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    Test de Coombs Direct

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    TEST DE COOMBS DIRECT

    =-==-=-=-=-=-=-=

    I. PRINCIPE

    Le test de Coombs direct permet la mise en évidence des anticorps de type


    incomplet. Les anticorps incomplets ont la particularité de se fixer sur l’antigène
    érythrocytaire sans entraîner l’agglutination des hématies.

    Les anticorps incomplets fixés sur les hématies sont révélés à l’aide d’un sérum
    antiglobuline humaine. Le sérum antiglobuline humaine réagit avec les anticorps fixés
    à la surface des hématies et provoque l’agglutination.

    2. TECHNIQUE

    TUBES A HEMOLYSE TEST 1 TEMOIN TEMOIN


    Négatif 2 Négatif 3
    Hématies à tester en suspension à 5% II gouttes
    Hématies O Rh - en suspension 5% II gouttes
    Hématies O Rh + en suspension 5% II gouttes
    Sérum anti-D II gouttes II gouttes
    Laisser incuber au bain -Marie
    à 37°C pendant 45 mn
    Laver 3 fois en solution physiologique,
    rejeter tout le surnageant après 3° lavage.
    Sérum anti-globuline humaine II gouttes II gouttes II Gouttes

    Agiter les tubes, mélanger leur contenu. Centrifuger immédiatement 1000 tours/mn
    pendant 1 mn. Lire en remettant doucement le culot en suspension macroscopiquement
    (miroi) puis microscopiquement (objectif 10).

    RECHERCHE D’AGGLUTINATION

    Test de Coombs positif agglutination pas d’agglutination Agglutination


    Test de Coombs négatif pas d’agglutination pas d’agglutination Agglutination
    TEST DE COOMBS INDIRECT
    =--=-=-=-=-=-=-=-=-=
    1. PRINCIPE

    Le test de Coombs indirect permet de déceler la présence d’anticorps


    incomplets, libres dans le sérum. (Les anticorps incomplets sont incapables
    d’agglutiner en milieu salin les hématies portant l’antigène correspondant, mais ils se
    fixent cependant sur les hématies).

    Pour les mettre en évidence, le sérum suspect, dans un 1er temps, est mélangé
    avec des hématies connues (O Rh+) sur lesquelles les anticorps pourront se fixer, puis
    dans un 2ème temps, leur présence est révélé par l’apport de sérum antiglobuline
    humaine qui permettront l’agglutination des hématies.

    2. TECHNIQUE

    TUBES A HEMOLYSE TEST 1 TEMOIN TEMOIN


    Négatif 2 Positif 3
    Sérum à tester II gouttes
    Hématies O Rh + en suspension 5% II gouttes II gouttes II gouttes
    Sérum anti D II gouttes
    Eau physiologique II gouttes

    Mélanger et laisser incuber 45 mn au bain Marie. Centrifuger à 1000 tours/mn


    durant 1 mn. Lire en recherchant une agglutination. Si c’est le cas, il y a présence
    d’anticorps complets actifs en milieu salin. Si les suspensions restent homogènes laver
    successivement 3 fois en solution physiologique. Décanter complètement le surnageant
    après le dernier lavage.

    Sérum anti globuline humaine II gouttes II gouttes II gouttes

    Mélanger et centrifuger immédiatement à 1000 tours/mn durant 1mn. Lire en


    remettant doucement en suspension, macroscopiquement et microscopiquement
    (objectif 10).

    Test de Coombs indirect positif agglutination pas agglutination


    d’agglutination
    Test de Coombs indirect négatif pas d’agglutination pas agglutination
    d’agglutination

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