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Évaluation in vitro de l’activité antibactérienne de l’huile essentielle de Salvia

officinalis

Article in Phytotherapie · February 2015

DOI: 10.1007/s10298-015-0925-3

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3 authors:

Benkherara Salah Ouahiba Bordjiba

Université de Ghardaia BADJI Mokhar University Annaba Algeria
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Dr. DJAHRA Ali Boutlelis

El-Oued University
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Phytothérapie
DOI 10.1007/s10298-015-0925-3

ARTICLE ORIGINAL

Évaluation in vitro de l’activité antibactérienne de l’huile essentielle

de Salvia officinalis
In vitro evaluation of the antibacterial activity of essential oil of Salvia officinalis

S. Benkherara · O. Bordjiba · A B. Djahra

© Lavoisier SAS 2015

Résumé Ce travail visait à vérifier l’activité thérapeutique against some strains responsible for certain infectious disea-
antibactérienne d’une plante à usage médicinal : Salvia offi- ses was evaluated, in vitro, on Mueller-Hinton medium.
cinalis L. ou sauge officinale du nord-est algérien. Pour ce The obtained results showed that the isolated essential oil
faire, les huiles essentielles extraites ont été séparées et iden- is constituted of nineteen terpene compounds with a predomi-
tifiées par chromatographie en phase gazeuse couplée à une nance of the α-thujone (about 37%). The tests of the antibac-
spectrométrie de masse (CG/SM) et leur activité antibacté- terial activity revealed that the inhibition of the growth varies
rienne vis-à-vis des souches responsables de certaines mala- according to the bacterial species and the concentration of the
dies infectieuses a été évaluée, in vitro, sur milieu Mueller- tested natural product. Among all tested strains, five of them
Hinton. were very sensitive to the different concentrations of the
Les résultats obtenus ont montré que l’huile essentielle iso- obtained extract with great inhibition zones which can exceed
lée est formée de dix-neuf (19) composés terpéniques avec 34 mm of diameter such as Pseudomonas aeruginosa ATCC
une prédominance de l’α-thujone (environ 37%). Les tests 27853 and Escherichia coli 1554. The recorded inhibition
de l’activité antibactérienne ont révélé que l’inhibition de la zones often exceed those caused by the antibiotic (Rifampin
croissance varie en fonction de l’espèce bactérienne et de la 5 μg). These results are promising and provide a scientific
concentration du produit naturel testé. De toutes les souches validation for the massive use of this species.
testées, cinq d’entre elles se sont montrées très sensibles face
aux différentes concentrations de l’extrait végétal obtenu avec Keywords Antibacterial activity · Essential oils · Salvia
des zones d’inhibition pouvant dépasser 34 mm de diamètre officinalis · Bacterial strain · Rifampin
telle que la souche Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853
(37.08 mm) et Escherichia coli 1554 (34.48 mm). Les zones
d’inhibition enregistrées dépassent le plus souvent celles pro-
Introduction
voquées par l’antibiotique (Rifampicine à 5 μg). Ces résultats
sont prometteurs et apportent une validation scientifique
Il est connu depuis l’Antiquité que les huiles essentielles
quant à l’usage massif de cette espèce.
isolées des espèces végétales présentent une activité antisep-
tique non négligeable. Elles sont utilisées dans de nombreux
Mots clés Activité antibactérienne · Huiles essentielles ·
domaines : pharmacie, cosmétique, agro-alimentaire, etc.
Salvia officinalis · Souche bactérienne · Rifampicine
Bien qu’une grande partie du XXe siècle ait été consacrée
à la mise au point de molécules de synthèse, la recherche de
Abstract This work was designed to assess the antibacterial
nouveaux agents pharmacologiques actifs via le screening de
therapeutic activity of the medicinal plant: Salvia officinalis
sources naturelles a résulté dans la découverte d’un grand
L. or officinal sage in the region of the northeastern algerian.
nombre de médicaments utiles qui commencent à jouer un
To do this, the extracted essential oils were separated and
rôle majeur dans le traitement de nombreuses maladies
identified by Gas Chromatography coupled with a Mass
humaines [1]. Ainsi, de nouvelles recherches ont vu le jour,
Spectrometry (GC/MS) and their antibacterial activity
notamment de l’espoir de traiter certaines maladies infectieu-
ses par les huiles essentielles extraites des plantes aromati-
S. Benkherara (*) · O. Bordjiba · A B. Djahra ques, ce qui est de plus en plus fondé du fait de l’apparition
Laboratoire de Biologie Végétale et Environnement (LBVE),
de résistance des germes aux antibiotiques. Ces huiles sont
Faculté des Sciences, Département de Biologie,
Université BADJI Mokhtar, BP 12, Annaba 23000, Algérie douées de propriétés antimicrobiennes à des degrés divers,
e-mail : [email protected] ce sont des propriétés antifongiques [2-5], antivirales [6],
2 Phytothérapie

antiparasitaires [7] et également des propriétés insecticides 50 g de drogue végétale portés à ébullition pendant 3 heures
[8,9]. Les huiles essentielles qui présentent une bonne acti- avec une vitesse de distillation de 2 à 4 ml par minute.
vité antibactérienne sont également de bons antifongiques L’analyse des huiles essentielles extraites est effectuée à
[10,11]. l’aide d’un chromatographe en phase gazeuse couplé à un
Dans cette étude, nous nous sommes intéressés à une spectromètre de masse de type Schimadzu équipé d’un détec-
espèce végétale très répandue dans le bassin méditerranéen teur à ionisation de flamme (FID) et muni d’une colonne
et très utilisée pour ses nombreuses vertus thérapeutiques. capillaire en silice fondue de type QP20 10C25 FS-OV1701
Il s’agit de Salvia officinalis L. ou sauge officinale. C’est de 25 m de longueur, 0,25 mm de diamètre interne et 0,25 μm
une espèce de la famille des Lamiacées, de 30 à 60 cm de d’épaisseur de film. La température de la colonne est pro-
hauteur, de tiges formant des rameaux quadrangulaires dres- grammée de 60 à 200° C à raison de 3°C/ min pendant
sés et velus, aux feuilles ovales et allongées, gris verdâtre en 13 minutes. La température de l’injecteur est fixée à 240°C
raison d’une pubescence cotonneuse sur la face inférieure, et celle du détecteur (FID) à 250°C. Le débit de gaz vecteur
ont une odeur aromatique caractéristique et de petites fleurs (Hélium) est fixé à 1,5 ml/min. Le volume de l’échantillon
bleues-violettes qui s’épanouissent en juin ou juillet [12,13]. injecté est 0,1 μl de l’huile pure diluée à 10% dans l’hexane.
L’objectif est de vérifier la spécificité de cette espèce sur le Les composés de l’huile essentielle sont identifiés par
plan antiseptique et notamment l’activité antibactérienne des leurs indices de rétention sur la colonne (l’indice de rétention
huiles essentielles. est calculé par rapport aux temps de rétention d’une série
d’alcane linéaire (C9-C28)) et par la comparaison de leurs
spectres de masse avec ceux des composés chimiques réper-
Matériels et méthodes toriés dans une bibliothèque commerciale (ov.17/GCMS
Rcal time analysis).
Matériels utilisés Le pourcentage de chaque composé est déterminé à partir
des aires de pics sans tenir compte des facteurs de correction
Le matériel végétal utilisé est constitué de feuilles de l’es- en supposant que tous les constituants ont des coefficients de
pèce végétale Salvia officinalis L. Les échantillons ont été réponse voisins.
prélevés en décembre 2009 au niveau du Parc National d’El-
Kala (PNEK) au nord-est algérien tôt le matin et au moment Activité antibactérienne
de débourrement de la plante. Ces échantillons ont été dépo-
sés au sein du laboratoire de Biologie Végétale et Environ- L’activité antibactérienne est évaluée par la méthode de
nement (LBVE), faculté des Sciences de l’Université BADJI l’aromatogramme, c’est une méthode de mesure in vitro du
Mokhtar-Annaba. pouvoir antibactérien des huiles essentielles. C’est l’équiva-
Le matériel microbiologique ayant fait l’objet de cette étude lent d’un antibiogramme où les antibiotiques sont remplacés
est constitué de sept souches bactériennes pathogènes pour par les huiles essentielles [18,19].
l’homme, responsables d’infections plus ou moins graves,
souvent multirésistantes aux antibiotiques : Staphylococcus Principe de la méthode
aureus, Escherichia coli 1554, Escherichia coli 1429, Esche-
richia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis, Pseudomonas Un disque (6 mm de diamètre) imprégné du produit à tester
aeruginosa 7244 et Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853. (HE pures, HE diluées au 1/2, HE diluées au 1/4) est placé
Elles proviennent d’un laboratoire d’analyses médicales situé sur une gélose (4 mm d’épaisseur ; dans des boîtes de Pétri
à la wilaya d’Annaba (Algérie). La gélose Mueller-Hinton de 90 mm de diamètre) préalablement inoculée avec la sou-
(pH=5.7) a constitué le principal milieu de culture utilisé. che, s’humidifie et le produit diffuse radialement du disque
Dans le but de comparer l’activité antibactérienne des huiles dans la gélose en formant ainsi un gradient de concentration.
essentielles extraites avec celle des antibiotiques, nous avons Après une incubation de 18 à 24 heures à une température de
utilisé la rifampicine à 5 μg. C’est un antibiotique de la famille 37°C, si le produit est toxique pour la souche, il se forme un
des Rifamycines. Il a une excellente activité sur les germes à halo ou une zone autour du disque. Plus grande est cette
Gram positif : staphylocoques et entérocoques [14-16]. zone, plus la souche est sensible. Des disques témoins (eau
distillée stérile) et des disques de comparaison (antibiotique)
Méthodes suivies sont inclus dans les essais.

Extraction et identification des huiles essentielles Suspensions bactériennes

L’extraction des huiles essentielles (HE) est faite par entrai- A partir des cultures bactériennes préalablement réactivées
nement à la vapeur d’eau. D’après [17], elle est réalisée avec sur milieu Mueller-Hinton à une température de 37°C
Phytothérapie 3

pendant 24 heures, des suspensions bactériennes sont prépa- est réputée pour sa résistance face à la plupart des antibio-
rées dans de l’eau physiologique et homogénéisées de façon tiques, elle s’est révélée ici très sensible par rapport aux
à obtenir une concentration de l’ordre de 106 à 108 autres souches testées avec plus de 30 mm de diamètre. Ce
C.F.U/ml. Après ensemencement des bactéries, les disques chiffre est de loin plus important que celui noté en présence
imprégnés du produit à tester sont appliqués. de l’antibiotique. De même, le germe Staphylococcus aureus
n’a montré aucune sorte de résistance face à l’antibiotique
utilisé. Cependant, il semble légèrement sensible aux diffé-
Résultats rentes dilutions des huiles essentielles étudiées. D’autre part,
une efficacité non négligeable de ces huiles essentielles est
Extraction et identification des huiles essentielles observée contre le germe Proteus mirabilis avec une zone
d’inhibition de 29,96 mm de diamètre (Tableau 2).
Une teneur moyenne de 1,52 ml dans 100 g de drogue végé-
tale correspondant à un taux de 1,52% d’huile essentielle
obtenue. Ces huiles sont de densité plus importante que celle Discussion
de l’eau, d’un aspect liquide limpide fluide et mobile, de
couleur jaune pâle et d’odeur agréable. De l’extraction, l’analyse et l’identification des huiles essen-
Le profil du chromatogramme obtenu lors de l’analyse tielles des feuilles de l’espèce végétale Salvia officinalis, il
par CG/SM a révélé la présence de dix-neuf (19) composés paraît évident qu’on est en présence d’une plante aromatique
terpéniques. D’après le temps de rétention, la surface du pic dont les huiles extraites se caractérisent par un chémotype à
de l’échantillon et la surface du pic de l’étalon ; ces compo- thujone (mélange α- et β-thujone).
sés ont été identifiés. Au vu de ces résultats et par comparaison avec d’autres
Quatre composés semblent être majoritaires : α-thujone travaux, des résultats plus ou moins similaires ont été signa-
(36,74%), cinéole (22,97%), camphre (11,34%) et β-thujone lés par [20] sur la même espèce végétale dont les rendements
(8,81%), d’autres avec uniquement des teneurs comprises d’HE obtenues sont compris entre 1 et 2,5% et avec environ
entre 2,94 et 3,81% tels que le bornéol, β-humulène, eucalyp- 46% de thujone (mélange composé de α- et β-thujone).
tol et le L-camphre. Le reste des composés identifiés ont des Cependant, dans une autre étude réalisée par [13] sur la
teneurs relativement faibles avec des valeurs comprises entre sauge officinale de l’Espagne, l’auteur a signalé la présence
0,20% pour le D-limonène et 1,54% pour le caryophyllène d’un chémotype à différents composés terpéniques avec une
(Tableau 1). prédominance du camphre (11 à 36%), suivi de cinéole (11 à
Les tests de l’activité antibactérienne des huiles essentiel- 25%) et très peu de thujone (<0,5%). Cette divergence dans
les ont montré une énorme hétérogénéité dans les résultats les résultats explique le rôle que peuvent jouer les facteurs
obtenus. Les souches bactériennes testées ont réagi plus ou environnementaux et climatiques sur la composition biochi-
moins bien selon la concentration du produit naturel extrait. mique et sur la qualité de l’extrait de l’espèce végétale [21].
Les meilleures zones d’inhibition ont été enregistrées avec la Des tests de l’activité antibactérienne évaluée, ces HE
solution (HE au 1/4). De l’ensemble des résultats obtenus, semblent être plus efficaces à la dilution (HE au 1/4) contre
on cite la souche Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 qui la majorité des souches. Des résultats meilleurs ont été

Tableau 1 Composés terpéniques de l’huile essentielle obtenue.

N° de pic Composé identifié TR (mn) S (%) N° de pic Composé identifié TR (mn) S (%)
1 α-Pinène 3.460 0.22 11 Camphre 12.247 11.34
2 Camphène 3.822 0.41 12 L-camphre 12.435 3.81
3 Ocimène 3.951 1.06 13 β-linalool 12.816 1.10
4 β-Pinène 4.409 0.37 14 Bornéol 13.560 2.94
5 β-Myrcène 4.859 0.25 15 α-terpenéol 14.166 0.25
6 D-Limonène 5.667 0.20 16 Caryophyllène 20.106 1.54
7 Eucalyptol 6.253 3.27 17 α-caryophyllène 21.617 1.34
8 Cinéole 6.345 22.97 18 α-longipinène 22.638 0.23
9 α-thujone 10.525 36.74 19 β-humulène 29.112 3.15
10 β-thujone 10.950 8.81

S : superficie, TR : temps de rétention activité antibactérienne.

4 Phytothérapie

Tableau 2 Diamètres des zones d’inhibition (mm) de la croissance des bactéries face aux produits testés.

Antibiotique Huiles essentielles

HE pures HE (1/2) HE (1/4)
Proteus mirabilis 28.32 24.32 26.74 29.96
Escherichia coli 1429 30.50 31.56 33.62 29.64
Escherichia coli 1554 27.72 23.32 34.48 28.04
Escherichia coli ATCC 25922 00.00 13.40 12.65 29.35
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 27.42 37.08 31.22 30.54
Pseudomonas aeruginosa 7244 00.00 5.40 10.00 15.50
Staphylococcus aureus 40.00 24.00 22.65 21.45

enregistrés ; même vis-à-vis des souches les plus résistantes Conclusion

telles que Pseudomonas aeruginosa et Staphylococcus
aureus. Autrement dit la souche Pseudomonas aeruginosa
ATCC 27853 a attiré le plus notre attention étant donné sa En guise de conclusion, il est important de signaler que la
grande performance face aux antibiotiques, elle s’est révélée sauge officinale ou Salvia officinalis de la région du nord-est
ici sensible à l’action des HE. algérien est une espèce aromatique dont les huiles essentiel-
Ce pouvoir antibactérien des HE a été signalé par de nom- les se caractérisent par un chémotype à thujone (mélange
breux travaux notamment ceux réalisés par [22] sur les hui- composé de α- et β-thujone).
les essentielles de Salvia officinalis L. de la région du sud De l’activité thérapeutique antibactérienne évaluée, il res-
brésilien, qui ont provoqué des propriétés antibactériennes sort que les huiles essentielles de la sauge officinale de cette
sur Escherichia coli et Staphylococcus aureus. région pourraient posséder un pouvoir antibactérien impor-
Dans ce même contexte et selon [23], une similitude est tant sur les germes multi-résistants étudiés. L’inhibition de la
observée car les HE de la sauge officinale de la région de croissance varie en fonction de l’espèce bactérienne et de la
Syrie ont pu présenter une bonne activité inhibitrice sur la concentration du produit naturel extrait. De toutes les sou-
souche Staphylococcus aureus qui a fait également l’objet de ches testées, cinq d’entre elles se sont montrées très sensibles
notre étude. Cependant, une divergence dans les résultats est face aux huiles essentielles obtenues : Escherichia coli 1554,
enregistrée lorsqu’on parle de l’effet de ces mêmes HE de la Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli 1429, Pro-
région syrienne face aux diverses colonies de la bactérie teus mirabilis et plus particulièrement la souche Pseudomo-
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 c’est-à-dire que nas aeruginosa ATCC 27853 qui est réputée pour sa résis-
ces HE n’ont pu provoquer qu’un effet bactériostatique tance à la plupart des antibiotiques dont la zone d’inhibition
contre la souche Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 enregistrée est de 37,08 mm de diamètre. Les zones d’inhi-
alors qu’elle est fortement inhibée sous l’action des HE de bition enregistrées dépassent le plus souvent celles de l’anti-
notre espèce végétale Salvia officinalis L. ou sauge officinale biotique utilisé (Rifampicine à 5 μg).
(environ 38 mm de diamètre). La puissance de cette activité de substances naturelles
D’autre part, une investigation réalisée par [24] sur les HE prouve de plus en plus leur efficacité vis-à-vis des bactéries
de Salvia officinalis L. de la région de Batna (Est-algérien), a multirésistantes. D’autre part, de nombreuses bactéries ont
signalé un pouvoir inhibiteur sur des bactéries Escherichia récemment développé une résistance à la plupart des anti-
coli entre autre l’inhibition du développement de la souche biotiques. De ce fait, nous pensons que les principes actifs
Escherichia coli ATCC 25922 qui a été très sensible face aux isolés de diverses plantes médicinales pourraient présenter
différentes concentrations des HE des feuilles de l’espèce une alternative intéressante à l’utilisation des antibiotiques.
végétale étudiée.
L’activité biologique des principes actifs, entre autre celle
Liens d’intérêts : les auteurs déclarent ne pas avoir de liens
des HE, est liée à leur chémotype c’est-à-dire la ou les molé-
d’intérêts
cules biologiquement actives et majoritairement présentes.
Cette activité s’explique par la lyse des membranes bacté-
riennes. Les HE, flavonoïdes, alcaloïdes voire les tanins
pourraient induire une fuite d’ions potassium au niveau des Références
membranes et par voie de conséquences des lésions irréver-
sibles au niveau de ces membranes. Cette perméabilité au 1. Gurib-Fahim A (2006) Medicinal plants: Traditions of yesterday
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