FICHE TECHNIQUE

GELOSE VRBG
DENOMBREMENT ET CONFIRMATION DES ENTEROBACTERIES

1 DOMAINE D’UTILISATION

La gélose VRBG (gélose glucosée biliée au cristal violet et au rouge neutre) est utilisée pour la recherche et le
dénombrement des entérobactéries dans les produits laitiers, les viandes, les charcuteries et les autres produits
alimentaires. Ce milieu peut être utilisé pour la recherche des bactéries à Gram négatif et résistantes aux sels biliaires,
lors du contrôle microbiologique des produits non stériles.

La formule-type répond à la composition définie dans les normes NF EN ISO 21528-1 et 21528-2, NF V08-054 et dans
la Pharmacopée européenne.

2 PRINCIPES

La présence simultanée de cristal violet et de sels biliaires assure l’inhibition des bactéries à Gram positif.
La dégradation du glucose en acide est révélée par le virage au rouge de l’indicateur de pH, le rouge neutre.

3 FORMULE-TYPE

La composition peut être ajustée de façon à obtenir des performances optimales.

Pour 1 litre de milieu :

- Digestat enzymatique de tissus animaux .................................................................... 7,0 g
- Extrait autolytique de levure ........................................................................................ 3,0 g
- Glucose ..................................................................................................................... 10,0 g
- Sels biliaires ................................................................................................................ 1,5 g
- Chlorure de sodium ..................................................................................................... 5,0 g
- Rouge neutre ......................................................................................................... 30,0 mg
- Cristal violet .............................................................................................................. 2,0 mg
- Agar agar bactériologique ......................................................................................... 13,0 g
pH du milieu prêt-à-l’emploi à 25 °C : 7,4 ± 0,2.

4 PREPARATION

• Mettre en suspension 39,5 g de milieu déshydraté (BK011) dans 1 litre d’eau

distillée ou déminéralisée. Reconstitution :
• Porter lentement le milieu à ébullition sous agitation constante et l’y maintenir 39,5 g/L
durant le temps nécessaire à sa dissolution complète.
• Ne pas surchauffer, ne pas autoclaver. Stérilisation :
• Refroidir le milieu à 44-47 °C. Porter à ébullition
• Utiliser dans les 4 heures suivant la préparation.

Utilisation du milieu prêt-à-liquéfier :

• Faire fondre le milieu prêt-à-liquéfier (BM075) pendant le minimum de temps nécessaire à la reliquéfaction totale.
• Refroidir et maintenir le milieu à 44-47 °C.
• Utiliser dans les 4 heures suivant la préparation.

Note
Le milieu peut être additionné de MUG (4-méthyl-umbelliféryl-ß-D-glucuronide) afin de différencier Escherichia coli
(se référer à la fiche technique concernant le supplément MUG 50 mg BS024).

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5 MODE D’EMPLOI

Dénombrement des entérobactéries – Microbiologie des aliments

Ensemencement :
(NF V08-054 ; NF ISO 21528-2) : 1 mL en double couche
• Transférer 1 mL de la suspension et de ses dilutions décimales successives dans
des boîtes de Petri stériles. Incubation :
• Couler environ 15 mL de milieu, par boîte. 24 ± 2 h à 37 °C
• Homogénéiser parfaitement et laisser solidifier sur une surface froide.
• Couler à nouveau environ 5 mL de milieu, de façon à former une deuxième couche.
• Laisser solidifier.
• Incuber à 37 ±1 °C pendant 24 ± 2 heures.

Note :
Alternativement, la température de 30 °C peut être choisie lorsque le dénombrement des entérobactéries mésophiles
est entrepris dans le cadre du contrôle sanitaire d'un procédé technologique.

Détection des entérobactéries (Pharmacopée européenne, NF EN ISO 21528-1) Ensemencement :

En surface
• Couler en boîtes de Petri stériles et laisser solidifier sur une surface froide.
• Faire sécher les boîtes à l’étuve, couvercle entrouvert. Incubation :
• Ensemencer en stries l’inoculum obtenu à partir du milieu d’enrichissement Selon le référentiel
employé.
• Incuber à 37°C pendant 24 ± 2 heures, conformément à la norme NF EN ISO
21528-1 ou bien pendant 18-24 heures à 30-35 °C, suivant la Pharmacopée.

6 LECTURE

Les entérobactéries présentent des colonies violettes, entourées ou non d’un halo violet de sels biliaires précipités.

7 CONTROLE QUALITE

Milieu déshydraté : poudre beige à légèrement rosée, fluide et homogène.

Milieu préparé : gélose rougeâtre.
Réponse culturale après 24 heures d’incubation à 37°C, ensemencement en profondeur (NF EN ISO 11133) :
Croissance
Microorganismes (Rapport de Caractéristiques
productivité : PR)

Salmonella Typhimurium WDCM 00031 PR ≥ 50 % Colonies rouge-violacé, avec halo violet

Salmonella Enteritidis WDCM 00030 PR ≥ 50 % Colonies rouge-violacé, avec halo violet
Escherichia coli WDCM 00012 PR ≥ 50 % Colonies rouge-violacé, avec halo violet
Enterococcus faecalis WDCM 00087 Inhibée -

Réponse culturale après 18 heures d’incubation à 30-35 °C, inoculum ≤ 102 microorganismes :
Croissance
Microorganismes (Rapport de Caractéristiques
productivité : PR)

Escherichia coli WDCM 00012 PR ≥ 50 % Colonies rouge-violacé, avec halo violet

Pseudomonas aeruginosa WDCM 00026 Bonne Colonies incolores à orangées

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8 CONSERVATION

Milieu déshydraté : 2-30 °C.

Milieu prêt-à-liquéfier : 2-8 °C.
Les dates de péremption sont mentionnées sur les étiquettes

Milieu préparé en flacons (*) : Non recommandé.

(*) Valeur indicative déterminée dans les conditions standards de préparation, suivant les instructions du fabricant.

9 PRESENTATION

Milieu déshydraté :
Flacon de 500 g ................................................................................................................................................... BK011HA
Seau de 5 kg ........................................................................................................................................................BK011GC

Milieu prêt-à-liquéfier :
Pack de 10 flacons de 200 mL ............................................................................................................................ BM07508

10 RÉFÉRENCES BIBLIOGRAPHIQUES

Mossel, D.A.A., Mengerink, W.H.J., and Scholts, H.H. 1962. Use of a modified MacConkey agar medium for the
selective growth and enumeration of all Enterobacteriaceae. J. Bact., 84: 381.
Mossel, D.A.A., Wisser, M., and Cornelissen, A.M.R. 1963. The examination of foods for Enterobacteriaceae using a
test of the type generally adopted for the detection of Salmonellae. J. Appl. Bact., 24: 444-452.
NF V08-054. Avril 2009. Microbiologie des aliments. Dénombrement des entérobactéries présumées par comptage
des colonies obtenues à 30°C ou à 37°C.
NF EN ISO 21528-1. Juillet 2017. Microbiologie de la chaîne alimentaire - Méthode horizontale par la recherche et le
dénombrement des Enterobacteriaceae - Partie 1 : recherche des Enterobacteriaceae.
NF EN ISO 21528-2. Juillet 2017. Microbiologie de la chaîne alimentaire. Méthodes horizontales pour la recherche et
le dénombrement des Enterobacteriaceae. Partie 2 : Méthode par comptage des colonies.
Pharmacopée Européenne. Chapitre 2.6.13. Contrôle microbiologique des produits non stériles : Recherche de
microorganismes spécifiés.

11 AUTRES INFORMATIONS

Les mentions portées sur les étiquettes sont prédominantes sur les formules ou les instructions décrites dans ce
document et sont susceptibles d’être modifiées à tout moment, sans préavis.

Code document : VRBG_FR_V13.

Date création : 11-2000
Date de révision : 09-2019
Motif de révision : Correction mode de préparation

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