INTRODUCCION

Investigador Espectrometra de masa

1912

Joseph John "J.J." Thomson

-Permite la separacin de mezclas de compuestos previo al anlisis de masas
-Mejora la selectividad del mtodo y el acoplamiento de mltiples
02 espectrmetros
-favorece la deteccin de molculas de mayor tamao, como por ejemplo
N2 microorganismos completos.
Elementos

CO Rev. Chilena Infectol 2012; 29 (3): pg. 263

 DEFINICIN m/z

La espectrometra de masas es un mtodo que permite la identificacin de una

molcula mediante la medicin de su masa en relacin a su carga (relacin
masa/carga), as como la de los fragmentos generados a partir de ella.
Rev. Chilena Infectol 2012; 29 (3): pg. 263

El espectrmetro de masas produce, separa y detecta iones en fase gaseosa.

E. Jordana-Lluch et al / Enferm Infecc Microbiol Clin. 2012;30(10):pg. 636

La EM es una tcnica analtica que permite la separacin, identificacin y

cuantificacin de mltiples metabolitos, en diferentes matrices biolgicas,
en un tiempo muy corto y de manera simultnea.
Acta Peditrica de Mxico Volumen 30, Nm. 5, septiembre-octubre, 2009 pg. 258
 UTILIZACIN

Tiene una amplia utilizacin para

determinacin de compuestos orgnicos

Puede ser utilizado sola o en combinacin con

otras tcnicas de espectrometra

En sentido estricto no es una tcnica

espectroscpica

file:///D:/Usuario/Desktop/analisis%20por%20instrumentacion/4.1InstrumentacionEspectrometriadeMasas_2462.pdf
 La relacin entre la
abundancia y la relacin
(m/z) depender de la
naturaleza de cada
compuesto orgnico
analizado.
 VENTAJAS DE LA ESPECTROMETRIA DE MASA

Posee una gran

Permite
Suministra sensibilidad:
Capacidad de Es cualitativa y analizar
informacin [concentracin]
identificacin cuantitativa muestras de ppq (partes
isotpica.
complejas. por cuatrilln).

Permite
Suministra Es muy rpida Tcnica en fin
determinar el
Es universal y informacin (espectro de muy
peso molecular
especfica estructural de dcimas de evolucionada y
de la sustancia
la molcula segundo). automatizada
analizada

Font, M. Depto. Qumica orgnica y farmacutica. Seccin de modelizacin molecular. Universidad de Navarra.
 DESVENTAJAS DE LA ESPECTROMETRIA DE MASA

Es una tcnica
Espectrometra destructiva en
de Masas
Voltil Termoestable comparacin con
Necesidad de otras tcnicas de
disponer de la anlisis
muestra en
fase vapor sin
descomposici Dificultad de
n lo que Es necesario
analizar
implica que la un alto vaco Alto
sustancias de
sustancia a (10-6 costos del
alto peso
analizar sea: torr). equipo
molecular.

Font, M. Depto. Qumica orgnica y farmacutica. Seccin de modelizacin molecular. Universidad de Navarra
FUNDAMENTOS TERICO DE EM

Consiste en la separacin de partculas moleculares o atmicas por su

diferente masa.

Esta basada en la obtencin de iones a partir de una muestra orgnica en

fase gaseosa

Una vez obtenidos los iones son separados en relacin a su masa/carga

(m/z)

Finalmente son detectados por un dispositivo adecuado

 INSTRUMENTACIN
El espectrmetro de masa debe contar con las siguientes partes:

SISTEMA DE FUENTE DE
INTRODUCCION
DE MUESTRA IONIZACION

SISTEMA DE
ANALIZADOR DETECTOR Y
DE MASA REGISTRADOR

E. Jordana-Lluch et al / Enferm Infecc Microbiol Clin. 2012;30(10):pg. 636

 INTRODUCCIN DE MUESTRA

Solido
Liquido
Gaseoso(vapor)

Convierte la muestra
gaseosa en iones

Mide la cantidad de
Separa los iones en iones y provee la
funcin a su masa informacin para
calcular su
Facultad de Medicina UNAM. Espectrometra de masas. Pg. 11
abundancia
 FUENTE DE IONIZACIN
Aplica una fuente de ionizacin sobre
una molcula que es la formacin de
iones, generados por exceso o prdida
de electrones, por lo que dichas
molculas estarn cargadas
elctricamente Los iones obtenidos son
dirigidos hacia el analizador de masas y,
posteriormente, al detector. El papel de
la matriz es fundamental para los
procesos electroqumicos que se
producen. Generalmente se trata de
sustancias orgnicas que absorben la
energa del lser.
E. Jordana-Lluch et al / Enferm Infecc Microbiol Clin. 2012;30(10):pag.636
Acta Peditrica de Mxico Volumen 30, Nm. 5, septiembre-octubre, 2009-pag 260
 Analizador de masas

Se trata del componente principal del

espectrmetro el ms utilizado en las
aplicaciones de la EM dentro del campo de la
microbiologa es el analizador de tipo TOF. La
estructura de limita una zona de vuelo a travs
de la cual los iones son acelerados adquiriendo
una elevada energa cintica, y durante este
trayectos e separarn segn su ratio
masa/carga(m/z). La mayor parte de iones
generados poseen una sola carga (z=1), por lo
que la ratio m/z equivale a m. El periodo de
tiempo que tarda cada in en llegar hasta el
detector es denominado tiempo de vuelo y
depende de dicha ratio.

E. Jordana-Lluch et al / Enferm Infecc Microbiol Clin. 2012;30(10):pag.637

Acta Peditrica de Mxico Volumen 30, Nm. 5, septiembre-octubre, 2009-pag 260
 DETECTOR

Al nal de la zona de vuelo los iones impactan en el detector. En muchos casos, antes
del detector encontramos un cuarto elemento, el reector, cuyo objetivo es compensar
las velocidades cinticas antes de que los iones impacten contra el detector. Con ello se
obtiene un aumento en la resolucin A partir de la informacin recogida por el
detector, se genera el espectro de masas en el cual se muestra la masa de los diferentes
iones de la muestra calculada a partir del tiempo de vuelo. En el eje de las ordenadas
del espectro de masas se representan los valores de la ratio m/z, mientras que en el eje
de las abscisas se representa la intensidad, es decir, el nmero de iones de una
determinada ratio m/z que ha impactado contra el detector.
E. Jordana-Lluch et al / Enferm Infecc Microbiol Clin. 2012;30(10):pag.637

El detector registra y amplifica la seal proveniente del analizador de masas,

posteriormente la enva al procesador de datos en donde esta informacin
se registra en forma de espectro de masas, que es una representacin
grfica de los iones separados por su valor de m/z y ajustados de acuerdo al
porcentaje de las especies ms abundantes en la muestra
Acta Peditrica de Mxico Volumen 30, Nm. 5, septiembre-octubre, 2009-pag 259
 APLICACIONES
ANLISIS DIRECTO DE FORMULACIONES
FARMACUTICAS:
En particular al anlisis rpido de comprimidos
o tabletas
Acta Bioqum Cln Latinoam 2011; 45 (1): pag.53
APLICACIN AL ANLISIS DE MUESTRAS DE
FLUIDOS BIOLGICOS:
El anlisis DESI-MS de alto rendimiento de
muestras de fluidos biolgicos, como por
ejemplo: orina, para la identificacin de
metabolitos, est logrando una mayor
atencin debido al valor potencial de la
informacin sobre pequeas molculas
caractersticas o biomarcadores, como
indicadores de enfermedad.
Acta Bioqum Cln Latinoam 2011; 45 (1): pag.55
 ANLISIS FORENSE :
la deteccin de explosivos, toxinas y drogas de
abuso en las superficies de artculos
personales, el anlisis de agentes simulantes
de guerra qumica y toxinas ambientales
presentes en una variedad de superficies.
Acta Bioqum Cln Latinoam 2011; 45 (1): pag.56
ANLISIS DE ALIMENTOS:
Se conocen varias publicaciones recientes de
aplicacin de DESI-MS y DESI-MS/MS al anlisis
directo de alimentos, a la bsqueda de
agroqumicos en alimentos y al anlisis de la
presencia de melamina en productos lcteos.
Acta Bioqum Cln Latinoam 2011; 45 (1): pag.63
 ANLISIS DE COLORANTES:
Ya se ha mencionado el anlisis
mediante DESI-MS involucrando la
cromatografa en capa delgada (TLC)
sobre todo al estudiar las diferentes
clases de superficies
ANLISIS DE CULTIVOS DE BACTERIAS
DESI-MS:
Permiti obtener espectros de masas muy
reproducibles de microorganismos intactos en
condiciones ambientales; la aplicacin del
anlisis de componentes principales a los datos
llev a la diferenciacin de sub-especies (74).
As por ejemplo, se obtuvo el espectro de
masas caracterstico de cepas de Escherichia
coli, como: E. coli JM109, utilizando como
solvente del aerosol DESI metanol-agua
Acta Bioqum Cln Latinoam 2011; 45 (1): pag.65
 ESPECTROMETRIA DE MASA DE MALDI-TOF MS
La identificacin de microorganismos basada en la espectrometra de
masas conocida como MALDI-TOF MS es una tcnica que existe hace mas
de 30 aos. Lo cual ha permitido a los laboratorios de microbiologa clnica
acceder mas fcilmente a esta tecnologa y aplicarla como mtodo
confiable, especifico y rpido identificacin de bacterias, microbacterias y
hongos basado en el perfil de protenas
Esta tcnica permite la identificacin de microorganismos mediante el
anlisis de protenas, principalmente ribosmicas a travs del espectro de
masas que es especifico para cada especie as como tambin la
identificacin rpida de bacterias y levaduras a partir de colonias aisladas e
incluso es capaz de diferenciar a nivel de subespecie.
Rev Argent Microbiol.2015;47(2): pag.104
 Ventajas
La implementacin de MALDI-TOF MS en un laboratorio de
microbiologa no requiere de infraestructura especial. Los equipos
comerciales disponibles en la actualidad no utilizan un espacio mayor
al de otros equipos automatizados usados frecuentemente en el
laboratorio y tampoco requieren de un ambiente con control de
temperatura estricto, a diferencia de otros equipos de espectrometra.
Slo son necesarias una conexin elctrica y otra conexin a internet.
El personal requiere entrenamiento en el equipo y conocimientos
bsicos de espectrometra de masas.
Rev Chilena Infectol 2012; 29 (3): pag.264
 LIMITACIONES
Por otra parte, la demora y laboriosidad del manejo de microorganismos
que requieren procesos previos de extraccin tambin se irn simplificando
con la comercializacin de kits de extraccin.
la dificultad en la identificacin de mezclas de microorganismos.
Otra limitacin actual del proceso es que la inoculacin de las cepas es
manual, por lo que siempre existe el riesgo de error en la posicin en que
se cargan las muestras.
Respecto al costo del equipo, una evaluacin econmica realizada en
nuestro laboratorio permite estimar que la inversin se recupera en cuatro
aos, considerando el ahorro en insumos de laboratorio, tiempo en mano
de obra y en repeticiones de la identificacin microbiolgica por los
mtodos manuales convencionales.
En caso de los instrumentos pticos atmicos el coste del instrumento es
de dos a tres veces mas.
Rev Chilena Infectol 2012; 29 (3):pag.269-270
Rev Chilena Infectol 2012; 29 (3):pag.264
 El uso de la tecnologa de
espectrometra de masas,
especficamente MALDI-TOF MS, en la
identificacin microbiolgica en los
laboratorios clnicos es, sin duda, uno
de los cambios ms importantes
despus de la introduccin de los
mtodos moleculares. Su aplicacin en
la identificacin bacteriana y de
levaduras en un laboratorio clnico,
permite acortar en forma significativa
los tiempos de respuesta, mejorar la
exactitud de los mtodos de
identificacin convencional y disminuir
los altos costos involucrados, tanto en
uso de reactivos e insumos como en
mano de obra.

Rev Chilena Infectol 2012; 29 (3): pag.270

 ESPECTROMETRA DE MASAS EN TNDEM

Los estudios metabolmicos mediante MS/MS, que slo requieren

unas gotas de sangre, sern especialmente valiosos en el campo de la
neonatologa y la perinatologa, ya que otros tipos de anlisis requieren
muestras de sangre mucho mayores, cuya obtencin puede tener
riesgo. Ejemplo de esto es el neonato con muy bajo peso, cuyo
volumen de sangre disponible es limitado para medir procesos
patolgicos.
El trmino metabolmica se refiere al estudio, la identificacin y
cuantificacin sistemtica de compuestos de bajo peso molecular en
ciertas clulas, tejidos o fluidos biolgicos que son producto de las
reacciones metablicas en los seres vivos.

Acta Peditrica de Mxico Volumen 30, Nm. 5, septiembre-octubre, 2009-pag 261

 COMPONENTES
Un equipo de MS/MS est constituido de seis
componentes bsicos:
1) sistema de introduccin de muestra;
2) fuente de ionizacin;
3) primer analizador de masas (MS1);
4) cmara o celda de colisin;
5) segundo analizador de masas (MS2);
6) detector.
La tcnica usualmente se abrevia como:
tndem MS, MS/MS, MS2, QqQ (en el caso de
los equipos triple cuadrupolo).

Acta Peditrica de Mxico Volumen 30, Nm. 5, septiembre-octubre, 2009-pag 260

 APLICACIONES
La aplicacin ms comn de la MS/MS es el tamiz neonatal ampliado
(TN) 21, en el cual, a partir de una gota de sangre depositada en papel
filtro (SPF), se obtiene simultneamente el perfil de 11 aminocidos
(AA) y 33 acilcarnitinas (AC) en aproximadamente dos minutos.

Acta Peditrica de Mxico Volumen 30, Nm. 5, septiembre-octubre, 2009-pag 262

 La aplicacin de la espectrometra de masas en tandem en el
diagnstico de los errores innatos del metabolismo ofrece la
posibilidad de ampliar el nmero de enfermedades que son
tamizadas durante el periodo neonatal. Esta tecnologa permite
detectar, con gran sensibilidad, especificidad y rapidez, ms de 30
enfermedades metablicas en un mismo ensayo a partir de un nico
disco de sangre seca sobre papel de filtro. Para esto se realiza el
anlisis combinado del perfil de aminocidos y acilcarnitinas sin
requerir, generalmente, de sistemas de cromatografa adicionales. El
procesamiento analtico que actualmente se utiliza en los diferentes
laboratorios de tamiz es relativamente homogneo
Acta Bioqum Cln Latinoam 2012; 46 (2): pg. 195
 BENEFICIOS
Hoy en da la MS/MS comienza a ser utilizada en los laboratorios clnicos y
reemplaza, incluso, a los ensayos inmunolgicos, para analizar una gran
cantidad de biomarcadores clnicos, con sensibilidad y especificidad que
proporcionan un resultado ms preciso y significativo
La importancia de esta te cnologa radica en su capacidad de anlisis de
mltiples compuestos de manera simultnea, con un alto grado de
sensibilidad, lo cual puede identificar enfermedades metablicas antes que
tengan expresin clnica, es decir, en el periodo asintomtico, lo cual
permite iniciar un tratamiento oportuno para salvar la vida y prevenir
secuelas en los pacientes afectados.
Acta Peditrica de Mxico Volumen 30, Nm. 5, septiembre-octubre, 2009-pag 262
ESPECTROMETRA DE MASAS EN TNDEM
INTERPRETACION DE UN ESPECTRO DE MASAS
http://studylib.es/doc/5394660/espectrometr%C3%ADa-de-masas-interpretaci%C3%B3n-de-espectros-pag7
http://studylib.es/doc/5394660/espectrometr%C3%ADa-de-masas-interpretaci%C3%B3n-de-espectros-pag8
 Fig.6: Aspecto clsico de un espectrograma de masas, en el que se sealan su pico base
y su in molecular ms importante. La tabla situada a la derecha nos indica la concentracin
y la relacin m/z de cada uno de los elementos presentes en el analito

file:///D:/Usuario/Desktop/analisis%20por%20instrumentacion/espectrometria_de_masass.pdf-pag12
 CONCLUSION
Pese a muchos aos de edad continua siendo uno de los instrumentos ms recurridos
a la hora de analizar todo tipo de muestras ya que de ella se destaca su gran
versatilidad, facilidad de uso y fundamentalmente, porque es uno de los pocos
instrumentos que te permiten realizar un anlisis cualitativo y cuantitativo de forma
simultanea y de calidad.
Sus mbitos de uso se encuentran un tanto restringidos dado su elevado precio, su
principal enemigo y retractor, pero que no est impidiendo que cada da se imponga
ms frente a otras ms innovadoras y su demanda no haga ms que aumentar.
Vemos que el estudio exhaustivo de este instrumento es fundamental para su ptima
utilidad, ya que te permite combinar diferentes tipos de cada uno de sus elementos
para adecuarlo a las necesidades de cada investigacin.
Hoy en da se continua investigando en nuevas instrumentos de mejora para esta
tcnica, ya que cada da se exigen resultados con mayor precisin o simplemente
porque se analizan muestras en las que se requiere una mayor especializacin.