabab ,sans
oublier bien sûr de remercier les techniciens de laboratoire et les
médecins du service.
1. Introduction
• Définition de l'anatomopathologie
• Définition de cancer
• Organisation des laboratoire: Hôpital CHU Mohammed VI
Hôpital Militaire Avicenne
2. Traitement des prélèvements
A. Histologie
2. Fixation
3. Examen macroscopique
4. Circulation
5. Enrobage et microtomie
6. Colorations
B. Cytologie
• Définition
• Méthode d’ultracentrifugation
• Fixation
• Coloration
C. Immunohistochimie
3. Conclusion
Les prélèvements reçus au laboratoire sont enregistrés avec un numéro unique qui va être
ensuite transcrit dans les blocs et les lames.
2. Fixation
La fixation est destinée à immobiliser et maintenir les structures cellulaires et tissulaires dans
un état aussi proche que possible de leur état vivant:
i) Elle préserve les composants cellulaires, les protéines, les acides nucléiques et conserve
leur emplacement tissulaire;
ii) Elle prévient l’autolyse et l’activité bactérienne;
• il réunit à la fois les propriétés d’un liquide fixateur et d’un liquide conservateur.
Durée à adapter au volume et au caractère adipeux de la pièce fixée. Les pièces de mastectomie
nécessitent un temps de fixation plus long (24-48h)
Biopsies : minimum 6h
• Volume du fixateur
Le volume du liquide fixateur doit être au moins trois fois équivalent à celui du tissu à fixer
• Température de fixation
Le procédé de fixation des tissus par des fixateurs pontants (cross-linking) comme le formol est
un procédé chimique température-dépendant. Il doit donc être réalisé à température ambiante.
• Les échantillons sont décrits macroscopiquement (la pièce est examinée, mesurée, pesée,
palpée) puis des fragments à étudier au niveau histologique sont préparés.
• Les fragments d’organe doivent être orientés par rapport à la pièce initiale
• Les tissus doivent être découpés en tranches fines proprement pour maintenir l’architecture
tissulaire
Étape consistant à faire pénétrer la paraffine au sein du tissu, puisque la paraffine n’est pas
miscible à l’eau, les échantillons doivent être alors complètement déshydratés avant l’inclusion
dans la paraffine. Cette dernière n'est plus soluble dans l'alcool utilisé pour la déshydratation,
on assiste donc à une substitution par le xylène ou le toluène.
Déshydratation : se fait par immersion des casettes (contenant les fragments) dans des bains
d’alcool de degré croissant (70°, 90°, 100°) pour éliminer l’eau des tissus.
Éclaircissement : Les casettes sont ensuite émergées dans les bains du xylène ou du toluène
qui servent à remplacer l’alcool dans les tissus afin que celui-ci soit miscible dans la paraffine.
Imprégnation dans la paraffine: C’est la dernière étape de la circulation, la paraffine doit être
chauffée pour se liquéfier, dans deux bain successifs de paraffine pure afin d’éliminer le xylène.
Enrobage :
C’est une technique de la réalisation des coupes. Les cassettes de paraffine contenant
les prélèvements sont fixées sur un microtome pour réaliser des ruban de coupes
d’organe a une épaisseur de 4 µm après l’élimination d’excès de paraffine à 40µm. Les
rubans de paraffine obtenus sont étalés sur des lames porte-objet au niveau du bain marie
identifiées.
6. Colorations
Principe:
C'est une coloration bichromatique qui se compose d'un colorant nucléaire, l'hématoxyline, et
d'un colorant cytoplasmique, l'éosine. L'hématoxyline est un colorant cationique, qui a une
affinité pour les éléments cellulaires chargés négativement dits basophiles. Il colore notamment
les noyaux en bleu/violet, en se fixant sur les acides nucléiques. Au contraire, l'éosine est un
colorant anionique , qui a une affinité pour les éléments cellulaires chargés positivement dits
éosinophiles. Il colore le cytoplasme en rose et les autres éléments cellulaires basiques en
rose/rouge plus ou moins vifs selon leur acidophilie.
Technique manuelle
Protocole
• Bleu Alcian
Principe
La coloration au bleu alcian permet de colorer les mucosités acides et les mucines acétiques.
Des quantités excessives de mucosités acides non sulfatées sont observées dans les
mésothéliomes. Ces mucosités sont présentées en quantités normales dans les parois des
vaisseaux sanguins mais augmentent dans les lésions précoces d'athérosclérose.
Cette coloration repose sur un groupe de colorants basiques polyvalents qui sont solubles dans
l'eau. (La couleur bleue est due à la présente de cuivre).
Le pH de la solution de coloration au bleu Alcian (peut être compris entre 0.4 et 2.5) est très
important et a un effet direct sur la catégorie de mucines révélées par cette méthode.
La solution de coloration au bleu Alcian au pH=2.5, permet de colorer les mucines carboxylées
présents dans les tissus conjonctifs et le cartilage.
Résultats
Mucines acides …… Bleu turquoise
Noyaux ....…………..Rouge
Fond………………... Bleu clair
• Orcéine acide :
Principe
L’orcéine est un colorant acide faible qui se fixe avec une grande électivité sur les fibres et
lames élastiques, Réactifs pour diagnostic in vitro Il est également utilisé pour identifier
l'antigène Australia (HBSAg) spécifique du virus de l'hépatite B : dans ce cas, le résultat doit
toujours être étayé par une analyse immunohistochimique. Les fibres élastiques sont mises en
évidence par de nombreuses colorations spéciales; la méthode à l'orcéine constitue une solution
particulièrement simple. Sur une Coupe d’ épaisseur 4-5 um en paraffine fixée dans le formol
dans une Température de stockage de +15°C/+30°C (Tissu témoin : Foie, peau )
Résultats :
NB :Ces colorations sont applicables à des coupes en paraffine d'une épaisseur d'environ 4-
5µm fixées par le formol.
Pour éviter un séchage excessif de la coupe, il est conseillé d'utiliser une chambre humide.
• Réticuline :
Principe :
Cette coloration marque les fibres réticuliniques du stroma et permet de préciser l'architecture
des tumeurs (exemple : architecture folliculaire). Elle est très utile dans les cas où la tumeur est
nécrosée. C'est une coloration clé dans l’étude des lésions qui touchent les organes dont la trame
est riche en réticuline comme le foie (fibrose, montre le collagène plus jeune), la rate et les
ganglions lymphatiques (trame réticulinique constituant le squelette), la moelle osseuse
(myélofibrose)
1- après
Déparaffinage et
réhydratation 10-laver à
oxyder avec l'eau
permanganate de de robinet
k 1% pdt 1min.
11-rinçage à
2-laver à l'ER l'eau distillée.
3-métabisulfate 12-chlorure
de k 3% d'or
pendant 1min pendant 5min.
13-rincer à
4-laver à l'eau de l'eau
robinet. distillée.
5-sensibiliser 14-réduire
dans l'alun de fer l'argent dans
à 2% pendant 2 le
min. méta bisulfate
de K pendant
5 min
17-rincer à
8-imprégner l'eau-
dans le Gomori. distillée.
Pendant 5min
B. CYTOLOGIE
La cytologie est une spécialité issue de la biologie qui consiste à étudier les cellules vivantes.
Un examen cytologique est l’étude au microscope de prélèvements cellulaires mais aussi de
liquides biologiques. Complément de l’histologie, la cytologie connaît une progression
constante.
Avantages :
C’est une méthode qui sert à collecter les cellules au centre de la lame par centrifugation.
Principe :
• Le cytocpin projette les cellules en suspension dans le liquide, sur une lame,
perpendiculaire à l’axe de centrifugation.
• La carte filtrante entre l’échantillon dans la cytochambre et la lame en verre permet
l’adhésion de la cellule à la lame.
• Les cellules sont étalées sur un disque de 0,5cm de diamètre Fig.1 : automate novacute
nps 50 filtre lame
• Le dispositif comporte des godets contenant le liquide, auxquels on fixe la lame,
l’ensemble tournant dans une enceinte selon une vitesse pré-affichée.
Figure 1 : cytospin
NB : Si l’échantillon est reçu sous forme de lame contenant le prélèvement déjà étalé,
cette étape de préparation est ignorée.
La fixation est une étape très importante, elle sert à maintenir les cellules proches à l’état
vivant. Elle assurée par l’alcool-éther.
La coloration standard :
• Principe de la coloration :
- L’hématoxyline de Harris : colore les noyaux des cellules grâce à son affinité
avec l’ADN.
- L’orange G (OG 6) : réagit avec les cellules squameuses matures de par son
affinité avec la kératine.
- L’éosine-azur (EA 50) : réagit avec le cytoplasme des cellules squameuses non
matures (cellules basales et intermédiaires) ainsi qu’avec les cellules glandulaires
et les hématies.
C. Immunohistochimie
Principe
• Panel
• Panel
• Panel
• EMA, actine musculaire lisse, S100, CD34, Ki67, MUC4 (marqueur du sarcome
fibromyxoïde de bas grade)
→ Tumeurs épithélioïdes
• Panel
• En première ligne : CKAE1/AE3, EMA, S100, CD34 En deuxième ligne : CK5/6, P63,
chromogranine / synaptophysine, INI1, CD31 / ERG. En intra-abdominal KIT, DOG1
(GIST épithélioïde)
Il nous a appris à développer aussi bien l’esprit d’équipe que l’autonomie. En plus il nous a
donné de l’ambition, l’envie de découvrir plus et de creuser pour comprendre chaque principe.
Les explications nécessaires nous ont été données pour qu’on puisse ensuite nous débrouiller
seul dans la réalisation de nos manipulations. Cela nous a permis de prendre plus confiance en
soi.
Il nous a permis de consolider nos connaissances par une pratique quotidienne, en faisant face
aux multiples difficultés et imprévus.
Enfin, on tient à exprimer notre grande satisfaction, on a presque tout apprécié et tout aimé,
nous avons atteint énormément d’acquis.