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DOI 10.1007/s10298-015-0975-6
PHARMACOGNOSIE
Introduction
Les produits naturels sont une source de molcules varies
prsentant des activits biologiques puissantes, et des profils
pharmacologiques intressants. Historiquement, les produits
naturels sont la source de nombreux mdicaments. Cest
ainsi que 60% des mdicaments contre le cancer et 75% des
mdicaments contre les maladies infectieuses sont des drivs de produits naturels [1]. Lacceptation de la mdecine
traditionnelle comme une forme alternative de traitement,
ainsi que le dveloppement de la rsistance microbienne
aux antibiotiques disponibles ont conduit les scientifiques
raliser des recherches sur lactivit antimicrobienne des
plantes mdicinales [2-5]. Toutefois, des donnes rcentes
de lindustrie pharmaceutique montrent que, pour certaines
maladies complexes, les produits naturels reprsentent toujours une source extrmement prcieuse pour la production
de nouvelles entits chimiques car ils reprsentent des structures privilgies choisies par les mcanismes dvolution
Phytothrapie
Matriels et mthodes
200 g de poudre de feuilles ont t introduits dans un erlenmeyer pour tre macrs avec 600 ml dthanol pur 95% et
mis sous agitation magntique pendant 24 heures la temprature du laboratoire et une vitesse de 500 tours/minutes.
Aprs dcantation de lchantillon, le surnageant a t filtr
sous vide.
Le marc humidifi dun volume de 700 ml rcupr aprs
la dcantation, auquel il a t ajout 700 ml dthanol pur
95%, a t soumis une deuxime extraction, dans les
mmes conditions opratoires du dpart. Par la suite plusieurs extractions ont t effectues afin dobtenir des rendements infrieurs aux prcdents. Les surnageants rcuprs
ont t concentrs en petites fractions par vaporateur rotatif.
Aprs filtration sur papier Whatman N03, le filtrat a t
concentr au rotavapor de type Laborota 4000 sous vide
la temprature de 70C et avec une rotation de 120 rpm,
lextrait concentr a t marqu EEFG [12].
Le rendement en (g) dextrait par rapport la masse du
matriel vgtal traiter a t calcul selon la formule suivante : R=m 100/m. O R est le rendement de lextrait brut
en pourcentage (%), m est la masse de lextrait brut obtenu
aprs extraction (g) et m est la masse du matriel vgtal (g)
[13]. Les extraits obtenus ont t conservs dans des tubes
couverts avec du papier aluminium et mis au conglateur
jusqu leur utilisation pour les essais biologiques.
Matriel vgtal
Les feuilles du grenadier Punica granatum ont t cueillies
durant le mois de mars 2009, dans la localit de SidiAli-Benyoub distante de 25 km au sud de la ville de SidiBel-Abbs, 450 km louest dAlger et 80 km au sud
dOran. Les feuilles ont t photographies pour authentification, le spcimen de rfrence de la plante a t achemin
au laboratoire de taxonomie vgtale pour identification par
le Pr Benhassaini du dpartement de lenvironnement de la
facult des sciences de la nature et de la vie de luniversit
Djillali Liabs de Sidi-Bel-Abbs (Algrie), o lchantillon
a t dpos et cod sous le NPGF2009. Les feuilles ont t
sches lombre pendant 15 jours sur une plaque en bois,
labri de lhumidit et de la lumire et temprature
ambiante. Aprs schage, les feuilles ont t concasses dans
un mortier traditionnel ensuite pulvrises au broyeur
manuel jusqu lobtention dune poudre trs fine, cette dernire a t conserve au rfrigrateur + 4C dans un rcipient hermtiquement ferm, cette poudre fine sera ultrieurement utilise pour la prparation des deux extraits [12].
Prparation des extraits vgtaux
Cest ainsi que 323 g de la poudre de feuilles ont t solubiliss dans 750 ml de mthanol extra pur 99%. Le mlange a
Ltude antimicrobienne a consist dterminer des paramtres antifongiques (CMI et CMF) des deux extraits
Phytothrapie
Analyse statistique
Lanalyse statistique des rsultats a t effectue par lutilisation du programme XLSTA 2014. Le test est considr
comme significatif pour des valeurs de p<0,05. La moyenne
des diamtres dinhibitions des 3 essais pour chaque concentration a t calcule pour les deux extraits et pour chaque
souche de levure teste.
Phytothrapie
Rsultats et discussion
Rendement %
EMFG
EEFG
35,860,17
280
Tableau 2 Diamtres des zones dinhibitions de la croissance fongique obtenus par lextrait des feuilles de la grenade EMFG
(moyenne cart type).
EMFG (mg/ml)
3,125
6,25
12,5
25
50
Covariance
R.spp
C. albicans ATCC
1231
C. albicans IP 444
C. albicans (c)
110
180
170
190
200
200
220
230
230
24,331,56
57,75
39,02
140
120
150
150
160
170
190
180
22,12
210
49,86
47,13
Phytothrapie
Tableau 3 Diamtres des zones dinhibitions de la croissance fongique obtenus par lextrait des feuilles de grenade EEFG
(moyenne cart type).
EEFG (mg/ml)
3,125
6,25
12,5
25
50
Covariance
R. spp
C. albicans ATCC
1231
C. albicans IP 444
C. albicans (c)
150
150
190
16,50,5
22,160,29
19,50,5
23,50,5
22,50,5
24,50,5
25,50,5
47,41
62,63
18,160,29
150
19,50,5
170
21,50,5
17,761,36
23,331,53
18,50,5
24,50,5
200
36,54
25,52
Fig. 2 Corrlation linaire entre les diamtres des zones dinhibitions de la croissance des 4 levures et la concentration de lextrait
EMFG (p0,05)
Phytothrapie
Fig. 3 Corrlation linaire entre les diamtres des zones dinhibitions de la croissance des 4 levures et la concentration de lextrait EEFG
(p0,05)
dextrait test (Tableaux 2, 3). Nos rsultats taient comparables ceux mens par [26], o le test de lextrait aqueux
des feuilles de la grenade sur C. albicans (MTCC 3017), a
produit une zone dinhibition de 240,81 mm et ceux mens
par [27] dont lextrait aqueux dcorces de la grenade a
donn une zone dinhibition de 19 mm test sur la souche
C. albicans MTCC 3018.
Nos rsultats ont correspondu aussi ceux trouvs par
[28] o ils ont test six varits de grenade sur diffrents
micro-organismes parmi eux Rhodotorula rubra. La valeur
maximale de la zone dinhibition tait de 22 mm teste avec
la varit Eksi, par contre sur C. albicans une zone maximale
dinhibition de 23,7 mm tait observe avec la mme varit.
Ces variations dactivit taient peut-tre lies aux diffrentes mthodes dextraction employes qui ont pu affecter lactivit antimicrobienne des matires vgtales et/ou en fonction des diffrentes souches de germes testes [24,29].
Nous avons remarqu galement quil y a une activit inhibitrice trs prononce par rapport au pouvoir
Phytothrapie
Fig. 4 Effet des deux extraits EMFG et EEFG sur linhibition de la croissance des 4 levures : R. spp, C. albicans ATCC 1231, C. albicans IP 444 et C. albicans (c)
Phytothrapie
Fig. 5 Zones dinhibitions obtenues avec lextrait thanolique des feuilles de Punica granatum (EEFG) sur les 4 levures testes
Pour lextrait mthanolique, la CMI et CMF de C. albicans (c) taient respectivement 1,56 mg/ml CMI0,78 mg/
ml et CMF 1,56 mg/ml.
Ces valeurs taient moins leves compares celles
trouves par [31], qui ont test lextrait thanolique de feuilles de grenade sur C. albicans (NCPF 3153), la CMI et la
Phytothrapie
Fig. 6 Zones dinhibitions obtenues avec lextrait mthanolique des feuilles de Punica granatum (EMFG) sur les quatre levures testes
Tableau 4 Valeurs de CMIs et CMFs des souches testes avec les extraits tudis de feuilles de Punica granatum.
Micro-organismes
Extraits
CMI (mg/ml)
CMF (mg/ml)
R. spp
EMFG
EEFG
EMFG
EEFG
EMFG
EEFG
EMFG
EEFG
0,39CMI0,195
0,39CMI0,195
0,39CMI0,195
0,39CMI0,195
1,56CMI0,78
1,56CMI0,78
3,125CMI1,56
1,56CMI0,78
0,39
0,39
0,39
0,39
1,56
1,56
3,125
1,56
10
Phytothrapie
Fig. 7 Dtermination de concentrations minimales fongicides de lextrait thanolique des feuilles de Punica granatum (EEFG) Les
stries des dilutions des tubes tmoins TT / Les stries des tubes exprimentaux La CMF est en couleur rouge en mg/ml (sur la bote
droite =3,125 mg /ml) chez C. albicans (c) en prsence dEMFG. Les stries des dilutions des tubes tmoins TT / Les stries des tubes
exprimentaux La CMF est en couleur rouge en mg/ml (sur la bote droite =1,56 mg/ml) chez C. albicans IP 444 en prsence dEEFG
10-1,10-2,10-3,10-4 (correspondent respectivement : 10%,1%,0,1% et 0,01% de survie)
[38,39]. Lactivit dune substance vgtale dpend de plusieurs facteurs dont le mode dextraction et la concentration
en principe actif [40]. Lactivit antimicrobienne de nos
extraits pourrait sexpliquer par la prsence dun/ou plusieurs
constituants bioactifs limage des phnols, acide phnolique, tanins, quinones, flavonodes et coumarines [41].
Conclusion et perspectives
A partir de cette tude analytique qui consistait valuer
lactivit antifongique des extraits des feuilles de Punica
granatum ; nous pouvons conclure que toutes les souches
fongiques taient sensibles nos extraits. Cette sensibilit
tait diffrente selon les souches (trs sensibles ou moyennement sensibles) et selon le solvant dextraction utilis. Cest
ainsi que C. albicans ATCC 1231 et R. spp ont t les souches les plus sensibles aux deux extraits. Par ailleurs lextrait
Phytothrapie
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