REPUBLIQUE DU CAMEROUN

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INSTITUT SUPERIEUR DES SCIENCES ET *********
TECHNIQUES DE LA SANTE ET DU HIGHER INSTITUTE OF SCIENCES, HEALTH
MANAGEMENT TECHNIQUES AND MANAGEMNT

Cours de Parasitologie Clinique 1

Filière : Sciences et Techniques Biomédicales
Spécialité : TLAM
Niveau 2

1 Chapitre 2 Examen parasitologique du sang

A partir de prélèvements sanguins, un diagnostic est systématiquement posé pour le paludisme, la

trypanosmiase africaine, la leishmanisis viscérale et la plupart des types de filariose et rarement de la
toxoplasmose.

Prélèvement

Le prélèvement doit être fait autant que possible avant le début du traitement si non signaler. Une attention
particulière est nécessaire dans la collecte et la préparation des frottis sanguins.
 Les précautions suivantes doivent être prises lors de la collecte du sang.
 1. Recueillir une quantité suffisante de sang.
 a. Sang capillaire provenant de la piqûre au doigt, des orteils ou des lobes de l'oreille
 b. Sang veineux.
 Le sang recueilli devrait être suffisant pour faire un état frais, des frottis minces et / ou épais colorés, ou pour
être utilisé pour concentrer les parasites.
 2. Moment de la collecte
 Recueillir l'échantillon de sang au moment opportun en fonction des investigations cliniques. Par exemple.
Pour les microfilaires, les plasmodium, etc. La plupart des parasites du paludisme se trouvent généralement
dans le sang vers la fin d'une crise de fièvre. Toujours prélever du sang pour le dignostic du paludisme avant
de donner les médicaments antipaludiques aux patients. Le sang doit être prélevé en fonction de la périodicité
des microfilaires.
 3. Si un échantillon de sang anti-coagulé doit être utilisé.
Utilisez un anticoagulant approprié. Par exemple : citrate de sodium pour les microfilaires, EDTA pour les
parasites du paludisme et les trypanosomes.
 4. Après la collecte, protéger les spécimens de manière adéquate.
 Les types d'examens sanguins suivants peuvent être réalisés pour le diagnostic de laboratoire des
hémoparasites:

 Examen direct à l’état frais: recherche des microfilaires

Technique de sang lysé par centrifugation en tube

10 ml de sang veineux sont lysés dans une solution de saponine. Les microfilaires sont concentrées par
centrifugation. L’ajout de colorant nucléaire bleu aide à identifier l'espèce. Le nombre de microfilaires (mf)
compté diviser par 10 donne le nombre de mf / ml.

Technique de tube de microhaematocrite

Le sang capillaire (de préférence le sang du lobe de l'oreille) est recueilli dans des tubes capillaires héparinés
ou environ 100 pi sont d'abord recueillis dans un anticoagulant EDTA et transférés dans des tubes capillaires

PAR : BABINNE G. BONAVENTURE, PHD STUDENT IN MEDICAL MICROBIOLOGY 1

plats. Le sang est centrifugé dans une centrifugeuse à microhématocrite et la couche leucocytaire est
examinée pour rechercher les microfilaires mobiles. Dans les zones où l'espèce est connue et Mansonellamf
ne sont pas trouvés, c'est la technique rapide pour détecter les microfilaires.

Préparation de la lame à l’état frais

Prélever 0,02 ml de sang et mélanger avec 2 gouttes d'eau (pour lyser les globules rouges) sur une lame.
Couvrir avec un verre de protection et examiner pour trouver le mf mobile à l'objectif 10x. La technique est
parfois utilisée comme test de dépistage, mais elle n'est pas aussi sensible que les procédures ci-dessus.

 Goutte épaisse

 Désinfecter le bout du doigt et piquer avec un geste rapide d'une aiguille ou lancette, en utilisant une
compresse pour essuyer les traces de désinfectant et de sang.
 Déposer une grosse goutte de sang sur une lame.En utilisant le coin d'une autre lame, étalez le sang dans un
motif rectangulaire de sorte que le sang coule lentement et ne forme pas immédiatement une goutte sur le
bord inférieur lorsque la lame est inclinée sur le côté. La lame doit être laissée à sécher dans une surface plane
telle que le dessus de la table. Puis colorer avec Giemsa.

Frottis mince

Recueillir une goutte de sang sur une lame propre, généralement à partir du bout du doigt. Déposer à
l’extrémité d’une lame propre une petite goutte de sang. Placez sur une table. Prenez rapidement une
deuxième lame propre. Et en le maintenant à un angle de 30 degrés par rapport à la première lame: approcher
jusqu'à ce qu'elle touche la goutte de sang, puis poussez vers l'avant pour que le sang s'étende. La quantité de
sang doit être suffisamment petite pour être épuisée avant que la lame atteigne l’autre bout. De cette manière
un frottis en couche monocellulaire peut être obtenu. Un tel frottis est le meilleur pour l'étude des cellules
sanguines ainsi que des parasites. Puis séchez à l'air et colorerauGeimsa.
Sensibilitéde la goutte épaisse et frottis
- 20 fois plus de sang peut être examiné dans unegoutte épaisse que dans un frottis mince dans la même
période de temps. Unegoutte épaisse est donc plus appropriée pour la détection rapide des parasites du
paludisme. Dans la zone où P.malariae existe, sauf si unegoutte épaisse est examinée, l'infection est
susceptible d'être manquée parce que la parasitémie est normalement faible avec cette espèce.
 - Plus de sang peut être examiné dans unegoutte épaisse parce que le frottis n'est pas fixe et donc les globules
rouges sont lysés pendant la coloration.
Les parasites ne sont pas détruits et après avoir été colorés, ils peuvent être détectés parmi les globules blancs,
sur un fond d'hémoglobine légèrement colorée.
 - Un frottis mince est nécessaire pour confirmer l'espèce de Plasmodium si cela n'est pas clair à partir de
lagoutte épaisse. Un frottis mince est fixé et donc les parasites peuvent être vus dans les globules rouges.
Selon les espèces, les globules rouges parasités peuvent s'agrandir, avoir une forme ovale et présenter des
taches. Ces caractéristiques, ainsi que les formes parasitaires présentes, peuvent grandement aider à confirmer
une infection mixte et à identifier P.ovale et P.malariae qui sont plus difficiles à différencier dans unegoutte
épaisse.

 Confection de goutte épaisse et frottis mince

 Unegoutte épaisse et un frottis mince peut être réalisée sur une même lame, ce qui présente l'avantage
d'utiliser moins de lames. Le frottis mince peut être utilisé pour étiqueter l'échantillon lorsque des lames avec
des extrémités dépolies (pour l'étiquetage) ne sont pas utilisées.
Pour assurer une bonne coloration et une standardisation des rapports, la quantité de sang utilisée, en
particulier pour faire des frottis épais, doit être maintenue aussi constante que possible et le sang doit être
étalé uniformément sur une zone donnée de la lame.
 Le sang d'une piqûre au doigt est habituellement utilisé pour les frottis de paludisme. Le frottis mince et
épais peut être coloré avec une coloration de Wrigthou une coloration auGiemsa. Un frottis mince est mieux

PAR : BABINNE G. BONAVENTURE, PHD STUDENT IN MEDICAL MICROBIOLOGY 2

coloré avec des Wrightset épais mieux avec le Giemsa. Si les deux doivent être colorés avec Giemsa. Le
frottis mince doit être fixé dans l'alcool. La coloration de Giemsa enlève l'heamoglobine.

Coloration du frottis sanguin mince

 Colorationde Wright:

1. Sécher le frottis à l'air

2. Mettez la lame sur la grille de coloration
3. Couvrir la lame avec le colorant de Wright et attendre 2-3 minutes
4. Ajouter une quantité égale d'eau distillée
5. Mélanger l'eau distillée avec la tache de poids en soufflant jusqu'à ce que l'écume métallique apparaisse
6. Attendez 8 minutes.
7. Sans bouger la lame, inonder d'eau distillée et laver jusqu'à ce que des parties plus minces du frottis
deviennent rosées.
8. Tenez la lame de verre à l'extrémité pour sécher.

 Coloration de la goute épaisse et frottis avec coloration Giemsa:

 1. Laisser sécher le frottis épais et mince

2. Placez le frottis sur la grille de coloration (côté frottis vers le haut)
3. Fixez d'abord 1-3 minutes. (Veillez à ce que le méthanol ne touche pas les frottis épais)
4. Couvrir le frottis de sang épais et mince avec la tache de Giemsa diluée
Laissez le colorant diluée pendant 30 minutes
5. Laver le colorant avec de l'eau distillée
6. Laisser le frottis sécher et
7. Examiner avec l'objectif d'immersion dans l'huile

 Résultat de la coloration des frottis sanguins

 Parasites du paludisme

 Cytoplasme du parasite ..........................................bleu

Point de chromatine nucléaire ................................rouge foncé
Pigment de paludisme ..............................................marron noir
Globules rouges..........................................................gris à pâle mauve
Leucocytes ..................................................................tache foncé
Les points de James, Schuffener et Maurer .............rouge violacé

 Parasites de trypanosomes

Noyau................................................. ..............mauve rouge

Kinstoplast ................................................. ......foncé mauve -red
Cytoplasme................................................. ....Pâle mauve

 Parasites de Leishmania

Noyau................................................. ..............Rouge mauve

Kinetoplast ................................................. .....Rouge foncé mauve
Cytoplasme................................................. ....Pâle-mauve
Densité moyenne des parasites
0 …………………………………………….0/1000 champs

PAR : BABINNE G. BONAVENTURE, PHD STUDENT IN MEDICAL MICROBIOLOGY 3

1+ ……………………………………………1-10 / 1000 champs
2+ …………………………………………….1-10 / 100 champs
3+ ……………………………………………..1-10 / 10 champs
4+………………………………………………1-10 / champ
5+ ……………………………………………..10-100 / champ
6+…………………………………………….> 100 / champ

 Microfilaires

 Noyaux ................................................. ......violet foncé

Fourreau de W.bancrofti ............................rose
Gaine de B. malayi .....................................rose foncé
Gaine de L.loa .............................................gris pâle ou non taché

Résultats

 Le résultat de l'examen sanguin pour des hémoparasites doit ressortir:

A. L'espèce de parasite trouvée
B. Le stade de développement
 C. La densité parasitaire

Techniques d'estimation de la densité parasitaire du paludisme

 Comptage du pourcentage des hématies parasitées dans un frottis mince

 Pour estimer les cellules parasitées, compter un total d'au moins 500 globules rouges en faisant une note du
nombre qui contiennent des parasites à l'exclusion des gamétocytes et à la fin du rapport en pourcentage.
Remarque: - Une infection grave à P.falciparum est indiquée lorsque plus de 5% des globules rouges sont
infectés. Par exemple. Lorsque 10 à 20% des cellules sont parasitées, le pronostic est grave, de 20 à 30% il est
grave et de plus de 30% il est exceptionnellement grave.

Comptage des parasites du paludisme contre les leucocytes dans une goutte épaisse.

 Le nombre absolu de parasites peut être estimé dans un étalement épais en comptant les parasites contre les
globules blancs et en utilisant des valeurs de numération des globules blancs fixes ou des comptes connus de
leucocytes(plus précis) pour calculer le nombre de parasites par microlitre de sang. Le comptage des parasites
est facilité si une grille est placée dans l'oculaire.
 1. Sélectionnez une partie de lagoutte épaisse où les globules blancs sont répartis uniformément et les
parasites sont bien colorés.
2. À l'aide de l'objectif d'immersion, compter systématiquement 100 globules blancs (LEUCOCYTES) en
estimant en même temps le nombre de parasites (asexués) dans chaque champ couvert. Répétez cela dans
deux autres zones du frottis et prenez une moyenne des trois,
3. Comptez le nombre ou les parasites par microlitre ou sang comme suit.
Nombre de parasites: Nombre de globules blancs x Parasites comptés contre 100 LEUCOCYTES
Exemple: - Nombre de globules blancs du patient = 5 000 / microlitre
           Parasite compté contre 100 LEUCOCYTES - 500
      Nombre de parasites = (5000 x 500)/100= 25,000 / micro-litre

Estimation de la parasitémie     

La quantité des parasites trouvés dans unegoutte épaissedonnée en utilisant des signes plus :
  1- 10 pour 100 champs............................ +
 11-100 pour 100 champs........................... ++

PAR : BABINNE G. BONAVENTURE, PHD STUDENT IN MEDICAL MICROBIOLOGY 4

 1- 10 dans tous les champs.........................+++
 Plus de 10 dans tous les champs................++++

PAR : BABINNE G. BONAVENTURE, PHD STUDENT IN MEDICAL MICROBIOLOGY 5