FACULTE SNV

FILIERE : SCIENCES BIOLOGIQUES

SPECIALITE : M1 PHARMACOTOXICOLOGIE
MODULE : EXTRACATION DES BIOMOLECULES
ENSEIGNANTE : MADAME AMARI

COMPTE RENDU DU TP :

Extraction de limonène par la méthode de

L’Hydrodistillation

REALISE PAR :

DJELLOUL DAOUADJI ABDERRHMANE

2021\ 2022
 INTRODUCTION :
Définition :
Est l'un des procédés d'extraction ou de séparation de certaines substances
organiques les plus anciens, apporté par les Arabes au ixe siècle. Cette opération
s'accomplit dans un alambic. La méthode est basée sur l'existence d'un azéotrope
de température d'ébullition inférieure aux points d’ébullition des deux composés
purs pris séparément.
Aujourd'hui, il est mis en œuvre dans différents secteurs. L'industrie pétrolière
l'utilise pour obtenir de l'essence à partir de pétrole brut. C'est aussi par
hydrodistillation que l'on tire les huiles essentielles des pétales de fleurs (c'est
notamment le cas de l'huile essentielle de lavande et le limonène des agrumes
dans le cas de notre TP ).

Avantages :
– Le principal avantage est de ne pas nécessiter de source de vapeur externe
: investissement réduit.
– Convient aux fleurs comme la rose ou la fleur d’oranger….
– Convient aux plantes avec des composants saponifiables, hydrosolubles
ou à points d’ébullitions élevés.

Inconvénients :
– Nécessité d’arrêter la distillation lorsque l’on remet de l’eau.
– Nécessité de surveiller en permanence le niveau d’eau.
– Précautions à prendre dans la façon de charger l’alambic
– Phénomènes d’hydrolise
– Durée de distillation difficilement contrôlable car attente de la montée
en température de l’eau.
– La température élevée cause la destruction des molécules qui donne un
faible rendement , alors qu’il faut contrôler la température
attentivement
Objectif du TP :
On utilise cette méthode d’Extraction par hydrodistillation pour extraire le
limonène contenu dans l’écorce d’orange Lors du chauffage d'un système non
miscible (ici eau - molécules organiques)

Figure 01 : Composition chimique de limonène

Principe de l’hydrodistillation :
Lorsqu'on utilise cette technique, on fait chauffer un ballon contenant de l'eau
ainsi que l'espèce végétale dont on veut récupérer l'huile jusqu'à ébullition. Sous
l'effet de la chaleur, les cellules végétales éclatent et libèrent leurs huiles, puis
les vapeurs d'eau et d'huile vont s'élever pour atteindre un réfrigérant constitué
de deux tubes : le premier dans lequel passe la vapeur pour se liquéfier et le
second qui l'entoure et qui dispose d'une entrée et d'une sortie à travers lequel on
fait circuler de l'eau à température ambiante en continu pour refroidir.
On n'a alors plus qu'à récupérer le distillat dans un récipient tel une burette ou
une éprouvette. On obtient deux phases puisque l'eau et l'huile ne sont pas
miscibles. L'huile essentielle apparaît alors sur le dessus car elle est moins dense
que l'eau. On peut alors évacuer l'eau si on a choisi d'utiliser une burette. le
papier filtre portant le soluté, et est soutiré par un conduit latéral où elles
accumulent le soluté dans le bas et le solvant dans la partie supérieure, et le
solvant est remis en circulation à partir d'ici dans le ballon. Sinon, le solvant et
le soluté peut être versé ensemble dans le flacon, où le soluté demeure précipiter
et il est récupéré à la fin de l'opération.
Matériel Utilisé :
 bain d'huile et plaque chauffante magnétique (ou chauffe-ballon, avec
agitation magnétique),
 support élévateur,
 ballon bicol
 thermomètre
 réfrigérant à eau coudé (ou réfrigérant à eau + allonge coudée) et tuyaux,
 éprouvette graduée de 250 mL
 puissant barreau aimanté
 potence, noix et pinces
 écorces des oranges
 un entonnoir
 Cuillère
 Seringue de verre
 Balance électrique
 Eau distillé

Eau distillé réfrigèrent thermomètre Potence

Chauffe ballon CCM Sulfate seringue balance

De sodium électrique
Figure 02 : Matériel utilisé
Ampoule à décanter scalpel cuillère éprouvette gradué

Aluminium support élévateur Râpe

Figure 03 : Matériel utilisé

Mise en place du matériel :

Au préalable, on a bien pris soin de graisser tous les rodages mâles. La plaque
chauffante magnétique et le bain d'huile sont placés sur le support élévateur en
position basse. Le ballon est fixé à la potence à l'aide d'une noix et d'une pince à
une hauteur telle que l'on puisse retirer le moyen de chauffage lorsque le support
est en position basse. On place sur le premier col, la tête de colonne avec un
thermomètre et le réfrigérant coudé et, sur le deuxième col, un bouchon rodé.
Notons que le réfrigérant à eau coudé est relié directement au ballon. Il est
totalement inutile d'insérer une colonne de séparation (type Vigreux par
exemple) entre les deux. L'éprouvette est placée sous l'extrémité du réfrigérant
coudé.
Méthode :
- Après le montage de matériel et la vérification de son bon
fonctionnement, Nous pesons une masse de 62g d’écorce de
citron et d’orange

Figure 04: Figure 05: pèse d’une

Râpe d’écorce masse de 62g

- On place les écorces de citron et d’oranges dans le ballon

contenant 200ml d’eau distillée dans lequel on rajoute une autre
200ml d’eau distillé de l’eau pour procéder à une
hydrodistillation.
 Figure 06 : Ajout des écorces de citron et oranges dans le ballon
- Nous fermons après le ballon et on ferme toute fuite du dispositif
d’extraction pour éviter la perte des molécules et huiles
essentielles qui sont de nature volatils, et nous allumons le
chauffe ballon et on met la température au début sur 150° et on
attend l’ébullition de la solution contenue dans le ballon.

Figure 07 : Fermeture du dispositif et contrôle de température

d’échauffement

- Nous remarquons après l’ébullition et l’échauffement du ballon une

condensation de vapeur d’eau au niveau de chambre de condensation et
après l’atteinte de température 95 °
 Figure 08 : Ebullition du ballon et condensation de vapeur .
- Nous regardons des gouttes monte dans la tête de colonne puis pénètre
dans un réfrigérant à eau, parcouru par de l’eau froide venant du robinet et
qui finit à retomber dans l’éprouvette avec un thermomètre à 100° et les
gouttes continuent à descendre formant deux phases , la phase aqueuse et
la phase organique contenant les huiles essentielles ou bien le limonène .

Figure 09 : Thermomètre à 100° Figure 10 : descente des huiles

Essentielles avec l’eau

- On enlève attentivement après la phase organique à l’aide d’une seringue

de verre

Figure 11 : enlèvement du huiles essentielles

- On utilise après l’ampoule à décanter pour séparer entre les deux phases
aqueuse et l’organique , on va rajouter de le solvant qui est l’éther de
pétrole. L’éther est un liquide non miscible à l’eau, dans lequel l’huile
essentielle d’orange est très soluble.
- Pour utiliser correctement l’ampoule à décanter, il faut bien agiter et
penser à dégazer régulièrement. L’éther est un liquide très volatil.
- Il faut ensuite laisser reposer l’ampoule à décanter, pour bien séparer la
phase aqueuse contenant l’eau, et la phase organique contenant l’éther et
l’huile essentielle d’orange.
- Une fois l’extraction terminée, il faut évaporer l’éther pour recueillir
l’huile essentielle d’orange.

Figure 12 : Décantation

- Après la décantation on dessèche la solution restée de tout les molécules

d’eau restés en utilisant le sulfate de sodium
- Après évaporation de l’éther, on obtient une très petite quantité d’huile
essentielle dans l’erlenmeyer : environ 1,8 gramme. La masse d’écorce
d’orange initialement pesée correspond à 62 grammes. Le rendement de
l’extraction correspond à 1,8 x 100 \ 62 = 2,9%

- Pour vérifier que l’huile essentielle contient bien du limonène, il faut

procéder à une chromatographie Sur une plaque de silice CCM, on dépose
une goutte de distillat, et une goutte de limonène pur de référence.
L’ensemble est placé dans une cuve chromatographique contenant un
éluant adapté. L’éluant migre sur la plaque chromatographique en
entraînant avec lui, les composés déposés préalablement sur cette plaque.
 - Une fois la chromatographie terminée, il faut révéler le chromatogramme,
car les composés sont incolores. On utilise pour cela, une solution de
permanganate de potassium.

Figure 13 : Utilisation du CCM pour valider la présence de limonène

Résultats :
Après le suivi de protocole et l’application des différentes étapes de
l’hydrodistillation nous avons acquis un distillat qui contient les huiles
essentielles et la phase aqueuse , nous avons poursuivi les autres étapes pour
récupérer que la phase organique en passant par la méthode de décantation ,
dessèchement et en utilisant finalement le CCM qui nous a validé la présence de
notre principe actif voulu (  Limonène ).

Figure 14 :Les huiles essentielles obtenus

Discussion :
- D’abord nous avons choisi la méthode d’hydrodistillation parce que Les
températures nécessaires à la mise en œuvre de la technique
d'hydrodistillation se situent autour de 100 °C. De quoi protéger les
molécules odorantes et volatils surtout dans notre expérience qui concerne
l’extraction du limonène à partir du citron et les oranges
- la râpe était soigneuse à cause de la volatilité des molécules odorantes
contenus au niveau du zeste ou bien les écorces du citron et les oranges et
de ne pas les enfoncer pour garder le maximum des huiles essentielles
- Il faut bien vérifier le bon fonctionnement de dispositif pour éviter tout
danger et fuites
- Ensuite , nous avons travaillé Avec le Ether de pétrole parce que il
présente un solvant utile pour la limonène .
- L’hydrodistillation est une méthode très sensible concernant la
température d’échauffement et le temps écouler pour terminer
l’opération , surtout le contrôle intensif de la température pour éviter
l’arrêt de la distillation et pour ne pas détruire les molécules odorantes
- Cette méthode nous aide dans l’extraction des molécules odorantes à
cause de sa température moins élevée que les autres méthodes
- Nous avons remarqué que chaque fois la vapeur diminue même avec un
petite valeur la distillation et la condensation s’arrête qui veut dire il faut
toujours garder la température bien précise
- Nous avons fermer chaque fuite qui peut permettre la perte des molécules
odorantes et volatils dans l’air en utilisant les coudes et l’aliminium
- L'inconvénient reste la faible quantité d'huile essentielle récupérée au final
après plusieurs étapes et protocoles suivis qui épuise les efforts et le
temps et aussi le côté financier grâce à la nécissité de ramener une grande
quantité de chaque fleur voulu extraire leurs huiles essentielles , c'est en
partie cela qui explique le prix élevé des parfums.
- Le CCM valide la présence de limonène avec l’utilisation de limonène
standard et le est du limonène obtenu en concerntrant sur la phase mobile
qui va nous déterminer la présence du limonène ou pas
Interprétation :

- L’utilisation de cette méthode d’hydrodistillation est fatigante et très

coûteuse et surtout une méthode ancienne et classique
- Cette méthode permet l’extraction de peu des huiles essentielles à partir
d’une grande quantité des fruits et fleurs utilisés qui donne un très faible
rendement
- Cette méthode protège les molécules odorantes à cause la température
d’ébullition qui ne dépasse pas 100° qui permet à extraire des molécules
sensibles odorantes et volatils
- La manipulation de cette méthode est facile et pas compliquée

Conclusion :
La technique d'hydrodistillation permet d'obtenir, à partir d'un mélange
complexe, le composé organique souhaité par simple séparation de phases dès
lors que ce dernier est non miscible à l'eau. L'avantage principal de cette
méthode par rapport à une distillation fractionnée tient aux températures
utilisées : l'hétéroazéotrope est distillé à des températures, TH, toujours
inférieures à 100 °C, alors que les températures d'ébullition de nombreux
composés organiques sont nettement supérieures à cette valeur. Ceci explique
que cette technique est très largement utilisée en parfumerie, où les molécules
odorantes sont souvent fragiles et ne peuvent supporter des températures
importantes.
Une variante de cette technique consiste à apporter de la vapeur d'eau de
l'extérieur et non pas à chauffer le ballon contenant les composés à récupérer.
On parle alors d'entraînement à la vapeur.
Liste des figures :

Figure 01 : Composition chimique de limonène

Figure 02 : Matériel utilisé
Figure 03 : Matériel utilisé 2
Figure 04 : Râpe d’écorce
Figure 05 : Pèse d’une masse de 62g
Figure 06 : Ajout des écorces de citron et oranges dans le ballon
Figure 07 : Fermeture du dispositif et contrôle de température d’échauffement
Figure 08 : Ebullition du ballon et condensation de vapeur .
Figure 09 : Thermomètre à 100°
Figure 10 : descente des huiles Essentielles avec l’eau
Figure 11 : enlèvement du huiles essentielles
Figure 12 : Décantation
Figure 13 : Utilisation du CCM pour valider la présence de limonène
Figure 14 : :Les huiles essentielles obtenus